ESTRATEGIAS DE SUPERVIVENCIA DE

LAS BACTERIAS EN MEDIOS NATURALES

EST. ALAN TICONA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTIN
FACULTAD DE INGENIERIA CIVIL
Contenido

................................................................................................................................................................................... 2
...................................................................................... 2
................................................................................................................... 2
................................................................................................................................................................................... 3
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............................................................................... 4
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....................... 5
.................................. 5
 Revista Mexicana de Ingeniera Qumica
Vol. 7, No. 3 (2008) 229-235

SUPERVIVENCIA DE BACTERIAS FECALES EN LODOS RESIDUALES

DESHIDRATADOS TRATADOS CON AMONIACO

FECAL BACTERIA SURVIVAL IN AMMONIA-TREATED

WASTEWATER DEWATERED SLUDGES

J.M. Mndez 1*, C. Gonzlez 1, A. Alvarado-Lassman1,

G. Alvarado-Kinnell1 y S. Martnez-Delgadillo2
1
Instituto Tecnolgico de Orizaba (ITO), 852 Tecnolgico, Zapata 94320,
Orizaba, Ver. Mxico
2
Departamento de Energa, Universidad Autnoma Metropolitana Azcapotzalco.
Av. San Pablo 180. Azcapotzalco. CP.02200. Mexico D.F.

Recibido 14 de Enero 2008; Aceptado 26 de Agosto 2008

Resumen

Uno de los problemas ms importantes de contaminacin en lodos provenientes de plantas de tratamiento de aguas
residuales municipales y agroindustriales de Mxico es el alto nivel de microorganismos patgenos. El amoniaco es
conocido como un desinfectante importante capaz de inactivar significativamente las altas concentraciones
microbianas presentes en el lodo. En este estudio, se evalu el efecto del amoniaco en lodo fisicoqumico
agroindustrial y se utilizaron los parmetros cinticos del modelo de Hom para describir la inactivacin de bacterias
a diversas concentraciones de slidos totales. El lodo fisicoqumico crudo con 2.0 0.5% de ST se obtuvo de una
planta de tratamiento de aguas residuales de un rastro avcola. El amoniaco se aplic en dosis de 1 hasta 40% p/p
directamente al lodo deshidratado (4%, 8% y 12% de ST). Despus de 2h, las muestras fueron analizadas
microbiolgicamente. Los resultados mostraron que el amoniaco removi 9 y 6.5 logs de coliformes fecales y de
Salmonella spp., respectivamente, cumpliendo con los lmites de la US EPA para bioslidos clase A. El anlisis de
los parmetros k, n y m del modelo de Hom, indican mayor resistencia de inactivacin de bacterias cuando la
concentracin de slidos totales es baja, debido principalmente a dilucin del amonaco en el agua. Tambin, se
requiri 75% menos amonaco para cumplir con el estndar de la US EPA cuando el lodo fue deshidratado.

Palabras clave: amoniaco, bacterias fecales, bioslidos, lodo fisicoqumico, estabilizacin.

Abstract

One of most important pollution problems in sludge from municipal and agro industrial wastewater treatment
plants of Mexico is the high level of pathogens microorganisms. Ammonia is known as an important disinfectant
capable to significantly inactivate high microbial populations in sludge. In this study, the effect of ammonia was
evaluated in agro industrial physicochemical sludge and kinetic parameters of the Hom model were used to
describe the inactivation of bacteria at different total solids concentrations. Raw physicochemical sludge with 2.0
0.5% TS were sampled from a bird slaughterhouse wastewater treatment plant. Ammonia in doses from 1 to 40%
w/w was directly applied to dehydrated sludge (4, 8 and 12% TS). After 2h, samples were taken for microbial
analyses. Results showed that the ammonia removed 9 and 6.5 logs of fecal coliforms and Salmonella spp.,
respectively, making possible to meet the US EPA limits for Class A biosolids. The analysis of parameters k, n and
m of the Hom model, indicates higher resistance to inactivation of bacteria when lower is the total solids
concentration, due mainly to the ammonia dilution in the water. Also, 75% less ammonia was needed to meet the
US EPA standard when sludge was dewatered.

Keywords: ammonia, biosolids, faecal bacteria, physicochemical sludge, stabilization.

1. Introduccin adecuadamente antes de ser depositado o reutilizado

El lodo municipal y agroindustrial producido
en plantas de tratamiento de aguas residuales de
Mxico presenta altas concentraciones de
microorganismos patgenos y requiere tratarse
para prevenir riesgos a la salud en la poblacin
(Jimnez y col., 2004 y Cabirol y col., 2002). Se han
encontrado densidades de 9.8 y mayores de 6.2 logs
para coliformes fecales y Salmonella spp.,
respectivamente, en lodo fisicoqumico. Estas

* Autor para la correspondencia. E-mail: jmmendez@itorizaba.edu.mx 229

Publicado por la Academia Mexicana de Investigacin y Docencia en Ingeniera Qumica A.C.
 J.M. Mndez y col./ Revista Mexicana de Ingeniera Qumica Vol. 7, No. 3 (2008) 229-235
concentraciones son mucho ms altas que las
encontradas en pases desarrollados. Incluso
recientemente han sido identificadas en el sureste de
Mxico (Gaspard y col., 1997; Mndez y col,. 2006,
2007). Puesto que los procesos biolgicos como la
digestin aerobia o anaerobia slo remueven menos
de 2 log de patgenos, no pueden aplicarse con xito
para la estabilizacin del lodo. La estabilizacin con
cal es una alternativa eficaz pero incrementa la masa
del lodo tratado. Segn Mndez y col. (2004), el
amonaco es un desinfectante de gran alcance capaz
de inactivar niveles extremadamente altos de
bacterias, incluso puede difundirse a travs de la
membrana externa de las estructuras como las de los
huevos de helmintos. El amoniaco tambin puede
mejorar el valor agronmico de los bioslidos
producidos. Adems, el gas puede mejorar el proceso
de estabilizacin con cal aprovechando su efecto
txico, reciclando la cantidad generada o agregando
una dosis pequea. En una investigacin previa,
Mndez y col. (2004), demostraron que la
estabilizacin del lodo con amoniaco inactiva
significativamente poblaciones microbianas altas en
lodos fisicoqumicos hidratados (3.5% de slidos
totales) provenientes de plantas de tratamiento de
aguas residuales municipales. El Amoniaco redujo
hasta 7 y 5.8 logs de coliformes fecales y de
Salmonella spp., respectivamente, con dosis de 20%
p/p y 2h de tiempo de contacto. El modelo de Hom
describi la inactivacin de microorganismos y los
parmetros cinticos se obtuvieron con un lodo con
alto contenido de agua. El modelo cintico tiene la
forma siguiente (Pernitsky y col., 1995).
N la velocidad a 300 RPM. En una tercera etapa, fue
Log = k C n t m (1)
No
donde No es la concentracin inicial de
microorganismos, N es la concentracin de los
microorganismos sobrevivientes en el tiempo t, k es
la constante de velocidad de inactivacin de pseudo
primer orden, C es la concentracin del
desinfectante, n: es un coeficiente de dilucin que es
un factor emprico asumido con frecuencia como la
unidad y m: es la constante emprica de Hom.
Debido a su elevado poder desinfectante, el
amoniaco tiene un alto potencial de ser utilizado para
la estabilizacin de lodos generados en pases en vas
de desarrollo. As, es necesario obtener informacin
til para el diseo e incluso para la operacin
apropiada del proceso propuesto. Esta investigacin
se propone identificar el modelo cintico, as como
los valores de parmetros cinticos correspondientes
para describir la inactivacin por amoniaco, de
bacterias coliformes fecales y Salmonella spp., que
son las poblaciones de microorganismos
predominantes en el lodo deshidratado estudiado.
2. Mtodos
El lodo crudo con 2.0 0.5% de ST fue muestreado
en una planta de tratamiento de aguas residuales de
230
un rastro avcola de 10 L/s situado en Orizaba,
Veracruz (Mxico) cuyo tratamiento consiste en un
tratamiento primario avanzado. Al inicio del
tratamiento, el lodo se deshidrat en una centrfuga
hasta concentraciones de 4, 8 y 12% de slidos
totales.
Pruebas de estabilizacin en tres etapas se
realizaron en un reactor de 4 L con cerrado
hermtico y control electrnico de temperatura. En la
primera etapa, el amoniaco se aplic directamente al
lodo en dosis de 5, 10, 20, 30 y 40% p/p con 4, 8, y
12 % de ST usando una solucin de 28 al 30% v/v de
NH4OH con un pH de 13. Las muestras y un control
fueron homogenizadas agitando a 200 RPM por 1
minuto, despus del cual se aplic la dosis de NH3 y
la velocidad de la agitacin se aument a 300 RPM
durante 2 h. Al final de cada tratamiento, se tomaron
muestras para su anlisis microbiolgico. Las
concentraciones de coliformes fecales y Salmonella
spp., se determinaron de acuerdo a los mtodos
estndar (APHA-AWWA-WEF, 1995). Los
resultados representan el promedio de 5
experimentos; en este estudio las concentraciones de
microorganismos se presentan en unidades
logartmicas (Log), por lo tanto, el promedio
aritmtico puede ser utilizado. La segunda etapa se
realiz para evaluar el efecto del tiempo del contacto.
En este caso, el amoniaco en dosis de 18% p/p se
aplic directamente al lodo con 8% de ST (a 20C) y
la evaluacin microbiolgica de las muestras se
realiz despus de 0.5, 1, 1.5 y 2 h. Una vez ms, el
procedimiento incluy mezclado por 1 minuto a 200
RPM y despus la adicin del reactivo, aumentando
posible describir la inactivacin de los
microorganismos evaluados en funcin del producto
de la dosis y de la temperatura (producto DT). En
este caso, 9%, 14% y 19% de amonaco fueron
aplicados directamente al lodo con 8% de ST y los
tratamientos se hicieron en 20, 30, 40 y 50C durante
2 h. En todos los casos, los valores de los parmetros
cinticos se obtuvieron utilizando el modelo cintico
de Hom, usando el mtodo de mnimos cuadrados
para la regresin no lineal. Todos los resultados
fueron analizados estadsticamente usando el criterio
de anlisis varianza (ANOVA).
3. Resultados
3.1. Primera etapa: Valores de los coeficientes del
modelo cintico de Hom en pruebas con diversas
dosis de amoniaco
La Tabla 1 demuestra que el uso de diversas dosis de
amoniaco en el lodo produjo un aumento en el pH. El
pH promedio para el lodo crudo fue cercano a 7.45 y
aument gradualmente hasta 11.7 despus de la
adicin de amoniaco. Es importante mencionar que
en estos valores de pH, la mayora del NH4OH se
disocia en NH3 + H2O (Stumm, 1996) aumentando el
poder desinfectante del amonaco sobre las bacterias.
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Una vez realizada la caracterizacin del lodo
crudo, se encontraron concentraciones de 12 y 8.3
unidades logartmicas (log) de coliformes fecales y
de Salmonella spp., respectivamente. Como se
muestra en la tabla 2, cuando la concentracin de los
slidos totales fue de 4%, y la dosis de amonaco de
20% p/p se removi una concentracin mayor de 7 y
8 logs de coliformes fecales y de Salmonella spp.,
respectivamente. Para cumplir con el lmite la US
EPA para bioslidos clase A, se requiri una dosis
del 24% p/p (240 g/kg ST). En contraste con los
requerimientos de amoniaco del lodo hidratado, la
Tabla 3 muestra que dosis inferiores fueron
necesarias para reducir significativamente las
poblaciones microbianas con lodos parcialmente
deshidratados; de hecho para cumplir el estndar de
la US EPA, se requiri una dosis de 18% p/p o 180
NH3/kg ST. Siguiendo una tendencia similar, la
mxima inactivacin de coliformes fecales y
Salmonella spp., se alcanz por adicin de amoniaco
al lodo al 12% de ST. En este caso, slo se agreg el
6% p/p (60 gNH3/kg ST) para alcanzar la total
inactivacin microbiana (Tabla 4). Puesto que la
conversin terica del amoniaco fue del 70 al 99%
de la dosis original aplicada, la inactivacin de
bacterias se debe principalmente a la forma
molecular (NH3) y no a la forma ionizada (NH4+). De
acuerdo con las condiciones experimentales, los
resultados sugieren un efecto mayor del amonaco en
comparacin con el pH para la inactivacin de los
microorganismos evaluados. Efectivamente, los
cambios ms altos de pH se obtuvieron por
aplicacin de la primera dosis de amoniaco mientras
que la mxima inactivacin microbiana se alcanz
con las dosis ms altas en valores de pH cercanos a
10.7. Un efecto similar en estreptococos fecales y
huevos de Ascaris suum fue reportado por Allievi y
col. (1994) y Ghiglietti y col. (1997).
Por otra parte, la relacin entre la inactivacin
de coliformes fecales y Salmonella spp., y la
concentracin del desinfectante (D) ha sido descrita
favorablemente por el modelo cintico de Hom. En
este caso el modelo fue utilizado considerando
constante el tiempo de contacto (2 h). La ecuacin es
N
Log = k * D n (2)
N0
donde:
D es la dosis de amoniaco en g/L.
K* es una constante que asocia a la constante k y al
tiempo tm
En la Tabla 5, se muestran valores de k*
para ambos grupos bacterianos, es perceptible que la
velocidad del grupo Salmonella obtuvo valores
superiores a aquellos obtenidos para el grupo
coliforme. Lo anterior debido a la alta
susceptibilidad del grupo Salmonella y a su menor
concentracin originalmente presente, adems el
grupo coliforme presenta un mayor nmero de
especies bacterianas en concentraciones superiores.

