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Gentica Molecular

UNIDADE 2
REPLICAO DO DNA

Todos os organismos devem duplicar o seu DNA com extrema preciso e em altas taxas
(at mil nucleotdeos por segundo), antes de cada diviso celular.
O DNA que existe na natureza pode se apresentar de diversas formas, tais como: fitas
simples e duplas, e os dois podem existir tanto na forma linear como na circular. Como muitos
DNAs se apresentam como dupla hlice, pode-se apresentar algumas das caractersticas gerais
da replicao que se aplicam para DNAs lineares e circulares. Descreveremos o processo de
replicao em procariontes e, mais especificamente, em Escherichia coli, organismo no qual ele
foi mais bem estudado.
Todas as vezes que uma clula se divide para produzir clulas filhas, o DNA precisa se
duplicar ou replicar dando origem a uma nova molcula de DNA com a mesma sequncia de
bases existente na original, assegurando, assim, que as funes que executam sero
perpetuadas na sua descendncia.
A replicao do DNA envolve a separao das duas fitas parentais e a produo de duas
novas fitas, tendo as parentais como molde. Cada nova molcula de DNA contm uma fita
parental e uma fita recm-sintetizada, caracterizando a replicao semiconservativa (Figura 7).
O processo de replicao complexo e envolve a participao de vrias protenas e enzimas que
atuam de forma coordenada para garantir uma fidelidade considervel.

Figura 7 Replicao semiconservativa da molcula de DNA.

Fonte: http://e-portfolio-biologia.blogspot.com/2008/10/replicao-do-dna_12.html modificado por

Pessa, H.L.F.

A separao dos dois filamentos de DNA realizada pela enzima DNA helicase. Esta
enzima desenrola as duas fitas que compem a dupla-hlice, quebrando as pontes de hidrognio
estabelecidas entre as bases complementares de cada uma das fitas.

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As regies de fita simples so estabilizadas pelas protenas de ligao de fita simples

(SSB) que protegem essas regies de sofrer hidrlise pelas nucleases.
De modo a aliviar a tenso provocada pela toro da cadeia dupla durante o seu
desenrolar pela helicase, a enzima DNA topoisomerase I se associa com a cadeia parental a
montante da helicase. Esta enzima cataliza quebras transitrias das ligaes fosfodister em um
dos filamentos fornecendo um eixo de rotao que permite que os segmentos de DNA em lados
opostos da quebra girem independentemente, com o filamento intacto servindo como eixo. As
topoisomerases I so extremamente eficientes pois armazenam a energia resultante da clivagem
das ligaes fosfodister para serem reaproveitadas para recompor o filamento.
J foram descritas 5 DNA polimerases de E. coli, as DNA polimerases II, IV e V no so
necessrias para a replicao e esto envolvidas em mecanismos de reparo de danos ao DNA.
As DNA polimerases catalisam a adio de nucleotdeos ao filamento em crescimento da
extremidade 5 para a 3. No terminal 5 do acar h um grupo fosfato e no 3 existe uma hidroxila
livre onde se estabelece a ligao fosfodister com o nucleotdeo que esta sendo incorporado.
Observou-se que as DNA polimerases no so capazes de catalizar a sntese desde o incio, elas
necessitam de um pequeno filamento de nucleotdeos, um oligonucleotdeo iniciador, ao qual ela
adiciona os nucleotdeos seguintes. Esse oligonucleotdeo iniciador de RNA, copiado de forma
complementar fita molde de DNA pela RNA primase. As DNA polimerases, para realizarem o
processo de polimerizao, necessitam tambm dos quatro desoxirribonucleotdeos trifosfato
(dTTP, dATP, dGTP e dCTP) e de Mg2+.
A DNA polimerase III um complexo enzimtico com 10 subunidades responsvel pela
polimerizao 53 da fita de DNA recm-formada. Esta holoenzima apresenta, ainda, a
atividade 35 exonuclesica que permite que nucleotdeos incorretos adicionados sejam
prontamente removidos, um por vez, durante a replicao e substitudos por nucleotdeos
corretos, mecanismo de reviso e reparo.
A DNA polimerase I tem a funo de reparar e remendar o DNA danificado e para tanto
apresenta as atividades; polimersica 53 e exonuclesica 35 e 53, esta ltima permite
que vrios nucleotdeos sejam removidos durante o reparo.
Durante o processo de replicao do DNA, uma das fitas novas formada continuamente
na direo 53 (fita lder) e a outra de maneira descontnua e no sentido inverso para manter a
mesma direo 53 (fita retardatria). A fita descontnua replicada atravs de fragmentos de
Okasaki (1000 a 2000 nucleotdeos). Cada um desses fragmentos apresenta, alm do DNA
recm sintetizado, um RNA iniciador que ser substitudo por desoxirribonucleotdeos pela DNA
polimerase I e a DNA ligase reconstituir a nova fita. O filamento lder possui apenas um RNA
iniciador que tambm ser substitudo pela DNA polimerase I (Figura 8).

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Figura 8 A replicao semiconservativa do DNA

Fonte: www.enq.ufsc.br/.../genetica/DNA.html

A replicao do DNA se inicia em um ponto especfico da dupla hlice denominado de

origem de replicao e prossegue em direes opostas gerando a formao de duas forquilhas
de replicao. A medida que a replicao avana as forquilhas se distanciam e ocorre a
formao de uma bolha de replicao. No DNA circular dos procariontes existe apenas uma
origem de replicao e se forma uma nica bolha enquanto que nos eucariontes existem vrias
origens de replicao e, portanto, se formam vrias bolhas. A nica origem de replicao presente
em E. coli, chamada de OriC, apresenta 245 nucleotdeos e contem duas sequncias diferentes
repetidas conservadas, uma delas rica em A:T o que facilita a separao dos filamentos e a
outra possui stios de ligao para uma protena importante para a formao da bolha de
replicao (Figura 9).

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Figura 9 Replicao em procariontes (A) e eucariontes (B).

Fonte: Champe, P.C.; Harvey, R.A.; Ferrier, D.R. modificado por Pessa, H.L.F.

A compreenso do mecanismo de replicao em eucariontes no to extensa em razo

de sua maior complexidade. Embora muitos princpios sejam os mesmos, a replicao eucaritica
mais complicada em trs aspectos bsicos: existem vrias origens de replicao, o tempo deve
ser controlado de acordo com o tempo de diviso celular e h mais protenas e enzimas
envolvidas.

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BIBLIOGRAFIA

FARRELL, S.O.; CAMPBELL, M.K. Bioqumica. 5 ed. So Paulo, Thomson, 2007.

CHAMPE, P.C.; HARVEY, R.A.; FERRIER, D.R. Bioqumica Ilustrada. 4 ed. Rio Grande
do Sul, Artmed, 2009.

SNUSTAD, D.P. Fundamentos de Gentica. 4 ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan,

2008.

GRIFFITHS, A.J.F. Introduo a Gentica. 9 ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan,

2009.

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