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Resumen
La presente investigacin tuvo como objetivo la evaluacin de la calidad de dos abonos orgnicos lquidos producidos
a partir de estircol de ovino, mediante dos procesos consecutivos la digestin anaerobia en biodigestores (Biol I-G)
y la fermentacin homolctica sobre el biol obtenido (Biol II-G) simples y poco costosos, con el fin de identificar
alternativas ante el indiscriminado uso de fertilizantes qumicos en la agricultura. Por ello, los bioles fueron sometidos
a un anlisis de parmetros fsico-qumicos como pH, conductividad elctrica, concentracin de materia orgnica, C,
N, P, K, Ca, Mg, Na, metales pesados (Pb, Cd, Cr) y microbiolgicos como cantidad de coliformes totales, coliformes
fecales, Staphylococcus sp. y Salmonella sp. Adems, se evaluaron los efectos en la germinacin y crecimiento de
semillas de lechuga en un ensayo de toxicidad Aguda. Los resultados de laboratorio evidenciaron que el Biol II-G
alcanz valores de pH alrededor de 3.5, un nivel mucho ms cido con respecto al que present el Biol I-G (entre 6.8-
7.8). Las concentraciones de nutrientes se incrementaron considerablemente al finalizar el proceso de produccin del
Biol II-G, muchos de los elementos hasta quintuplicaron sus valores. De igual manera, los metales pesados aumentaron
sus concentraciones, sin embargo no sobrepasaron los lmites establecidos en la normativa internacional. La carga
patgena se redujo totalmente al finalizar el segundo tratamiento, es decir se puede considerar al Biol II-G como un
producto inocuo para su aplicacin como fertilizante orgnico.Finalmente, el ensayo de fitotoxicidad demostr que las
concentraciones muy altas de los bioles (100% y 10% con Indice de Germinacin < 80%) inhiben la germinacin de las
semillas de lechuga y limitan el crecimiento de la radcula. Mientras que las concentraciones del 1% y 0.01% se acercan
a las dosis ptimas en la utilizacin del Biol de I-G y Biol II-G, respectivamente.
Palabras claves: Digestin anaerbica, fermentacin homolctica, biodigestor, biol.
Abstract
The aim of this study was the quality assessment of two liquid organic fertilizers produced from sheep manure, through
two consecutive biological processes - anaerobic digestion in biogas reactors (Biol I - G) and homolactic fermentation
on that first product (Biol II - G) - simple and inexpensive methods, for identifying alternatives to the indiscriminate
use of chemical fertilizers in agriculture.Therefore, the liquid organic fertilizers were subjected to an physicochemical
and microbiological analysis including parameters such as pH, electric conductivity, organic material concentration,
C, N, P, K, Ca, Mg, Na, heavy metals (Pb, Cd, Cr), amount of total coliforms, fecal coliforms, Staphylococcus sp. and
Salmonella sp. In addition, we evaluated the effects on germination and growth of lettuce seeds through a Phytotoxicity
Test. The laboratory results showed that the Biol II-G pH reached about 3.5 units, more acid than Biol IG (which value
was between 6.8-7.8). Nutrient concentrations increased significantly at the end of the Biol II-G production process,
many of the elements increased to five times their values. Similarly, heavy metals increased their concentrations;
however these did not exceed the limits established by international standards. Pathogen load completely dropped at
the end of the second treatment, so we can consider Biol II -G as a safe product for use as organic fertilizer.
Finally, the Phytotoxicity Test showed that very high concentrations (100% and 10% with Germination Index < 80%)
inhibited the germination and the growth of the radicle and hypocotyl of lettuce seeds. Meanwhile, the concentrations
of 1% and 0.01 % are close to the optimal dosage in the use of Biol I-G and Biol II -G, respectively.
Key words: Anaerobic digestion, homolactic fermentation, bioreactor, organic liquid fertilizer.
1
Egresado de la Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima, Per.