Tabla 1. pH alcanzado en lodo fisicoqumico con diversas dosis de NH3.

Promedio final de pH Desviacin estndar
Dosis de NH3 (p/p)
4% ST 8% ST 12% ST 4% ST 8% ST 12% ST
0% 7.66 7.45 7.62 0.42 0.13 3.81
5% 9.20 10.20 10.30 0.22 0.59 0.14
10% 9.63 10.73 10.02 0.26 0.84 0.16
20% 9.90 11.04 10.22 0.25 0.73 0.13
30% 10.14 11.62 10.47 0.35 0.99 0.15
40% 10.32 11.72 10.58 0.42 0.99 0.11

Tabla 2. Inactivacin de coliformes fecales y Salmonella spp. con diferentes dosis

de amoniaco aplicado en lodos con 4% ST.
Dosis de amoniaco
Dosis de amoniaco
aplicado pH % NH3 Coliformes fecales Salmonella spp.
efectiva
% p/p (promedio) Disociado* Log(N/No) Log(N/No)
(g/L)
(g/L)
0 (0.00) 7.66 0.00 0.00 0.00 0.00
10 (4.22) 9.63 70.09 2.96 -4.28 -6.63
20 (8.44) 9.90 81.36 6.87 -7.13 -8.11
30 (12.66) 10.14 88.35 11.19 -10.36 -8.11
40 (16.88) 10.32 91.99 15.53 -11.36 -8.11
1
* Calculado con % amoniaco = *100
1 + 1.82 x109 pH

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Tabla 3. Inactivacin de coliformes fecales y Salmonella spp. con diferentes dosis

de amoniaco aplicado en lodos con 8% ST.
Dosis de amoniaco
Dosis de amoniaco
aplicado pH % NH3 Coliformes fecales Salmonella spp.
efectiva
% p/p (promedio) Disociado * Log(N/No) Log(N/No)
(g/L)
(g/L)
0 (0.00) 7.45 0.00 0.00 0.00 0.00
5 (4.00) 10.20 89.70 3.59 -3.80 -5.00
10 (8.00) 10.73 96.72 7.74 -6.08 -7.64
20 (16.00) 11.04 98.37 15.74 -9.35 -7.64
30 (24.00) 11.67 99.61 23.91 -11.37 -7.64
40 (32.00) 11.72 99.65 31.89 -11.37 -7.64
1
* Calculado con % amoniaco = *100
1 + 1.82 x109 pH

Tabla 4. Inactivacin de coliformes fecales y Salmonella spp. con diferentes dosis de

amoniaco aplicado en lodos con 12% ST.
Dosis de amoniaco
Dosis de amoniaco
aplicado pH % NH3 Coliformes fecales Salmonella spp.
efectiva
% p/p (promedio) Disociado * Log(N/No) Log(N/No)
(g/L)
(g/L)
0 (0.00) 7.62 0.00 0.00 0.00 0.00
3 (3.60) 10.02 85.19 3.07 -8.74 -6.63
6 (7.20) 10.22 90.12 6.49 -11.36 -8.11
9 (10.80) 10.47 94.19 10.17 -11.36 -8.11
12 (14.40) 10.58 95.43 13.74 -11.36 -8.11
1
* Calculado con % amoniaco = *100
1 + 1.82 x109 pH

Tabla 5. Parmetros cinticos del modelo de Hom modificado obtenidos durante la primera etapa experimental.
Concentracin de slidos totales
Microorganismos 4% 8% 12%
2 2
K* n R K* n R K* n R2
Coliformes fecales 2.35 0.59 0.99 2.78 0.42 0.98 7.72 0.16 0.99
Salmonella spp. 6.09 0.12 0.98 4.33 0.19 0.88 5.99 0.13 0.98

Tambin se observa que cuando mayor es la
concentracin de slidos totales, la velocidad de
inactivacin se incrementa en los coliformes fecales,
esto puede justificarse por que el amoniaco reduce su
disolucin en lodos con menor contenido de
humedad.
De acuerdo con los resultados anteriores, es
posible obtener los requerimientos de amoniaco y
predecir la eficiencia del proceso utilizando los
parmetros cinticos obtenidos. Con base en los
resultados obtenidos, la dosis de NH3 requerida para
la produccin de bioslidos se reduce cuando menor
es el contenido de agua, de tal forma que la
concentracin de los slidos totales (%ST) se puede
utilizar como alternativa aproximada para operar el
proceso con la siguiente ecuacin:
Y = K ** ( ST )
n
(3)
donde Y es la dosis de amonaco (en % p/p) necesaria
para cumplir con el lmite de bioslidos clase A, K**
es la constante de reduccin de amoniaco (calculada
considerando 2h de tiempo de contacto), ST es la
concentracin de slidos totales y n: es un tipo de
coeficiente cintico emprico. Es claro el efecto del
contenido de slidos sobre los requerimientos de
amoniaco, de hecho, las dosis de amoniaco
disminuyeron drsticamente de 24% a 4% p/p
cuando el lodo se deshidrat parcialmente; el valor
de K** (123.1) muestra el efecto mencionado (Tabla
6). La Fig. 1 muestra la aplicacin del modelo de
Hom de este caso. Es importante mencionar que este
mtodo es otra opcin tcnica preliminar para iniciar
la operacin del proceso sugerido; naturalmente, los
resultados se deben confirmar con un anlisis
microbiolgico en planta piloto.

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Tabla 6. Parmetros cinticos del modelo de Hom Nota: k** es una constante que asocia la velocidad
modificado en trminos de la concentracin de de inactivacin (k) y la dosis (D)n Los valores
slidos totales. obtenidos para los parmetros cinticos con la Ec. (4)
Parmetro K ** n R2 se muestran en la Tabla 8. Confirmando los
resultados anteriores, los valores de k** para
Slidos totales 123.10 1.08 0.82 coliformes fecales (0.51) fueron notablemente ms
bajos que los encontrados para Salmonella spp.
30 (3.01).
4parabioslidosClase
(% w/w) to meet

25
3.3. Tercera etapa. Coeficientes cinticos a diversas
EPA standard

20 temperaturas
USA(USEPA)

15
Puesto que la temperatura es otra variable que puede
Ammonia

10 aumentar la inactivacin de los microorganismos, la

%p/pNH

5 tercera etapa se realiz para evaluar el efecto

combinado la temperatura y la dosis de amoniaco en
0
lodos con 8% de ST. Para todos los microorganismos
0 4 8 12 16
% de Slidos totales
evaluados, los resultados indican un incremento
significativo de la eficiencia del proceso cuando la
Fig. 1. Aplicacin del modelo de Hom para
temperatura es mayor a 40C. La Tabla 9 muestra
determinar las dosis de amoniaco.
que cuando el amoniaco fue aplicado en dosis de 9%
p/p a 40C, los mejores resultados fueron obtenidos,
3.2. Segunda etapa. Coeficientes cinticos del
reduciendo los coliformes fecales 10.4 log y
modelo de Hom obtenidos con diversos tiempos de
cumpliendo con el lmite US EPA para bioslidos de
contacto
clase A. La Salmonella spp. se redujo totalmente (en
-8.0 log) a 30C. La combinacin del amonaco con
De acuerdo con un anlisis estadstico y grfico, la
temperatura puede reducir densidades de
dosis de 19% p/p de NH3 y 8% de ST fueron las
microorganismos ms altas que las que se
condiciones experimentales seleccionadas para las
inactivaron a 20C. Consecuentemente fue posible
pruebas de inactivacin. Los experimentos con 19%
confirmar que la reduccin de microorganismos
p/p de amoniaco y con diversos tiempos del contacto
aumenta significativamente si se aumenta la
se observan en la Tabla 7 y muestran que se requiere
temperatura del lodo.
de menor tiempo (30 min, aproximadamente) para la
inactivacin de Salmonella spp., en comparacin de
Tabla 8. Parmetros cinticos del modelo modificado
los coliformes fecales (1h). Los tiempos obtenidos
de Hom, obtenidos en la segunda etapa experimental.
son incluso menores que aquellos recomendados por
la US EPA, 1994 para la estabilizacin de lodos Microorganismos K ** m R2
utilizando la estabilizacin alcalina (2 horas). Como Coliformes fecales 0.51 0.61 0.99
se mencion, la inactivacin de los indicadores de Salmonella spp. 3.01 0.22 0.98
contaminacin se describi usando un modelo de
primer orden (Hom). Para nuestros propsitos, el Estos efectos coinciden con los publicados
modelo de Hom fue modificado asociando la por Booth (1999), que report que la temperatura
constante k con la dosis de amonaco (D) y aumenta la permeabilidad de la pared celular
quedando: bacteriana, permitiendo la penetracin de agentes
N externos.
Log = k ** t m (4)
No

Tabla 7. Inactivacin de coliformes fecales y Salmonella spp. con

diferentes tiempos de contacto en lodos con 8% ST.
Dosis de Dosis de
Tiempo de Coliformes Salmonella
amoniaco pH % NH3 amoniaco
contacto fecales spp.
aplicada (Promedio) Disociado * efectiva
(min) Log(N/No) Log(N/No)
% p/p (g/L) (g/L)
0 0 (0.00) 6.37 0.00 0.00 0.00 0.00
30 19 (16.68) 9.89 80.89 13.49 -3.93 -6.00
60 19 (16.68) 9.93 82.38 13.74 -6.07 -8.36
90 19 (16.68) 10.26 90.97 15.17 -7.93 -8.36
120 19 (16.68) 10.48 94.36 15.73 -9.14 -8.36

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Tabla 9. Inactivacin de coliformes fecales y Salmonella spp. con diferentes valores del producto DT
(dosis de amoniaco - temperatura) en lodos con 8% ST.
Temperatura
20C 30C 40C
Dosis de amoniaco % p/p (g/L)
0% 9% 14% 19% 9% 14% 19% 9% 14% 19%
(0.00) (6.70) (10.70) (14.60) (6.70) (10.70) (14.60) (6.70) (10.70) (14.60)
pH 7.66 10.40 10.90 11.04 10.40 10.90 11.04 10.40 10.90 11.040
Coliformes
0.00 -7.00 -8.00 -10.40 -9.80 -10.00 -11.40 -10.40 -11.00 -11.40
fecales a
Salmonella
0.00 -7.00 -8.00 -8.00 -8.00 -8.00 -8.00 -8.00 -8.00 -8.00
spp. a

En estas condiciones, el amoniaco molecular puede
difundirse a travs de la membrana de bacterias;
independientemente del aumento de temperatura por
las reacciones qumicas. Efectivamente, en un
proceso donde el amoniaco es aadido al lodo para
alcanzar un valor de pH de 10, Allievi y col. (1994)
mencionan que a temperatura ambiente (28C) se
puede inactivar 1 unidad log de estreptococos fecales
en comparacin con un tratamiento con la misma
dosis a 5C, donde no hubo remocin significativa.
De acuerdo con Hass y col. (1998) y Veschetti y col.
(2003), la inactivacin de bacterias puede
relacionarse con el producto de las variables
concentracin de desinfectante y el tiempo de
contacto (producto TC).
Debido a que en esta etapa el tiempo de
contacto fue constante (2h), la inactivacin
bacteriana fue directamente relacionada con la dosis
de amoniaco aplicado y la temperatura utilizada en
cada tratamiento (producto DT). Los resultados de
39 pruebas se pueden representar mediante el modelo
de primer orden de Hom modificado, en el cual se
introdujo el tiempo t y la constante m* asociados con
k en k*, para tomar en cuenta las desviaciones
superiores en inferiores del modelo lineal de Chick-
Watson, las cuales se encuentran con frecuencia en la
prctica. El modelo de Hom se represent con la Ec.
(5).
N puesto que ambas variables (temperatura y dosis de
= k * ( DT )
m*
Log (5)
N0
donde
D: Dosis de amoniaco, g/L.
T: Temperatura, C
Los valores de la constante k* = 1.31 (Tabla
10) sugieren que la inactivacin se realiz
gradualmente con el incremento del producto DT,
mismo que puede definir el efecto combinado de
ambas variables (dosis-temperatura) para el control
del proceso. El valor de k* obtenido en esta etapa no
puede ser comparado con la k* y k** obtenidas en
las etapas anteriores por lo que nicamente puede
utilizarse para predecir resultados en donde la
temperatura sea utilizada en combinacin con la
dosis de amoniaco.
Tabla 10. Resumen de los valores de los parmetros
cinticos estimados por el modelo de Hom obtenidos
en la tercera etapa experimental.
Microorganismos K* m* R2
Coliformes fecales 1.31 0.33 0.98
En relacin con la inactivacin de coliformes
fecales, se observ un valor bajo de el coeficiente m*
(m*<1), el cual sugiere que la cintica de
desinfeccin actual se desva del modelo de Chick-
Watson con una tendencia definida como "tails
(colas) por Hom. Esta tendencia sugiere una
inactivacin relativamente rpida de bacterias, an
con valores muy bajos del producto DT. Puesto que
la dosis de amonaco de 9% p/p a 20C inactiv la
Salmonella spp., el efecto del producto DT no pudo
ser evaluado en bacterias patgenas.
Los parmetros cinticos determinados
pueden ser tiles para predecir la inactivacin de los
principales microorganismos presentes no solamente
en lodos agroindustriales sino tambin en lodos de
origen municipal adems de servir de base para el
diseo y operacin del proceso alcalino con
amoniaco. Adems, los parmetros cinticos
obtenidos en la tercera etapa se pueden utilizar para
calcular y predecir la remocin microbiana cuando se
aumenta la temperatura del proceso. Finalmente,
amoniaco) son dependientes de la dosis de CaO en el
proceso de la estabilizacin con cal viva,
comnmente utilizado para tratar lodos, pueden
aprovecharse para mejorar la estabilizacin con cal
en sistemas cerrados en los cuales se impide la libre
volatilizacin del amoniaco.
Conclusiones
De acuerdo con los resultados obtenidos, el poder
desinfectante del amoniaco puede ser considerado
como una alternativa paralela a la estabilizacin
alcalina, no solamente en lodos residuales
municipales sino tambin en lodo agroindustrial con
concentraciones extremadamente altas de
microorganismos patgenos. Puesto que el amoniaco
aplicado se diluye en el agua contenida en el lodo; el
poder desinfectante del amonaco aumenta su efecto

