CULTIVO DE SECRECIN VAGINAL

Paute, Mara de los ngeles; Ros, Yajaira: Salina, Jelitza & Tuqueres, Danilo
Bioqumica y Farmacia, Universidad Tcnica Particular de Loja
San Cayetano Alto, Loja-Ecuador.

1. Introduccin

2. Objetivo
Conocer y determinar las principales causas de vaginitis, dolor plvico, un
flujo vaginal inusual u otros signos de infeccin tanto por medios
microscpicos como macroscpicos para el correcto diagnstico.
3. Materiales y mtodos

4. Resultados y discusin
Durante el desarrollo de nuestra prctica obtuvimos los siguientes resultados macroscpicos
y microscpicos de acuerdo al avance de su elaboracin:

Examen de pH

Fig.1 Examen de pH. Se observa un pH

de 6.
De la muestra otorgada por el docente se comenz realizando un examen de pH el cual
determino un pH de 6 para la muestra de secrecin vaginal como se puede ver en la Fig.1.

Examen en fresco Tincin gram

Fig.3 Tincin Gram. Presencia de

Fig.2 Examen en fresco. Presencia de
bacilos gramnegativos.
cilindros.

Luego se procedi a realizar un examen en fresco en el cual no se observaron estructuras

fngicas. Al realizar este mtodo es esencial que la observacin se realice en corto tiempo
despus de haber obtenida la muestra, para asegurar la observacin del parsito en
movimiento, pues de otra manera pueden confundirse con otras clulas como los leucocitos,
Fig.2. Tambin se realiz una tincin Gram en la cual se observaron bacilos grannegativos,
ya que estos presentaron una forma alargada y una coloracin rosada verificando que eran
enterobacterias gramnegativas como podemos ver en la Fig.3. De acuerdo a (Rodriguez et
al. 2005) la diferente respuesta a la tincin de Gram en bacterias se debe a que el cristal
violeta es retenido por la capa de peptidoglicano y, al ser ms delgada en las bacterias
Gram negativas, estas sufren la decoloracin al aplicar la mezcla de alcohol cetona.
Apoyadas en esta informacin, en la tincin Gram realizada se observaron bacilos de color
rosado lo que no ayudo a verificar que eran enterobacterias Gram negativas.
Completando lo que dice (Rodriguez et al. 2005) Hanele (1999), nos informa que el aparato
genital femenino estn colonizadas en el rea vaginal con microorganismos que provienen
del aparato gastrointestinal, tomando en cuenta que el Proteus es el menos frecuente,
incluyen Klebsiella y otro tipo de Enterobacterias
a) Agar sangre b) Agar chocolate c) Agar MacConkey d) Agar EMB

Fig4. Cultivos a) Cultivo en agar sangre en aerobiosis donde hubo crecimiento de colonias y
ausencia de hemlisis. b) Cultivo en agar chocolate en aerobiosis, se visualiz crecimiento de
colonias. c) Cultivo en agar MacConkey en aerobiosis donde no hubo crecimiento de colonias
redondas, pequeas y de color rosado. d) Cultivo en agar EMB en aerobiosis, donde se
presenci el crecimiento de colonias con un brillo metlico verdoso.

En el cultivo agar sangre hubo crecimiento de colonias irregulares con borde entero y no
hemoliticas por lo que se descarta la presencia de Streptococcus en la muestra ya que en
este medio crecen la mayora de bacterias patgenas y algunas levaduras, Fig,4 a).
Seguimos con la hiptesis de una enterobacteria ya que el medio es adecuado para el
cultivo y aislamiento de microorganismos exigentes, tambin para estudiar la actividad
hemoltica y en nuestro caso no existe esa actividad en un estudio (Garcia, 1994).
En el agar chocolate tambin se observaron colonias blanquecinas como podemos
visualizar en la Fig.4 b). La mezcla de peptonas aporta nitrgeno, vitaminas, minerales y
amino cidos esenciales para el crecimiento. El almidn de maz es fuente de vitaminas,
particularmente del grupo B esenciales para el desarrollo bacteriano, El cloruro sdico
aporta electrolitos esenciales para el transporte y balance osmtico La sangre es fuente de
factores de crecimiento (Mylotte, 2001).

