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Se pesaron cien gramos de hojas utilizando un equilibrio digital (Mettler Scientific Balance AE
200S, Mettler Instruments, AG, Greifensee, Suiza) y se pusieron en una mezcladora de 1 l
(Waring Laboratories, Cat. No. 14-509-18, Fisher Scientific, Montreal, Quebec, Canad). La
licuadora tiene cortador de 6 hojas de acero inoxidable / trituradora. Se aadieron a las hojas
aproximadamente 70 ml de hidrxido sdico 0,1 N y 170 ml de agua destilada. Esto llevara el
contenido de humedad y el pH al 97% y 8,5, respectivamente. El pH se midi usando un
medidor de pH digital (Philips PW9409, Fisher Scientific, Montreal, Quebec, Canad) y el
contenido de humedad se midi usando el mtodo de secado en horno descrito por la APHA
(1990). Se utiliz un horno de conveccin (Isotempoven, Modelo No. 655F, Fisher Scientific,
Montreal, Quebec, Canad) y las muestras se secaron durante 24 h a una temperatura de
105C.
La mezcla se mezcl durante 30 segundos a baja velocidad para triturar las hojas y luego
durante cuatro periodos de 1 minuto a alta velocidad para pulpar. Cualquier pulpa de hoja
encontrada adherida a la pared de la mezcladora fue empujada hacia abajo entre los periodos
de pulpa. Se utiliz un sistema de filtracin a vaco constituido por un embudo (Buchner 17J,
Fisher Scientific, Montreal, Quebec, Canad), un matraz y una bomba de vaco (ED50
Speedivac, Edward High Vacuum Ltd, Londres, Inglaterra). Se coloc un papel de filtro
(Whatman n 40, Fisher Scientific, Montreal, Quebec, Canad) en el embudo. La pulpa se
verti del mezclador en el embudo y se indic la bomba de vaco. La pulpa se filtr durante 20
min.
Se utiliz una prensa especialmente construida para presionar el resto del jugo fuera de la
torta. Se ajust manualmente la prensa con un filtro de base ancho y un tamiz de 1 mm de
dimetro. Se colocaron dos papeles de filtro (Whatman No. 40, Fisher Scientific, Montreal,
Quebec, Canad) en el colador y se coloc la torta sobre los papeles de filtro. La torta se
prens a alta temperatura (80 C) hasta que todo el jugo dej de gotear. El proceso se
complet en 10 min. Los jugos de los procesos de filtracin y prensado se combinaron juntos.
A continuacin, la mezcla se acidific hasta un pH de 3,5 por adicin de gotas de HCl 1N. El
jugo acidificado se calent hasta que la cuajada de protena apareci firme y toda la masa flot
por encima del licor. La cuajada de protena / licor se filtr usando el sistema de filtracin. El
producto final era un licor claro en el matraz y una torta de protena firme en el embudo. La
torta se lav y se sec en un horno (Isotempoven, Modelo No. 655F, Fisher Scientific,
Montreal, Quebec, Canad) a una temperatura baja (40C) hasta un contenido de humedad
del 10%.