1) Aplicacin d Microorganismos en Tratamientos de Agua.

Los microorganismos juegan un papel importante en todo proceso de depuracin de

aguas residuales. De manera general, los desechos lquidos procedentes de diferentes

sectores industriales (agroindustria, alimentaria, alguna petroqumica) y de las aguas

negras municipales, son tratados por va biolgica. Estos procesos biolgicos que ocurren

en la mayora de los reactores, bajo unas condiciones determinadas y controladas, tienen

lugar de manera natural en ros, lagos y otros sistemas acuticos.

En el caso concreto de las aguas residuales, las tcnicas desarrolladas en

biotecnologa en este rea no slo tienen como objetivo reducir la materia orgnica en

general, sino que es utilizada para eliminar otros agentes contaminantes industriales

presentes en las aguas, as como para convertir el flujo de desechos derivado del proceso de

depuracin en productos tiles o incluso con valor aadido para poder liberarlos al medio

ambiente sin causar perjuicio (como el compost de lodos de depuradoras).

Algunos ejemplos de tcnicas utilizadas son el bioprocesamiento y la bioadsorcin.

En el primer caso, el objetivo se basa en el empleo de cepas de microorganismos muy

especializados para tratar agentes concretos, como bien podran ser compuestos fosforosos,

nitrgeno y azufre. Por otra parte, la bioadsorcin puede llegar a reemplazar mtodos

fisicoqumicos como la precipitacin, adsorcin o el intercambio inico en el proceso de captar

iones de metales pesados, donde las algas, por ejemplo, constituyen una importante fuente de

biosorbentes de estos ltimos compuestos. Actualmente el uso de plantas acuticas, microalgas

y procesos de biodegradacin para el tratamiento y posterior reutilizacin de las aguas

residuales, son algunas opciones para mejorar la calidad del agua tratada adems de para

aumentar la eficiencia de las plantas de tratamiento.

Organismos Autotrficos y Heterotrficos

 Metablicamente las bacterias pueden ser clasificadas como heterotrficas o

autotrficas. los organismos autotrficos son aquellos que utilizan el CO2 o bixido de

carbono como fuente de carbono. Para efectuar la fijacin del CO2 en la estructura celular

se requiere energa. Si la energa requerida la proporciona el sol, o la luz sinttica, se dice

que el organismo es fotosinttico. Si la fijacin del bixido de carbono se efecta empleando

la energa desprendida en una reaccin qumica, el organismo se dice que es autotrfico

quimio sinttica. Por ejemplo, la bacteria tiobacillus oxida el ion tiosulfato a sulfato y en

esta reaccin de oxidacin toma la energa desprendida en la reaccin para su provecho. La

bacteria tiobacillus ferroxidans hace lo mismo en la oxidacin del fierro ferroso [(Fe(II)] a

fierro [frrico Fe(III)]. Los organismos autotrficos ms comunes son los que obtienen

energa por medio de procesos quimio sintticos, y son muy pocos los que pueden llevar a

cabo la fotosntesis. Los autotrficos son los productores de la cadena alimenticia ya que

proporcionan las protenas, carbohidratos y dems nutrientes que requieren los

heterotrficos para vivir. Los microorganismos heterotrficos son aquellos que tienen como

fuente de carbono molculas de estructuras orgnicas ms complejas como son las

molculas los azcares, protenas y carbohidratos. Los organismos heterotrficos no son

capaces de obtener su fuente de carbono del bixido de carbono y requiere de los

autotrficos para alimentarse. Todos los animales, as como algunos tipos de hongos y

bacterias son heterotrficos y son catalogados como consumidores en la cadena alimenticia.