234
 J.M. Mndez y col./ Revista Mexicana de Ingeniera Qumica Vol. 7, No. 3 (2008) 229-235
cuando la concentracin de slidos totales aumenta.
En efecto, concentraciones de ST de 4, 8 y el 12%
requirieron de 23, 17 y 4% p/p, de NH3,
respectivamente. As, se recomienda la
deshidratacin parcial del lodo fisicoqumico antes
de su estabilizacin para cumplir satisfactoriamente
con el lmite US EPA para bioslidos clase A.
Los parmetros obtenidos para el modelo
cintico de Hom (k, n y m) describieron
apropiadamente la inactivacin de ambos grupos de
bacterias, indicadoras (coliformes fecales) y
patgenas (Salmonella spp.). Los valores de R2 de
0.82 a 0.98 confirmaron el grado de ajuste del
modelo. De acuerdo con este modelo matemtico, es
posible predecir los requisitos de los materiales
alcalinos (NH3) para diversos niveles de inactivacin
de las bacterias. Adems, los resultados de los
parmetros cinticos mostraron mayor resistencia a
la inactivacin de los coliformes fecales en
comparacin con la Salmonella spp., debido a una
concentracin notablemente mayor en lodo crudo (12
log y 8 log).
Por otra parte, en relacin a los
requerimientos de materiales alcalinos, la seleccin
de la dosis puede obtenerse a partir de pruebas
experimentales o conociendo la concentracin de
slidos totales (%) usando el modelo modificado de
Hom. La ventaja es que no se requiere realizar
anlisis microbiano antes de iniciar la operacin del
proceso; los resultados obtenidos naturalmente se
deben validar en el laboratorio para escalar el
proceso. El producto del proceso de estabilizacin de
amoniaco no aumenta la masa y la salinidad del lodo
tratado, reduciendo costos. Adems, el amonaco
aumenta el contenido de nutrientes en los bioslidos
producidos hacindolos tiles en regiones agrcolas.
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235
Artculo Tcnico Bayona-Rojas, M.A.; Gutirrez-Escobar, A.J.: Supervivencia Helicobacter pylori

BIOPELCULA: UN MECANISMO DE SUPERVIVENCIA DE

Helicobacter pylori

BIOFILM: A SURVIVAL MECHANISM OF

Helicobacter pylori
Martn Alonso Bayona-Rojas1*, Andrs Julin Gutirrez-Escobar2*
1
Bacterilogo, Esp., M.Sc.; 2 Lic. Biologa, M.Sc. Docentes Facultad de Medicina, Grupo de Investigaciones Biomdicas y de
Gentica Aplicada (GIBGA), Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U.D.C.A. Calle 222 No. 55-37, Bogot, D.C,
Colombia. Correo electrnico respectivo: mabayona@udca.edu.co; andresgutierrez@colombia.com, *ambos autores reali-
zaron la misma contribucin.

Rev. U.D.C.A Act. & Div. Cient. 16(2): 335-342, Julio-Diciembre, 2013

RESUMEN cin mundial. La infeccin, se asocia al desarrollo de lcera

Helicobacter pylori es un patgeno que coloniza el estma-
go humano, el cual, se ha asociado a mltiples enfermeda-
des gastroduodenales. Dentro de su metabolismo produce
una biopelcula, que es un complejo exopolisacarido, que le
permite a la bacteria sobrevivir en ambientes desfavorables
y ser resistente a la accin de los antibiticos, debido a que
previene la penetracin completa de estos compuestos. La
presente revisin estuvo orientada a realizar una actualiza-
cin sobre la importancia del biopolmero para la supervi-
vencia de la bacteria y mostrar su trascendencia para la salud
pblica.
Palabras clave: Microbiologa, bacteria, lcera pptica, resis-
tencia microbiana, cultivo microbiano.
SUMMARY
Helicobacter pylori is a pathogen which colonizes the human
stomach and is associated with multiple gastrointestinal
diseases. Metabolism occurs within a biofilm which is a
complex exopolysaccharide that allows the bacterium to
survive in hostile environments and be resistant to the action
of antibiotics, since it prevents complete penetration of these
compounds. The present review was designed to perform an
update on the importance of the biopolymer regarding the
survival of the bacteria and show its public health significance.
Key words: Microbiology, bacterium, peptic ulcer, microbial
resistance, microbial culture.
INTRODUCCIN
Helicobacter pylori infecta entre el 50 y el 75% de la pobla-
pptica y participa en la cadena etiolgica multicausal, para
el desarrollo de cncer gstrico. En Colombia, uno de los
principales motivos de consulta en los servicios mdicos y
hospitalarios corresponden a sintomatologa de enfermedad
cido pptica (Bessa et al. 2012; Gisbert, 2011; Romo & Co-
ria, 2010; Vale & Vtor, 2010; Torres & Backert, 2008; Fuccio
et al. 2007; Parkin, 2006; Sierra, 2002).
Los reservorios del microorganismo son el hombre y los ani-
males domsticos, como el perro y el gato y presenta di-
versos mecanismos de transmisin, por mencionar el agua
y los alimentos contaminados, transmisin oro-fecal e in-
sectos, como la mosca domstica (Ford & Axon, 2010). La
infeccin no es exclusiva para un rango de edad especfico
y afecta tanto poblacin infantil (principalmente, en pases
con condiciones sanitarias pobres) como adulta. Los patro-
nes de infeccin varan de acuerdo a la zona geogrfica y se
ha identificado que se asocia con hbitos y con costumbres
alimentarias, que influyen en la aparicin de sintomatologa
(Vale & Vtor, 2010; Flatland, 2002; Gmez & Orozco, 2006;
Kivi & Tindberg, 2006).
Desde el punto de vista microbiolgico, H. pylori es pleo-
mrfico, Gram negativo y habita tanto en el epitelio del es-
tmago como del intestino de humanos y de los animales.
Una vez coloniza la mucosa gstrica es difcil erradicarla, a
menos que se emplee tratamiento antibitico. Helicobacter
presenta las siguientes caractersticas: es microaerfilo, po-
see una membrana externa y, en promedio, seis flagelos po-
lares estan protegidos por una estructura lipdica; asimismo,
es ureasa, catalasa y citocromo-oxidasa positivo, no produce
hidrlisis del hipurato ni cido sulfhdrico. Entre los factores
de virulencia, se encuentra la ureasa, que transforma la urea
en amoniaco y agua, alcalinizando as el medio cido cir-

335
Revista U.D.C.A Actualidad & Divulgacin Cientfica 16 (2): 335 - 342
cundante; tambin se encuentran lipasas, adhesinas, factor
activador plaquetario, la protena Cag A, Pic B (que induce
a citocinas) y la protena vacuolizante Vac A. (Naranjo et al.
2012a; 2012b; Blanchard & Nedrud, 2012; Terebiznik et al.
2006; Marshall, 2002).
El cultivo se realiza, principalmente, a partir de biopsias de
mucosa gstrica; sin embargo, se logra tambin empleando
muestras extra-gstricas, como placa dental, heces fecales,
saliva y muestras obtenidas, a partir de esfago. Los creci-
mientos tpicos, se obtienen entre 4 a 7 das, en condiciones
de: 5-10%, 02; 5-10%, C02; 80-90%, N2; humedad de 95%
y temperatura de 35 a 37oC. Para su pleno crecimiento, se
emplean medios de cultivo complejos, suplementado con
sangre, con vitaminas y con antibiticos (Blanchard & Ne-
drud, 2012; Siavoshi et al. 2012; Abrante et al. 2012; Joo et
al. 2010; Stevenson et al. 2003; Cellini et al. 2010; Bayona,
2013).
Genticamente, H. pylori es muy diverso, con una tasa de
intercambio de material gentico alta y con ventajas evolu-
tivas diferenciales entre cepas de la misma especie, tanto
para marcadores de virulencia como para adhesinas (Bal-
trus et al. 2008). En nuestra experiencia, esta diversidad se
puede apreciar en el crecimiento diferencial de las cepas en
medios de cultivo diferentes (agar Brucella, Campylobacter
y Tripticasa de soya); inclusive, cepas aisladas, a partir de
biopsias de un mismo paciente, presentan cinticas de cre-
cimiento diferenciales. Adems, anlisis evolutivos realizados
por nuestro grupo ponen de manifiesto procesos de diferen-
ciacin gentica entre adhesinas pertenecientes a cepas del
este y el oeste, que presentan seleccin positiva operante
(Gutirrez-Escobar, 2013). Finalmente, mencionar que hasta
las caractersticas macroscpicas e, inclusive, la coloracin
de Gram, son diferenciales (Bayona, 2013).
Andersen & Rasmussen (2009), mediante estudios de mi-
croscopa electrnica, observaron formas espirales, formas
cocoides y formas degenerativas. Las formas espirales son
viables, cultivables, virulentas y pueden colonizar los anima-
les de experimentacin. Las formas cocoides tambin pue-
den ser viables, pero no cultivables, son menos virulentas y
menos propensas a colonizar e inducir inflamacin en ani-
males de experimentacin. Finalmente, las formas degene-
rativas no pueden ser cultivadas y la membrana celular se ha
desintegrado, pero el material gentico puede ser demostra-
do por la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR), especialmente, en los suministros de agua.
Otro aspecto importante es el enfoque del tratamiento actual
que busca eliminar la bacteria, acompaado de una terapia
complementaria, que mejora el efecto de los antibiticos, por
diferentes mecanismos. A nivel mundial, la terapia estndar
ha perdido eficacia, todo debido a la resistencia que ha veni-
Julio-Diciembre 2013
do desarrollando este microorganismo en los ltimos aos.
En muchos casos, se ignora la efectividad de los esquemas
de tratamiento prescritos, ya que no se realizan pruebas para
verificar su eliminacin (cultivo), pruebas de susceptibilidad y
estudios farmacogenmicos (Mgraud & Corti, 2009; Otero
et al. 2009).
Un tema poco mencionado y que consideramos importan-
te desde diversos puntos de vista es el hecho que la bac-
teria forme una biopelcula; sin embargo, poco es el cono-
cimiento concentrado en nuestro idioma sobre referente a
este tema. En el presente artculo, se realiz una revisin de
aspectos microbiolgicos asociados con la biopelcula pro-
ducida por H. pylori. Para la bsqueda bibliogrfica, se ex-
ploraron las siguientes bases de datos: Medline, Proquest,
Embase, Jstore,Pubmed,Hinari, Springer, Nature, Science
online y Oxford Journal y en revistas particulares como Plos,
Nas e Imbiomed. Se combinaron los trminos: biofilms and
Helicobacter, Helicobacter pylori survival, Helicobacter
and Maintenance, Supplements for Helicobacter, Laboratory
Maintenance, Susceptibility to antibiotics.
Los mtodos de recuperacin en caldo y en medios slidos
recomendados por los autores han sido evaluados con cepas
de referencia. Cabe resaltar que a cada una de las cepas que
hemos obtenido se les ha realizado un control bioqumico,
caracterizado por pruebas convencionales (Gram, oxidasa,
catalasa y ureasa) y un control molecular basado en la geno-
tipificacin de la subunidad 16S del gen ribosomal, teniendo
en cuenta que estas cepas presentan altsima variabilidad
gentica. Destacamos, tambin, que a partir de los cultivos
en medio lquidos y slidos, se presenta como caracterstica
importante, la presencia de una biopelcula, cuya secrecin
es aparentemente diferencial entre las cepas aisladas hasta
el momento. Por otra parte, hemos observado las diferentes
morfologas macroscpicas de las colonias, lo cual, nos des-
cribe su amplia variabilidad gentica (Figura 1).
BIOPELCULAS
Algunas bacterias forman conglomerados o comunidades
microbianas cuando crecen en un nicho ecolgico distinto
a su hospedero. Estas comunidades microbianas, se embe-
ben dentro de una matriz orgnica polimrica autoprodu-
cida y adherida a una superficie viva (biofilm de mucosa) o
inerte, que pueden ser mono o polimicrobianas (Davey &
Otoole, 2000; Kraigsley et al. 2002; Percival & Thomas,
2009; Coticchia et al. 2006; Costerton et al. 1999; Donlan,
2002; Yonezawa et al. 2010; Binkowska et al. 2013). Las bio-
pelculas son slidas y presentan canales por donde fluyen el
agua y los nutrientes a las zonas ms profundas (Yonezawa et
al. 2010; Ceyhan, 2010; Di Campli et al. 2010; Makipour &
Friedenberg, 2011). Los primeros anlisis de la produccin
de biofilm por parte de bacterias, como H. pylori, se llevaron
336
Artculo Tcnico Bayona-Rojas, M.A.; Gutirrez-Escobar, A.J.: Supervivencia Helicobacter pylori

Figura 1. Caractersticas macroscpicas de cepas de Helicobacter pylori en medio de cultivo agar Chocolate.

