CADENA RESPIRATORIA Y FOSFORILACIN OXIDATIVA

1) Indique si las afirmaciones hechas a continuacin son verdaderas o falsas.

a) La respiracin puede ocurrir slo en presencia de O 2.
b) El dispositivo molecular para la respiracin se encuentra slo en las clulas
eucariotas.
c) Las protenas transportadoras de electrones que tienen FAD como grupo
prosttico se denominan citocromos.
d) La relacin P:O es igual a 2,5 para el FADH 2 en la mitocondria.
e) El amital bloquea la formacin del ATP de la oxidacin del isocitrato, pero
no de la del succinato.
f) En presencia de un desacoplante la energa obtenida del transporte de
electrones se disipa como calor.

2) La inyeccin de dinitrofenol a una rata produce un aumento inmediato en su

temperatura corporal. Puede explicar por qu?

3) Un laboratorio farmacutico le envi a usted muestras de dos nuevos

compuestos metablicos para caracterizarlos como posibles antibiticos.
Utilizando una preparacin aislada de mitocondrias de hgado e incubada con
piruvato, O2, ADP, y Pi, usted observa que la adicin del compuesto "A"
bloquea tanto el transporte de electrones como la fosforilacin oxidativa.
Cuando agrega el compuesto "B" adems del "A", observa con sorpresa que
se restablece el transporte de electrones pero no la fosforilacin oxidativa. a)
Cmo clasificara estos compuestos teniendo en cuenta su modo de accin
en el transporte de electrones y la fosforilacin oxidativa? b) Nombre un par de
sustancias conocidas que podran dar el mismo resultado.

4) Se prepararon mitocondrias y se determin el consumo de O 2 en 0,2 ml de

la preparacin en estado 4, en estado 3 y desacoplado, en presencia y en
ausencia de una sustancia M (ver tabla). Indique qu tipo de inhibidor es M y
justifique su respuesta.

CONDICIN SUSTANCIA M CONSUMO DE 02 (moles

(nM) de t O/min)
ESTADO 4 0 11
ESTADO 4 0,5 4
ESTADO 3 0 80
ESTADO 3 0,5 30
DESACOPLADO 0 85
DESACOPLADO 0,5 33

5) Cuatro transportadores: a, b, c y d, cuyas formas reducidas y oxidadas

pueden ser distinguidas espectrofotomtricamente, se requieren para la
respiracin en un sistema de transporte de electrones bacteriano. En
presencia de sustrato y oxgeno, tres inhibidores diferentes bloquean la
respiracin, obtenindose los patrones de los estados de oxidacin que
aparecen en la Tabla. Cul es el orden de los transportadores en la cadena
desde los sustratos hasta el oxgeno?

1
Tabla: Efecto de los inhibidores sobre los niveles de oxidacin de los
transportadores en una va hipottica de transporte de electrones (+ y - indican
las formas totalmente oxidadas y reducidas, respectivamente).

INHIBIDORa b c d
1 + + - +
2 - - - +
3 + - - +

6) a) Se determin (en presencia de distintas concentraciones de una

sustancia "A" y "B") la velocidad de consumo de oxgeno en mitocondrias
intactas en las siguientes condiciones: estado "3", estado "4" y en presencia
de un desacoplante. El sustrato empleado fue malato-glutamato. Los
resultados se grafican abajo. Indique si las sustancias "A" y B son inhibidores
de la sntesis de ATP, de la cadena respiratoria o desacoplantes. Justifique
brevemente.

60 60

50 50
DESACOPLADO
DESACOPLADO
40 40

ESTADO 3 ESTADO 3
Q O2

30
Q O2

30

ESTADO 4 ESTADO 4
20 20

10 10

0 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 10 20 30 40 50 60 70 80
[A] [B]

b) Se estudi el efecto de distintas concentraciones de una sustancia "C" y "D"

(inhibidores del transporte de electrones) sobre el consumo de oxgeno en
partculas submitocondriales utilizando como sustrato: NADH, succinato y
ascorbato + tetra metil p fenilen diamina (TMPD). Precise lo mejor posible el
lugar de accin de la sustancia "C" y "D" en la cadena respiratoria. Justifique
brevemente.

2
 60 60

50 50
NADH
SUCCINATO
40 40
SUCCINATO
30 NADH
Q O2

30

Q O2
20 20

10 10
ASC + TMPD ASC + TMPD
0 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 10 20 30 40 50 60 70 80
[C] [D]

7) Una suspensin de mitocondrias consume 24 mol O 2/min en presencia de

malato y glutamato. Al agregar 2,8 mmoles de ADP y Pi en exceso el consumo
se acelera a 211 mol O2/min durante 3 min para luego retornar a la velocidad
inicial. Explique a qu se debe la aceleracin transitoria del consumo de
oxgeno y calcule el control respiratorio e ndice P/O. Explique cmo afectara
un inhibidor de la transferencia de energa la velocidad de consumo de
oxgeno y el ndice P/O.

