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PRCTICA 7

DIAGNOSTICO COPROPARASITOSCOPICO (CPS)

B) CPS MEDIATO DIRECTO Y CPS POR CENTRIFUGACION-

FLOTACION

L Galaviz Silva

Introduccin de esquistosomas. La una densidad del


El CPS mediato directo es el empleado para sulfato de zinc se ajusta a 1.18 con heces
examinar heces duras o pastosas. Este frescas (sin formol) o 1.20 con heces
emplea lugol. Se denomina mediato porque conservadas en formaldehido o PVA.
se examinan horas despus de ser Objetivo general
evacuadas porque son tipos de heces que Desarrollar en el estudiante la habilidad de
contienen huevos de helmintos o quistes de analizar microscpicamente muestras de
protozoarios. Al resultar negativas, pero con heces para examen parasitolgico,
sospechas clnicas que indican la presencia capacitndolo para realizar labores
de parsitos, se procede a realizar la tcnica diagnsticas clnicas. Esta prctica
de concentracin de parsitos por complementa los conocimientos tericos
centrifugacin. revisados en la Unidad B2 (Flagelados del
La tcnica de concentracin y flotacin en aparato digestivo y urogenital), Unidad B3
sulfato de zinc, aprovecha la densidad (Protozoarios sarcodinos), B4 (puntos 2 al 5;
menor de los huevos y quistes llevndolos a Toxoplasmosis, Sarcocistosis,
la regin superior del tubo de centrfuga, Criptosporidiasis); Unidades C y D
donde se colectan con un cubreobjetos o (Tremtodos y Cestodos de importancia
pipeta Pasteur. La desventaja es que no es mdica) y Unidad E (Nemtodos de
efectiva en el caso de huevos operculados o importancia mdica).

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zinc, si es superior agregar ms agua ). Si se
Objetivo particular: trata de muestras fijadas con formalina se
Desarrollar en el estudiante la habilidad de recomienda emplear una densidad de 1.20.
ejecutar los protocolos recomendados en el
diagnstico parasitolgico por el CPS El alumno aportar el siguiente material:
mediato y la concentracin de formas Tubos cnicos para centrfuga, gradilla.
parsitas en muestras de heces fecales. Aplicadores, portaobjetos, cubre objetos de
22 X 22 mm.
Material Muestras positivas de heces fecales, sin
El maestro proporcionar: conservador o preservador.
Lugol parasitolgico.
Solucin salina 0.85 % El lugol no es un colorante, sino un
Sulfato de zinc contrastante para microscopa. Tiene
Microscopios afinidad para combinarse con los las
estructuras que contienen glucgeno.
Lugol parasitolgico: Contrasta las formas qusticas y se
Yodo (cristales) 5g recomienda emplearlo en preparaciones
Ioduro de potasio 10 g hmedas o examen en fresco de heces
Agua destilada 100 ml duras o pastosas. Si se utiliza en blandas o
acuosas, los trofozoitos se inmovilizan y se
Disolver el ioduro de potasio en agua destruyen.
destilada, agregar lentamente el iodo y
agitar para disolver los cristales. Filtrar y A) Mtodo del CPS mediato directo.
almacenar en frascos mbar. Antes de Para el CPS mediato, coloque una gota de
usarlo disolver cinco veces en agua una lugol con el gotero (procure que la gota sea
alcuota, para preparar la solucin de pequea (aproximadamente 20 L) para
trabajo. que no se flote la muestra.

Sulfato de zinc: Coloque una pequea cantidad de muestra


a una densidad de 1.18, agregar a un litro de de heces y mezcle con el aplicador. Deposite
agua tibia 331g aproximadamente de el cubreobjetos. Examine en 10X, 40X y si es
sulfato de zinc y filtrar, determinar con un necesario en 100 X. En el objetivo de 10 X
densmetro la densidad, esta debe ser de puede detectar fcilmente huevos de
1.18, si es inferior, aadir ms sulfato de

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nemtodos (Ascaris lumbricoides) cstodos 4. Centrifugar2000-2500 rpm por 2 min .
(Taenia, Hymenolepis) o tremtodos. 5. Al finalizar de centrifugar, no deseche el
sulfato de zinc, agregue ms sulfato con
Si observ escasos parsitos, la siguiente un gotero o pipeta Pasteur, hasta formar
tcnica le permitir concentrarlos para un menisco.
analizar su morfologa ms detenidamente. 6. Llvelo hasta una gradilla sin
movimientos bruscos. Coloque un
B) Mtodo de flotacin centrifugacin cubreobjetos * en la parte superior del
para concentracin de quistes y huevos de menisco, sin perturbarlo y espere 5-10
parsitos. min. Mientras, prepare un portaobjetos
con una gota de lugol.
El material examinado y los sobrenadantes 7. Al terminar el tiempo, lleve el cubre,
desechados se colocan en un recipiente que levantndolo verticalmente con cuidado,
contiene formalina 10% para desinfectarlos. y colquelo sobre la gota de lugol para
examinarlo al microscopio.
1. Deposite la muestra de heces del tamao
(*) Si lo prefiere, tomar una alcuota de la
de un frjol (~ 0.3 g) en un tubo de 13 x
parte superior del menisco, dentro de 10
100 cnico, de plstico. Si tiene muchos min con una pipeta Pasteur o asa
detritos o partculas grandes, filtrar bacteriolgica.
primero la muestra en gasa, antes de
continuar. Si tiene mucho mucus no lo Debido a que los quistes de protozoarios y
filtre, agregue formol al 5 10 % antes huevos de helmintos, poseen una densidad
de continuar. menor que el sulfato de zinc, estos
2. Agregar solucin salina 0.85 % casi hasta ascendern o flotarn hasta la superficie del
la boca del tubo y mezclar con aplicador. menisco. Existen otras tcnicas de flotacin,
Centrifugar a 2000-2500 rpm por 2 min y as como de sedimentacin, que aprovechan
descartar el sobrenadante. Repetir hasta el mismo principio para separarlos de las
que quede claro el sobrenadante heces y recuperarlos.
(regularmente de 7 a 10 veces).
3. Agregar primero, sulfato de zinc hasta la
mitad del tubo. Mezclar. Segundo,
agregar ms sulfato hasta 1 cm abajo de
la boca del tubo.