a cabo en Per, mostrando un fuerte potencial de infeccin,
a partir de muestras de agua potable (Hulten et al. 1996).
Los microorganismos que estn alojados en la biopelcula
tienen diferente metabolismo, crecimiento, disponibilidad
de nutrientes, presin osmtica y densidad poblacional mi-
crobiana y se comunican por medio de seales qumicas.
Las clulas microbianas viven en estrecha proximidad, que
les permiten intercambiar material gentico, presente en los
plsmidos (Binkowska et al. 2013).
Las biopelculas estn presentes en todas partes y afectan
todos los aspectos de nuestra vida. A nivel clnico, se aso-
cian con neumona nosocomial, infecciones del tracto uri-
nario (catter), infecciones supurativas, infecciones del sis-
tema nervioso central, sepsis bacteriana y juegan un papel
importante, asociados con fibrosis qustica y enfermedad del
legionario (Brelles Mario, 2012; Binkowskawa et al. 2013).
Representan una estrategia adaptativa de las bacterias que
es ventajosa porque: 1) Protege los microorganismos de
agentes adversos, como son desinfectantes y antibiticos
y otros agentes ambientales estresantes; 2) Incrementa la
disponibilidad de nutrientes, ya que los concentra; 3) Evita
la deshidratacin y, 4) Posibilita la transferencia de material
gentico (Costerton et al. 1999; Donlan, 2002). Varios me-
canismos estn probablemente relacionados con la resisten-
cia antimicobiana: 1) Lenta penetracin del agente antimi-
crobiano en la biopelcula; 2) Cambio en el microambiente
qumico dentro de la biopelcula, lo cual, conduce a zonas de
crecimiento lento o nulo; 3) Respuesta de estrs de adapta-
cin y, 4) Presencia de una pequea poblacin de clulas de
extrema resistencia (Huynh et al. 2004).
Grande et al. (2011), al estudiar y caracterizar el ADN extra-
celular (EDNA) en las biopelculas de H. pylori, determina-
ron que el EDNA no es el componente principal de la matriz
y que, como tal, puede estar involucrado en otros proce-
sos que estn orientados a la recombinacin, a travs de la
transformacin, contribuyendo as a la variabilidad gentica
de la bacteria.
Las biopelculas tambin juegan un papel importante, a nivel
de salud pblica, debido a su papel en enfermedades infec-
ciosas, relacionadas con dispositivos. De acuerdo con la es-
timacin dada por el centro para el control de enfermedades
(Atlanta, GA, EE.UU), se estima que 65% de las enferme-
dades humanas causadas por infecciones bacterianas estn
involucradas con biopelculas (Jain et al. 2007).
Estructuralmente, las biopelculas estn constituidas por
tres componentes: a) masa microbiana, b) espacios inter-
celulares o canales y c) mMatriz extracelular que rodea el
complejo y est compuesta de exopolisacaridos, protenas,

337
Revista U.D.C.A Actualidad & Divulgacin Cientfica 16 (2): 335 - 342
cidos nucleicos y otras sustancias (Costerton et al. 1987).
La formacin de la biopelcula est regulada por un sistema
de seales dependiente de la acumulacin de un autoinduc-
tor. En bacterias Gram negativas, como H. pylori, el principal
autoinductor es la acil-homoserina lactona (Donlan, 2002;
Lasa et al. 2009). La formacin de la biopelcula conlleva
un proceso sistemtico de cinco fases: 1) Adsorcin rever-
sible de la bacteria a la superficie; 2) Unin irreversible a la
superficie; 3) Fase inicial de maduracin con crecimiento y
desarrollo microbiano; 4) Produccin del exopolmero y, 5)
Desarrollo final de la colonia con dispersin de clulas colo-
nizadoras (Kumar & Anand, 1998; Cole et al. 2004).
Un medio comn para la formacin de biopelculas es el
agua, frente a lo cual, los estudios epidemiolgicos sugieren
que el agua del medio ambiente es un factor de riesgo para
su infeccin, en comparacin con el agua del grifo (Adams
et al. 2003; Watson et al. 2004; Bellack et al. 2006). Muchas
veces, el tratamiento con antimicrobianos de comunidades
de bacterias patgenas es inefectivo (Patel, 2005).
Las biopelculas pueden presentar diferentes formas depen-
dientes del ambiente, sea natural, clnico o industrial (Davey
& O Toole, 2000; Kraigsley et al. 2002; Cammarota et al.
2010). Dentro de esos ambientes encontramos: piel, tracto
intestinal, alrededor de races vegetales, en las tuberas, en
la placa dental o en instrumentos implantados, como catte-
res, marcapasos y prtesis (Donlan, 2002; Serra, 2003); sin
embargo, no parece participar en la formacin de biopelcula
en la cavidad oral, a pesar que la bacteria se puede detectar
(Andersen & Rasmussen, 2009).
Bessa et al. (2012) evaluaron, a nivel in vitro, el comportamien-
to fisiolgico de biopelculas de H. pylori y emplearon cuatro
medios de cultivo lquido: caldo Brucella, infusin de cerebro
corazn, caldo Ham F-12 adicionado de 2% de suero fetal
de ternero y Ham sin suero. La formacin de las biopelculas
fue significativamente dependiente de los medios empleados,
recomendando los medios Ham F-12. Posteriormente, Bessa
et al. (2012), con el fin de obtener estudios fisiolgicos ms
precisos, optimizaron condiciones de cultivo para H. pylori,
los cuales, incluyeron al medio Ham F-12 suplementado con
suero fetal bovino al 5%. La estrategia del diseo experimental
mostr resultados ptimos, en valores de pH (8,0), velocidad
de agitacin, (130rpm), valor de tasa de crecimiento especfi-
co de 0,164 h-1, correspondiente a una concentracin mxi-
ma aproximada de 1,5x 108 UFC/ml, despus de 8 horas. En
contraste a lo anterior, Yonezawa et al. (2010), en su estudio
de formacin de biopelcula de H. pylori, obtuvo un ptimo
crecimiento en caldo Brucella suplementado con suero de
ternera fetal al 7%, encontrando que no hubo diferencias sig-
nificativas en la autoagregacin, la motilidad y la hidrofobici-
dad de las diferentes cepas evaluadas.
Julio-Diciembre 2013
Un trabajo que emple caldo Brucella adicionado de sue-
ro de caballo al 10% fue evaluado por Joo et al. (2010),
quienes introdujeron una nueva tcnica en capa fina lqui-
da, empleando como soporte, caja de Petri de 90mm. Esta
metodologa representa una alternativa verstil para la inves-
tigacin del microorganismo. Una cepa de H. pylori NCTC
11637 produjo una biopelcula, bajo condiciones in vitro, en
un medio con un alto contenido de carbono (caldo Bruce-
lla), suplementado con 3g de glucosa. En nuestra experien-
cia, se ha dado un resultado similar, al observar presencia del
exopolisacarido, a las 18 horas de iniciado el cultivo.
Carron et al. (2006) demostraron, mediante microscopia
electrnica de barrido (primer registro fotogrfico), la exis-
tencia de una biopelcula de H. pylori en mucosa gstrica
humana. Los pacientes evaluados, se sometieron a una en-
doscopia, tomndose tres muestras por cada uno; paralela-
mente, se realizaron pruebas confirmatorias de ureasa.
Cammarota et al. (2012) demostraron, mediante un esca-
neo por medio de la microscopia electrnica, a partir de
biopsias gstricas obtenidas de pacientes infectados por H.
pylori, la formacin de biopelculas. Estos biopolmeros per-
miten que el microorganismo permanezca latente en este
medio gstrico y asimismo, sea resistente a la accin de los
antibiticos. Mediante el empleo de N-acetilcistena, antes de
iniciar el tratamiento con antibiticos, permiti erradicar la
biopelcula, a nivel gstrico y, de esta manera, poder eliminar
posteriormente la bacteria. Asimismo, Makipour & Frieden-
berg (2011) y Huynh et al. (2004) mostraron el papel que
presenta este compuesto en la degradacin de la biopelcula.
Souto & Vieira (2008), al evaluar la prevalencia de H. pylori
por PCR en biofilm subgingival y de saliva de 169 pacientes
con periodontitis crnica, encontraron una prevalencia de un
20%. Se observ una mayor prevalencia en muestras de bio-
pelcula subgingival (33,3%), en comparacin con muestras
de saliva (20%), permitiendo establecer que dicho microor-
ganismo se detecta con frecuencia en la microbiota oral de
sujetos con periodontitis. Por otra parte, el trabajo llevado
a cabo por Ghosh & Bodhankar (2012), quienes evaluaron
1.500 muestras de saliva de pacientes asintomticos para
H. pylori por PCR, hallaron una prevalencia en hombres de
75,96% y en mujeres de 88,10%. El papel de la cavidad oral
en la colonizacin por H. pylori es considerada como tran-
sitoria e independiente del estado del paciente, de tal forma
que el tiempo de supervivencia debe ser estudiado con el fin
de aumentar su conocimiento sobre la va de transmisin de
este patgeno (Al-Ahmad et al. 2012).
Se ha demostrado que en agua, las biopelculas protegen
a los microorganismos de condiciones adversas (Percival
& Thomas, 2009; Stewart & Costerton, 2001). Tcnicas,
338
Artculo Tcnico Bayona-Rojas, M.A.; Gutirrez-Escobar, A.J.: Supervivencia Helicobacter pylori
como PCR y la prueba de fluorescencia de hibridacin in situ
(FISH), se han empleado con xito para identificar con satis-
faccin la presencia de H. pylori en agua (Giao et al. 2008).
Cuando se habla de la presencia de H. pylori en agua, se
define como un microorganismo que tiene la capacidad de
entrar en estado viable, pero no cultivable, sobre todo en ca-
sos de condiciones desfavorables. Frente a esta problemti-
ca, Linke et al. (2010) evaluaron la prueba de PCR en tiempo
real, para lo cual, las biopelculas con el microorganismo se
generaron en un modelo con agua potable sobre un tubo
con silicona. Dentro de los resultados obtenidos evidencia-
ron que la secuencia de ADN de la sonda y los cebadores no
mostr homologa cruzada con otras bacterias, siendo po-
sible detectar diez unidades genmicas, representando, por
lo tanto, una nueva herramienta de anlisis para este tipo de
microorganismo.
CONCLUSIONES
A pesar de las importantes implicaciones microbiolgicas
y fisiolgicas que presenta la formacin de las biopelculas
no es mucho lo que se conoce sobre su produccin, regu-
lacin y papel en la resistencia a los antibiticos. El hecho
de poder conocer e identificar elementos genticos y facto-
res ambientales asociados con la formacin de biopelculas
permitir establecer estrategias efectivas para su control. El
objetivo de esta revisin fue, precisamente, traer a la retina
de la comunidad cientfica nacional e internacional, de habla
hispana, este tema, para abrir posibilidades investigativas en
nuestras regiones, ya que poco se conoce sobre la forma-
cin de biopelculas y sus implicaciones clnicas, por parte
de cepas nativas para la regin latinoamericana.
Conflicto de intereses: El artculo fue preparado y revisado
con la participacin de todos los autores, quienes declara-
mos que no existe ningn conflicto de intereses, que ponga
en riesgo la validez de los resultados presentados.
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Como citar:
Bayona-Rojas, M.A.; Gutirrez-Escobar, A.J. 2013. Biopelcula: un mecanismo de supervivencia de Helicobacter pylori. Rev.
U.D.C.A Act. & Div. Cient. 16(2): 335-342.

342
Rev Argent Microbiol. 2014;46(2):126-132

R E V I S TA A R G E N T I N A D E
MICROBIOLOGA
www.elsevier.es/ram

ARTCULO ORIGINAL

Supervivencia de VTEC O157 y no-O157 en agua de bebederos

y materia fecal de bovinos
Rosana Polifroni, Anala I. Etcheverra*,, Guillermo H. Arroyo y Nora L. Padola

CIVETAN - CONICET CICPBA FCV - UNICEN, Tandil, Buenos Aires, Argentina

Recibido el 2 de mayo de 2013; aceptado el 13 de marzo de 2014

PALABRAS CLAVE Resumen

VTEC; Escherichia coli productor de verotoxina [verotoxin-producing E. coli (VTEC)] es el agen-
Medio ambiente; te causal del sndrome urmico hemoltico (SUH), enfermedad que afecta principalmente
Tambo; a nios de edades comprendidas entre 6 meses y 5 aos. La transmisin se produce por
Agua; el consumo de alimentos contaminados, por el contacto directo con animales o con el
Supervivencia medio ambiente y de persona a persona. En trabajos anteriores hemos determinado que
el medio ambiente del tambo es un reservorio no animal de VTEC, por lo cual nos pro-
pusimos estudiar la supervivencia de 4 aislamientos VTEC (O20:H19; O91:H21; O157:H7
y O178:H19) en agua estril de bebederos y en materia fecal de bovinos mediante el
recuento de bacterias viables y la deteccin de genes de virulencia por PCR. Se demos-
tr que la supervivencia de los distintos aislamientos VTEC (O157 y no-O157) vara en
funcin de sus caractersticas intrnsecas y de las condiciones del medio ambiente en el
que se encuentran. Las principales diferencias entre los aislamientos fueron el tiempo
de supervivencia en los microcosmos y los recuentos mximos alcanzados. La capacidad
para adaptarse y sobrevivir de estos microorganismos aumenta el riesgo de transmisin
a las personas que trabajan en los establecimientos ganaderos o que se encuentran de
visita en ellos, as como el riesgo de reinfeccin de los animales y de contaminacin
de los alimentos.
2013 Asociacin Argentina de Microbiologa. Publicado por Elsevier Espaa, S.L. Todos
los derechos reservados.