Digestin Aerobia y Anaerobia

Digestin aerobia: La digestin aerobia se efecta cuando microorganismos aerobios

o sea los que requieren oxgeno, descomponen la materia orgnica para la obtencin de

energa en su provecho. Las rutas o pasos que son parte de este tipo de metabolismo implican

la oxidacin de las protenas, las grasas y los carbohidratos en una secuencia sumamente

compleja, que producen como sustancias terminales: agua, bixido de carbono, sulfatos y
amoniaco. Si persisten las condiciones oxidantes, el amoniaco producido por los

compuestos nitrogenados y que no escapa a la atmsfera en forma de gas, se oxida a nitritos

y posteriormente a nitratos. Esta ruta o forma de estabilizacin de la materia orgnica, no

implica la formacin de compuestos agresivos y desagradables al medio ambiente, o al

menos no duran mucho tiempo y la degradacin a xidos y gases inocuos ocurre en un corto

tiempo. Digestin anaerobia: La oxidacin anaerobia requiere de microorganismos

anaerobios que son los que subsisten en ausencia de oxgeno, y su metabolismo es muy

diferente al de los microorganismos aerobios. La descomposicin de la materia orgnica en

forma anaerobia se compone de tres pasos esenciales y que son los siguientes

HIDRLISIS: Cierto tipo de bacterias que son llamadas bacterias hidrolticas, son

las primeras en procesar y preparar el material para el siguiente paso de descomposicin.

Estos microorganismos, segregan ciertas enzimas que hidrolizan los polmeros orgnicos

como celulosa, carbohidratos, lpidos, grasas y las protenas. Los carbohidratos, son

convertidos a azucares, las protenas a aminocidos y los lpidos son hidrolizados y

convertidos a cidos grasos de cadena ms corta. CIDOGNESIS O FERMENTACIN:

Cuando se completa la hidrlisis, si las condiciones son las adecuadas ocurre la

acidognesis, la cual consiste en una degradacin por microorganismos de este tipo, de los

azucares de cadena corta, los aminocidos y los cidos grasos formados. En este paso del

metabolismo anaerobio, los cidos grasos se convierten a cidos grasos voltiles de cadena

corta como el cido actico, butrico y propinico principalmente. En este paso casi toda la

materia orgnica forma gases que son en promedio 80% CO2, 20% H2, y tambin algo de

amoniaco NH3. ACETOGNESIS: La secuencia en este proceso anaerobio implica la

conversin a hidrgeno, bixido de carbono y cido actico. De los cidos y alcoholes

carboxlicos formados en el paso anterior de la acidognesis. METANOGNESIS: Por

ltimo, en la secuencia del metabolismo anaerobio microbiano, los microorganismos

metanognicos catabolizan el cido actico que se forma de los cidos grasos, azucares y

aminocidos y lo transforman a metano CH4. El resultado neto de la digestin anaerobia es

la conversin de la materia carboncea a bixido de carbono y metano principalmente. Tanto

la digestin aerobia como la anaerobia producen nuevas clulas, pero el metabolismo

anaerobio es mucho ms eficiente en la conversin del sustrato a gases, en este caso de la

digestin anaerobia, a gases como CO2 y CH4. El metabolismo aerobio requiere de menos

tiempo en digerir el material orgnico biodegradable, pero es mucho menos eficiente en el

aprovechamiento de la energa disponible en el sustrato y produce una mayor cantidad de

clulas o biomasa a partir de la DBO presente en el agua residual

Papel de los Microorganismos

La remocin de la DBO, la coagulacin de slidos coloidales no sedimentables y la

estabilizacin de la materia orgnica, es posible por la accin de una variedad de

microorganismos, principalmente bacterias. Los microorganismos utilizan la materia

carboncea disuelta y en suspensin en forma coloidal, para sobrevivir en el ambiente en

que se encuentran. Al consumir esta materia cuyo principal componente es el carbono, una

parte de ella la convierten en tejido celular y otra parte es emitida al medio ambiente en

forma de gases. Los gases producidos, en su mayor parte, pueden separarse en forma

espontnea del agua tratada y el tejido celular formado, se separa tambin de la masa de

agua por sedimentacin, por lo que cuando esto ocurre se dice que la materia orgnica ha

sido removida del agua tratada. De la energa disponible en los alimentos o sustratos, los

organismos superiores (en la escala de consumo de sustrato), como son los animales y el

hombre, al consumir el alimento, solo una pequea parte de la energa disponible es

aprovechada y el resto se desecha al medio ambiente. Este proceso de obtencin de energa

es rpido pero ineficiente.