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Resultados y discusiones

1.- Esquematice los protozoarios o


helmintos observados con lugol y por
centrifugacin flotacin en sulfato de zinc.
Literatura consultada (por el alumno)

Investigue en la literatura el nombre de sus


estructuras.
Nota.- No olvide anotar el aumento del
microscopio en los esquemas.

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Bibliografa Centers for Disease Control and Prevention.
2010. Stool Specimens. Centers for
Disease Control and Prevention.
Araujo J, ME Garca, O Daz-Surez1 y H
http://www.cdc.gov/ncidod/dpd/parasit
Urdaneta. 2008. Amibiasis: Importancia
es/index.htm Ultimo Acceso Abril 12,
de su diagnstico y tratamiento. Mini-
2010.
revisin. Invest Cln. 49: 265-271.
Cox, FEG. 2004. Modern Parasitology. 2a
Ash LR & Orighel, TC. 1997. Atlas of Human
Edicin. BlackwelI Science Ltd. USA. 276
Parasitology. 4 ed. American Society of
pp.
Clinical Pathologists. ASCP Press, Chicago.
Fotedar R, Stark D, Beebe N, Marriott D, Ellis
410 pp.
J, Harkness. 2007. Laboratory diagnostic
vila-Rodrguez EH, A vila-Rodrguez, JM
techniques for Entamoeba species. Clin
Araujo-Contreras, A Villarreal-Martnez &
Microbiol Rev.;20:511-32.
T. Douglas T. 2007. Factores asociados a
Garcia, LS. 2001. Diagnostic Medical
parasitosis intestinal en nios de la
Parasitology. 4 ed. American Society for
consulta ambulatoria de un hospital
Microbiology. ASM Press. Washingthon,
asistencial. Rev Mex Pediatr. 74 : 5-8
DC. Pp. 329-362.
Beaver, PC, Jung, RC & EW Cupp. 2003.
Herrera GM, NCChvez-Tapia, C. Lizardi.
Parasitologa Clnica. 2003. 3 ed. Masson
2003. Absceso heptico amibiano. Med
Doyma Mxico, S.A. Mxico, DF. 823 pp.
Sur. 10:35-37.
Becerril MA. 2008. Parasitologa Mdica. 2.
Khan NA. 2009. Acanthamoeba: Biology and
Ed. Mc Graw Hill/Interamericana
Pathogenesis. Horizon Scientific Press, 1
Editores, SA de CV. Mxico. 308 pp.
220 pp.
Botero D. & M. Restrepo. 2005. Parasitosis
humanas. 4 ed. Quebecor Word, Bogota, Melvin DM, Brooke MM. 1982. Laboratory
Colombia. CIB. 235-237 pp. Procedures for the Diagnosis of Intestinal
Brito T. 2006. Diagnstico laboratorial da Parasites. 3rd Edition. US Dept. of Health
Giardia lamblia. Sade & Ambiente em and Human Services publication no.
Revista, Duque de Caxias. 1: 18-25. (CDC) 82-8282. Atlanta (GA): Centers for
Brooke MM & Melvin DM. 1984. Disease Control and Prevention.
Morphology, of Diagnostic Stages of
Intestinal Parasites of Humans. Center Pajuelo CG, RD Lujn, PB Paredes & CR
for Disease Control, Atlanta, GA. HHS Tello. 2006. Aplicacin de la tcnica de
Publication CDC N 84-8116. 30 pp. sedimentacin espontnea en tubo en el

67
diagnstico de parsitos intestinales. Rev Universidad Nacional Autnoma de
Mex Patol Clin. 53: 114-118. Mxico.
Rodrguez Prez E. 2004. Atlas de Trujillo Contreras F, A Villanueva & M
Parasitologa Mdica. Mc Graw Hill. Raygoza. 2001. Manual Prctico
Mxico. 57 pp. Ilustrado. Enfermedades Parasitarias.
Schuster FL, GS Visvesvara. 2004. Amebae Ediciones Cuellas, Jalisco, Mxico. 165
and ciliated protozoa as causal agents of pp.
waterborne zoonotic disease. Veterinary Valadez A, C- Ximenez. 2005. Entamoeba
Parasitology. 126: 91-120. histolytica and Entamoeba dispar:
Tanyuksel M & W Petri, Jr. 2003. Laboratory prevalence infection in a rural mexican
Diagnosis of Amebiasis. Clin Microbio community. Exp Parasitol. 110:327-30.
Rev, 16: 713-729. Uribarren Berrueta, T. 2010. Recursos en
Tato Saldivar P & Garca Yez, Y. 2010. Parasitologa. NAEGLERIOSIS,
Prcticas de Laboratorio. Programa ACANTHAMOEBOSIS, BALAMUTHIOSIS.
acadmico de la asignatura de Facultad de Medicina, Depto. de
Microbiologa y Parasitologa. Microbiologa y Parasitologa, UNAM.
Departamento de Microbiologa y http://www.facmed.unam.mx/marco/ind
Parasitologa. Facultad de Medicina, ex.php?dir_ver=87. Ultimo acceso Abril
12, 2010.