El primer lugar de los autores es compartido entre la Dra. Rosana Polifroni y la Dra. Anala I. Etcheverra.
* Autor para correspondencia.
Correo electrnico: analiain@vet.unicen.edu.ar (A.I. Etcheverra).

0325-7541/ 2013 Asociacin Argentina de Microbiologa. Publicado por Elsevier Espaa, S.L. Todos los derechos reservados.
VTEC O157 y no-O157 en agua y materia fecal 127

KEYWORDS Survival of VTEC O157 and non-O157 in water troughs and bovine feces
VTEC;
Environment; Abstract
Dairy farm; Verotoxin-producing Escherichia coli (VTEC) is the etiologic agent of hemolytic-uremic
Water; syndrome (HUS), which typically affects children ranging in age from six months to ve
Survival years old. Transmission is produced by consumption of contaminated food, by direct
contact with animals or the environment and from person to person. In previous studies
we determined that the environment of a dairy farm is a non-animal reservoir; thus, we
proposed to study the survival of 4 VTEC isolates (O20:H19; O91:H21; O157:H7 and
O178:H19) in sterile water troughs and bovine feces by viable bacteria count
and detection of virulence genes by PCR. It was demonstrated that the survival of
different VTEC isolates (O157 and non-O157) varied in terms of their own characteristics
as well as of the environmental conditions where they were found. The main differences
between isolates were their survival time and the maximal counts reached. The
competitive and adaptive characteristics of some isolates increase the infection risk for
people that are visiting or working on a farm, as well as the risk for reinfection of the
animals and food contamination.
2013 Asociacin Argentina de Microbiologa. Published by Elsevier Espaa, S.L. All
rights reserved.

Introduccin percial o subterrnea y el contacto con el suelo en reas

Argentina es el pas con mayor incidencia de sndrome ur-
mico hemoltico (SUH) a nivel mundial (17/100 000 nios
menores de 5 aos)37. El principal agente causal de esta
afeccin es Escherichia coli productor de verotoxina VT1 y
VT2 (VTEC)5,22. Estas toxinas producen muerte celular en los
tejidos de los rganos afectados: rin, intestino, hgado, incidencia mayor de casos de SUH (12,7 casos cada
pncreas y sistema nervioso central1. Los genes vt1 y vt2 se
encuentran codicados en fagos que se insertan en el cro-
mosoma bacteriano, lo cual facilita la transmisin horizontal
de la informacin a otras bacterias5,20. Otros factores de vi-
rulencia importantes de VTEC son la intimina, codicada por
el gen eae y necesaria para producir la lesin de adherencia
y borrado del enterocito (lesin A/E), y una hemolisina en-
terohemorrgica (EhxA) codicada en un plsmido32,44. En
cepas eae negativas se ha identicado una protena autoa-
glutinante de membrana externa (Saa) que le permitira la
adherencia al tejido del intestino. Este hallazgo sugiere que
el gen eae no sera esencial para la virulencia de VTEC32. La
emergencia de la cepa O104:H4, con caractersticas ente-
roagregativas y enterohemorrgicas y causante de dos bro-
tes de SUH y colitis hemorrgica (CH) en Alemania y Francia
(859 casos de SUH y 50 muertos entre mayo y julio de 2011),
refuerza la importancia de la transferencia horizontal de los
factores de virulencia que estn codicados en elementos
genticos mviles de E. coli, como plsmidos, fagos, trans-
posones e islas de patogenicidad9,19,26.
En Argentina, la mayora de los casos de CH y SUH son
producidos por el serotipo O157:H7, aunque serotipos no-
O157 son responsables del 40 % de ellos36. La transmisin se
produce debido al consumo de alimentos contaminados,
como carne mal cocida, vegetales de hoja, leche no pasteu-
rizada, frutas, salames, mayonesas, yogures y aguas conta-
minadas40. En los ltimos 20 aos se ha observado un incre-
mento en el nmero de casos de enfermedad relacionados
con el medio ambiente, a travs del contacto con agua su-
de cra intensiva de ganado7,17,29,38. Otros casos de infeccio-
nes con VTEC en humanos han ocurrido por el consumo de
frutas y vegetales cultivados en suelos abonados con euen-
tes de granjas8,23,34.
Se ha comprobado que la poblacin rural expuesta al
contacto directo con materia fecal de bovinos posee una
100 000 habitantes) en comparacin con la poblacin urba-
na de la misma zona (7,1 casos cada 100 000 habitantes)39.
Estos antecedentes destacan la amenaza que representa
para la salud pblica la contaminacin ambiental con este
patgeno35.
La supervivencia de E. coli O157:H7 en suelo, agua y he-
ces de animales frente a condiciones estresantes del medio
ambiente ha sido estudiada por muchos investigado-
res6,18,21,25,43, aunque poco se conoce sobre el efecto del es-
trs en otros serotipos VTEC28.
Recientemente nuestro grupo de investigacin ha infor-
mado que en el medio ambiente de un tambo la prevalen-
cia de VTEC fue menor que la observada en los animales
del mismo establecimiento (23 % y 27 %, respectivamen-
te)15,35. Esto podra deberse a las condiciones estresantes
del medio ambiente que desencadenaran diferentes res-
puestas al estrs, lo que permitira la adaptacin y super-
vivencia de diversas bacterias mediante la adopcin de un
metabolismo basal durante varias semanas30,39. Las bacte-
rias en estado de metabolismo basal reciben el nombre de
bacterias viables pero no cultivables (VNC), pues son ca-
paces de recuperar su culturabilidad bajo condiciones di-
ferentes a las empleadas rutinariamente en los laborato-
rios24, sin embargo, poco se conoce sobre su capacidad de
supervivencia en distintos ambientes27. Por tal motivo, nos
propusimos estudiar el crecimiento y la supervivencia de
4 aislamientos VTEC (O20:H19; O91:H21; O157:H7 y
O178:H19) en agua estril de bebederos y en materia fecal
de bovinos.
128
Materiales y mtodos
Cepas utilizadas
Las cepas utilizadas en este estudio fueron O20:H19 (ehxA,
vt1, vt2, saa, sab) y O157:H7 (ehxA, eae, vt2), aisladas de
bovinos de feedlot31; y O91:H21 (ehxA, vt2, saa) y O178:H19
(ehxA, eae, vt2, saa, sab), aisladas de bovinos de tambo14,31.
Estas pertenecen al cepario del Laboratorio de Inmunoqu-
mica y Biotecnologa CIVETAN CONICET CICPBA FCV -
UNICEN. La seleccin de los serotipos se realiz consideran-
do los datos epidemiolgicos de los casos de enfermedad en
humanos, la prevalencia en el ganado, la presencia de ge-
nes codicantes de factores de virulencia y los anteceden-
tes de resistencia al estrs cido14,28,31. Para facilitar la re-
cuperacin posterior en medios de cultivo, se generaron
cepas resistentes a cido nalidxico por medio de exposicio-
nes graduales a concentraciones crecientes del antibitico
(0,1; 0,2; 0,4; 0,8; 1,6; 3,2; 6,4; 12,8; 25 y 50 g/ml).
Preparacin e inoculacin de las muestras de agua
Se recolectaron 15 l de agua de bebederos de un tambo,
que se fraccionaron en Erlenmeyers (1 l en cada uno) y se
autoclavaron3. Se corrobor la ausencia de bacterias porta-
doras de vt1-vt2 mediante PCR13 y de bacterias resistentes a
cido nalidxico mediante siembra en placas de agar Mac-
Conkey sorbitol con el agregado de cido nalidxico (50 g/
ml) (SMAC-NAL).
Las cepas se cultivaron en un caldo nutritivo Luria-Berta-
ni (LB) a 37 C durante 18 h y se estim la concentracin
bacteriana mediante la determinacin de la DO600, para po-
der inocular el agua de bebederos a razn de 103 UFC/ml3.
Los Erlenmeyers con agua inoculada se mantuvieron a tem-
peratura ambiente (promedio: 16-20 C), tapados y sin agi-
tacin. La recoleccin de muestras se realiz inmediata-
mente luego de la inoculacin (hora 0), cada 24 h durante
los primeros 4 das, cada 48 h hasta el da 8 y, a partir de
entonces, se muestre una vez por semana hasta que no se
recuperaron bacterias por al menos 7 das consecutivos. La
toma de muestras se realiz con pipeta de vidrio estril lue-
go de una agitacin suave y en condiciones de esterilidad.
Se realizaron tres experimentos independientes: el pri-
mero, desde mayo hasta agosto de 2008; el segundo, desde
septiembre hasta diciembre de 2009; y el ltimo,
desde agosto hasta noviembre de 2011.
En el ensayo de 2008 se estudi y compar el crecimiento
y la supervivencia de VTEC O157:H7 en el microcosmos del
agua y en caldo nutritivo LB, utilizado como control de cre-
cimiento. En cambio, en los ensayos de 2009 y de 2011, solo
se utiliz el microcosmos del agua estril de bebedero y se
incorporaron al estudio las restantes cepas VTEC.
Estudio de viabilidad
El estudio de viabilidad de las cepas inoculadas se realiz
mediante el recuento de colonias en placas de agar SMAC-
NAL, a partir de diluciones estndares. Para la construccin
de las curvas de crecimiento se utiliz el promedio del re-
cuento de colonias obtenidas en dos diluciones decimales
consecutivas, por duplicado.
R. Polifroni et al
PCR
Se tom 1 ml de agua inoculada y se cultiv en 9 ml de cal-
do LB a 37 C con agitacin durante 18 h. Luego se tomaron
10 l del cultivo y se diluyeron en 500 l de agua bidestilada
y se extrajo el ADN por lisis celular en caliente. Las condi-
ciones de termociclado y las secuencias de los primers para
ehxA-eae-vt1-vt2 fueron descritas previamente por Paton y
Paton33.
Estudio in vitro de la viabilidad de VTEC O157 y
no-O157 en muestras de materia fecal de bovinos
Se tomaron muestras de materia fecal y se seleccionaron
para el ensayo aquellas que fueron negativas para vt1-vt2
por PCR y con resultado negativo al cultivo en SMAC-NAL.
Estas muestras se inocularon con las cepas O91:H21,
O178:H19 y O157:H7 en la misma concentracin nal
(103 UFC/g) y con el procedimiento descrito anteriormente.
La materia fecal se coloc en una bolsa dentro de contene-
dores plsticos y se mantuvo a la temperatura ambiente y
en contacto con el aire.
En cada ocasin de muestreo, se tom 1 g de materia
fecal y se suspendi en 9 ml de solucin siolgica estril.
El sobrenadante se utiliz para realizar las mismas determi-
naciones y siguiendo la misma metodologa que en el caso
del agua (estudio de viabilidad y PCR).
Los resultados de tiempo de sobrevida y recuentos mxi-
mos se analizaron con anlisis de varianza de un factor
(ANOVA).
Resultados
Viabilidad de VTEC O157 y no-O157 en muestras
de agua estril de bebederos
A partir de los datos obtenidos en los ensayos realizados en
aos independientes, se calcul el promedio para gracar
una curva de crecimiento para cada cepa (g. 1). Se obser-
v que las cepas no mostraron un mismo patrn de creci-
miento y tampoco igual tiempo de sobrevida en el micro-
cosmos (p < 0,0005). El serotipo O91:H21 sobrevivi ms
tiempo y alcanz un recuento mximo de 106 UFC/ml, al
igual que el O157:H7, mientras que las cepas O20:H19 y
O178:H19 no superaron las 104 UFC/ml y sobrevivieron me-
nos tiempo en el agua (tabla 1).
Los genes VTEC de todas las cepas estudiadas pudieron
detectarse por PCR, aun cuando los recuentos en placas
fueron inferiores a 101 UFC/ml de agua cuando se cultivaron
durante 18 h a 37 C con agitacin.
Viabilidad y persistencia de VTEC O157 y no-O157
en muestras de materia fecal
Todas las cepas sobrevivieron en la materia fecal aproxima-
damente 60 das, aunque, al igual que lo sucedido en el
ensayo del agua de bebedero, las cepas se comportaron de
forma diferente. Las curvas de crecimiento obtenidas a par-
tir de los resultados de los recuentos de cada cepa en el
microcosmos del agua de bebedero y la materia fecal se
VTEC O157 y no-O157 en agua y materia fecal 129

UFC/ml 020:H19 091:H21

UFC/ml
107 107
105 105
3
10 103
1
10 101

0 20 40 60 80 100 120 0 20 40 60 80 100 120 140

Das posinoculacin Das posinoculacin
A B

0157:H7
0178:H19
UFC/ml UFC/ml
7 7
10 10
5
10 105
103 103
101 101

0 20 40 60 80 100 120 140 0 20 40 60 80 100 120 140

Das posinoculacin Das posinoculacin
C D
Figura 1 Curvas de crecimiento de las cepas VTEC en el microcosmos del agua estril de bebederos de animales. A) O20:H19;
B) O91:H21; C) O157:H7; D) O178:H19. Los grcos se construyeron calculando los valores promedio obtenidos en los ensayos inde-
pendientes.