2
Docente de la Universidad Nacional Agraria La Molina, Lima, Pr. Email: lquipuzco@lamolina.edu.pe; jjuscamaita@lamolina.edu.pe
Alicia Medina V., Lawrence Quipuzco U. y Juan Juscamaita M.
Anales Cientficos Vol. 76 No 1, pp. 116-124
2. Materiales y mtodos
El diseo experimental fue un Diseo Completamente al
Azar (DCA) con dos tratamientos y tres repeticiones cada
uno (Ver Figura 1). Los tratamientos evaluados fueron los
siguientes:
(1)
Tratamiento 1: Digestin anaerbica en biodigestores
para la produccin de Biol I-G, llevado a cabo en el
Laboratorio de Ingeniera Ambiental (LIA) de la UNALM
durante los meses de agosto y diciembre del 2012. Las
materias primas fueron estircol de ovino, purn de cerdo
y agua destilada. Figura 2. Diseo del biodigestor de Primera Generacin
(I-G).
(2)
Tratamiento 2: Fermentacin homolctica en
biodigestores para la produccin de Biol II-G, llevado a
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BIODIGESTORES
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A la par, se realiz la caracterizacin inicial del estircol Las mediciones se realizaron dos veces por semana por
de ovinos proveniente de los establos del Programa de espacio de diez semanas.
Ovinos y Camlidos Americanos (POCA) en la UNALM,
incluyendo los parmetros %Humedad, %C y %N. A
Temperatura
partir de estos valores en el volumen til de 30.3 litros
del biodigestor (80%) se ingres como carga nica una Mediante un sensor de temperatura que posee el mismo
mezcla constituida por 4.5 kg de estircol de ovino, equipo Monitor de Gas por Extraccin, marca LANTEC,
4.5 litros de purn de cerdo (15% de la fase lquida del modelo GEM500, se realiz la medicin de la temperatura
biodigestor) y agua destilada hasta enrasar el volumen de interna del sistema.
la fase lquida del biodigestor con una concentracin de Una vez concluido el Tratamiento 1 que dur
solidos de la mezcla del 8%. aproximadamente 120 das, se retiraron muestras de Biol
Una vez realizado el sellado de los reactores, se procedi I-G, las cuales fueron llevadas para anlisis qumico y
a conectar los gasmetros a los reactores para que se de metales pesados en el Laboratorio de Anlisis de
pueda ir almacenando el biogs producido (ver Figura Suelos, Plantas, Aguas y Fertilizantes (LASPAF) de la
3). El proceso de digestin anaerbica tuvo una duracin Facultad de Agronoma y anlisis microbiolgico en el
de 120 das, hasta que la concentracin de metano Laboratorio de Ecologa Microbiana y Biotecnologa
en el biogs cay luego de haber alcanzado su niveles Marino Tabusso de la Facultad de Ciencias, ambos de
mximos. la UNALM.
Como parte del anlisis qumico y de metales pesados,
se incluy el estudio de los siguientes parmetros: pH,
conductividad elctrica, concentracin de materia
orgnica, nitrgeno, fsforo, potasio, calcio, magnesio,
sodio, plomo, cadmio y plomo. Asimismo, en el
anlisis microbiolgico se evaluaron los parmetros de
enumeracin de coliformes totales, coliformes fecales y
Staphylococcus aureus y deteccin de Salmonella sp en
25 mililitros.
Para iniciar el Tratamiento 2, se instalaron 9 envases
plsticos de 1.5 litros de capacidad con tapa hermtica
(Ver Figura 4). En estos se realiz una carga nica de
una mezcla constituida por Biol I-G (70%), melaza como
fuente de azcares (20%) y consorcio microbiano B-Lac
(10%) que propicia la fermentacin homolctica.
pH
La medicin de pH se realiz a travs del potencimetro
Hanna instruments HI8424, proporcionado por el
Laboratorio de Ingeniera Ambiental. La medicin se Figura 4. Instalacin de nueve biodigestores para el
realiz dos veces por semana por espacio de quince das. Tratamiento 2.