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PRCTICA 8

TCNICAS DE TINCIN PARA EXAMEN DE HECES FECALES

Z J Molina Garza

Introduccin mordiente recientemente preparado, de


Las tcnicas de tincin permiten obtener buena calidad en el caso de hematoxilina
preparaciones permanentes de los parsitos frrica (certificado), 6) usar solucin
intestinales para su posterior examen colorante madura, 7) permitir una buena
microscpico, con lo cual se pueden deshidratacin y transparentacin y 8)
evidenciar formas parsitas enmascaradas examinar la serie de alcoholes para
facilitando su identificacin. La garantizar que estn a pH neutro o
hematoxilina, por ser un colorante acidfilo, ligeramente alcalinos, pues las soluciones
tiene una mayor afinidad hacia los ncleos. de pH cido decoloran los frotis, y en el
Por ello, antiguamente se denominaron montaje con resina sinttica esta debe estar
errneamente algunas estructuras como a pH neutro para garantizar una duracin
cuerpos cromatoidales asocindose con permanente.
las estructuras nucleares. El colorante Objetivo general
tricrmico, en cambio, tie en varias El objetivo de esta prctica es proporcionar
tonalidades entre el verde y el prpura, al alumno los conocimientos sobre las
pero con mayor intensidad en los ncleos y tcnicas de tincin para obtener laminillas
menor en el citoplasma. permanentes de protozoarios intestinales,
debido a que estas sirven como un registro
Los buenos frotis para tincin se logran 1) al permanente de los hallazgos y
utilizar muestras recientes y sin observaciones hechos por el investigador o
conservadores, 2) realizar frotis extendidos en la regin de estudio y es la nica manera
delgados, 3) no permitir que se sequen los de comprobar a la comunidad cientfica la
frotis durante el proceso de tincin, 4) veracidad de su investigacin. Esta prctica
realizar una buena fijacin, 5) usar es complemento importante de la teora

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correspondiente a las Unidades B2 y B3 Resina
sobre protozoarios intestinales y las Carboxilol.
unidades C, D y E sobre helmintos de
importancia clnica. El estudiante proporcionar:
1. Porta y cubreobjetos libres de grasa
Objetivos particulares 2. Aplicadores de madera
1. Capacitar al alumno en las tcnicas de 3. Muestras positivas a de protozoos o
tincin con hematoxilina frrica y helmintos certificadas por el
tricrmica de Gomori para responsable de la prctica mediante
protozoarios intestinales. preparaciones temporales.
2. Informar al estudiante sobre los El estudiante colaborar en la preparacin
pormenores de las tcnicas, los cuales de los reactivos
son parte de la experiencia de los
maestros del laboratorio y que no Fijador de Schaudinn:
aparecen en la literatura, de los cuales 1) Preparar una solucin acusa saturada de
depende el xito de la tcnica. bicloruro de mercurio:
Bicloruro de mercurio
Material 110 g
El laboratorio proporcionar el siguiente Agua destilada
material: 1000 ml
Jarras cubetas de tincin con canastilla Caliente la solucin para permitir que se
Canastillas de plstico, para sumergir las disuelva (evite aspirar los vapores por ser
laminillas en Schaudinn. neurotxico) cubrindolo con un vidrio de
Canastillas metlicas, para sumergir las reloj. No use agitadores o material metlico.
laminillas en el resto de las soluciones, Permitir que se enfre. La solucin saturada
especialmente en el xilol. permitir la sedimentacin de los cristales
Fijador de Schaudinn en el fondo.
Colorante Tricrmico 2) Preparacin del fijador:
Colorante de hematoxilina frrica. Solucin saturada de bicloruro
Mordientes. de mercurio 600 ml
Etanol al 70, 80, 90 y 100 %. Alcohol etlico 95 % 300 ml
Agua destilada.
Pizetas.
Xilol

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Inmediatamente antes de usarlo, agregar 5 Alumbre frrico (sulfato frrico amoniacal):
ml de acido actico glacial por cada 95 ml de Sulfato frrico amoniacal 0.25 g
fijador. Agua destilada 100 ml.