observaron que O157:H7 fue capaz de sobrevivir 91 das en

Tabla 1 Supervivencia de VTEC O157 y no-O157
agua de lago a 15 C. Existe una considerable variabilidad
en agua estril de bebederos
en la persistencia de estos agentes en aguas procedentes de
Aislamiento/ Tiempo de sobrevida Recuento mximo diferentes fuentes y con diferente contenido de nutrientes y
serotipo en el agua (das) (UFC/ml) grado de competencia por parte de otros microorganismos
del ecosistema3,4. La importancia en la salud pblica de los
O91:H21a 94 105 serotipos no-O157 nos llev a analizar, adems del O157:H7,
O157:H7 a
78 106 la supervivencia de 3 aislamientos VTEC pertenecientes a los
O178:H19b 90 104 serotipos O91:H21, O20:H19 y O178:H19.
En nuestro trabajo, la cepa O157:H7 se recuper a partir
O20:H19b 71 104 del agua inoculada hasta los das 104, 62 y 69 posinocula-
a
Valor promedio de los ensayos independientes. cin en tres ensayos independientes. Cuando la misma cepa
b
Los valores corresponden a un solo ensayo. se inocul en materia fecal sin autoclavar, a los 60 das la
presencia de VTEC fue equivalente a la observada en el
agua estril de bebedero (10 UFC/g en materia fecal y
10 UFC/ml en agua), aunque las dinmicas de crecimiento
presentan en la gura 2. Los aislamientos O91:H21 y fueron distintas. En el agua se observ que el crecimiento
O178:H19 presentaron recuentos superiores en la materia fue muy rpido durante los primeros 10 das, con un recuen-
fecal, en tanto que la cepa O157:H7 mostr un comporta- to mximo de 106 UFC/ml, para luego descender brusca-
miento inverso, es decir, mayores recuentos en el agua que mente, mientras que en la materia fecal el crecimiento fue
en la materia fecal. ms lento. As, a los 10 das apenas se superaron las 104
Durante los primeros 15 das no pudieron obtenerse re- UFC/g, para decrecer luego paulatinamente hasta el da 50.
sultados de PCR a partir de un cultivo overnight (ON) en Esta dinmica poblacional puede explicarse por la disponi-
caldo LB. Entonces, las PCR se realizaron con colonias recu- bilidad de nutrientes de fcil acceso en el microcosmos del
peradas de las placas de SMAC-NAL cultivadas durante 18 h agua, que VTEC utiliza rpidamente durante los primeros
a 37 C ON; de esa manera se corrobor la identidad de las das, pero cuando se reduce su disponibilidad, la poblacin
cepas inoculadas en cada caso. comienza a declinar lentamente. En el caso de la materia
fecal, tambin podra suceder esto, lo que se sumara a la
competencia y antagonismo que podra existir con otros mi-
Discusin croorganismos del ecosistema41. El comportamiento de ais-
lamientos O157:H7 de distinto origen ha sido distinto ante
El medio ambiente puede ser una fuente de transmisin y diferentes condiciones ambientales2,42.
diseminacin de VTEC debido a la contaminacin fecal repe- Si bien los trabajos de supervivencia de cepas no-O157 en
tida producida por los animales infectados. Wang y Doyle43 distintos microcosmos son ms escasos, se ha demostrado
130 R. Polifroni et al

UFC/ml microbianos, de manera similar a lo que sucede con el sero-

107 tipo O157:H712,16,18.
Si comparamos los comportamientos de los aislamientos
A O91:H21 y O178:H19 en los dos microcosmos analizados,
105 luego de 50 das de ensayo observamos en los recuentos
diferencias de ms de 1 log en la materia fecal con respecto
a los obtenidos en el agua estril, lo que sugiere que podra
existir una mejor adaptacin a ciertas condiciones de la
103 091:H21 MF
materia fecal, como la acidez y la competencia microbiana.
091:H21 Agua
Los resultados de la cepa O91:H21 concuerdan con lo pre-
sentado por Molina et al.28.
101 Recientemente, Sawant et al.41 han descrito un mecanismo
de inhibicin dependiente de la interaccin ntima entre VTEC
y E. coli saprtas antagonistas presentes en la materia fecal.
0 20 40 60
Este mecanismo es independiente de cualquier elemento solu-
Das posinoculacin
ble, como una bacteriocina o toxina extracelular, y de la pre-
sencia de fagos. Aunque an no se conoce en detalle se ha
sugerido que la inhibicin dependiente de la proximidad re-
UFC/ml presenta una accin de eliminacin de la competencia cuando
107 B
las condiciones son momentneamente desfavorables, que
deja as a la cepa inhibidora con una ventaja numrica para
105 cuando las condiciones se restablezcan y pueda, de esta for-
ma, acceder a mayor cantidad de nutrientes.
0157:H7 MF Desnues et al.10 indicaron que ante la restriccin de nu-
103 trientes, las clulas pierden lentamente la capacidad de
0157:H7 Agua
reproducirse debido al deterioro oxidativo, pero depen-
diendo del grado de deterioro, esta puede llegar a restable-
101 cerse. La prdida irreversible de los mecanismos de soporte
de la vida bacteriana es consecuencia del incremento de la
0 20 40 60 carbonilacin de las protenas durante el estrs. Sin embar-
Das posinoculacin go, solo una fraccin de la poblacin sufre inmediatamente
estas consecuencias, mientras que el resto se adapta lenta-
mente modicando su expresin de genes11. Este proceso
UFC/ml aleatorio y progresivo provoca la muerte paulatina de la
107 C poblacin a lo largo del tiempo.
En conclusin, todas las cepas VTEC poseen gran capaci-
dad de supervivencia tanto en agua como en materia fecal,
105 circunstancia que aumenta el riesgo de transmisin para las
personas que trabajan o que se encuentren de visita en es-
0178:H19 MF tablecimientos ganaderos, as como el de reinfeccin para
10 3 0178:H19 Agua los animales.
Estos resultados ponen de maniesto la necesidad de
profundizar los estudios acerca de las relaciones de antago-
101 nismo entre las cepas VTEC y otros miembros del ecosiste-
ma que abarca los bebederos, la materia fecal animal y el
suelo, con el n de identicar nuevas alternativas para
0 20 40 60 el control de estos patgenos en los ambientes de produc-
Das posinoculacin cin animal y reducir as el riesgo de contaminacin de
los alimentos derivados de estas producciones y de transmi-
Figura 2 Curvas de crecimiento de las cepas VTEC. sin al hombre por el contacto directo con el ambiente.
A) O91:H21; B) O157:H7; C) O178:H19 en el microcosmos de la
materia fecal de bovinos (MF) y en el agua estril de bebederos
(Agua). Los grcos se construyeron calculando los valores pro- Conicto de intereses
medio obtenidos en los ensayos independientes.
Los autores declaran no tener ningn conicto de intereses.

que el serotipo O26 es ms resistente que el O157 y que el

O111 en materia fecal a 15 C, y se ha propuesto que dicha Agradecimientos
capacidad est ntimamente asociada a la temperatura, a
la concentracin bacteriana del inculo, al grado de deshi- Los autores agradecen a Mara R. Ortiz por su asistencia
dratacin de la muestra y a la presencia de antagonistas tcnica y a la Lic. Silvina Etcheverra por el anlisis estads-
VTEC O157 y no-O157 en agua y materia fecal
tico. Este trabajo recibi nanciamiento por parte de FON-
CYT PICT 1728/OC-AR Proy 38059, CIC y SECYTUNCPBA. NL
Padola es miembro de la Comisin de Investigaciones Cien-
tcas de la Provincia Buenos Aires (CICPBA), A. I. Etcheve-
rra es miembro de CONICET, y R. Polifroni realiz este tra-
bajo con una beca doctoral interna de CONICET.
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Colombia Mdica Vol. 38 N 2, 2007 (Abril-Junio)

La resistencia de bacterias a antibiticos, antispticos y desinfectantes

una manifestacin de los mecanismos de supervivencia y adaptacin

CRISTINA EUGENIA CABRERA, M.SC.1, ROMMEL FABIN GMEZ, B.SC.2,

ANDRS EDMUNDO ZIGA, B.SC.3

RESUMEN

La resistencia a mltiples sustancias es un problema de salud pblica que se viene observando a nivel mundial despus de la
aparicin de los antibiticos. El uso indiscriminado de los antibiticos y la presin selectiva ambiental realizada por antispticos
y desinfectantes ha generado una respuesta de supervivencia en los microorganismos, que los capacita para evadir con eficiencia
la accin bactericida de algunos agentes. En la actualidad se intenta dilucidar si hay mecanismos compartidos entre antibiticos,
antispticos y desinfectantes que les permita a las bacterias y otros microorganismos activar genes que potencialmente expresen
los cinco mecanismos propuestos hasta ahora como respuesta evolutiva a la intervencin humana. La presente revisin examina
el estado del arte de los mecanismos mencionados, con nfasis en los que actualmente utilizan las bacterias que causan brotes
de resistencia en centros hospitalarios.

Palabras clave: Resistencia bacteriana a drogas; Antispticos; Antibiticos; Desinfectantes.

Resistance to bacterial antibiotics, antiseptics and disinfectants a manifestation of the survival and adaptation
mechanisms

SUMMARY

Resistance to multiple substances is a problem of public health coming to world-wide level observation since the appearance
of antibiotics. Indiscriminate use of antibiotics and the environmental selective pressure made by antiseptics and disinfectants have
generated a survival answer in the microorganisms, enabling them to efficiently evade the bactericidal action of some agents.
Nowadays the time has come to try to explain if mechanisms shared among antibiotics, antiseptics and disinfectants allow bacteria
and other germs to activate genes that potentially express the five mechanisms proposed until now as an evolutionary answer to
mans intervention. The present review examines the state-of-the-art of the mentioned mechanisms, with emphasis about the
resistance mechanisms performed by nosocomial bacteria in hospitals centers.

Keywords: Bacterial drugs resistance; Antiseptics; Antibiotics; Disinfectants.

En el siglo XX el descubrimiento de los antibiticos se expresin natural de la evolucin y gentica bacteriana,

convirti en la solucin a las mltiples enfermedades
producidas por agentes infecciosos. Las bacterias como
todos los seres vivos exhiben mecanismos biolgicos, que
las facultan para adecuarse a diversas presiones ambien-
tales. Aunque la resistencia a los antibiticos es una
ciertos factores tambin contribuyen al aumento de la
expresin y diseminacin de esta caracterstica inherente.
El incremento en el uso de antibiticos y la respectiva
presin selectiva que ejercen, es el factor ms importante
que contribuye a la aparicin de diversas clases de resis-

1. Docente, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Libre Seccional Cali, Colombia. Grupo de Investigacin en Micro-
biologa Molecular, Universidad Libre, Seccional Cali y Profesora Auxiliar, Departamento de Microbiologa, Universidad del
Valle, Cali, Colombia. e-mail: criseuca@gmail.com
2. Docente, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Libre Seccional Cali, Colombia y Grupo de Investigacin en Micro-
biologa Molecular, Universidad Libre, Seccional Cali, Colombia. e-mail: rofagom@gmail.com
3. Docente, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Libre Seccional Cali, Colombia y Estudiante de Maestra en Ciencias
Bsicas Mdicas, Universidad del Valle, Cali, Colombia. e-mail: biogenex@gmail.com
Recibido para publicacin noviembre 29, 2006 Aceptado para publicacin abril 16, 2007

2007 Corporacin Editora Mdica del Valle 149

Colomb Med 2007; 38: 149-158

Colombia Mdica
tencia bacteriana1. En los ltimos sesenta aos se ha
hecho notorio el impacto de la respuesta de estos
microorganismos a la presin selectiva que ejercen los
antispticos y desinfectantes, as como los compuestos
quimio-teraputicos ms utilizados en los brotes de infec-
ciones en los hospitales del mundo.
En uno de los pocos estudios hechos en pases en va
de desarrollo, se evalu la tendencia en la resistencia de
aislados de un hospital taiwans entre 1981 y 1999.
Aunque el nmero de infecciones causadas por enterococos
no cambi notablemente durante el perodo del estudio, se
observ que la incidencia de enterococo resistente a
vancomicina se elev de 3% a 50% entre 1995 y 1999 y
los datos muestran un ajuste cercano a una tendencia
exponencial2 .
Segn estudios epidemiolgicos, Amrica Latina se
encuentra entre las regiones con ms alta incidencia de
brotes nosocomiales producidos por bacterias que presen-
tan resistencia a mltiples antibiticos. Tambin enlos
ltimos aos se ha visto un inters marcado por evidenciar
la presencia de mecanismos de resistencia cruzada tanto
para antispticos y desinfectantes como para antibiticos.
En la actualidad estos estudios se adelantan en otros
continentes mientras los estudios a nivel nacional son
elementales y los datos epidemiolgicos los recopilan las
secretaras de salud y las instituciones de investigacin en
este campo3.
GENERALIDADES
La resistencia que ejercen las bacterias a los antibiticos,
antispticos y desinfectantes, es un problema de salud
pblica que se crea superado. Desde el descubrimiento de
los primeros antibiticos, los microorganismos han sido
capaces de evadir su accin. Un ejemplo que ofrece
muestras evolutivas de resistencia, es la bacteria Staphylo-
coccus aureus, que en 1946 presentaba la mayora de sus
cepas sensibles a la penicilina; en la actualidad casi todas
las cepas hospitalarias, son resistentes a bencilpenicilina y
algunas lo son a meticilina, gentaminicina o a ambas y slo
se pueden tratar con vancomicina4. Adems, en los
ltimos 25 aos la comunidad ha adquirido microorganismos
resistentes a mltiples frmacos, por ejemplo Mycobac-
terium tuberculosis, Salmonella spp, Shiguella spp,
Vibrio cholerae, Streptococcus pneumoniae, que, al
aumentar, causan infecciones en ambientes nosocomiales;
y dejan en claro que la resistencia a los frmacos consti-
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tuye un problema de salud pblica extremadamente gra-
ve4-6. Durante los ltimos veinte aos el uso indiscriminado
de estos productos ha hecho que las bacterias dotadas de
mltiples mecanismos (bioqumicos, genticos-moleculares
y celulares) desarrollen estrategias inherentes y adquiri-
das, que les permiten evadir con efectividad la accin de
estos compuestos. Se calcula que ms de 50% de las
prescripciones mdicas de antibiticos en los hospitales,
se ordenan sin pruebas claras de infeccin o sin una
indicacin mdica adecuada7. Otros factores que contri-
buyen al desarrollo de la resistencia son:
1. Las medidas ineficientes para el control de infecciones
en los centros hospitalarios:
2. La falta de campaas educativas en el uso y manejo de
los medicamentos, debido a las condiciones de pobreza
e ignorancia en las prescripciones.
3. La severidad de las enfermedades y el manejo de
pacientes en las unidades de cuidados intensivos.
4. La colonizacin previa por microorganismos con resis-
tencias mltiples.
5. Los procedimientos invasivos como cateterizacin y
dilisis.
6. El uso de antibiticos en agricultura y acuacultura
ocasiona la presencia de residuos de antibiticos en la
carne de los animales y la seleccin de bacterias
resistentes en los intestinos de los animales de consumo
humano, llevan a una exposicin directa de los consu-
midores a estos frmacos. Adems, se pueden encon-
trar grmenes resistentes en los alimentos de origen
vegetal cuando se irrigan con aguas residuales o
cuando se aplican antibiticos a los cultivos.
7. Factores del medio: La presencia de bacterias resisten-
tes en nacimientos de agua se ha documentado en
varias partes del mundo. La resistencia se puede deber
a la produccin natural de antibiticos por bacterias del
suelo, que actan como reservorios naturales de genes
de resistencia y suministran el principio de genes
transferibles.
8. El uso de elementos para limpieza casera, ha incre-
mentado de modo notorio en los ltimos aos. Las
sustancias antibacterianas aadidas a estos elementos
son semejantes a los antibiticos en su accin y pueden
apresurar la resistencia en ciertas cepas1,6,8.
La infeccin bacteriana es un proceso complejo donde
interactan tanto la bacteria como el estado inmunolgico,
fisiolgico y gentico del hospedero. En este contexto los
grmenes oportunistas se convierten en los principales

