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MICROPIPETAS
Objetivos
Identificarlaspartesquecomponenlasmicropipetas.
Utilizarlasdemaneraadecuadayseguirloscuidadosindicadosparasu
mejorconservacin.
Realizar el clculo de la exactitud y del coeficiente de variacin de las
medicionesconmicropipetas.
Antecedentesacadmicos
Manejodematerialdelaboratorio.
Tiposdemicropipetas.
Calibracindemicropipetas.
Tiposdeerroresdemedicin.
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BioqumicaCelularydelosTejidosI
Introduccin
Lasmicropipetassondispositivosquesecaracterizanporcarecerdedepsito
yqueseutilizanparamedirotransvasarpequeosvolmenesdelquidode
un recipiente a otro con gran exactitud, permiten medir volmenes
pequeos que van desde 0.1 L y comnmente hasta 1 mL. Hoy en da
existen unagrancantidaddecompaas ymodelossimilares que funcionan
bajounmismoprincipiodepistones.Porloanterior,esimportanteconsultar
las instrucciones del fabricante sobre el empleo correcto de cada modelo.
Una caracterstica comn a todas es que utilizan puntas descartables
plsticasqueseajustanalextremodecadamodelodemicropipeta.Enestas
puntasdeplsticoesdondesedepositaellquidoamedir.
Existen micropipetas que solo miden un volumen fijo y otras que miden
volmenes variables. Las de volumen fijo son ms precisas que las de
volumen variable. Adems pueden ser usadas de forma manual o
electrnicamente automatizada; siendo stas ltimas de alto costo por lo
quesuusoselimitaenequiposautomatizadosorobticos
La pipeta mecnica o de pistn funciona generalmente transmitiendo la
fuerzaqueunoperadorejercesobreunmboloqueseencuentraunidoaun
pistnmedianteunejequelosdesplazaalolargodeuncilindrodelongitud
fija,forzandounvolumenpredefinidodelquidofueradelapipeta.
Lapipetasdepistndevolumenfijo,dispensanunvolumenpredeterminado
delquido,elcualesconocidocomovolumennominal(Vn)ylasdevolumen
variable permiten ajustar el volumen dispensado dentro de un rango
determinado en las especificaciones de la pipeta; en este caso, la variacin
delvolumenselogramodificandolalongituddelacarreradelpistndentro
delmbolomedianteunmicrmetro.
Laspipetasdepistnpueden serde desplazamientoporaireoneumticas,
debidoaqueexisteunvolumendeaireentrelacabezadelpistnyellquido
enelcilindro,odedesplazamientodirectoporqueelpistnseencuentraen
contactodirectoconellquido(Fig.1).
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Manejodemicropipetas
Fig.1.Tiposdepipetasdependiendodelaformadelpistn.Imagentomada
deOrganizacinPanamericanadelaSalud(2005).Manualde
mantenimientoparaequipodelaboratorio(178).
Todaslaspipetasdepistndisponendepuntasdesechablesparaminimizar
losriesgosdecontaminacin.Parafacilitarelusodeltipodepuntaadecuado
los fabricantes han adoptado un cdigo de color segn el volumen a
dispensar(Cuadro1)yqueenlasdeusomsgeneralcoincideconelcolorde
laspuntasutilizadas.
Cuadro1.Capacidaddelaspipetasporcdigodecolores
0.1-2.5 L Negro
0.5-10 L Gris
10-100 L Amarillo
50-200 L Amarillo
100-1000 L Azul
500-2500 L Rojo
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BioqumicaCelularydelosTejidosI
LaspipetasutilizadasennuestroslaboratoriossondeltipoGilson(Figs.2y
3).Cadamarcatienesusparticularidades,especialmenteconelajusteexacto
de las puntas desechables; sin embargo, el uso, cuidado y calibracin es
similarparatodaslasdesutipo.
Fig.2.ImgenesdepipetasdelamarcaGilsondedistintas
capacidades.
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Manejodemicropipetas
Tornillodelbotn Botnpulsador
pulsador
Ruedadentada
Botnparaquitar
decontrol
puntas
volumen
Ventanade
volumen
Eyectordepunta
Conodepipeta
Punta
desechable
Fig.3.Esquemadelaspartesquecomponenunmicropipetadela
marcaGilson.
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BioqumicaCelularydelosTejidosI
Recomendacionesparaelpipeteo:
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Manejodemicropipetas
Material
Micropipetasp20,p200,p1000yp5000L
Balanzaanaltica
Unacajapetriounvasodeprecipitadode10mL.