Solucin madre de alcohol iodado DAntoni Hematoxilina (solucin madre del


: colorante):
Disolver 1 g de ioduro de potasio (KI) y 1.5 g Hematoxilina en cristales 10g
de cristales de iodo en 100 ml de agua Etanol 95% 100ml
destilada. Quedar un exceso de cristales
en el fondo del envase. Filtrar la solucin La calidad del colorante se mejora si se
madre en un envase mbar de vidrio. Esta prepara la solucin madre varias semanas
solucin tiene una caducidad promedio de (6) antes y se almacena en un frasco tapado
un ao. Cuando desaparece el exceso de con torunda de algodn para que madure.
cristales deber de prepararse una nueva. Agite eventualmente durante el proceso de
La solucin madre se divide en varios maduracin. Almacene en envase de vidrio
goteros mbar. Este se puede usar sin diluir, bien cerrado a 4 C o en un lugar fresco. La
en lugar del lugol para preparar la caducidad de este es de un ao o mas.
solucin de alcohol iodado.
Solucin de trabajo de hematoxilina: Esta
Alcohol iodado: se prepara antes del proceso de tincin con
Agregue varias gotas de la solucin madre 5ml de la solucin madre en 100 ml de agua
DAntoni al etanol 70 % de la canastilla destilada.
hasta que adquiera un color marrn como el
t. Esta se prepara al momento de teir. Alcohol etlico: Preparar diluciones al 50%,
70%, 95% y 100% ( dos cambios del ltimo).
Otros reactivos para la tincin con Verificar el pH. Este debe ser neutro o
Hematoxilina frrica: ligeramente alcalino (7-7.4), de lo contrario,
Mordiente (para la tcnica de tincin con el tono de la tincin se perder con la
hematoxilina): Antes de iniciar la tcnica, acidez.
preparar una solucin de sulfato frrico
amoniacal al 4% en agua destilada, agitar y Carboxilol: Preparar con un volumen de
eliminar los cristales y partculas no xileno o tolueno y un volumen de alcohol
disueltas. etlico absoluto.

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Resina sinttica neutra: Diluir los cristales emplear canastillas u otros instrumentos
en xileno o tolueno con agitacin constante. de metal. Estos se deben sustituir por
Tambin se puede conseguir preparada en artculos de plstico para evitar la
el comercio. precipitacin del mercurio que tiene el
fijador. Si este precipita, el fijador ya no
Colorante tricmico de Gomori (Ash & servir porque el mercurio es el agente
Orihel, 1997): fijador. Maneje la solucin con cuidado y
Cromotrofo 2R 6g evitar el contacto con la piel, porque es
Verde claro SF 3 g. altamente txico.
Verde rpido FCF 3g 3.- Transferir en alcohol iodado por 5 min. Si
cido fosfotngstico 7g la solucin se ha decolorado, repetir
cido actico glacial 10 ml este paso agregando ms solucin
Agua destilada 1000 ml madre. El alcohol iodado permite
eliminar todos los restos del fijador de
Mezclar los colorantes y cido los frotis. Si quedan restos, no se teir.
fosfotngstico con el cido actico glacial en 4.- Sumergir en etanol al 50% por 3 min
un mortero, macerarlos y mezclarlos, dejar para eliminar el iodo.
reposar 30 min. Agregar el agua destilada y 5.- Lavar en agua de la llave por 3 min.
agitar la solucin. Se usa sin diluir. Este debe 6.- Sumergir en mordiente (sulfato frrico
quedar de color prpura obscuro. amoniacal 4 %) por 5 min a temperatura
ambiente.
A) Mtodo de tincin con hematoxilina 7.- Lavar veces en agua de la llave 1 min.
frrica (Adaptada de Ash & Orihel, 1997): 8.- Transferir a la solucin de trabajo de
hematoxilina por 10 min a temperatura
1.- Depositar la muestra (positiva y con ambiente. El tiempo de tincin tambin
buena densidad de parsitos) con un puede variar dependiendo del grado de
aplicador, cerca de un extremo el madurez del colorante. Si al
portaobjetos y extender para lograr un reutilizarlo, se observan grumos en la
frotis transparente. El grosor adecuado solucin colorante o, si este presenta un
es el que permite leer un peridico a color pardo negruzco, se debe de
travs de l. No se debe dejar secar en desechar y cambiar por nuevo. Este
ningn momento. cambio en el color y turbidez en el
2.- Fijar en Schaudinn 5 min a 50C o 15 min colorante se debe a que ya reaccion
a temperatura ambiente. No se deben con residuos de mordiente que pueden

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quedar en las laminillas si no se lavaron Dejar secar toda la noche de preferencia en
bien y se inactiva. una estufa a 30C. El frotis seco se tie
10.- Lavar en agua de la llave por 1 min. inmediatamente o puede conservarse en
11.- Aclarar en sulfato frrico amoniacal etanol 70%. Tambin se pueden transferir 4
0.25% (o cido fosfotngstico al 2%) por ml de muestra en PVA a un tubo y
2 a 5 min. Este es el paso crtico de la centrifugar a 2500 rpm. Durante 5 min.
tcnica porque el tiempo es muy Decantar el PVA y limpiar las paredes del
variable. Se aconseja examinar el frotis tubo con un hisopo, despus se transfiere
hmedo (unas gotas de agua con pipeta parte del sedimento a un trozo de papel
de vez en cuando para que no se seque) para absorber el exceso de humedad.
al microscopio para obtener el ptimo Finalmente se prepara el frotis en un
de tincin y contraste. portaobjetos.
12.- Lavar en agua de la llave por 10 min.
13.- Agregar unas gotas de carbonato de Resultados esperados: Los protozoarios y
litio saturado (en agua) al etanol 70%. quistes se teirn de un color azl obscuro,
Sumergir los frotis en esta por 3 min. con las estructuras nucleares, cuerpos
14.- Enjuagar en etanol 80 % por 3 min. cromatoidales y otras inclusiones
15. Transferir a etanol 95% por 3min. citoplsmicas ms negras que el resto del
Despus, sumergir en dos cambios de citoplasma. Los cristales de Charcot-Leyden,
etanol absoluto por 5 min en cada uno. eritrocitos y bacterias se teirn de azl
1+.- Transferir a carboxilol por 3-5min. grisceo.
16.- Transferir a dos cambios de xilol o
substituto de xilol por 5 min en cada
uno. B) Tincin con tricrmica de Gomori
17.- Montar en resina sinttica, procurando Esta brinda buenos resultados para
aplastar bien el cubre con una goma propsitos de rutina, no es necesario la
para que queden lo ms cercanos el sobre tincin y diferenciacin para
porta y el cubre y lograr observarlos en conseguir los detalles morfolgicos ni el uso
el objetivo de inmersin. de mordientes. El colorante tricrmico es
estable y puede usarse repetidamente, si se
Para muestras fijadas en PVA-Schaudinn, se pierde la calidad de la tincin el colorante
depositan dos gotas en el centro del puede restablecerse dejndolo destapado
portaobjetos y se extienden en por 3-8 hrs. o toda la noche. Para heces
2
aproximadamente 2.5 cm con un aplicador. fijadas en PVA se omite la fijacin en

