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GISELL MEJIA
GUSTAVO ROJAS
ANGELICA TULANDE
1.)
2.)
Sistema de bombeo: Todos los sistemas HPLC incorporan un sistema de bombeo, con
las siguientes caractersticas:
Debe ser capaz de gestionar altas presiones, de hasta 400 atm., Mantener un flujo libre
de pulsos, Proporcionar caudales constantes y reproducibles, Permitir cambios de
disolvente de modo simple y rpido, Ser qumicamente inerte y resistente a la corrosin.
3.)
El tiempo cero (t0) o tiempo muerto (tm), es el tiempo de retencin del componente inerte o
gas portador.
El tiempo de retencin (ti o tR) es el tiempo transcurrido entre el instante en que se introduce
la mezcla y el instante en que se detecta la seal propia del componente en su mxima
intensidad. Los tiempos de retencin no son reproducibles, ni siquiera en una misma columna
cromatogrfica.
t'i = ti - t0
Es el volumen necesario de fase mvil para transportar el soluto de un extremo a otro del
sistema cromatogrfico.
> 2 se obtiene una mala separacin ya que son necesarios periodos muy largos para
realizarla.
Eficiencia
Para definir la eficacia se utiliza el concepto de piso terico, y se define ste como la seccin
terico-transversal en la cual se realiza el equilibrio de particin durante el flujo de fase
mvil. Cuanto mayor es el nmero de platos terico (N) mayor ser la eficiencia de la
columna.
Resolucin (R o Rs).
4.)
5.)
Espectrmetro de Masas
Los analitos se detectan basndose en su peso molecular. La informacin obtenida es
especialmente til para la identificacin de compuestos estructurales. Sin embargo, su uso
no se limita a la identificacin de la estructura y se puede utilizar para cuantificar lmite de
deteccin muy bajo de componentes elementales y moleculares.
Detector de conductividad
Las soluciones que contienen componentes inicos conducen la electricidad. Detector de
conductividad mide la resistencia electrnica y el valor medido es directamente proporcional
a la concentracin de los iones presentes en la solucin. Por lo tanto, se utiliza generalmente
para la cromatografa de iones.
Detector de Fluorescencia
La ventaja del mtodo de fluorescencia es su alta sensibilidad para determinados grupos de
compuestos a ~ nivel fg. Mediante el uso de una longitud de onda especfica, tomos de
analito son excitados y luego emitir la seal de luz (fluorescencia). La intensidad de esta luz
emitida se controla para cuantificar la concentracin del analito.
Detector de quimioluminiscencia
Similar a FL, pero en lugar de utilizar una fuente de luz para excitar los tomos de analito, la
excitacin se inicia por reaccin qumica. Puesto que no se bas en la fuente de excitacin
externa, el ruido es pequeo, resulta en elevada relacin de seal a ruido, es decir, que
proporciona una sensibilidad an mayor que FL.
Detector electroqumico
Hay varios tipos diferentes de ECs. La deteccin se basa en amperometra, polarografa,
culombimetra y conductrometria. Ofrecen una alta sensibilidad, simplicidad, conveniencia
y aplicabilidad generalizada. Es especialmente adecuado para el uso con el sistema de tipo
semi-micro o capilar
6.)
Presin Alta
o Posible causa: Obstruccin de la Columna de HPLC o Guarda Columna por
partculas.
o Solucin: Invierta la Columna y Enjuagar con solvente, teniendo la columna
desconectada del detector. Si sto no funciona reemplaze el fritado a la
entrada de la columna. Si la presin sigue alta reemplaze la columna.
o Solucin a largo plazo: Asegurese que todas las fases mviles se filtren
apropiadamente antes que entren a la bomba de HPLC . Tambin filtre todas
las muestras antes de inyectarlas.
Prdida de la Resolucin
o Posible causa: Obstruccin de la Columna de HPLC del Guarda Columna
por partculas.
o Solucin: vea la seccin de Presin Alta
o Solucin a largo plazo: Filtrar todo antes que se introduzcan las fases
mviles en el sistema de HPLC.
Picos Hendidos
o Posible causa : Obstruccin de la Columna de HPLC o del Guarda Columna
por partculas.
o Solucin: Marcha atrs columna roja con presin baja est al lado de abre.
Si es necesario reemplaze el fritado de la entrada o la columna.
o Solucin a largo plazo: Filtrar todo antes que se introduzcan las fases
mviles en el sistema de HPLC.
Variacin en los Tiempos de Retencin
o Posible causa : Aire atrapado en la bomba debido a gases disueltos en fase
mvil.
o Solucin: Bomba primera y est fases seguras tan mviles es propiamente
[degassed]
o Solucin a larga plazo: Asegurese fase tan mvil est propiamente y
adecuadamente desgasificada. Si usa desgasificacin electrnica en lnea
asegura esa cadencia del flujo no es demasiado alto para evita [degassing]
completo.
Variaciones de la Lnea Base
o Posible causa: Burbujas del aire atrapados en la celda del detector debido a
una mala desgasificacin de los solventes de la fase mvil.
o Solucin: Asegurese que todas las fases mviles estn debidamente
desgasificadas y considerar el uso de un restrictor de la presin a toma de
corriente del detector.
Lnea Base con mucho Ruido
o Posible causa: Aire atrapado en celda del detector o en la bomba.
o Solucin: Enjuage el sistema y purge la bomba de HPLC . Use Solventes
desgasificados adecuadamente para mantener constante la velocidad de flujo
de la fase movil del sistema.
Picos Falsos (Detectores Electroqumicos y de Fluorescencia)
o Posible causa: Oxgeno Disuelto
o Solucin: Desgasificar adecuadamente las fases mviles para reducir la
concentracin de oxgeno disuelto.
o Solucin a largo plazo: Agregar un sistema de filtracin al vaco en lnea.
Peridicamente chequear el nivel de oxgeno disuelto.
Baja Ninguna Presin
o Posible causa: Trabajar con bombas, sellos pistones expuestos por mucho
tiempo a partculas en suspencin en la fase mvil.
o Solucin: Reemplace los sellos o pistones, si es necesario.