Otros organismos consumen nuestros desechos como son insectos, larvas y gusanos

y lo hacen a una alta velocidad de digestin, pero tambin de forma ineficiente ya que solo

extraen una parte de la energa interna potencialmente contenida en el sustrato. Los

microorganismos en sus diferentes variedades y cadenas alimenticias consumen los restos

de sustrato que no es digerido por los seres de escalas superiores, a una muy baja velocidad

de digestin, pero con una alta eficiencia en el aprovechamiento de la energa interna del
sustrato, tal y como se muestra en la figura. De los cientos de miles de especies de

microorganismos que existen, algunos de ellos son de gran importancia en el proceso de

depuracin de aguas residuales ya que consumen el material orgnico que contamina las

aguas de desecho. Los ms importantes son los que se describen a continuacin

BACTERIAS: Las bacterias son protistas unicelulares. Utilizan la materia orgnica

disuelta como alimento, y en general pueden ser encontradas en cualquier medio en el que

exista alimento disponible. Su modo de reproduccin es por fisin binaria, aunque algunas

especies se reproducen sexualmente o por germinacin. Existen miles de clasificaciones de

bacterias, pero todas caen dentro de tres clasificaciones generales en relacin con su forma:

esfricas, cilndricas y helicoidales. Son muy variables en tamao, y su rango est de los 0.5

a los 15 micrones (1 micrn=10-6 metros=10-4 cm). El material de la bacteria constituye un

80% agua y un 20% material seco. De este material seco el 90% es material orgnico y el

10% restante es material inorgnico. Una formula qumica propuesta para la parte orgnica
de la bacteria es C60H87O23N12P. La parte inorgnica constituye: fsforo, azufre, sodio,

calcio, magnesio, potasio y fierro, en ese orden de composicin decreciente. En ausencia de

alguno o algunos de estos elementos la bacteria est limitada en su crecimiento o no

sobrevive. La temperatura y el pH juegan un papel vital en el medio ambiente en que se

encuentra la bacteria, lo cual tambin es sumamente importante para otras especies

microscpicas. Se ha observado que la actividad de las bacterias se duplica por cada 10C

de incremento en la temperatura hasta que se alcanza un lmite de temperatura en el cual la

bacteria ya no sobrevive. De acuerdo con el rango de temperatura en el cual la bacteria tiene

su mximo desarrollo, las bacterias pueden ser clasificada como: crioflicas, mesoflicas y

termoflicas. Su clasificacin est de acuerdo a la Tabla

El pH de la solucin tambin es determinante en el desarrollo y crecimiento de los

microorganismos. La mayora de los microorganismos pueden tolerar ambientes de pH

mayor a 9.5 o menor a 4.0, pero el rango ptimo de pH para que las bacterias comunes

cumplan apropiadamente sus funciones es de 6.5 a 7.5. HONGOS: En ingeniera de

tratamiento de aguas los hongos son considerados protistas multicelulares, heterotrficos,

no fotosintticos. Los hongos son estrictamente aerbicos. Tienen la capacidad de crecer en

condiciones de poca humedad y pueden tolerar un medio ambiente con bajos valores de pH,

aunque su rango ptimo de pH es 5.6. Los requerimientos de nitrgeno son bajos y son de

aproximadamente la mitad de los que requieren las bacterias comunes. Esta habilidad para

sobrevivir a bajos valores de pH y con cantidades relativamente limitadas de nitrgeno, los

hacen sumamente importantes en el tratamiento biolgico de algunas aguas de origen

industrial. ALGAS: Las algas son protistas unicelulares o multicelulares, autotrficos y

fotosintticos. La presencia de algas en las aguas es indeseable ya que producen malos olores

y sabores en el agua de consumo. Interfieren en los procesos de filtracin, y al darle

coloracin al agua disminuyen sus caractersticas estticas. En lagunas de oxidacin, las

algas son valiosas debido a que producen oxgeno a travs del proceso de fotosntesis. Por

la noche, cuando no hay disponible luz para la fotosntesis, emplean el oxgeno disponible

para la respiracin. Las reacciones bioqumicas simplificadas de los procesos bioqumicos

que ocurren en la fotosntesis y en la respiracin son las siguientes:

En el medio ambiente acutico y como consecuencia de las reacciones anteriores,

este proceso metablico

causa una variacin diurna y nocturna del oxgeno disuelto. La habilidad de las algas

para producir oxigeno es

de vital importancia para la ecologa del medio ambiente de las aguas. Para que una

laguna de oxidacin

aerbica o facultativa opere adecuadamente, se requiere de las algas, que son la

fuente de oxgeno para las bacterias aerbicas heterotrficas. Esta relacin simbitica entre

las bacterias y las algas es el mecanismo a travs del cual las aguas residuales pueden ser

depuradas en lagunas de oxidacin. Debido a que las algas utilizan el dixido de carbono en

la actividad fotosinttica, es posible que el agua alcance altos valores de pH. Si se alcanzan
altos valores de pH, la alcalinidad tiende a ser alcalinidad de hidrxidos y carbonatos y si

adems en el agua es alta la concentracin de calcio, se puede rebasar el valor de la constante

de producto de solubilidad del carbonato de calcio, y este precipita. Esta remocin del

carbonato por precipitacin evita que el pH se siga incrementando. De la misma forma a

como ocurre con el oxgeno disuelto, existe una variacin en el valor del pH. Durante el da,

las algas consumen dixido de carbono lo cual tiende a incrementar el valor del pH; por la

noche, las algas producen CO2 lo cual resulta en una disminucin en el pH. El resultado

neto, en un sistema bien equilibrado es un valor ms o menos constante en el valor del pH,

que es requisito indispensable para el proceso de depuracin de las aguas. Tambin. como

los dems organismos, las algas requieren de compuestos inorgnicos para su reproduccin.

Los principales elementos requeridos de este tipo son nitrgeno y fsforo. Otros elementos

trazan o micronutrientes tambin son esenciales; entre estos se encuentran: fierro, cobre y

molibdeno. En lagos y lagunas naturales, el crecimiento excesivo de las algas es indeseable,

por lo que uno de los procesos avanzados de tratamiento de aguas residuales, es la

eliminacin del nitrgeno o fsforo, o los dos en forma conjunta, para evitar la proliferacin

de este material. Tambin la remocin de los micronutrientes requeridos para su crecimiento

y reproduccin es una alternativa para el control de las algas. PROTOZOARIOS: Los

protozoarios son protistas microscpicos que por lo regular son unicelulares y que, adems,

poseen movilidad, lo cual realizan generalmente por medio de un flagelo o cola. La mayora

de los protozoarios son aerbicos heterotrficos, aunque algunos de ellos son anaerbicos.

Los protozoarios son de mayor tamao que las bacterias y consumen estas como fuente de

energa. De hecho, los protozoarios consumen en los efluentes finales de las aguas tratadas,

la materia orgnica residual y las bacterias que se puedan encontrar en dicho efluente.

ROTFEROS: Los rotferos son animales multicelulares, aerbicos, heterotrficos. Su

nombre es originado del hecho que poseen dos juegos de antenas rotatorias, las cuales giran
y les comunican movimiento para capturar su alimento. Los rotferos son muy eficientes

consumiendo bacterias dispersas y floculadas, as como partculas pequeas de material

orgnico. La presencia de rotferos en el agua depurada indica una alta eficiencia en el

proceso aerbico de purificacin. CRUSTCEOS: Los crustceos. al igual que los rotferos

son animales multicelulares aerbicos heterotrficos. A diferencia de los rotferos, los

crustceos tienen un capa o cubierta dura. Los crustceos son alimento natural de los peces,

por lo que frecuentemente se encuentran en la mayora de las aguas naturales. No se

presentan en grandes cantidades en sistemas biolgicos de tratamiento de aguas y su

presencia en efluentes es indicativo de un agua con baja cantidad de materia orgnica y

valores altos de oxgeno disuelto. VIRUS: Un virus es la ms pequea estructura biolgica

conteniendo toda la informacin necesaria para su propia reproduccin. Los virus son tan

pequeos que solo pueden ser vistos con microscopio electrnico. Son parsitos obligados,

por lo cual siempre requieren de un organismo husped en el cual sobrevivir. Una vez

estabilizados en el husped dirigen toda su compleja maquinaria a la produccin de nuevas

partculas de virus. Eventualmente, la clula husped se rompe liberando nuevas partculas

de virus, las cuales se van a infectar nuevas clulas. Muchos virus que producen

enfermedades en el hombre tambin se encuentran en las heces fecales de ste, por lo que

en ingeniera de tratamiento de aguas residuales es necesario el control de los mismos. Esto

se efecta con la cloracin de los efluentes y la disposicin adecuada de los mismos.