73
Shaudinn y se prolongan los tiempos, segn Etanol 90% acidificado (1 gota de cido
se seala entre parntesis. actico glaciar en 10 ml de alcohol
etlico) 10-20seg.
Mtodo Etanol 95% o 100%. Enjuague en esta
Sumergir en el fijador Schaudinn 5min a solucin para detener el aclaramiento
50C o una hora a temperatura (5min).
ambiente. Seguir las mismas Etanol 100 % 1min (5 min )
recomendaciones dadas anteriormente. Carboxilol 1min (5-10 min )
Transferir a etanol 70% iodado 1 min. ( 10 Xilol 1min. o hasta que desaparezca la
min.) refraccin en la interfase del frotis- xilol (
Etanol 70% I 1min. ( 3-5 min ) 10 min ). Montar en resina sinttica
Etanol 70% II 1min. ( 3-5 min ) neutra.
Colorante tricromico 2-8 min. ( 6-8 min. )

Resultados y discusiones

1.- Esquematice las formas observadas con ambas tcnicas, enfatizando sobre las estructuras
diferenciadas al microscopio en objetivo de inmersin.

A) Protozoarios B) Helmintos

74
2.- Concluya las diferencias observadas entre ambas tinciones

Literatura consultada (por el alumno)

75
Bibliografa
http://www.cdc.gov/ncidod/dpd/parasit
es/index.htm Ultimo Acceso Abril 12,
Araujo J, ME Garca, O Daz-Surez1 y H
2010.
Urdaneta. 2008. Amibiasis: Importancia
Cox, FEG. 2004. Modern Parasitology. 2a
de su diagnstico y tratamiento. Mini-
Edicin. BlackwelI Science Ltd. USA. 276
revisin. Invest Cln. 49: 265-271.
pp.
Ash, L. R. y Oriel, T. C. 1987. Parasites: A
Fotedar R, Stark D, Beebe N, Marriott D, Ellis
Guide to Laboratory Procedures and
J, Harkness. 2007. Laboratory diagnostic
Identification. ASCP Press, Chicago.
techniques for Entamoeba species. Clin
Ash LR & Orighel, TC. 1997. Atlas of Human
Microbiol Rev.;20:511-32.
Parasitology. 4 ed. American Society of
Garcia, LS. 2001. Diagnostic Medical
Clinical Pathologists. ASCP Press, Chicago.
Parasitology. 4 ed. American Society for
410 pp.
Microbiology. ASM Press. Washingthon,
Beaver, PC, Jung, RC & EW Cupp. 2003.
DC. Pp. 329-362.
Parasitologa Clnica. 2003. 3 ed. Masson
Garca Ms I, B Muoz Arajo, A Aguirre
Doyma Mxico, S.A. Mxico, DF. 823 pp.
Inchaurbe, I Polo Roldn. Ana Garca
Becerril MA. 2008. Parasitologa Mdica. 2.
Moreno, P Refoyo Romn. 2008. Manual
Ed. Mc Graw Hill/Interamericana
de laboratorio de Parasitologa 4.
Editores, SA de CV. Mxico. 308 pp.
Amebas parsitas y/o comensales
Botero D. & M. Restrepo. 2005. Parasitosis
Reduca (Biologa). Serie Parasitologa. 1
humanas. 4 ed. Quebecor Word, Bogota,
(1): 2837.
Colombia. CIB. 235-237 pp.
Garca Ms I, B Muoz Arajo, A Aguirre
Brito T. 2006. Diagnstico laboratorial da
Inchaurbe, I Polo Roldn. Ana Garca
Giardia lamblia. Sade & Ambiente em
Moreno, P Refoyo Romn. 2008. Manual
Revista, Duque de Caxias. 1: 18-25.
de laboratorio de Parasitologa. 3.
Brooke MM & Melvin DM. 1984.
Flagelados intestinales y urogenitales.
Morphology, of Diagnostic Stages of
Reduca (Biologa). Serie Parasitologa. 1
Intestinal Parasites of Humans. Center
(1): 2027.
for Disease Control, Atlanta, GA. HHS
Museo virtual de Parasitologa. Facultad de
Publication CDC N 84-8116. 30 pp.
Cc. Biolgicas. UCM. Madrid, Espaa.
Centers for Disease Control and Prevention.
http://www.ucm.es/centros/webs/fbio/i
2010. Stool Specimens. Centers for
ndex.php?tp=Museo%20Virtual%20de%2
Disease Control and Prevention.