Colombia Mdica
actores de las infecciones nosocomiales en individuos con
inmunodeficiencias, con daos en las barreras de sus
epitelios o con enfermedades previas9,10. En la interaccin
hospedero-parsito hay un nuevo elemento fruto de la
evolucin cultural humana, los antimicrobianos, que han
sido efectivos en el tratamiento de la infeccin. Sin
embargo, las bacterias se han hecho resistentes a los
mismos. Una vez que se introduce un antibitico en el
mercado, la aparicin de cepas con resistencia es cuestin
de tiempo, y demuestra que el medicamento que ms se
prescribe en un momento dado, es al que las bacterias
desarrollan la resistencia1,11. Las cepas resistentes a anti-
biticos aparecieron al principio en hospitales donde stos
se usaban frecuentemente12. Str. pyogenes resistente a
las sulfonamidas emergi en hospitales militares en la
dcada de 193013. Staph. aureus resistente a las penici-
linas apareci poco despus de iniciarse el uso de este
antibitico en hospitales civiles de Londres en la dcada de
1940. De manera similar M. tuberculosis resistente a
estreptomicina surgi en la comunidad poco despus del
descubrimiento de este antibitico14.
La resistencia a mltiples frmacos se descubri en
enterobacterias como Escherichia coli, Shigella y
Salmonella a finales de la dcada de 1950 y comienzos de
la dcada de 196015,16. Debido al uso indiscriminado de
antimicrobianos, la resistencia se disemin en diferentes
bacterias y se hizo ms comn, no slo en pases en va de
desarrollo, donde los antibiticos se consiguen sin pres-
cripcin mdica, sino en pases del primer mundo, donde
su suministro se lleva a cabo bajo controles ms estric-
tos14 .
Con el fin de hacer claridad, se unificarn varias pala-
bras importantes para esta revisin. Biocida es un
trmino general para describir una sustancia qumica,
usualmente de amplio espectro, que inactiva los microorga-
nismos. Como los biocidas se relacionan con actividad
antimicrobiana, otros vocablos pueden ser ms especfi-
cos, por ejemplo -esttico, que se refiere a agentes que
inhiben el crecimiento (e.g., bacteriosttico, fungiesttico
y esporosttico) y -cida, que hace referencia a agentes
que matan al organismo blanco (e.g., esporicida, virucida
y bactericida). Antibitico se define como una sustan-
cia orgnica, natural o sinttica, que inhibe o destruye en
forma selectiva bacterias y otros organismos, general-
mente a bajas concentraciones; los antispticos son biocidas
o sustancias que destruyen o inhiben el crecimiento de
microorganismos y que son seguros para su aplicacin en
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tejido vivo y los desinfectantes son similares, pero por lo
general son sustancias o biocidas que se usan sobre
objetos inanimados o en superficies. Los desinfectantes
pueden ser esporostticos, pero no son esporocidas17-19.
Desde siglos atrs se emplean compuestos como la sal
para conservar los alimentos, las vasijas de plata y cobre
en el almacenamiento de agua potable, la miel y el vinagre
para la limpieza de heridas. Luego se utilizaron compues-
tos yodados como desinfectantes de heridas, agua clorada
en pacientes obsttricas, alcohol como desinfectante de
manos y fenol tanto en la limpieza de heridas como en
cirugas antispticas20.
Los antispticos y desinfectantes se usan ampliamente
en hospitales, centros de salud y laboratorios en los pro-
cesos de control y desinfeccin y sobre todo en la preven-
cin de infecciones nosocomiales21.
La resistencia bacteriana a los biocidas fue descrita en
las dcadas de 1950 y 1960 y ha ido en aumento. Ciertos
biocidas como alcoholes, formaldehdos, biguanidas,
yodoforos, aldehdos y agentes catinicos como los com-
puestos de amonio cuaternario (CUAs), la clorhexidina
y el triclosn se han comprometido como posibles causan-
tes de la seleccin y persistencia de cepas bacterianas con
bajo nivel de resistencia a los antibiticos20.
El uso generalizado de antispticos y desinfectantes
genera expectativas sobre la resistencia bacteriana pro-
vocada por la presin ambiental que ejercen los productos
ya mencionados, y enfoca el inters hacia la posible
resistencia cruzada con antibiticos17.
MECANISMOS DE RESISTENCIA A LOS
ANTISPTICOS Y DESINFECTANTES
En la actualidad se ha obtenido un avance considerable
en la comprensin de la respuesta de las bacterias a los
bactericidas. La resistencia puede ser una propiedad
natural de un organismo (intrnseca) o conseguida por
mutacin o adquisicin de plsmidos (autorreplicacin,
ADN extracromosmico) o transposones (cromosomal o
integrado en plsmidos, cassettes de ADN transmisibles).
Los genes de resistencia naturales en plsmidos, se origi-
nan como mutaciones puntuales en los genes blanco (sitios
de insercin de los genes de resistencia) de bacterias
susceptibles y tambin de genes que les proveen protec-
cin contra otras bacterias22. La resistencia intrnseca se
ha demostrado para bacterias gramnegativas, esporas
bacterianas, micobacterias y bajo ciertas condiciones en
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Cuadro 1
Resumen de mecanismos de accin antibacteriana de antispticos y desinfectantes2

Sitio blanco Antisptico o desinfectante Mecanismo de accin

Envoltura celular (pared Glutaraldehdo Unin cruzada a protenas

celular, membrana externa) EDTA, otros permeabilizantes Bacteria gramnegativa: remocin de Mg++,
liberacin de algunos LPS

Dao generalizado de la membrana que

CAC comprometen fosfolpidos de las dos membra-
nas.

Las bajas concentraciones afectan la integri-

Clorhexidina dad de la membrana, las altas concentracio-
Membrana interna nes causan congelamiento del citoplasma.
citoplasmtica
Diaminas Induccin a la prdida de aminocidos.

PHMB (mezcla heterodispersa de Fase de separacin y formacin de dominios

bioguanidas de polihexametileno) , de lpidos de membrana.
alexidina

Fenoles Prdida, desacople.

Unin cruzada a Formaldehdo Unin cruzada de protenas, ARN y ADN.

macromolculas Glutaraldehdo Unin cruzada de protenas de la envoltura
celular y en otros sitios celulares.

Intercalacin con el ADN Acridinas Intercalacin de una molcula de acridina entre

dos capas de pares de bases en el ADN.

Interaccin con grupos tiol Compuestos con plata Enzimas que se unen a membrana interaccin
con grupos tiol

Halgenos Inhibicin de la sntesis del ADN

Efectos en el ADN Perxido de hidrgeno, iones de Ruptura de la hebra de ADN
plata

Halgenos Oxidacin de los grupos tioles a disulfitos,

sulfxidos o disulfxidos

Agentes oxidantes Perxido de hidrgeno: Actividad debida a la

formacin de radicales libres OH-, que oxida a
Peroxgenos los grupos tioles en enzimas y protenas; cido
paractico: Inhibicin de los grupos tioles en
protenas y enzimas.

especies del gnero Staphylococcus. En el Cuadro 1 se
resumen los mecanismos de accin y los blancos de los
principales agentes qumicos utilizados en desinfeccin23.
Resistencia intrnseca a bacterias gramnegativas.
Las bacterias gramnegativas por lo general son ms resis-
tentes a los antispticos y desinfectantes que las gram-
positivas. Se han hecho estudios donde se midieron las
concentraciones mnimas inhibitorias (CIM) que presen-
tan tanto las grampositivas como las gramnegativas, y se
estableci que hay diferencias marcadas entre Staph.
aureus y E. coli a los compuestos de amonio cuaternario
(CAC), hexaclorofeno, diamidinas y triclosn, pero poca
diferencia en la susceptibilidad a la clorhexidina. Pseudo-
monas aeruginosa es ms resistente a la mayora de

152

Colombia Mdica
Cuadro 2
Concentracin mnima inhibitoria de antispticos y desinfectantes contra bacterias grampositivas y negativas5
Agente qumico
S. aureus
Cloruro de benzalconio 0.5
Cloruro de benzeltonio 0.5
Cetrimida
Clorexidina 0.5-1
Hexaclorofeno 0.5
Fenol 2.000
o- fenilfenol 100
Isetionato de propamina
Isetionato de dibromopropamidina
Triclosn 0.1
estos agentes, incluyendo la clorhexidina (Cuadro 2)18.
La membrana externa de las bacterias gramnegativas
acta como una barrera que limita la entrada de varios
tipos de agentes antibacterianos sin relacin qumica. Las
molculas hidroflicas de bajo peso molecular pasan fcil-
mente a travs de las porinas, en cambio las molculas
hidrofbicas se difunden a travs de la bicapa de la
membrana. Adems de las vas antes descritas se ha
propuesto una tercera va para agentes catinicos como
los CAC, biguanidas y diamidinas, los cuales daan la
membrana y facilitan su autocaptacin23-28. Un ejemplo
claro de resistencia mediada por la membrana externa es
el de P. aeruginosa que presenta diferencias en la
composicin del lipopolisacrido (LPS) y el contenido de
cationes como el magnesio, que produce enlaces estables
entre molculas de LPS y como complemento a este
mecanismo, esta bacteria presenta porinas pequeas que
impiden el paso por difusin de ciertas sustancias. Algunas
cepas que son muy resistentes a clorhexidina, CAC,
EDTA y diamidinas se han aislado de muestras clnicas.
La presencia de un LPS menos cido en la membrana
externa puede ser un factor que contribuye a la resistencia
intrnseca29,30.
MECANISMOS DE RESISTENCIA
BACTERIANA ADQUIRIDA
Como se ha visto en los antibiticos y en los agentes
quimioteraputicos, la resistencia adquirida a los antisp-
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Concentracin minima inhibitoria (CIM) (mg/ml)
S. aureus S. aureus
0.5 0.5
0.5 0.5
4 4 4
0.5-1 0.5-1
0.5 0.5
2.000 2.000
100 100
2 2 2
1 1 1
0.1 0.1
ticos y desinfectantes surge por mutacin o por la adqui-
sicin de material gentico en forma de plsmidos o
transposones; estas configuraciones permiten grandes
arreglos de genes de resistencia para la mayora de los
antibiticos y desinfectantes al ser transferidos juntos en
un solo evento de conjugacin22. Chopra31,32 evalu el
papel de los plsmidos en la resistencia codificada (o
incremento en la tolerancia) a los antispticos y desinfec-
tantes y concluy que aparte de ciertos ejemplos espec-
ficos como algunos metales, los plsmidos no eran los
responsables por los altos niveles de resistencia a antisp-
ticos o desinfectantes de ciertas especies o cepas. Sin
embargo, algunos autores evidencian la relacin entre la
presencia de plsmidos en bacterias con el aumento de la
tolerancia a clorhexidina, CAC, triclosn, as como a
diamidinas31,33.
Sutton y Jacoby34 observaron que el plsmido RP1 no
alteraba en forma significativa la resistencia de P.
aeruginosa a CAC, clorhexidina, yodo o fenoles clorados,
aunque se observ un aumento en la resistencia a hexa-
clorofeno. La transformacin de este plsmido (que codi-
fica resistencia a carbenicilina, tetraciclina, neomicina y
kanamicina) en E. coli o P. aeruginosa, no aument la
sensibilidad de estas bacterias a los antispticos y desin-
fectantes35. Se han visto altos niveles de resistencia en
aislados de hospitales36, aunque no es claro que haya una
resistencia mediada por el plsmido37-39. Los altos niveles
de tolerancia a clorhexidina y CAC40, pueden ser intrnse-
cos o se pueden generar por mutaciones. Se ha propuesto
153

