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fustiger 81
ARTCULO ORIGINAL
D.R. TIP Revista Especializada en Ciencias Qumico-Biolgicas, 11(2):81-86, 2008
RESUMEN
Por primera vez se describe la morfologa y ultraestructura de la gnada de los machos del sapo endmico de
Cuba, Bufo fustiger. Fueron colectados ocho ejemplares adultos en el rea de La Chorrera en la provincia Pinar
del Ro los cuales fueron trasladados al laboratorio y tratados adecuadamente. Se procesaron las gnadas para
ser observadas por microscopa de luz y microscopa electrnica de transmisin (MET). Se utiliz el microscopio
de fuerza atmica para la observacin de espermatozoides. Los resultados indican que la gnada de los machos
tiene un rgano de Bidder en posicin anterior. La parte correspondiente al testculo muestra una organizacin
en tbulos seminferos y dentro de stos las clulas sexuales (espermatogonias, espermatocitos I y II,
espermtidas en diferenciacin y espermatozoides) estn dispuestas en cistos de forma similar a otros anuros
lo cual indica una conservacin de esta caracterstica dentro de los anfibios y los anamniotas. Se observan
espermtidas al MET en el proceso de espermiognesis con la presencia de mitocondrias y la formacin del
acrosoma. El espermatozoide es delgado, con la cabeza cnica. La cola tiene un axonema con el patrn
microtubular 9 + 2 y se observaron espermatozoides con dos colas. No se detect la presencia de membrana
ondulante. Esto resultados pudieran contribuir a esclarecer la sistemtica del grupo.
Palabras Clave: Anura, Bidder, Bufo fustiger, gnadas, ultraestructura.
A BSTRACT
Morphology and ultrastructure of the male gonad of the endemic toad to Cuba, Bufo fustiger was described. Eight
adults were collected in the area of La Chorrera in Pinar del Rio province. They were transferred to the laboratory
and treated properly. Gonads were processed to be observed by light microscopy and transmission electron
microscopy (TEM). We used the atomic force microscope to observe spermatozoa. The results indicate that in
anterior position the male gonad has a Bidder organ. The proper testis shows an organization in seminiferous
tubules, and within these, sex cells (spermatogonia, spermatocytes I and II, spermatids in differentiation and
spermatozoa) are arranged in the form of cysts similar to other anurans which indicates a conservation of this
feature within amphibians and anamniotas. Spermatids with the presence of mitochondria and the formation of
the acrosom were observed by TEM in spermiogenesis process. The sperm is thin, with a conical head. The tail
has an axonema pattern with 9 + 2 microtubules. Also were observed spermatozoa with two tails. Was not
detected the presence of undulating membrane. These results could help shed light on the taxonomy of the group.
Key Words: Anura, Bidder, Bufo fustiger, male gonads, ultrastructure.
I NTRODUCCIN
E
n los anuros, los testculos son rganos rodeados por objetivos de 20X, 40X y 100X. Las imgenes se digitalizaron
tejido conectivo fibroso que constituye la tnica mediante el programa Motic 2000.
albugnea. En relacin a la arquitectura histolgica de
los elementos seminferos, el epitelio germinal debe En el caso de las muestras para microscopa electrnica de
estar dispuesto en tbulos seminferos en Anura1. transmisin se lavaron con PBS, se fijaron con glutaraldehdo al
2.5% y se postfijaron con tetraxido de osmio al 1% en buffer
El tejido germinal, el cual constituye el parnquima de los fosfato a pH 7,4 por varias horas, despus se enjuagaron y
testculos, tiene diferentes tipos celulares: espermatogonias en deshidrataron en alcoholes crecientes terminando con xido de
el borde del epitelio; espermatocitos y espermtidas en la propileno. La preinclusin se realiz con una mezcla de xido de
secuencia de la diferenciacin celular, y espermatozoides en el propileno y resina epxica 1:1 por 16 horas. La inclusin se llev
lumen o cercano a este. En este epitelio, hay un ordenamiento a cabo con resina epxica durante 16 horas a 60C y se obtuvieron
de las clulas en forma de cistos o quistes, es decir, grupos de cortes ultrafinos con un microtomo modelo Ultracut de Leica.
clulas sexuales asociados con clulas de Sertoli forman quistes Los cortes se observaron bajo un microscopio JEOL JEM 1010.
de clulas espermatognicas. Cada uno de estos grupos de
clulas en la misma fase de diferenciacin y con un sincronismo Tambin se prepararon suspensiones de espermatozoides de
de desarrollo debe ser caracterstica comn en los anfibios2. algunos ejemplares y se observaron por el microscopio de fuerza
atmica de acuerdo a protocolos previamente descritos12. Las
Adems, los sapos machos de la Familia Bufonidae tienen una extensiones de espermatozoides se observaron con un
caracterstica nica y es la presencia en la parte anterior del microscopio de fuerza atmica BioScope (Digital Instruments,
testculo de un ovario vestigial conocido como rgano de Santa Brbara, CA, USA).