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mientras que durante la etapa de anlisis de estabilidad Se sembraron un total de 3660 semillas de lechuga tipo
se evaluaron estos parmetros con una frecuencia de cada Duett, 20 semillas en cada placa Petri, exponindolas a 4
5 das: ml de la dilucin de prueba.
Transcurrido el tiempo de evaluacin (120 horas) se
pH procedi a realizar el conteo de las semillas germinadas.
Inmediatamente despus, se midi la longitud de la
La medicin del pH se realiz a travs del uso de
radcula e hipocotilo de cada semilla germinada con
potencimetro Hanna HI8424.
ayuda de una regla milimetrada. Registrados dichos
datos, se calcul el ndice de Germinacin (IG) usando
Porcentaje de cido lctico la siguiente frmula:
Se determin mediante la medicin indirecta de cido
lctico titulable, siguiendo la metodologa del titulado IG = PRG*CRR
con hidrxido de sodio 0.1N hasta encontrar el punto
100
final correspondiente al cambio de pH del indicador
fenolftalena. El porcentaje de cido lctico se calcul Donde:
considerando el gasto en mL (G) y la normalidad (N) del PGR = Porcentaje de Germinacin Relativo:
NaOH, el volumen de la muestra (m) y el miliequivalente
del cido lctico igual a 0.09:
PRG = N de Semillas germinadas en el extracto x 100
N de Semillas germinadas en el testigo
% Acidez titulable = G*N*meqAc. Lctico*100
m
CRR = Crecimiento de Radcula Relativo:
Conductividad Elctrica
CRR = Elongacin de radculas en el extracto x 100
Se efectu por medicin directa mediante el uso del
Elongacin de radculas en el testigo
conductmetro WTW 330i/SET.
Al trmino del Tratamiento 2, se retiraron muestras
de Biol II-G, las cuales fueron llevadas para anlisis 3. Resultados y discusin
fisicoqumico y de metales pesados en el laboratorio Monitoreo de los tratamientos
de Anlisis de Suelos, Plantas, Aguas y Fertilizantes El producto gaseoso de la digestin anaerobia de
(LASPAF) de la Facultad de Agronoma y anlisis compuestos orgnicos, denominado biogs, contiene un
microbiolgico en el Laboratorio de Ecologa Microbiana alto porcentaje en metano (CH4) de entre 50-70% (Mart,
y Biotecnologa Marino Tabusso de la UNALM. Los 2007). Sin embargo, dentro de la composicin del biogs
parmetros evaluados en dichos anlisis de laboratorio producido durante el Tratamiento 1 el porcentaje mximo
son los mismos efectuados para el Biol I-G, con la de CH4 que se alcanz fue de 34.5% en la repeticin B1 y
finalidad de realizar una comparacin entre ambos bioles. en promedio solo se lograron porcentajes de 30%.
Para la validacin estadstica de los datos se utiliz el La composicin del biogs depende de varios factores,
programa Statical Analysis Software (SAS) versin 9.1, pero esencialmente del sustrato a digerir, es as que la
recurriendo al anlisis de varianza (ANVA) y la prueba produccin de metano que se obtuvo del estircol de ovino
de Tukey, con un nivel de significancia del 5% para ambas dependi bsicamente de su potencial como sustrato.
pruebas, con el propsito de determinar la significancia Es por esta razn que suelen trabajarse procesos de co-
de todas las diferencias entre los bioles obtenidos a partir digestin, caracterizado por una digestin anaerobia
de cada tratamiento. conjunta de dos o ms sustratos de diferente origen, con el
Por ltimo, se estudiaron los efectos fitotxicos de los fin de aprovechar la sinergia de la mezcla, compensando
bioles ejecutando el Ensayo de Toxicidad Aguda sobre las carencias de cada uno de los sustratos por separado.