2) Toma de Muestras Microbianas y Cadena de Custodia

Entindase que, para tomar una muestra microbiolgica, primero hay que establecer

una cadena de custodia y para establecer una cadena de custodia, se necesita saber qu tipo

de muestra microbiolgica se va a tomar, teniendo en cuenta que las muestras

microbiolgicas se pueden tomar de un afluente de agua, de un alimento establecido, del

ambiente, de una superficie plana, muestra mdica o de tipo industrial.

Para tomar una muestra se debe de tener todos los materiales requeridos para la

realizacin de la toma de muestra, estos materiales deben estar limpios, esterilizados,

sellados hermticamente, para evitar una contaminacin cruzada, teniendo en cuenta todos

estos aspectos podemos realizar una lista, en donde se pueda establecer paso a paso la toma

de muestra e implementar una cadena de custodia, se tomara como ejemplo la toma de

muestra tipo industrial con las materias primas para la elaboracin de productos de consumo

masivo.

Preparar el material estril para la toma de muestra (Pipeta, Papel desechable,

Envase, Alcohol etlico).

Usar los EPP, Gorro, Guantes, Gafas de seguridad, Batas, Cubre bocas.

Determinar los tambores o canecas a muestrear, con su respectiva identificacin.

Limpiar la boca del contenedor, sea tambor o caneca, con papel desechable.

Desinfectar la boca del contenedor con papel desechable humedecido con alcohol

etlico.

Tomar una muestra de cantidad suficiente para los anlisis a realizar, con la pipeta y

depositar en los envases estriles.

Identificar correctamente la muestra tomada del contenedor, con su nombre, fecha y

lote al que corresponda el contenedor.

Llevar la muestra al analista de calidad, ya sea bien para fsico qumico o para

microbiologa.
 De esta forma se logra establecer una toma de muestra segura sin contaminacin

cruzada y establecer una cadena de custodia a nivel industrial

3) Anlisis en el Laboratorio de Microorganismos de Inters Ambiental y Sanitario y

Comparacin con la Normatividad. Tcnicas Microbiolgicas para la Deteccin de

Coliformes Fecales y Totales.

Coliformes Fecales

Los coliformes fecales tambin denominados coliformes termo tolerantes, llamados as

porque soportan temperaturas hasta de 45C, comprenden un grupo muy reducido de

microorganismos los cuales son indicadores de calidad, ya que son de origen fecal. En su

mayora estn representados por el microorganismo E. coli pero se pueden encontrar, entre

otros menos frecuentes, Citrobacter freundii y Klebsiella pneumoniae estos ltimos hacen parte

de los coliformes termotolerantes, pero su origen se asocia normalmente con la vegetacin y

solo ocasionalmente aparecen en el intestino. (HAYES; 1993)

Los coliformes fecales integran el grupo de los coliformes totales, pero se diferencian

de los dems microorganismos que hacen parte de este grupo, en que son indol positivo, su

rango de temperatura ptima de crecimiento es muy amplio (hasta 45C) y son mejores

indicadores de higiene en alimentos y en aguas, la presencia de estos indica presencia de

contaminacin fecal de origen humano o animal, ya que las heces

 contienen dichos microorganismos, presentes en la flora intestinal y de ellos entre

un 90% y un 100% son

E. coli mientras que en aguas residuales y muestras de agua contaminadas este

porcentaje disminuye hasta un 59%. (GOMES; 1999)

Coliformes Totales

El grupo coliforme se define como todas las bacterias Gram negativas en forma

bacilar que fermentan la lactosa a temperatura de 35 a 37 C, produciendo cido y gas (CO2)

en 24 horas, aerobias o anaerobias facultativas, son oxidasa negativa, no forman esporas y

presentan actividad enzimtica de la B-galactosidasa (Ministerio de salud, 1998). Entre ellos

se encuentran los diferentes Escherichia coli, Citrobacter, Enterobacter y Klebsiella.