Colombia Mdica
Cuadro 3
Mecanismos de resistencia bacteriana a biocidas
Mecanismos de resistencia
Intrnsecos
Impermeabilidad
Bombas de eflujo
Inactivacin
Adquiridos
Inactivacin/modificacin
Sitio blanco insensible
Disminucin en acumulacin (mediado por plsmido y eflujo)
Sobre-produccin del sitio blanco
que el uso intensivo de estos agentes catinicos podra ser
responsable por la seleccin de cepas resistentes a anti-
biticos, desinfectantes y antispticos41; sin embargo exis-
te poca evidencia que apoye esta conclusin. Adems,
otros estudios muestran que el plsmido R124 altera la
protena de la membrana externa OmpF en E. coli y
concluyen que las clulas que contienen este plsmido son
ms resistentes a CAC (cetrimida) y otros agentes42.
Los mecanismos de resistencia bacteriana a formal-
dehdo y a bactericidas industriales pueden ser codificados
por plsmidos43. Las alteraciones en las protenas de la
membrana externa y la formaldehdo-dehidrogenasa se
consideran responsables44,45. Tambin se ha documenta-
do la participacin de las bombas de eflujo en la adquisicin
de esta resistencia. La activacin de estas bombas es
mediada por plsmidos y es un importante mecanismo de
resistencia a antibiticos, metales, desinfectantes y anti-
spticos catinicos (Cuadro 3)46,47.
Los aislados de bacterias gramnegativas de hospitales
son menos sensibles a los desinfectantes que las cepas de
laboratorio26,48,49. Debido a que las transferencias media-
das por plsmidos se han descartado aparentemente, la
seleccin y la mutacin podran jugar un papel muy
importante en la presencia de estos aislados. Las concen-
traciones subinhibitorias de antibiticos pueden causar
cambios sutiles en la estructura externa de la bacteria, y
estimular de esta forma el contacto clula a clula50; queda
el interrogante si las concentraciones residuales de anti-
spticos y desinfectantes en ambientes clnicos podran
producir el mismo efecto.
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Ejemplos
Bacterias Gram-: Triclosn, solventes
Bacterias Gram-: multirresistentes: algunos biocidas
Triclosn, clorhexidina
Formaldehdo
Triclosn
Biocidas
Triclosn
MECANISMOS DE RESISTENCIA A
ANTIBITICOS
Hay gneros de bacterias con resistencia innata a
antibiticos especficos como lo muestra el Cuadro 451.
Las bacterias pueden presentar resistencia a antibiticos
como resultado de mutaciones cromosomales o por inter-
cambio de material gentico mediante el transporte de
genes de resistencia a travs de varios mecanismos como:
Transduccin: Transferencia de cualquier parte de
un genoma bacteriano, cuando un fago atemperado
(genoma del virus que se encuentra inserto en el ADN
bacteriano) durante su fase de ensamblaje, encapsula este
material. Si el fragmento de ADN que queda envuelto es
totalmente bacteriano se denomina transduccin gene-
ralizada y si slo se encapsula parte del genoma bacteriano
pero se conserva el genoma viral se habla de transduccin
especializada 4 .
Conjugacin: Transferencia de material gentico
contenido en plsmidos de una bacteria a otra a travs de
una hebra sexual; estos plsmidos usualmente contienen
genes que le confieren resistencia a drogas, antispticos y
desinfectantes14 .
Transformacin: Transferencia de genes desde un
ADN desnudo de una bacteria previamente lisada a otra
que lo recibe y lo incorpora a su genoma12.
Transposicin: Movimiento de una seccin de ADN
(transposon) que puede contener genes para la resistencia
a diferentes antibiticos y otros genes casete unidos en
equipo para expresin de un promotor en particular4,14.
Existen cinco mecanismos de resistencia adquirida.

Colombia Mdica
Cuadro 4
Ejemplos de bacterias que presentan resistencia innata a antibiticos
Antibioticos
Penicilina
Cefalosporinas
Carbapenemes
Aztreonam
Aminoglicsidos
Macrlidos
Tetraciclinas
Glicopptidos
Las bacterias pueden utilizar ms de un mecanismo:
Modificacin enzimtica o destruccin del antibi-
tico. Es el mecanismo de resistencia que utilizan algunas
bacterias contra medicamentos betalactmicos (penicili-
nas, cefalosporinas, carbapenemes y monobactmicos).
El ejemplo ms representativo son las betalactamasas,
enzimas que inactivan el antibitico al hidrolizar el anillo
betalactmico de la molcula8,52. Otra clase importante de
antibiticos que son destruidos por enzimas, son los
aminoglicsidos. Se sabe que hay tres tipos de modifica-
ciones catalizadas por O-fosfotransferasas (OPH), O-
adeniltransferasas (ANT) y N-acetiltransferasas (ACT)
que inactivan estos medicamentos53,54.
Se reconocen cuatro clases de betalactamasas:
a. Clase A: penicilinasas
b. Clase B: betalactamasas
c. Clase C: cefalosporinasas
d. Clase D: oxacilinasas
La resistencia surge de estmulos naturales o mutacio-
nes en los cromosomas de los genes o de la adquisicin de
elementos genticos extracromosomales (plsmidos o
transposones) que portan los genes de transferencia5. Los
genes que codifican para estas enzimas se encuentran
generalmente en elementos mviles como transposones y
plsmidos, por ejemplo en S. aureus; algunas veces se
han encontrado en el cromosoma bacteriano en P.
aeruginosa 8,53 .
A pesar de los esfuerzos en la produccin de medica-
mentos que pudieran resistir la accin de las betalactamasas
como la cloxacilina, las bacterias alteraron el sitio blanco
(PBP) y esto llev al desarrollo de MRSA (Staph. aureus
multirresistente). Se produjo entonces la tercera y cuarta
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Cepas con resistencia innata
Pseudomonas spp. (excepto ureidopenicilinas)
Enterococcus spp
Stenotrophomonas maltofhilia
Todas las bacterias grampositivas
Bacterias anaerbicas, Enterococcus spp
Enterobacteriaceae
Pseudomonas spp.
Todas las bacterias gramnegativas
generacin de cefalosporinas, resistentes a las betalacta-
masas producidas por bacterias gramnegativas; sin em-
bargo, con el uso amplio, las bacterias desarrollaron un
mecanismo para destruir el medicamento: las betalacta-
masas de espectro extendido (BLEEs). A fin de contra-
rrestar esta accin de las bacterias se produjeron los
carbapenemes resistentes a las BLEEs, pero una vez que
se generaliz su empleo, las poblaciones bacterianas
iniciaron la produccin de carbapenemasas que hidrolizan
estos medicamentos54,55. De tales enzimas se ha informa-
do a nivel mundial y en Latinoamrica en pases como
Brasil, Chile y Argentina, donde han aparecido cepas de
bacterias como Klebsiella pneumoniae, Salmonella
enterica y Serratia marcescens57. En Colombia, se hizo
un estudio en 8 hospitales y se analiz la prevalencia y
susceptibilidad a antibiticos en aislados de K. pneumoniae
y E. coli productoras de BLEEs. Los resultados mostra-
ron una prevalencia de 34.8% de K. pneumoniae en
unidad de cuidados intensivos; tambin se encontraron
bacterias resistentes a cefalosporinas de tercera genera-
cin o aztreonam, as como resistencia asociada con
aminoglicsidos, ciprofloxacina y piperacillina/tazo-
bactam58 .
Impermeabilidad al antibitico. Existen diferencias
en la composicin de la envoltura celular de las bacterias
y en especial en la cantidad del peptidoglicano. Adems de
una capa pequea de peptidoglicano en las bacterias
gramnegativas, se conoce una estructura de membrana
consistente en lipopolisacrido y lipoprotena anclados al
peptidoglicano junto con grandes protenas de membrana
externa llamadas porinas (OMP). Estas porinas varan en
nmero y tamao y funcionan como canales acuosos que
155

Colombia Mdica
generan una ruta hidroflica a travs de la estructura de
la membrana hacia el espacio periplsmico54. La resisten-
cia intrnseca de bacterias como P. aeruginosa y Entero-
coccus sp se relaciona con la poca cantidad de molculas
de porina, las mutaciones que resultan por la alteracin de
la forma y el nmero de las ya existentes, influyen en la
permeabilidad a los antibiticos, por lo cual se presentan
diversos tipos de resistencia a travs de la membrana54,59.
Alteracin o produccin de nuevos sitios blanco.
Los cambios en los sitios blanco del antibitico son uno
de los mecanismos ms importantes de resistencia a los
antibiticos que se usan en clnica, pues evitan el efecto
bactericida/bacteriosttico que estimula la resistencia.
Por ejemplo, el mecanismo ms comn de resistencia a
macrlidos (eritromicina) por bacterias gramnegativas,
implica la modificacin del sitio blanco en el ribosoma,
especficamente la metilacin de un residuo de adenina en
el dominio V del ARNr23S60. La resistencia a fluoroquino-
lonas es otro ejemplo donde se atribuye a los efectos
debidos a la mutacin que afectan los sitios blanco (ADN-
girasa y topoisomerasa) del medicamento61. En el caso de
Staph. aureus resistente a meticilina, la bacteria altera las
protenas que unen penicilina y evita as la accin del
antibitico8.
Muchas clases de antibiticos, por ejemplo betalact-
micos, glicopptidos y quinolonas, pueden disminuir su
eficacia debido a cambios o produccin de nuevos sitios
blanco. Los betalactmicos actan al fijarse covalente-
mente a protenas que unen penicilina (PBP) en la mem-
brana citoplasmtica; de esta forma se bloquea la funcin
transpeptidasa y carboxipeptidasa de las PBP en los
estados finales de la sntesis del peptidoglicano; esto hace
que las autolisinas endgenas se activen y lleven a la
bacteria a la lisis y muerte celular. Se ha descrito en
bacterias como Str. pneumoniae y aislados de Neisseria
que hay cambios en la estructura de las protenas que unen
penicilina (PBP) ocasionados por una estructura tipo
mosaico en la secuencia del gen de la protena PBP-2,
probablemente debida a un evento de recombinacin
interespecie entre Streptococcus orales y neisseiras
comensales51 .
Presencia de bombas de eflujo que expulsan el
antibitico. El mecanismo de eflujo para mltiples agentes
antimicrobianos contribuye a la resistencia intrnseca y
adquirida contra tales agentes. El anlisis del genoma de
bacterias grampositivas y gramnegativas ha confirmado la
amplia distribucin de estos sistemas. Este modo de
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resistencia puede llegar a disminuir o inclusive suprimir la
susceptibilidad a un amplio rango de antimicrobianos. El
diseo de eflujo (bomba) es mediado por protenas de
transporte, que confieren resistencia a los componentes
txicos. En las bacterias gramnegativas es necesario un
sistema de eflujo tripartita para expulsar el antimicrobiano
hacia el medio externo: una protena localizada en la
membrana citoplasmtica, otra en el espacio periplasmtico
(protena de fusin de membrana MFP) y una tercera en
la membrana externa (factor de membrana externa)
OMF62. Los sistemas de eflujo particularmente de bacte-
rias gramnegativas se asocian con resistencia a mltiples
antimicrobianos de importancia clnica como las fluoro-
quinolonas63.
Sobre-expresin del sitio blanco. La sobre-expresin
del sitio blanco, slo se ha descrito en aislados clnicos de
micobacterias. La duplicacin gnica o las mutaciones de
los promotores implicados en la transcripcin de estos
genes, son probablemente el mecanismo responsable. La
hiper-produccin de betalactamasas (gen Tem) induce
resistencia al clavulanato y se podra considerar la sobre-
expresin del blanco del antibitico64.
CONCLUSIONES
Los biocidas hacen parte importante de los protocolos
y estrategias que se utilizan para disminuir la adquisicin
y diseminacin de las infecciones nosocomiales. Se ha
documentado la eficacia de estos compuestos en los
procesos de desinfeccin. Los mecanismos de accin de
los antibiticos son bien conocidos, mientras los de los
biocidas se encuentran en investigacin. Estudios al res-
pecto afirman que los biocidas presentan mltiples sitios
blanco y que a concentraciones distintas muestran efectos
bactericidas. Caracterizar los sitios blanco es necesario
para entender los mecanismos de accin y de esta manera
dilucidar cmo se relacionan con la seleccin de resisten-
cia a los antibiticos de importancia clnica que se emplean
en la actualidad.
Las herramientas epidemiolgicas usadas para moni-
torear la resistencia a los antibiticos pueden a su vez
servir para vigilar los cambios en la susceptibilidad de los
patrones a los biocidas.
En la medida que se conocen los mecanismos de
resistencia a los antibiticos y biocidas, se puede esperar
el desarrollo de cepas altamente resistentes, pues los
mecanismos que genticamente se activan para uno de los

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compuestos los puede emplear el otro; se establece as una
posible resistencia cruzada entre dos tipos de compuestos,
que llevaran a un incremento en la resistencia a antibiticos
y al aumento en la prevalencia de microorganismos resis-
tentes en los hospitales.
Es esencial que el empleo de los antispticos y desin-
fectantes junto con preservativos incorporados en los
productos de consumo humano, slo se usen cuando sea
necesario y que haya control y vigilancia permanentes en
el manejo y uso de los elementos de limpieza y desinfec-
cin tanto en los centros hospitalarios como en los hoga-
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