76
0Parasitologa&a=servicios&d=16028.ph Microbiologa y Parasitologa.
p Departamento de Microbiologa y
Parasitologa. Facultad de Medicina,
Melvin DM, Brooke MM. 1982. Laboratory Universidad Nacional Autnoma de
Procedures for the Diagnosis of Intestinal Mxico.
Parasites. 3rd Edition. US Dept. of Health Trujillo Contreras F, A Villanueva & M
and Human Services publication no. Raygoza. 2001. Manual Prctico
(CDC) 82-8282. Atlanta (GA): Centers for Ilustrado. Enfermedades Parasitarias.
Disease Control and Prevention. Ediciones Cuellas, Jalisco, Mxico. 165
pp.
Pajuelo CG, RD Lujn, PB Paredes & CR Valadez A, C- Ximenez. 2005. Entamoeba
Tello. 2006. Aplicacin de la tcnica de histolytica and Entamoeba dispar:
sedimentacin espontnea en tubo en el prevalence infection in a rural mexican
diagnstico de parsitos intestinales. Rev community. Exp Parasitol. 110:327-30.
Mex Patol Clin. 53: 114-118. Uribarren Berrueta, T. 2010. Recursos en
Rodrguez Prez E. 2004. Atlas de Parasitologa. NAEGLERIOSIS,
Parasitologa Mdica. Mc Graw Hill. ACANTHAMOEBOSIS, BALAMUTHIOSIS.
Mxico. 57 pp. Facultad de Medicina, Depto. de
Tanyuksel M & W Petri, Jr. 2003. Laboratory Microbiologa y Parasitologa, UNAM.
Diagnosis of Amebiasis. Clin Microbio http://www.facmed.unam.mx/marco/ind
Rev, 16: 713-729. ex.php?dir_ver=87. Ultimo acceso Abril
Tato Saldivar P & Garca Yez, Y. 2010. 12, 2010.
Prcticas de Laboratorio. Programa
acadmico de la asignatura de

77
PRCTICA 9

OBSERVACIN DE HEMATOZOARIOS

L Galaviz Silva

Introduccin hombre pero se realiza en el mosquito del


gnero Anopheles los cuales siendo
Los hematozoarios (Apicomplexa o huspedes definitivos actan como
Sporozoa, Hematozoa) son organismos transmisores. Solo la hembra es hematfaga
formadores de esporas, con alternancia de y por lo tanto slo ella es la transmisora.
generaciones con una fase sexual Otra va de adquirir el paludismo es a travs
(microgametos microgametos = cigoto - de la transfusin sangunea.
oocineto mvil - oocistos en un hospedero
invertebrado (mosquitos) y otra asexual En 1897 hace ms de 100 aos, Sir Ronald
(formacin de esporozoitos en un Ross encontr que el mosquito Anopheles
hospedero vertebrado); adems afectan era el enemigo a vencer y pens que la
rganos como el bazo, hgado, cerebro y erradicacin del paludismo sera asunto de
otros tejidos en los cuales se inicia la fase pocos aos, sin embargo a poco ms de
exoeritrocitica y parasitan despus clulas siglo despus, el impacto de la infeccin
sanguneas, donde llevan a cabo la fase sigue en aumento. Se estima que existen
eritroctica, con produccin de pigmento. La zonas de riesgo de transmisin de
malaria es una enfermedad causada por paludismo en ms de 107 pases y
cuatro especies de plasmodios que infectan aproximadamente 3.3 millones de personas
a los seres humanos: P. falciparum, P. vivax, en zonas de riesgo de transmisin;
P. ovale y P. malariae. El hombre acta asimismo, se consideran entre 350 y 500
como husped intermediario reservorio y en millones de episodios de paludismo
el Plasmodium realiza dos ciclos clnico/ao, la mayora causados por
esquizognicos: el exoeritroctico y el infeccin con P. falciparum y P. vivax. P.
eritroctico. El ciclo sexuado se inicia en el falciparum causa ms de un milln de

78
defunciones anuales principalmente de determinadas zonas, lo que ha logrado
nios y bebs, por si solo o asociado a otras interrumpir la transmisin en gran parte del
enfermedades como VIH/SIDA ocasionando pas, aunque existen focos de transmisin
altos ndices de morbi-mortalidad en zonas persistentes en el noreste del pas, Nayarit,
endmicas como el frica subsahariana, Michoacn, Oaxaca y en la frontera sur
donde se reporta hasta el 60% de todos los (http://www.facmed.unam.mx/marco/index
casos de paludismo del mundo, un 75% de .php?dir_ver=87).
los casos por P. falciparum y casi el 90% de
las defunciones por paludismo. Si bien 9 de
cada 10 casos de muerte ocurren en pases Ciclo de vida: El mosquito (hembra) inocula
africanos, Amrica Latina tiene una cuota esporozoitos durante la alimentacin;
importante de infecciones paldicas. En invade los hepatocitos en hgado y despus
Latinoamrica, el paludismo persiste como clulas rojas sanguneas en los ciclos
un importante problema de salud pblica, eritrocticos, la ruptura de los esquizontes,
con unos 870 000 casos reportados en 2004 causan fiebres peridicas caractersticas. Las
(PAHO, 2005). Es endmico en 9 pases que etapas sexuales son desarrolladas en el el
comparten la selva amaznica, y en 7 pases mosquito; culmina con la formacin del
de Amrica Central y el Caribe y Mxico. En ooquiste en pared del intestino; La
varias zonas de Centro y Sudamrica se han esporogonia y liberacin de los esporozoitos
reportado farmacorresistencias. Los que invaden glndulas salivales, estn listos
vectores prevalentes son Anopheles para infectar en la alimentacin siguiente de
albimanus y Anopheles pseudopunctipennis. sangre.
Las tasas de morbilidad de la malaria en El mtodo de diagnstico tradicional se basa
Mxico han seguido un patrn cclico, con en el examen de frotis sanguneos
perodos de control alternados con perodos extendidos y de gota gruesa, teidos con
de reactivacin y brotes epidmicos. La Giemsa, diferenciando los esquizontes con
mayor parte de los casos reportados son sus merozoitos, micro y macrogametos, as
causados por Plasmodium vivax y una como los trofozoitos invadiendo los
minora corresponde a P. falciparum. eritrocitos. Actualmente existen tambin
tcnicas moleculares basada en la
Mxico report logros mediante un amplificacin especie especfica del ADN del
programa de tratamiento focalizado, que parsito y tcnicas de inmunocromatografia
consiste en un tratamiento ms eficaz y que se basan en antgenos recombinantes
rociamiento de accin residual racional en del parsito permitiendo adems el