Puntasdesechablesparalasmicropipetas
Aguadestilada
Mtodo
1. Pasosparamanejarunamicropipeta:
a. Ajustarelvolumengirandolaruedadentada
de control de volumen hasta que en la
ventanaaparezcaelvolumendeseado.
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BioqumicaCelularydelosTejidosI
e. Apoyandolapuntacontralapareddelrecipiente
colocarellquido,presionarlentamenteelbotn
pulsador hasta el primer tope. Despus de un
segundo,ysinsoltarelbotnpulsador,terminar
devaciarlapipetapresionandohastaelsegundo
tope.
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Manejodemicropipetas
a.Ellquidonodebeentrarencontactoconelconodelamicropipeta.
b.Nuncainvertirlamicropipetaconlapartedearribahaciaabajo.
3.Clculodelaexactitud(E%)ydelcoeficientedevariacin(CV%):
b.Seleccionarlamicropipetaylaspuntasadecuadas.
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BioqumicaCelularydelosTejidosI
c.Colocarelvasodeprecipitadounacajapetrienlabalanza,anotar
elpesoytararacero.
d.Tomarelvolumendeaguadestiladaconlamicropipetaycolocaren
elvasoqueseencuentraenlabalanza.
e.Registrarelpesodelaguaaadido.Ladensidaddelaguaes1g/mLa
25 C, por lo tanto un volumen de 1 mL corresponde aproximadamente a
unamasade1g,(1ml=1000L).
f.Repetirelprocedimientodiezvecesparacadavolumen.
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Manejodemicropipetas
4.Clculodelvolumenmedio:
Los valores de las pesadas del control gravimtrico son slo la masa del
volumen dosificado. Para obtener el volumen real se debe efectuar un
clculo corrector. El clculo corrector se realiza por multiplicacin del valor
mediodelosvaloresdelaspesadas(x)conelfactorZ(mL/gqueeslomismo
queL/mg),quetomaenconsideracinladensidaddelagua,latemperatura
de control y la presin atmosfrica. Z es igual a 1.0032 L/mg, referido a
21.5C, 1013 mbar (hPa) y a la utilizacin de agua destilada o Z es igual a
1.0029L/mg,referidoa20.5Cy1013mbar(hPa).
Ejemplo:
Valoresdelcontrola21.5C(Z=1.0032L/mg)
VolumencontroladoVo(eselvolumendelapipetaquesecalibra)
EjemploVo(L):20L(x)
ValornominalV(mg)=Volumencontrolado/Z
Valornominal(mg):(20L/1.0032L/mg)=19.9362mg
x1=20.0mgx2=19.9mgx3=19.5mgx4=19.6mgx5=19.9mg
Valormedio
=xi/n
x =resultadodelaspesadas
n=nmerodepesadas
Volumenmedio
= *Z =promediodelaspesadas
Z=factor
Exactitud
E(%)= Vnominal/Vnominal*100
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BioqumicaCelularydelosTejidosI
Desviacinestndar
S=Z*
Coeficientedevariacin
CV(%)= *100
Silosvalorescalculadosdeexactitud(E%)yelcoeficientedevariacin(CV%)
son menores que los valores de tolerancia o iguales a stos, entonces la
pipetaestenorden.
Limitesdetolerancia
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Manejodemicropipetas
Resultados
- Realizar en anlisis de los datos obtenidos con las frmulas
proporcionadas.
- Calcularlaexactitudyprecisinquetienenlasmicropipetasutilizadas
enellaboratorio.
Cuestionario
1.Definaqueescalibracin
3.Definaqueesexactitudyprecisin
4.Qumarcasdemicropipetassonlasmscomunes?
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BioqumicaCelularydelosTejidosI
Referencias
1. CatlogodeProductosdeManejodelquidos.LT800507/A.USA:Gilson
S.A.S.;2011.
2. Garca M, Silva M. Manual del tcnico superior de laboratorio de
anlisisclnicos.Espaa:MAD;2004.
3. Instrucciones de Trabajo Estndar para Pipetas. AESOP13640.
Germany:EppendorfAG;2013.
4. Organizacin Panamericana de la Salud. Manual de mantenimiento
paraequipodelaboratorio.Washington:2005.
5. Segal C, Ortega G. Manual de prcticas de biologa molecular de la
clulal.Mxico:FacultaddecienciasdelaUNAM;2005.
6. UsersGuide.PIPETMANP.LT801129/A.France:GilsonS.A.S.;2009.
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