En el agar MacConkey se observaron colonias pequeas redondas de color rosadas como

podemos ver en la Fig4 c). De acuerdo a Hekker (2000), nos dice que el agar MacConkey
es un medio usado para el aislamiento selectivo de enterobacterias, lleva sustancias
inhibidoras de Gram positivos. Las bacterias que fermentan la lactosa producen colonias de
color rojo que pueden estar rodeadas de una zona opaca debida a la precipitacin de sales
biliares; las no fermentadoras dan colonias incoloras ms o menos transparentes.
En el agar EMB se observaron colonias con un brillo metlico verdoso lo cual indica que la
especie cultivada fue Escherichia coli, Fig4 d). De acuerdo a Larsen (2001), el medio EMB
es el mtodo ms eficaz debido a la capacidad que tiene para aislar microorganismos
exigentes como Enterobacteriaceae su uso es prcticamente el mismo del agar
MacConkey. El azul de metileno acta como indicador e inhibidor al mismo tiempo. Las
colonias fermentadoras de lactosa presentan un tono violeta ms o menos intenso. Por
ejemplo Escherichia Coli origina colonias muy oscuras, frecuentemente con brillo verde
metlico que facilita su deteccin por lo que es la prueba ms acertada.

Catalasa Oxidasa

Fig.5 Catalasa. Fue negativa, no hay Fig.6 Oxidasa. Fue negativa, no hay

presencia de burbujas . cambio de color (rosado).

La prueba de catalasa nos arroj un resultado negativo ya que no hubo presencia de

burbujas lo cual quieres decir que no hubo la descomposicin del perxido de hidrgeno en
oxgeno y agua, Fig,5. Segn MacFadin (2003), La catalasa es una enzima que
descompone el perxido de Hidrogeno en agua y oxgeno. El perxido de Hidrogeno se
forma como uno de los productos finales del metabolismo aerobio de los hidratos de
carbono.
La prueba de oxidasa nos arroj un resultado negativo ya que no hubo cambio de color lo
cual nos quiere decir que la bacteria a estudiar es de la familia Enterobacteriaceae, Fig 6.
Segn MacFadin (2003), la prueba de oxidasa no permite la identificacin de una enzima
bacteriana llamada citocromo C oxidasa para la sntesis de ATP. El sistema citocromo se
encuentra en los organismos aerobios o anaerobios facultativos, de modo que la prueba de
Oxidasa es importante para identificar aquellos organismos que carecen de esta enzima.

a) Tincin gram b) Tincin gram c) Tincin gram

Fig7. Tincin Gram. a) Tincin gram del cultivo de agar sangre, se

observan bacilos gramnegativos b) Tincin gram del cultivo de agra
chocolate, se observan bacilos gramnegativos c) Tincin gram del
cultivo de agar MacConkey, se observan bacilos gramnegativos.

En la tincin gram que se realiz de los cultivos de agar sangre, chocolate y MacConkey se
pudo visualizar claramente que se obtuvo bacilos gramnegativos como podemos apreciar en
la Fis.7 a), b), c)
Pruebas bioqumicas

Fig.8 Pruebas bioqumicas: Citrato negativo. TSI A/A.

Urea negativo. LIA positivo. Motilidad positivo. Indol
positivo. Gas positivo.
Las pruebas bioqumicas son un mtodo para distinguir cada una de las especies de
Enterobacteriaceae. Dentro de los resultados obtenidos se pudo llegar a concluir una vez
ms que nuestro microorganismo a estudiar es E.coli:
Citrato de Simmons.- Citrato negativo, no se evidenci una alcalinizacin del medio y por
ende no hubo viraje del color verde a azul. Lo que quiere decir que la bacteria no utiliza el
citrato de sodio como nica fuente de carbono. TSI (Agar triple azcar hierro).- A/A + g+ ;
la bacteria desdoblo los tres azucares la glucosa, sacarosa y la lactosa, por lo que acidifico
el medio. Urea.- Negativa, no se evidenci una alcalinizacin del medio y por ende no hubo
viraje a color rosado, lo que quiere decir que la bacteria no hidrolizo la urea por medio de la
enzima ureasa ya que no la posee. LIA (Lisina-Hierro-Agar).- Positiva porque no vir y
hubo presencia de gas, esto quiere decir que la bacteria si desamino y descarboxilo el
aminocido Lisina. SIM ( H2S Indol Motilidad).- Indol positivo, ya que la bacteria
desdobl el triptfano luego de aadir el reactivo de Kovacs , y hubo presencia de una zona
roja en la parte superior. La motilidad fue positiva, ya que hubo turbidez y la bacteria se
dispers. Estos resultados se los puede observar claramente en la Fig.8.