79
diagnstico a nivel de especie en escasos especie y estadio de desarrollo al
minutos, lo cual los convierte en una microscopio.
herramienta ideal para realizar el Material
diagnstico en zonas rurales alejadas de los El maestro proporcionar microscopio,
laboratorios de diagnstico, permitiendo aceite de inmersin y preparaciones
brindar un tratamiento inmediato a los permanentes de Plasmodium falciparum, P.
pacientes. Para mayor informacin, se citan vivax, P. ovale y P. malariae.
ejemplos en la bibliografa. El alumno aportar cuaderno de dibujo,
colores, lpiz y un trozo de tela de algodn
Objetivo general para la limpieza del microscopio.
El alumno diferenciara los principales
caracteres morfolgicos de cada una de las Mtodo
especies de Plasmodium, agente etiolgico 1) El alumno revisar cada una de las
de la malaria o paludismo. El material de laminillas en 40X y 100X, realizando dibujos
esta prctica es complementario a la representativos de las formas parsitas.
informacin proporcionada al estudiante en Comparar las formas observadas con el
la Unidad B4 (Protozoarios apicomplexos de que se muestra en la literatura para indicar
sangre, tejidos e intestino) del curso de el estadio de desarrollo y estructuras
Parasitologa Clnica. morfolgicas.

Objetivo particular
1. El estudiante diferenciar la
morfologa particular de cada

80
Resultados y discusiones
1.- Esquematice lo observado en las preparaciones permanentes siguientes:

Plasmodium vivax

Trofozot Esquizonte

81
Microgametocito Macrogametocito

Plasmodium malarie

Trofozoito Esquizonte

82
Microgametocito Macrogametocito

Plasmodium falciparum

Trofozoito Esquizonte

83
Microgametocito Macrogametocito

Plasmodium ovale
Trofozoito Esquizonte

84
Macrogametocito Microgametocito

Literatura consultada (por el alumno)

85
Bibliografa Coleman RE, M Maneechai, A Ponlawat, C
Kumpitak, N Rachapaew,Miller RS. 2002.
Ash LR & Orighel, TC. 1997. Atlas of Human
Short report: Failure of the OptiMAL
Parasitology. 4 ed. American Society of
rapid malaria test as a tool for the
Clinical Pathologists. ASCP Press, Chicago.
detection of asymptomatic malaria in an
410 pp.
area of Thailand endemic for Plasmodium
Beaver, PC, Jung, RC & EW Cupp. 2003.
falciparum and P. vivax. Am J Trop Med
Parasitologa Clnica. 2003. 3 ed. Masson
Hyg. 67:563-565.
Doyma Mxico, S.A. Mxico, DF. 823 pp.
Coleman RE, Maneechai N, Rachaphaew N,
Becerril MA. 2008. Parasitologa Mdica. 2.
Kumpitak C, Millar RS, Soyseng V. 2002.
Ed. Mc Graw Hill/Interamericana
Comparison of field and expert
Editores, SA de CV. Mxico. 308 pp.
laboratory microscopy for active
Botero D. & M. Restrepo. 2005. Parasitosis
surveillance for asymptomatic
humanas. 4 ed. Quebecor Word, Bogota,
Plasmodium falciparum and Plasmodium
Colombia. CIB. 235-237 pp.
vivax in western Thailand. Am J Trop Med
Brooke MM & Melvin DM. 1984.
Hyg. 67: 141-144.
Morphology, of Diagnostic Stages of
Cox, FEG. 2004. Modern Parasitology. 2a
Intestinal Parasites of Humans. Center
Edicin. BlackwelI Science Ltd. USA. 276
for Disease Control, Atlanta, GA. HHS
pp.
Publication CDC N 84-8116. 30 pp.
Fletcher RH, SW Fletcher, EH Wagner. 1996.
Centers for Disease Control and Prevention.
Clinical Epidemiology: The essentials, 3rd
2010. Stool Specimens. Centers for
ed. Baltimore: The William Wilkins Co.
Disease Control and Prevention.
46-58.
http://www.cdc.gov/ncidod/dpd/parasit
Ferro BE, Gonzlez IJ, Carvajal F, Palma GI,
es/index.htm Ultimo Acceso Abril 12,
Saravia NG. 2002. Performance of
2010.
OptiMAL in the diagnosis of Plasmodium
Cho D, KK Hee, PS Chul, KY Kee, KL No, CL
vivax and Plasmodium falciparum
Seung. 2001. Evaluation of rapid
infections in a malaria referral center in
immunocapture assays for diagnosis of
Colombia. Mem Inst Oswaldo Cruz.
Plasmodium vivax in Korea. Parasitol Res.
97:731-735.
87:445-448.
Filisetti D, S Bombard, C NGuiri, R Dahan, B
Molet, A Abou-Bacar. 2002. Prospective