semillas de lechuga (Lactuca sativa L.) variedad tipo En la Figura 5 se observa que la produccin de metano se
Duett con cuyo poder germinativo es mayor al 90%. inici alrededor de la tercera semana de retencin en todas
Para ello, se establecieron 6 diluciones de evaluacin, las repeticiones, por lo que se debe tener en consideracin
realizndose 3 repeticiones para cada una: que durante los primeros das, la actividad microbiana se
D0: Control Negativo o 100% agua destilada concentra en la degradacin de las molculas orgnicas
complejas. En el transcurso de las semanas, el CH4 se
D1: Control Positivo o 100 % biol puro
increment progresivamente y en los ltimos registros
D2: Dilucin del biol 10:100 (10%) se evidencia que el porcentaje de metano en el biogs
D3: Dilucin del biol 1:100 (1%) producido disminuy. Este descenso es causado por la
D4: Dilucin del biol 0.1:100 (0.1%) falta de nueva materia orgnica como alimento para los
microorganismos al finalizar el primer tratamiento ya que
D5: Dilucin del biol 0.01:100 (0.01%)
la alimentacin has sido tipo batch.
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Con respecto a la variacin de temperatura interna del Al realizar la carga de las mezclas para el Tratamiento 1,
sistema, los valores fueron aumentando ligeramente estas presentaron un valor inicial promedio de pH igual a
a lo largo del proceso de biodigestin. El aumento es 7.56.
consecuencia de la variacin de la temperatura ambiental Se monitore el parmetro pH en la fase lquida de los
(Castillo, 2010) por los cambios de estacionales. biodigestores registrndose estabilidad en este parmetro,
Asimismo, cabe mencionar que la temperatura interna segn se presenta en la Figura 6.
asciende tambin porque la actividad microbiana se
acenta.
Debido a que el pH es un factor crtico para el normal Con respecto al proceso de produccin del Biol II-G
desarrollo de la actividad de microorganismos presentes (Tratamiento 2), los valores iniciales de pH, porcentaje
en la fase lquida, los valores deben mantenerse en un de cido lctico y conductividad elctrica fueron
rango de entre 6 y 8 (Castillo, 2010). Como se puede 5.83, 0.45% y 25.0 mS/cm, respectivamente. Como
observar en la Figura 6, los valores de pH se mantuvieron se muestra en la Figura 7, durante los primeros cinco
dentro de este rango ptimo durante todo el periodo de das, se observa que todas las repeticiones disminuyen
monitoreo. Esto debido principalmente a que el carcter su pH significativamente, alcanzando niveles cidos
del estircol ovino, principal sustrato de la biodigestin, de alrededor de 3.5. A partir de este pH se continu la
el cual no es cido, sino ms bien neutro. evaluacin cada 5 das hasta los 30 das comprobndose
que las condiciones de pH se mantuvieron y verificando
su estabilidad.
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El pH del Biol II-G es significativamente ms cido que cantidades de metales pesados adicionados al suelo seran
el Biol I-G. Las concentraciones de materia orgnica bastante menores con respecto a las encontradas en el
revelan que el Biol II-G presenta una cantidad de materia biol puro y, sobretodo a las que se vienen agregando a los
orgnica mucho mayor a la de Biol I-G. Con respecto al suelos a travs de fertilizantes qumicos.
contenido de nutrientes minerales, el Biol II-G presenta
concentraciones ms altas con referencia al Biol I-G. Cuadro 3. Valores lmites de concentracin de Cd, Cr y
Segn la prueba estadstica de Tukey, las diferencias Pb (mg/kg).