(Organizacin Panamericana de la Salud, 1987)

La prueba ms relevante utilizada para la identificacin del grupo Coliformes es la

hidrlisis de la lactosa. El rompimiento de este disacrido es catalizado por la enzima. D-

Galactosidasa. Ambos monosacridos (la galactosa despus es transformada en glucosa por

reacciones bioqumicas) posteriormente son metabolizados a travs del ciclo glicoltico y ciclo

del citrato. Los productos metablicos de estos ciclos son cidos y/o CO2. Para la

determinacin de la B- Galactosidasa se utilizan medios cromgenos tales como chromocult.

(MANAFI, 1998).
 Tcnica de Filtracin por Membrana para Deteccin de

Coliformes Totales y Fecales

Para la determinacin de coliformes totales y fecales en agua potable, la legislacin

colombiana en la resolucin 2115 de 2007, recomienda entre otras tcnicas, la de filtracin por

membrana.

La tcnica de filtracin por membrana utiliza un mecanismo mediante el cual se

atrapan en la superficie de una membrana microorganismos cuyo tamao es mayor que el

tamao del poro (0.45 um); esto gracias a una bomba elctrica que ejerce una presin

diferencial sobre la muestra de agua haciendo que se filtre. Los microorganismos de tamao

menor que el especfico del poro pasan la membrana o quedan retenidos en su interior, las

bacterias quedan en la superficie de la membrana y luego esta es llevada a un medio

enriquecido, selectivo o diferencial, quien a travs de intercambio metablico y una incubacin,

evidencian el crecimiento de microorganismos y Unidades Formadoras de Colonia. (APHA -

AWWA - WPCF, 2000).

Esta tcnica es altamente reproducible y proporciona resultados numricos, es una

manera rpida y simple de estimar las poblaciones bacterianas en el agua, y especialmente til

al evaluar grandes volmenes o al realizar diariamente muchas pruebas de Coliformes (HACH,

2000).

Filtros de Membrana

Se deben utilizar filtros de membrana con un dimetro de poro que permita una

completa retencin de las bacterias coliformes. Solo se emplean filtros en los que se haya

comprobado, mediante una adecuada prueba de control de calidad y por garanta del fabricante,

que permita una retencin de las bacterias coliformes. (APHA, 1992)

Aplicaciones de los filtros de Membrana

Filtros de nitrato de celulosa Filtros de acetato de celulosa

Filtracin de aguas Esterilizacin de muestras de
Anlisis microbiolgico Esterilizacin de fluidos
protenas
Anlisis gravimtrico Filtracin de alcohols
biolgicos
Anlisis cualitativos de Filtracin de aceites
Esterilizacin de muestras Filtracin de muestras de aguas
partculas
Determinacin de protenas
Identificacin de cidos
Pre filtracin de muestras
nucleicos
Clarificacin de muestras

Parmetros de Desempeo de la Validacin

Especificidad

Capacidad de un mtodo de determinar inequvocamente un analto/parmetro en

presencia de los otros componentes de la muestra. La especificidad puede ser afectada por la

presencia de interferentes (como precursores de sntesis, impurezas, productos de degradacin,

entre otros). (OGA-016,2004).

Exactitud

La exactitud, es la cercana de un resultado al valor verdadero por comparacin con

los valores de referencia de un material caracterizado (material de referencia). Los valores de

referencia deberan ser trazables a las normas internacionales; los materiales de referencia

certificados (MRC) generalmente se aceptan como trazables. Es ideal que el material de

referencia sea de matriz natural lo ms similar posible a las muestras de inters. (RODRGUEZ,

2004). Usualmente, la exactitud se expresa como el porcentaje de recuperacin de los

microorganismos mediante el mtodo de validacin. (USP 31, 2008).

Precisin

Las dos medidas ms comunes de la precisin, que generalmente se define en trminos

de desviacin estndar o el coeficiente de variacin (desviacin estndar relativa) son la

repetibilidad y la reproducibilidad. La repetibilidad, da una idea de la variabilidad que se espera

cuando un proceso es aplicado por un solo analista en un equipo durante un periodo corto

(anlisis por duplicado). La reproducibilidad, es la que representa la variabilidad que se obtiene

cuando un proceso es analizado por diferentes analistas, lo cual tiene un valor ms amplio. La

precisin intermedia y ms til en casos especficos se obtiene cuando se evala

reproducibilidad entre analistas en un mismo laboratorio. (RODRGUEZ, 2004).

