Espectroscopa UV-Visible: Determinacin de AAS y Cafena

Instituto de Qumica de Recursos Naturales.

I. Resumen:
La espectroscopia de absorcin UV VISIBLE, corresponde a una tcnica la cual estudia la absorcin
de las radiaciones ultravioleta y visible de la materia, activando analitos los cuales eliminan su
energa en forma de calor. El trabajo experimental se bas en la determinacin de las concentraciones de cido
acetilsaliclico y cafena presentes en un frmaco (Cafiaspirina), para lo cual se mas el comprimido y posteriormente fue
pulverizado y disuelto en Cloroformo (disolvente orgnico apolar). Posteriormente, mediante una serie de procedimientos
sucesivos de separacin de la primera solucin, se logr la separacin de los analitos de inters, conteniendo una fase
acuosa (cido acetilsaliclico) y la fase orgnica (cafena). Ambas soluciones se midieron en un espectrofotmetro a una
longitud de onda especfica y posteriormente determinar la Ley de Lambert-Beer.

Palabras claves: Espectrofotometra, absorbancia, transmitancia, Lambeer-Beer, analito.

II. Introduccin: registre el mayor valor de absorbancia) ya que en

La espectroscopia consiste en la medicin de
energa radiante que absorbe (o transmite) un
determinado analito a una cierta longitud de onda.
La radiacin emitida puede ser en cualquiera de los
espectros IR, visible y UV y el valor de la absorcin
de la radiacin depender de la naturaleza de las
sustancias.
Este mtodo de anlisis ptico se basa en trminos
de absorbancia y transmitancia, en el momento en
que un haz de radiacin UV-Vis atraviesa una
disolucin la fraccin de radiacin que ha logrado
traspasar la muestra es
denominada transmitancia (T) (T = I/Io), o bien la
relacin entre intensidad del rayo incidente (l) y la
intensidad de luz que viene de la muestra (Io). En la
prctica, en lugar de la transmitancia se utiliza la
magnitud de absorbancia (A) (A = -logT), por estar
relacionada linealmente con la concentracin de la
especie absorbente segn la Ley de Lambert-Beer
que indica que:
A=Klc
En donde A es el valor de absorbancia, K es
coeficiente de extincin de la sustancia
(simbolizado con a cuando es medida en gr/L y
como e si es expresada en moles/L) y c la
concentracin de la sustancia.
torno a esa longitud de onda el valor del coeficiente
de extincin molar se mantiene constante, y en el
caso de que existan varios mximos de
absorbancia, las medidas se realizarn en el mayor
de todos, ya que en este caso la sensibilidad del
mtodo (pendiente del calibrado) ser mayor
(Gmez, Sierra Mara) y de este modo la
concentracin obtenida a partir de los valores de
absorbancia tendrn un margen de error mnimo al
cumplirse la tendencia lineal de la ley de Lambert-
Beer. Para esto es necesario disponer de valores
de absorbancia y concentraciones estndar para
obtener un patrn en el cual se podr interpolar o
extrapolar a partir de la absorbancia de la muestra
en cuestin.
III. Materiales y procedimiento:
Materiales: Mortero, tableta de Anacin, papel filtro,
papel pH, soporte universal, argolla, esptula,
pipeta de de 10 mL, pipetas de aforo de 1 y 5 mL,
micropipetas, matraces de aforo de 50, 100 y 250
mL, probeta de 100 mL, vaso precipitado de 200
mL, varilla de vidrio, embudo de separacin.
Equipos: Espectrofotmetro UV-Vis, balanza.
Reactivos: Cloroformo, solucin de bicarbonato de
sodio al 4 %, solucin de cido sulfrico 1 M, agua.
Procedimiento:

Asimismo, en este paso experimental se va a

A) Muestra 7
determinar la concentracin del analito, a una
Se pes con precisin una tableta de Anacin y se
determinada longitud de onda (la cual ser la que
moli con un mortero hasta obtener un polvo fino.
Se agreg 30 mL de cloroformo y se disolvi al
mximo la tableta. Luego se transfiri a un embudo
de separacin de 250 mL, al haber partculas sin
disolver se transfiri al embudo, ocupando alcuotas
de 10 ml de cloroformo, dos veces.
Se debi extraer la solucin de cloroformo con la
tableta con dos porciones de 40 mL de solucin de
bicarbonato al 4 % y luego con una de agua (20
mL): En el embudo de separacin que contena los
50 ml de cloroformo con la tableta, se agreg 40 mL
de solucin de bicarbonato al 4 %, se tap y agit
por tres minutos. Luego se coloc el embudo en su
soporte y se esper que se separaran las capas,
despus se sac la tapa y se vaci la fase inferior a
un vaso marcado como orgnico, la fase que qued
(la acuosa) se transfiri a otro vaso.
Posteriormente se volvi a introducir la fase
orgnica al embudo de decantacin y la fase
acuosa debi quedar en su respectivo vaso.
Al embudo de separacin que contena los 50 mL
de solucin de cloroformo con la tableta, se agreg
nuevamente 40 ml de solucin de bicarbonato al 4
% , se tap y se agit por tres minutos, se coloc el
embudo en su suporte y se esper que se separan
las capas. Se sac la tapa y se vaci la fase inferior
al vaso marcado como orgnico y la fase que
quedo (acuosa) se transfiri al vaso etiquetado
como acuoso.
Se volvi a introducir la fase orgnica al embudo de
decantacin y la fase acuosa se debi quedar en
su respectivo vaso.
Al embudo de separacin que contena los 50 ml de
solucin de cloroformo con la tableta, se agreg
nuevamente 20 ml de agua destilada, se tap y se
agit por tres minutos, se coloc el embudo en su
soporte y se esper que se separaran las capas. Se
sec la tapa y se vaci la fase inferior al vaso
marcado como orgnico y la fase que quedo se
transfiri al vaso etiquetado como acuoso.
Se introdujo la fase acuosa al embudo de
decantacin y la fase orgnica en su respectivo
vaso. Se lav los extractos acuosos con tres
porciones de 15 ml de cloroformo, en forma
sucesiva y se junt cada una de las porciones de
cloroformo en el vaso orgnico.
Se filtr la solucin orgnica sobre el papel filtro
mojado con cloroformo directamente a un matraz
de aforo de 100 ml y se aforo con cloroformo. Con
una pipeta de aforo se tom un alcuota de 5 ml del
aforo anterior y se introdujo a un matraz de aforo de
50 ml y se aforo con cloroformo.
Con estos pasos experimentales se obtuvo la
muestra 7, en que la posteriormente se midi la
absorbancia y se determin la concentracin de la
muestra.
B) Muestra 11
En el embudo de separacin se dej los 80 ml de la
solucin. Se agreg 10 ml de solucin de cido
sulfrico 1 M al embudo de separacin. Se verific
con papel pH la solucin. Posteriormente la
solucin acidificada es extrada con 4 porciones de
50 ml de cloroformo, lo que fueron filtrados
directamente cada uno de ellos a un matraz de
aforo de 250 ml, el cual se aforo con cloroformo. Se
tom una alcuota de 1 ml con un pipeta de aforo
del matraz de 250 ml y se transfirieron a un matraz
de aforo de 50 ml, se aforo con cloroformo.
Con este procedimiento se obtuvo la muestra 11, la
que junto con la muestra 7 se taparon
hermticamente y se mantuvieron resguardadas del
calor y as posteriormente se procedi a cuantificar
con espectroscopia. Adems se determin la
concentracin y % de los compuestos en la tableta
original.
IV. Resultados
Tabla N1: Datos de estndares de espectroscopia
visible de la cafena.
Observacin: A partir de los estndares para la
cafena se construy una curva de calibracin para
posteriormente conocer la concentracin de la
muestra problema nmero 7.
De la curva de calibracin (adjuntada en los
anexos) se obtuvo la ecuacin de la recta:
y = 10312x-0,0571, en donde para el clculo de la
concentracin se ocup la ecuacin obtenida y se
despej para el dato de la absorbancia que se
manejaba de la muestra problema.
(Dato: Absorbancia de la muestra problema 1,324 a
277 nm)
Se obtuvo que la concentracin de la muestra
nmero 7 que corresponde a cafena fue de 1,3 x
10-4 Moles por litro.
La concentracin estaba contenida en 1 litro, por lo
que se tuvo que calcular cual es la concentracin
que estaba en el matraz que contena la muestra
(50 ml)
1,3 x 10-4 1000ml
X 50ml
La concentracin obtenida de la muestra 7 fue de
6,7 x 10-6 moles un 50 ml de cafena.
Por lo tanto con el PM de la cafena se determin la
cantidad de gramos y posteriormente los mg de
cafena en la muestra.
En la muestra problema se obtuvo 0,025 gramos =
25 mg de cafena. Por lo que l % de cafena de la
muestra 0,53 gr son el 100%, entonces los 0,025 gr
son el 4,72%.
Tabla N2: Datos de estndares de espectroscopia
visible del cido Acetilsaliclico.
Observacin: A partir de los estndares para el
cido acetilsaliclico se construy una curva de
calibracin para conocer la concentracin de la
muestra problema nmero 11
De la curva de calibracin para el cido
acetilsaliclico (adjuntada en anexos) se obtuvo la
ecuacin de la recta:
Y= 1322,3 x - 0,0067
(Dato: No se pudo obtener la concentracin de la
muestra nmero 11, debido a que no se registr la