en las cantidades de nutrientes en el Biol I-G y el Biol Tratamiento Plomo Cadmio Cromo
II-G, excepto en el sodio, son altamente significativas
Tratamiento 1
( < 0.01). Esta manifestacin es comprensible en el (Biol I-G) 0.58 0.0 0.13
sentido de que a los nutrientes presentes en el Biol I-G Tratamiento 2
se le agrega el aporte nutricional de la melaza, resultando (Biol II-G) 7.71 1.34 1.00
despus del proceso de fermentacin, un producto (Biol Lodo para uso agrcola,
suelo pH < 7* 1000 20 750
II-G) enriquecido nutricionalmente. Se puede afirmar
entonces que el Biol II-G es un abono orgnico lquido Lodo para uso agrcola,
suelo pH > 7* 1500 40 1200
con mejores caracteristicas qumicas que el Biol I-G. Al
ser comparado con a otros bioles, producidos en similares *Norma Espaola Decreto Real 1310/1990. Regulacin de la utilizacin
condiciones y en base a otros estircoles, se demuestra de lodos de depuracin de aguas residuales en el sector agrario.
que sus condiciones son superiores en la mayora de
casos. Sin embargo, tambin se puede observar en el Los bioles tambin fueron sometidos a un anlisis
Cuadro 1 que el Fast BIOL 20 reune mejores condiciones microbiolgico, donde se evalu: Coliformes Totales,
nutricionales. Coliformes Fecales, Staphylococcus y Salmonella sp.
De igual manera, se determin la concentracin de metales puesto que la presencia de microorganismos patgenos
pesados, plomo, cadmio y cromo, en la composicin en un abono orgnico implicara riesgos a la salud de
de los bioles I-G y II-G. Cabe mencionar que dichos las personas, la calidad del suelo y de los cultivos. Los
elementos son de gran relevancia agronmica puesto que resultados presentados en el Cuadro 4 demuestran que
pueden potenciar el proceso de bioacumulacin en la a pesar que el estircol fresco de ovino presenta valores
cadena trfica (Ricse, 2013). En el Cuadro 2 se presentan de coliformes relativamente bajos en referencia a otros
los resultados obtenidos: tipos de estircoles (Castillo, 2010 y Peralta, 2010), esta
presencia se inhibida de manera parcial en el Biol I-G,
Cuadro 2. Resultados de caracterizacin de metales, pero se elimina totalmente a nivel del Biol II-G; con
valores promedio (mg/L). una reduccin de una unidad logartmica despus de
Tratamiento Plomo Cadmio Cromo completado cada proceso de produccin.
Tratamiento 1 Es importante destacar que el pH cido del Biol II-G inhibe
(Biol I-G) 0.329 0.000 0.073 toda actividad de los microorganismos patgenos. Adems,
Tratamiento 2 segn Scobitz (2003) mencionado por Aldn (2008),
(Biol II-G) 4.410 0.766 0.572 las bacterias lcticas originan un grupo de antibiticos
peptdicos con actividad bactericida que actan en contra
Los contenidos de metales pesados en el Biol I-G son de las especies patgenas que puedan permanecer presentes
menores a los valores que presenta el Biol II-G. Al durante el proceso de fermentacin lctica, garantizando la
igual que en el caso de los nutrientes, esta diferencia inocuidad del producto.
muy marcada (ANOVA, < 0.01) se atribuye a la Realizando una comparacin entre los resultados obtenidos
incorporacin de melaza, la cual contiene metales en el anlisis microbiolgico de los bioles y valores lmites
pesados en su composicin. establecidos en la Ley General de Aguas de nuestro
Debido a que en el Per no existe normativa que defina pas, se encuentra que ambos productos cumplen con lo
estndares referentes a concentraciones mximas establecido.
permitidas de metales pesados en abonos orgnicos Finalmente, siguiendo la metodologa descrita por Sobrero
lquidos, los resultados obtenidos fueron llevados a y Ronco (2004), se dispusieron 5 diluciones para cada biol
concentraciones en base seca con el fin de ser comparados (100%, 10%, 1%, 0.1% y 0.01%) sumadas a un control.