86
assessment of a new polymerase chain symptomatically diagnosed malaria. J Clin
reaction target (STEVOR) for imported Microbiol. 40:4675-4678.
Plasmodium falciparum malaria. Eur J Londono B, J Carmona, S Blair. 2002.
Clin Microbiol Infect Dis. 21:679-681. Comparison between OptiMAL and the
Garcia, LS. 2001. Diagnostic Medical tick smear tests for malaria diagnosis in
Parasitology. 4 ed. American Society for an endemic area during a non-epidemic
Microbiology. ASM Press. Washingthon, period. Biomedica. 22:466-475.
DC. Pp. 329-362.
Gonzlez-Cern, L, Rodrguez, AF Betanzos, Melvin DM, Brooke MM. 1982. Laboratory
A Abada. 2005. Eficacia de una prueba Procedures for the Diagnosis of Intestinal
rpida para el diagnstico de Parasites. 3rd Edition. US Dept. of Health
Plasmodium vivax en pacientes and Human Services publication no.
sintomticos de Chiapas, Mxico. Salud (CDC) 82-8282. Atlanta (GA): Centers for
Publica Mex. 47:282-287. Disease Control and Prevention.
Grobusch MP, Jelinek T, Anscheid. 1999.
False positivity of rapid antigen detection Milne LM, PL Chiodini, DC Warhurst. 1994.
tests for diagnosis of Plasmodium Accuracy of routine laboratory diagnosis
falciparum malaria: Issue appears to be of malaria in the United Kingdom. J Clin
more complicated than presented. J Clin Pathol. 4:740-742.
Microbiol 1999;37:3781-3782. Patsoula E, G Spanakos, D Sofianatou, M,
Iqbal J, A Sher, A Rab. 2000. Plasmodium Parara & NC Vakalis. 2003. A singlestep
falciparum Histidine-Rich protein 2- PCR-based method for the detection and
based immunocapture diagnostic assay differentiation of Plasmodium vivax and
for malaria:Cross-reactivity with P. falciparum. Trop Med Parasitol. 97:15-
rheumatoid factors. J Clin Microbiol. 21.
38:1184-1186. Piper R, J Lebras, L Wentworth, A Hunt-
Iqbal J, A Muneer, N Khalid, MA Ahmed. Cooke, S Houze, P Chiodini. 1999.
2003. Performance of the OptiMAL test Immunocapture dagnostic assays for
for malaria diagnosis among suspected malaria using Plasmodium lactate
malaria patients at the rural health dehydrogenase (pLDH). Am J Trop Med
centers. Am J Trop Med Hyg. 68:624-628. Hyg 1999;60:109-118.
Iqbal J, Khalid N, Hira PR. 2002. Comparison Playford EG, J Walker. 2002. Evaluation of
of two commercial assays with expert the ICT Malaria P.f/P.v and the OptiMAL
microscopy for confirmation of Rapid Diagnostic Test for Malaria in

87
Febrile Returned Travellers. J Clin Ediciones Cuellas, Jalisco, Mxico. 165
Microbiol. 40:4166-4171. pp.
Rodrguez Prez E. 2004. Atlas de Uribarren Berrueta, T. 2010. Recursos en
Parasitologa Mdica. Mc Graw Hill. Parasitologa. Facultad de Medicina,
Mxico. 57 pp. Depto. de Microbiologa y Parasitologa,
Singh N, N Valecha, AC Nagpal, SS Mishra, UNAM.
HS Varma, SK Subbarao. 200. The http://www.facmed.unam.mx/marco/ind
hospital and field-based performance of ex.php?dir_ver=87. Ultimo acceso Abril
the OptiMAL test, for malaria diagnosis 12, 2010.
and treatment monitoring in central Warhurst DC, JE Williams. 1996. Laboratory
India. Ann Trop Med Parasitol. 97:5-13. diagnosis of malaria. J Clin Pathol.
Snounou G, S Viriyakosol, XP Zhu, W Jarra, L 49:533-538.
Pinheiro, VE do Rosario. 1993. High
sensitivity of detection of human malaria
parasites by the use of nested
polymerase chain reaction. Mol Biochem
Parasitol. 61: 315-320.
Tato Saldivar P & Garca Yez, Y. 2010.
Prcticas de Laboratorio. Programa
acadmico de la asignatura de
Microbiologa y Parasitologa.
Departamento de Microbiologa y
Parasitologa. Facultad de Medicina,
Universidad Nacional Autnoma de
Mxico.
Tree of Life Web Project. 2010.
Apicomplexans. Sporozoans.
http://tolweb.org/Apicomplexans/2446V
ersion . in The Tree of Life Web Project,
http://tolweb.org/. Acceso el27 de Abril
2010
Trujillo Contreras F, A Villanueva & M
Raygoza. 2001. Manual Prctico
Ilustrado. Enfermedades Parasitarias.

88

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