2.5.2. Datos Requeridos para la validacin

Los requisitos de las pruebas farmacopeicas varan desde valoraciones analticas

muy rigurosas hasta evaluaciones subjetivas de atributos. Considerando esta amplia variedad,

es lgico que diferentes procedimientos de prueba requieran diferentes esquemas de validacin.

Las categoras ms habituales para las que se exigen datos de validacin son:
 Categora I: Los procedimientos analticos para la cuantificacin de componentes

principales de frmacos a granel o ingredientes activos (incluyendo conservantes) en productos

farmacuticos terminados.

Categora II: Los procedimientos analticos para la determinacin de impurezas en

frmacos a granel o productos de degradacin en productos farmacuticos terminados. Estos

procedimientos incluyen anlisis cuantitativos y pruebas de lmite.

Categora III: Los procedimientos analticos para la determinacin de las

caractersticas de desempeo.

Categora IV: Pruebas de identificacin

Para cada categora, se requiere de diferente informacin analtica. La validez de

un procedimiento analtico puede verificarse slo mediante estudios de laboratorio. Por lo

tanto, la documentacin final de dichos estudios constituye un requisito bsico para

determinar si un procedimiento es adecuado para sus aplicaciones previstas. (USP 31, 2008)

Datos Requeridos para la validacin

DATOS REQUERIDOS PARA LA VALIDACIN

Categora II
Caractersticas de Cate an Pru C Categora IV

Desempeo analtico gora I lisis eba de atego

Exactitud Si Si
cuantitati lmite * ra III * No
Precisin Si Si No S No
Especificidad Si va Si Si * Si
i
Lmite de deteccin No N Si * No

o
 Lmite de No Si No * No

Cuantificacin

Linealidad Si Si No * No

Fuente: USP 31, 2008.

Pruebas Cuantitativas para Microorganismos

El mtodo de recuento en placa es el ejemplo ms comn de esta clase de pruebas que se

emplean para estimar el nmero de microorganismos viables en la muestra. (USP 31, 2008)

Tabla 8. Parmetros de Validacin por tipo de prueba microbiolgica.

Parmetro Prue Pruebas

bas cuantitativas
Exactitud No Si
Precisin No
cualitativas Si
Especificidad Si Si
Lmite de deteccin Si Si
Lmite de cuantificacin No Si
Linealidad No Si
Robustez Si Si
Repetibilidad Si Si
Fuente: USP 31, 2008.

RESULTADO DE VALIDACIN POR EL MTODO DE MEMBRANA AGAR

CHROMOCULT
 Un laboratorio debe validar los mtodos no normalizados, los mtodos que disea o

desarrolla, los mtodos normalizados empleados fuera del alcance previsto, as como las

ampliaciones y las modificaciones de los mtodos normalizados, para confirmar que son aptos

para el fin previsto. La validacin debe ser tan amplia como sea necesario para satisfacer las

necesidades del tipo de aplicacin o del campo de aplicacin dados. El laboratorio debe

registrar los resultados obtenidos, el procedimiento utilizado para l validacin y una

declaracin sobre la aptitud del mtodo para el uso previsto. (ENAC, 2002).

Mtodos Normalizados

Son mtodos que el laboratorio aplica como ya est descrito en un procedimiento o

en una norma, en este caso tambin es necesario anexar o volver a escribir bajo forma de

procedimientos las especificaciones reconocidas que tengan suficiente informacin para

realizar los ensayos (G-ENAC. 1997).

 El laboratorio debe confirmar que puede operar correctamente los mtodos

normalizados antes de introducir los ensayos. Si el mtodo normalizado cambia se debe repetir

la confirmacin.

Mtodos Desarrollados por el Laboratorio

Elaborados en el laboratorio y no se encuentran en ningn documento oficial, debe

ser una actividad planificada y debe ser asignada a personal calificado y proveer los

recursos necesarios (G-ENAC. 1997)

Mtodos Normalizados con Modificaciones

Son mtodos tomados de una norma, pero con alguna modificacin, tal es el caso de

una filtracin con membrana utilizando otro medio de cultivo diferente; aqu se debe realizar

lo mismo a como si se estuviera realizando la validacin de un mtodo desarrollado por el

laboratorio, debido a que ya existe una modificacin sobre el mtodo normalizado (G-ENAC.