8) Usted realiz una serie de experimentos con partculas submitocondriales

en donde midi sntesis de ATP, consumo de oxgeno y diferencia de pH. El
medio de reaccin contena, adems de las partculas, ADP, Pi y NAD, una
serie de agregados, los cuales se indican al final del enunciado. Los
resultados fueron elaborados por un compaero suyo, quin para comprobar
sus conocimientos sobre el tema se los entreg en forma desordenada. Es
usted capaz de ordenarlos? Hgalo.
SINTESIS DE ATP (mol/h.mg protena):
30; 0; 0; 30; 20; 0; 10; 0; 0; 0; 0; 20; 30; 0; 0.
CONSUMO DE O2 (mol/h.mg protena):
0; 5; 5; 0; 5; 12; 2; 5; 5; 12; 0; 0; 2; 5; 0.
DIFERENCIA DE pH:
0; 0; 1,5; 1; 1; 0; 0; 1; 1,5; 0; 0; 1; 0; 1; 1.
AGREGADOS:
A) Isocitrato
B) Isocitrato + isocitrato deshidrogenasa
C) B + -cetoglutarato deshidrogenasa + CoA
D) B + rotenona
E) C + succinil CoA sintetasa + GDP + rotenona
F) D + 2,4-dinitrofenol
G) E + oligomicina
H) E + 2,4-dinitrofenol
I) NADH
J) NADH + amital
K) J + succinato
L) K + malonato
M) L + ascorbato-TMPD

3
N) M + oligomicina
O) N + 2,4-dinitrofenol

9) El grfico muestra el trazado obtenido en un oxgrafo al incubar partculas

submitocondriales a 30C, en un medio a pH: 7,5. Caracterice cada uno de los
compuestos agregados (A, B, C, etc.). Justifique brevemente el efecto de cada
compuesto sobre la velocidad de consumo de O 2.

A
B

C D
B
E
[O2] (mM)

E
G
H

Tiempo (min)

10) Se agregaron 0,1 ml de una suspensin conteniendo partculas

submitocondriales (con una concentracin de protena de 5 mg/ml) a 2,9 ml de
una solucin amortiguadora (pH 7,2) en una cubeta termostatizada de un
oxgrafo. Las medidas de consumo de oxgeno obtenidas ante el agregado de
diferentes compuestos se muestra en el grfico adjunto. En base a estos
datos: a) Calcule la velocidad de consumo de O 2 en cada caso, expresndola
en mol/min.mg de protena. b) Calcule el ndice P/O. c) Caracterice lo mejor
posible a los compuestos X, Y, Z y A. d) Qu velocidad de consumo de O 2
esperara medir si a los 3,9 minutos (flecha en lnea de puntos) se agregara
nuevamente ADP y Pi (iguales cantidades que anteriormente)? Durante
cunto tiempo? e) Puede decir en qu estado estaban las partculas a tiempo
cero?

4
 2 l X 5 l ADP (65 mM)
+ 3 l Pi (75 mM)
0.20
2 l Y

0.18

0.16 2 l Z
[O2] (mM)

2 l A
0.14

0.12

0.10

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0

Tiempo (min)

RESPUESTAS
1) a) F b) F c) F d) F e) V f) V
2) Porque se disipa el gradiente de protones como calor.
3) A: inhibidor de la F1-ATPasa (oligomicina); B: desacoplante (dinitrofenol)
4) inhibidor de la cadena de transporte de electrones
5) c b a d
6) a) A: inhibidor de ATPasa; B: inhibidor de cadena de transporte de
electrones
b) C: inhibidor sitio 1; D: inhibidor sitio 2
7) Aumenta el consumo de O2 al agregar ADP y Pi (pasa de estado 4 a 3)
C.R.= 7,42 P:O= 2,5
8) A) 0 0 0 B) 30 5 1 C) 30 5 1 D) 0 0 0 E) 20 5 1 F) 0 0 0 G) 0 2 1,5 H) 0 12 0
I) 30 5 1 J) 0 0 0 K) 20 5 1 L) 0 0 0 M) 10 5 1 N) 0 2 1,5 O) 0 12 0
9) A: NADH. B: ADP. C: rotenona. D: succinato. E: oligomicina. F: DNF. G:
antimicina. H: ascorbato+TMPD. I: CN,CO, F -, N3-
10) a) 0,024; 0,3; 0,024; 0,51; 0; 0,54
b) 1,5
c) X-succinato, Y-desacoplante, Z-antimicina, A-ascorbato+TMPD
d) no se vera efecto. Prcticamente no hay oxgeno.
e) estado 1.

5
Modelo quimiosmtico

Relacin entre potenciales de xido-reduccin y energa libre en la cadena

respiratoria mitocondrial.

6
Sitios de accin de inhibidores en la cadena respiratoria mitocondrial.

Desacoplante 2,4 dinitrofenol. Tiene un protn disociable y es muy hidrofbico.

La carga negativa est deslocalizada en toda la molcula permitiendo su
solubilidad en la membrana. El DNP toma protones del espacio
intermembrana, atraviesa la membrana interna mitocondrial y disipa el
gradiente de protones.

7
Lanzadera del glicerofosfato

Lanzadera del malato-aspartato

8
Grupos prostticos de citocromos. El Fe-protoporfirina IX se encuentra en
citocromos b, hemoglobina y mioglobina. Los hemos A y C se encuentran en
citocromos del mismo nombre. Obsrvese el sistema de dobles enlaces
conjugados que permiten detectar a las protenas que los poseen por su
absorcin en el visible.