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8 AISLAMIENTO Y CUANTIFICACIN DE
MICROORGANISMOS.
Podemos distinguir dos tipos, aquellos que se realizan en medios lquidos y los que se
realizan en medios slidos.
a) Medio lquido:
b) Medio slido:
- tcnica de siembra por estras en placa: con un asa de platino se pasa una porcin de la
muestra a la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se siembra en el
medio por estras.
- tcnica de siembra por difusin en placa (distribucin del inoculo de manera homognea
por toda la placa -al azar-): se usa una varilla de cristal estril para esparcir la muestra. Esta
operacin hace posible adelgazar la muestra de tal manera que en la superficie del agar
queden las bacterias separadas unas de otras.
b) Filtracin. Los lquidos que contienen las bacterias se hacen pasar a travs de un
filtro que retienen los grmenes. Se deja despus que el filtro absorba un medio de cultivo y
se incuba, pudiendo contarse las colonias que se desarrollen.
Lo aparatos portafiltros estn hechos de metal o de vidrio y se componen de un
embudo inferior, que llevan una plataforma de cartn comprimido rodeado de un anillo de
goma de silicona. Los filtros Francisco derivados de ester de celulosa poroso, de unos
120m de grueso. Los poros de las caras superiores tienen un dimetro de 0,5-1,0m,
agrandndose a 3-5m en la cara inferior. De esta forma, las bacterias quedan detenidas en
la parte superior, pero el medio de cultivo puede llegar fcilmente a ella por capilaridad. En
la superficie de cada filtro hay marcada una cuadrcula para facilitar el recuento.
Reactivos:
1% Cloruro de Bario (BaCl2) anhdrido
1% cido sulfrico (H2SO4) puro y fro
Mtodo de Preparacin:
1. Aadir 0,5 mL de 1% BaCl2 a 99,5 mL de 1% de H2SO4.
2. Revuelva para mantener en suspensin.
3. Mezclar completamente ante de proceder al siguiente paso.
4. Distribuya 5 mL de la solucin de McFarland en tubos de dimetros similares.
Se sugiere usar los mismos tubos que se utilizan rutinariamente para ajustar la densidad de
las suspensiones antes de la inoculacin.
5. Cuando estos estndares estn en suspensin completa, la turbidez equivale a un cultivo
que contiene 1,5 x 108 clulas.
6. Los tubos que contienen la solucin de 0.5 McFarland se deben guardar en un lugar
oscuro, a temperatura ambiente.
El recuento debe hacerse en aquellas placas que contengan entre 20 y 200 UFC.
Un conteo inferior escapa a los lmites de error del mtodo. La concentracin microbiana
debe expresarse como el nmero de Hongos y Levaduras presentes en 100 ml de la
muestra.