absorbancia de la muestra problema, por lo que no
se pudo desarrollar ningn clculo posterior.)
V. Discusin
En esta prctica de laboratorio se entreg una
muestra problema correspondiente a Cafiaspirina
cuyo peso fue de 0,53 gr, para determinar la
concentracin de cafena y cido acetilsaliclico,
para ello, se recurri a la espectroscopia de UV-
visible, y se realizaron curvas de calibracin que
siguen correctamente la Ley de Lambert-Beer y as
de este modo extrapolar la concentracin de la
muestra problema.
Para separar los componentes de la Cafiaspirina se
usaron tcnicas de decantacin, se bas en que,
cuando dos sustancias lquidas inmiscibles se
mezclan forman dos capas denominadas fases, el
lquido ms denso se dirige hacia el fondo del
embudo de decantacin, mientras el menos denso,
se ubica sobre el anterior en este instante el
sistema es de dos fases lquidas. Un soluto puede
mostrar mayor afinidad por uno de los dos lquidos,
es decir, que el soluto ser ms soluble en una fase
que en otro (Guarnizo, Martinez Yepes. 2009). En
este paso prctico se utiliz como solvente
cloroformo y una solucin de bicarbonato al 4%, as
en el embudo se separaron los lquidos en una fase
acuosa y una fase orgnica la cual sera la ms
densa, por ende se encontrara en el fondo del
embudo de decantacin, esta fase contena al
cloroformo. El cido acetilsaliclico (AAS) tiene ms
afinidad por la fase acuosa por ello es all donde
realiz la cuantificacin de este cido,
especficamente en la muestra marcada como 11,
por otro lado la cafena es ms afn a la fase
orgnica y es en esta fase donde se realiz la
cuantificacin de la muestra, rotulada como
muestra 7.
Al realizar la medicin en el espectrofotmetro de la
muestra 7 se obtuvo un mximo de absorbancia de
1,324 a 277 nm, al reemplazar este valor de
absorbancia en la ecuacin de la recta otorgada de
la curva de calibracin, se obtuvo una
concentracin de 1,3 x 10-4 M, como la muestra
estaba contenida en un matraz de 50 mL se calcula
que la concentracin es de 6,7 x 10-6 moles en
50ml, al saber el peso molecular de la cafena se
pudo calcular los gramos, correspondientes a 0,025
gr, este valor se encuentra alejado de lo que
normalmente se encuentra en este frmaco que
segn informacin estandarizada de l se
encuentra una concentracin de cafena de 40 mg
equivalente a 0,04 gr, esta diferencia pudo estar
dada a perdida de muestra mientras se realizaba el
prctico o bien no se recolecto adecuadamente la
fase orgnica debido a fallas en el embudo de
decantacin.
En cuanto a la muestra nmero 11 no se lograron
obtener resultados, debido a mltiples fallas en la
experimentacin, una de ellas se present en el
embudo de decantacin, se trab la llave
perdindose cantidades considerables de la fase
acuosa, por ello no se pudo cuantificar la
concentracin del AAS, adems se pudo
contaminar la muestra con agua, ya que al tratar de
contener la muestra, esta se manipulo
inadecuadamente. Los fallos de esta cuantificacin
se evidencian en el grfico del absorbancia
entregado por el espectrofotmetro, se aprecia en
este que no existen puntos de absorbancia ni
mnimos ni mximos, esto pudo deberse a que la
longitud de onda no fue adecuada para tratar la
muestra contaminada que se insert en este.
VI. Conclusin
Respecto a la espectroscopia UV visible cabe
destacar que tiene aplicaciones en qumica
analtica, especialmente para determinar
concentraciones de analitos, para lo cual se hace
uso de la ley de Lamber-Beer, y tambin tiene
multitud de aplicaciones fisicoqumicas, que en
parte estn basadas en la fuerte dependencia de
los espectros UV-visible con la temperatura, el ph,
el estado fsico de la muestra, el disolvente, etc
(Iriarte; Mercedez, Castillero; Luis. 2012.). Los
objetivos planteados en el prctico se cumplieron
cuando se logr obtener la concentracin de la
cafena de la muestra de dicho frmaco, no
ocurriendo en el caso de AAS, los errores que se
atribuyen al mal manejo de tcnicas de laboratorio
por nuestra parte dando como ejemplo las perdida
de muestra al momento de moler la tableta en el
mortero quedando residuos en l, lo que produjo el
hecho de que los pasos siguientes se realizaran
con una cantidad inferior a la correspondiente
alterando las concentraciones finales, adems, se
produjeron filtraciones imprecisas en las
extracciones realizadas, especficamente la fase
acuosa donde se concentraba el AAS. Se considera
que la precaucin y cautela de dicho experimento
es la clave de una buena extraccin y obtencin de
las muestras; a pesar de todo lo ocurrido se logr
cumplir la Ley de Lamber-Beer, en donde mediante
las concentraciones y la absorbancia de la cafena
se interpol y se obtuvo su concentracin.
VII. Bibliografa
Anderson Guarnizo Franco, Pedro Nel Martinez
Yepes.. (2009). Experimentos de Quimica
Orgnica con enfoque en ciencias de la vida.
Armenia, Quindio, Colombia: ELIZCOM S.A.S.
ISBN 9589774466, 9789589774465.
Gmez, Santiago. Sierra, Mara. Analisis
Instrumental Volumen 1, Netbiblo S. L.Espaa,
pg 47, ISBN: 978-84-9745-377-6
Iriarte; Mercedez, Castillero; Luis. 2012.
Especrofotometra UV-visible (III): Aplicaciones en
Qumica. Fecha: 25 de Mayo de 2014,
00:36.[Extrado de:
http://triplenlace.com/2012/12/05/especrofotometria-
uv-visible-iii-aplicaciones-en-quimica/