Bidder3,4, el cual segn algunos autores5,6 pudiera convertirse en
ovario funcional si fuese preciso y si los testculos son removidos RESULTADOS
pueden desarrollarse en ovarios funcionales representando una La gnada masculina de B. fustiger es alargada, mide
estrategia para la reproduccin de estas especies. A pesar de un aproximadamente 2 cm, en etapa reproductiva es de color amarillo
nmero creciente de estudios7,8 la informacin sobre el rgano claro y en su parte anterior o craneal presenta un rgano de
de Bidder de los bufnidos sigue siendo escasa. Bidder en el cual se pueden apreciar las rugosidades que
evidencian la presencia de numerosos folculos ovognicos
Bufo fustiger es un sapo endmico de Cuba, que tiene una (Figura 1), el resto de la gnada es el testculo. Toda la gnada
relativa abundancia en la zona occidental de la Isla9 y se conoce est cubierta por una fina capa de tejido conectivo, la tnica
muy poco acerca de su biologa por lo cual el objetivo del albugnea y no se observa pigmentacin.
presente trabajo es realizar un estudio de las gnadas del macho
de esta especie mediante microscopa convencional de luz y El epitelio germinal de la zona correspondiente al testculo est
electrnica (MET) con el fin de obtener una mejor comprensin organizado en tbulos (Figura 2). Delimitados por escaso y fino
de su morfologa. tejido conectivo estos tbulos forman unidades morfolgicas,
que son los elementos seminferos del testculo. Entre las unidades
M ATERIAL Y M TODOS seminferas hay tejido intersticial compuesto por clulas de
Se colectaron ocho machos de B. fustiger en La Chorrera, Leydig, fibroblastos y vasos sanguneos (Figura 2).
provincia de Pinar del Ro en la regin occidental de la isla de
Cuba en los meses de actividad reproductiva, entre mayo y
septiembre. Todos los animales fueron tratados ticamente. Los
ejemplares se anestesiaron y se realiz la diseccin. Las gnadas
y tambin el rgano de Bidder se fijaron en paraformaldehdo al
4% y glutaraldehdo al 2.5% en buffer fosfato a pH 7,4 y se
procesaron para las tcnicas de inmunofluorescencia10 y de
microscopa electrnica de transmisin11.
Las espermatogonias definitivas mitticas son clulas cuyos Los espermatocitos II los cuales ya son clulas haploides y
ncleos son redondeados y frecuentemente se observ al bastante menores que sus antecesoras, son difciles de observar
microscopio electrnico la presencia de un nuclolo excntrico pues son muy transitorias y rpidamente pasan por la segunda
(Figura 3). Presentan grnulos de cromatina y en general estn divisin de la meiosis para originar a las espermtidas. stas, en
muy cerca de la pared del tbulo, asociadas a las clulas de el estado primario, son clulas redondeadas. Las espermtidas
Sertoli. II o en alargamiento son clulas con ncleos alargados y
compactos (Figura 5). Estas clulas pasan el proceso de
Los espermatocitos I son el resultado de la diferenciacin de las espermiognesis para generar a los espermatozoides, se puede
espermatogonias que entraron en la profase meitica, su ncleo observar en esta transicin la presencia de mitoncondrias en el
es ligeramente condensado y, en general, los espermatocitos se citoplasma, la formacin del acrosoma (Figura 6) y la sntesis del
observan en las distintas fases de la primera divisin meitica, axonema de la cola o flagelo (Figura 7).
que presentan diferentes grados de compactacin de los
materiales nucleares. En el microscopio electrnico de transmisin Los espermatozoides estn caracterizados por una extraordinaria
se aprecian los cromosomas en la profase I de la meiosis (Figura 4). compactacin nuclear y una reduccin del citoplasma. Son
84 TIP Rev.Esp.Cienc.Qum.Biol. Vol. 11, No. 2
AGRADECIMIENTOS
A Intercambio Acadmico de la UNAM por permitirnos realizar
estancias en el Laboratorio de Nanobiologa Celular de la Facultad
de Ciencias y al Programa de Doctorado Conjunto Universidad
Nacional Autnoma de Mxico-Universidad de la Habana
(UNAN-UH).
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