1997).

Prerrequisitos de la Validacin

Monitoreo Ambiental

La calidad microbiolgica del aire y las superficies de laboratorio son un indicador de la

efectividad de las tareas realizadas segn el programa de limpieza y desinfeccin.

El programa de muestreo para monitoreo ambiental incluye:

 Determinacin cuantitativa de microorganismos presentes en el ambiente

(recuento total de determinado tipo de microorganismos, por ejemplo: hongos y levaduras,

mesfilos).

Determinacin cualitativa dependiendo de los ensayos que realiza el

laboratorio (ejemplo: Enterobacterias, coliformes, Salmonella spp).

El laboratorio debe definir los recuentos mximos de microorganismos que

considere aceptable y disponer de un procedimiento documentado en el que se describan

las acciones a tomar para corregir las situaciones en que sobrepasen estos lmites.

Se recomienda realizar como mnimo los siguientes controles microbiolgicos,

aunque es importante resaltar que existe variedad de mtodos para llevarlos a cabo:

Monitoreo de la calidad del aire por exposicin de placas o equipos

muestreadores

Monitoreo de la calidad microbiolgica de las superficies de trabajo, por

frotacin con hisopos o por placas rodac

Control de dotacin y de personal (VILLOCH, C.A. 2002)

El monitoreo microbiolgico ambiental se lleva a cabo por las siguientes razones:

Verificar la eficiencia de los procesos de limpieza y sanitizacin

Determinar la frecuencia con la que se deben realizarse estos procesos

Determinar la presencia de microorganismos contaminantes en las superficies o el

ambiente

Establecer las posibles fuentes de contaminacin ambiental

 Determinar la frecuencia requerida para el mantenimiento de un rea (por ejemplo,

el cambio de filtros)

Este monitoreo se basa en mtodos sencillos como la exposicin de placas con agar

durante un tiempo previamente determinado. Estos mtodos dependen de la fuerza de

gravedad y las corrientes de aire para que las partculas suspendidas en el aire se depositen

sobre las placas para su posterior recuento. Los resultados son reportados como Unidades

Formadoras de Colonias (UFC) por intervalo de tiempo. La prueba tiene una duracin de 3 a

5 das.

El monitoreo microbiolgico de superficies incluye todos los sitios que de manera

directa o indirecta puedan afectar la calidad de un producto. Estos sitios no deben estar

limitados a aquellos que tienen contacto directo con el producto ya que la contaminacin

microbiolgica puede llegar indirectamente a ellos por condensacin de agua o formacin de

aerosoles.
 Conclusin

Podemos deducir entonces que los microorganismos estn siempre involucrados en

todo proceso de depuracin de las aguas residuales, por lo que se hace imprescindible el tratado

de cualquier agua residual, cabe decir que para tratar una fuente hdrica no necesariamente debe

ser residual, toda agua debe ser tratada para que sea apta para consumo humano solo que, para

las aguas residuales donde se encuentran diferentes tipos de microorganismos en mayores

cantidades, es importante hacerle un tratamiento especial.

Se hace vital conocer el comportamiento, desarrollo, crecimiento y adaptacin de los

microrganismos puesto que se vuelve una problemtica que afecta directa o indirectamente a

los seres humanos.

Para llegar a un objetivo comn que es potabilizar las aguas y/o dar aprobacin de que

es apta para su consumo, esta tiene que pasar por un procedimiento donde primeramente se

debe tomar muestras que permitan su posterior estudio, para ello se percata que se debe conocer

previamente el tipo de muestras microbianas que se desea realizar, ya que existen diversas

fuentes donde se puede estar alojando, conociendo el tipo de microorganismo y donde se est

alojando se proceder a aplicar el respectivo y adecuado tratamiento para su eliminacin.

El anlisis en un laboratorio con sus respectivas normativas es fundamental a la

hora de evaluar un resultado, en el que deseamos conocer si cumple o no con las normativas

de calidad y as aprobar o desaprobar el elemento evaluado. Para logar el anlisis y un resultado

verdico se debe comparar los estndares de calidad de las normativas que permiten y que

arrojan el porcentaje del mximo permitido de cada parmetro.

 Bibliografa

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http://www.lei.com.mx/nuestros-servicios/microbiologia
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