con normativa espaola referente a la utilizacin de lodos Con relacin a la germinacin de las semillas, se logr
de depuracin de aguas residuales en el sector agrario el desarrollo normal de las semillas que en la mayora de
(Ver Cuadro 3). casos alcanz un porcentaje de germinacin mayor a 95%,
Segn se observa ambos bioles no superan ninguno de segn se muestra en el Cuadro 6. No obstante, se pudo
los estndares, pudindose catalogar incluso como un constatar que las semillas sembradas en las diluciones al
abono orgnico lquido de mucha calidad, con respecto a 100% y 10% del Biol II-G no hubo germinacin de ninguna
su contenido de metales pesados. Adems, es importante de las semillas expuestas dado que presentan pH bajo y alta
precisar que el mtodo de aplicacin de los bioles es conductividad elctrica y las semillas de lechuga son muy
mediante dilucin en el agua de riego, por lo que las sensibles a estas condiciones.
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Las semillas germinadas en las diluciones 10%, 1%, 0.1% concentracin, por lo tanto hay un adecuado desarrollo de la
y 0.01% del Biol I-G alcanzaron medidas similares, e germinacin de la semillas y el crecimiento de la radcula.
incluso superiores, a las que present el control. Esto es un Sin embargo, este indicador para la presente investigacin
indicador de la influencia positiva que tendran estos bioles se refiere ms bien a la identificacin de concentraciones
en la germinacin y el desarrollo inicial de las plantas. ptimas para el mejor desarrollo de las plntulas. Las
Por el contrario, en el caso del Biol II-G, la concentracin diluciones de concentracin 1%, 0.1% y 0.01% del Biol
0.01% logr igualar la elongacin alcanzada por el I-G presentan valores IG 80%. Con respecto al Biol II-
control. Por lo que se puede concluir que, mientras ms G, solo las disoluciones 0.1% y 0.01% alcanzaron un IG
diluido se encontr el Biol II-G, se alcanzaron medidas > 80%. Las concentraciones ms altas (100%, 10% y 1%)
que evidenciaron una mayor influencia positiva como tuvieron una notable influencia negativa en los valores
consecuencia de su aplicacin. Tal como se muestra de Indice de Germinacin, esto probablemente a la alta
en el Cuadro 6 se presentan los valores Porcentaje de conductividad elctrica y el pH muy bajo.
Germinacin Relativo (PGR), Crecimiento de Radcula Tambin afirma que un valor de IG 50% indica que
Relativo (CRR) y el ndice de Germinacin (IG) para cada hay una fuerte presencia de sustancias fitotxicas en la
concentracin de los bioles en las diluciones: dilucin por lo que en caso no se inhiba completamente
Segn Varnero et al. (2007), los valores de IG 80% indican la germinacin de las semillas utilizadas, por lo menos se
que no hay sustancias fitotxicas o estn en muy baja limitar el desarrollo de la radcula en estas.
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5. Literartura citadad
Aldn, D. 2008. Estrategia ambiental de aprovechamiento
de la macroalga Ulva lctica a travs del proceso de
ensilaje. Tesis. Facultad de Ciencias. Universidad
Nacional Agraria La Molina.
Castillo, G. 2012. Evaluacin de codornaza y gallinaza
de granjas avcolas para la produccin de biogs y
bioabono mediante digestin anaerbica. Facultad de
Ciencias. Universidad Nacional Agraria La Molina.
Mart, J. 2008. Biodigestores Familiares. Gua de diseo
y manual de instalacin. Biodigestores de polietileno
tubular de bajo costo para trpico, valle y altiplano. GTZ
Cooperacin Tcnica Alemana. Bolivia.
Peralta, R. 2010. Determinacin de parmetros ptimos
en la produccin de fast biol usando excretas de ganado
lechero del establo de la UNALM. Tesis. Facultad de
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