Luego de realizar las pruebas Bioqumicas obtuvimos los resultados que nos ayudaron a
identificar la bacteria en estudio. Apoyadas en (Garca et al. 1997) pudimos verificar parte
de nuestros resultados ya que nos dice que en Agar TSI Escherichia coli dar positividad
para la produccin de H2S y gas. En la prueba de motilidad hay 95% de positividad
para cepas de Escherichia coli. Escherichia coli posee enzimas que tienen la capacidad de
descarboxilar o de hidrolizar aminocidos especficos entre ellos la arginina, lisina, ornitina
en pruebas especficas.
De acuerdo a (Rodriguez et al. 2005) Escherichia coli es negativa para la prueba de urea ya
que no tiene la presencia de la enzima ureasa. Esta bacteria presenta positividad para la
prueba de Indol. En la prueba del citrato ser negativa ya que esta bacteria no tiene la
capacidad de utilizar el citrato de sodio como nica fuente de carbono para el metabolismo
y crecimiento.
Apoyadas en toda esta informacin y con los resultados obtenidos en las pruebas se pudo
confirmar que efectivamente la bacteria en estudio era Escherichia coli.
Despus de todo los resultados obtenidos decimos que el pH obtenido al inicio de nuestra
muestra, Fig1. va dentro del rango normal para Escherichia coli que es entre 4.4 6.7 con
un mximo de 10. Las condiciones ptimas de desarrollo es a un pH de 7,2. El desarrollo de
E. coli se detiene a pH extremos (inferiores a 3,8, o superiores a 9,5), por ello, el grado de
acidez de un alimento puede constituir un factor de proteccin y garantizar su seguridad
(Gottstein, 2009).

5. Conclusin

6. Recomendaciones

Realizar en orden las pruebas bioqumicas ya que esto nos ayudara al momento de
ver resultados.
Realizar el estriado en cada tubo de manera correcta ya que un mal sembrado de la
bacteria alterara los resultados.
No esterilizar el asa despus de sembrar en la primera prueba bioqumica que es de
Citrato, usar la misma asa sin esterilizar para todas las cinco pruebas.
Al momento de sembrar en cada tubo tener mucho cuidado que no se contamine ya
que si no usamos mascarilla o en si todos los materiales necesarios para tener un
rea de trabajo asptica, esto alterara los resultados.
Para realizar la prueba de oxidasa tomas una

7. Bibliografa

Garca Martos P, Fernndez del Barrio M. T, Paredes Salido F;

Microbiologa Clnica Practica; 2 ed; ; Universidad Cadiz; 1994
Garca, P., Fernndez M., & Paredes F. (1997). Microbiologa clnica
aplicada. Ediciones Daz de Santos, S.A. Juan Bravo, 3-A.28006 Madrid
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 Gottstein, B., Pozio E and Nckler K, 2009. Epidemiology, diagnosis,
treatment, and control of Trichinellosis. Clin. Microbiol. Rev. 22, 1, 127-
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Hannele R, Jousimies S, Sumanen P, et al.(1999). Anaerobic Gram negative
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Larsen B, Monif G. Understanding the bacterial flora of the female genital
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Mylotte JM, Kahler L, McCann C. Community-acquired bacteremia at a
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30-day mortality. Am J Infect Control 2001;29:13-9.
Rodriguez, E., Gamboa, M., Hernndez, F., & Garcia.,J. (2005).
Bacteriologa General principios y prcticas de laboratorio. Editorial
universidad de Costa Rica, 63-70.