Biologa celular

28 de septiembre del 2016

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 ndice
1- Microscopia 3
1.1- Fundamentos ..3
1.2- Amplificacin ...3
1.3- Poder de resolucin4

2- Microscopio fotonico u ptico .5

2.1- Campo claro.5
2.2- Contraste de fases..5
2.3- Campo oscuro.....6
2.4- Inmunofluorescencia..6
2.5- Confocal7
2.6- Caractersticas y usos7

3- Microscopio electrnico8
3.1- Estructura y tcnicas..8, 9
3.2- Transmisin de electrones....9
3.3- Sombreado metlico..10
3.4- Criofractura..10
3.5- Barrido..10
3.6 Caractersticas y aplicaciones11

4- Referencias.12

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 Microscopia
La microscopa es el conjunto de mtodos que se utilizan para poder visualizar objetos muy
pequeos que estn fuera del alcance de resolucin del ojo humano. La microscopa utiliza
instrumentos especiales como la lupa y el microscopio (del griego mikros = pequeo, skopein
= observar), que permiten magnificar el tamao de estructuras imperceptibles1
-Fundamentos
Como su definicin lo dice la microscopia es la tcnica que nos va a permitir observar objetos
ms a detalle que estn fuera de nuestro ojo humano con un microscopio sea simple o
compuesto, vamos a tener que tomar en cuenta tres aspectos elementales los cuales son:
El objeto a estudiar:
Cuando uno planea el estudio de alguna clula o ya sea tejido e incluso rgano se debe antes
plantear y definir cules son los aspectos de ellos que se desea analizar ya sean morfolgicos,
bioqumicos, fisiolgicos, genticos etc. Y en base a esto se va a planificar y se definir que
mtodo se va a seguir y tambin as se seleccionara la tcnica de visualizacin y que tipo de
instrumento ptico es el que va tener que ser requerido
Tener una fuente de iluminacin:
Se debe analizar el papel que va a jugar la luz o tambin el sistema de iluminacin como las
bombillas elctricas tambin se pueden tomar en consideracin otros como las radiaciones
electromagnticas tales como la luz ultravioleta o los rayos laser y estos no son captados por
la retina del ojo si no por placas fotogrficas o una pantalla fluorescente y son considerados
como un tipo de iluminacin ya que permiten la formacin de una imagen que muestra los
detalles finos de un espcimen.
Y tambin para esto requiere un buen sistema ptico.
-Amplificacin
Cuando una lente ptica se usa para incrementar la imagen de un objeto nos referimos a un
amplificado cualquier amplificador incrementa el tamao aparente de un objeto
incrementando la imagen del objeto en la retina del ojo La
ampliacin en un microscopio se refiere a la cantidad o al grado en
el que se ampla el objeto observado. Se mide por mltiplos, tales
como 2x, 4x y 10x, que indican que el objeto se ampla al doble de
grande, cuatro veces ms grande o 10 veces ms grande,
respectivamente. 2 La ampliacin en los microscopios es muy til e
importante de todas las estructuras biolgicas especficamente a

Figura 1.El uso del zoom. (microscope

image by Lulu Berlu from Fotolia.com)

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nivel celular as podemos entender las formas de vida vegetal y animal y entender mejor su
comportamiento, al momento de ajustar el aumento del microscopio uno debe ser muy
cuidadoso debe ser ajusto en proporcin a la distancia de la muestra hay unas que estn
preestablecidas por defecto.

Poder de resolucin
El poder de resolucin est determinado en parte por la longitud de onda de la radiacin
empleada para iluminar el espcimen y es inversamente proporcional a la misma, es decir, a
menor longitud de onda, mayor poder de resolucin. El haz de electrones puede tener
longitudes de onda variables, las cuales influyen en el lmite de resolucin que a su vez
depender del voltaje empleado para acelerar los electrones. 3

Tabla 1.-Relacin del voltaje de aceleracin, la longitud de onda del haz de electrones y el
poder de resolucin en el microscopio electrnico de transmisin expresadas en kilovoltios
(kV), angstroms () y nanmetros (nm)

Voltaje de Limite de resolucin

Longitud de onda ()
Aceleracin (kV) terico ()
10 0.122 (0.122nm) 3.7 (0.37nm)
20 0.086 (0.0086nm) 2.9 (0.29nm)
50 0.054 (0.0054nm) 2.1 (0.21nm)
100 0.037 (0.0037nm) 1.7 (0.17nm)
200 0.025 (0.0025nm) 1.3 (0.13nm)
500 0.014 (0.0014nm) 0.9 (0.9nm)
1000 0.009 (0.0009nm) 0.7 (0.07nm)

Con el microscopio electrnico se puede alcanzar una resolucin de aproximadamente

40.000 veces ms que el poder de resolucin del microscopio de luz y 2 x 106 veces el poder
de resolucin del ojo humano. 4

4
 Microscopio fotnico
El microscopio fotnico o tambin ptico utilizan la luz como su fuente de energa es el
microscopio ms utilizado este microscopio est basado en que solo tiene lentes pticas las
propiedades que tienen los lentes pticos que tiene este microscopio es que permiten
aumentar el tamao de los objetos que son observados, existen muchos tipos de microscopios
pticos aunque en realidad son muy pequeas las diferencias ya que estos siguen un mismo
principio bsico.

Figura 2.Partes de un microscopio ptico imagen sacada de

http://www.monografias.com/trabajos-pdf5/partes-microscopio-
tipos/partes-microscopio-tipos.shtml

Campo claro
En campo claro toda la luz desde el espcimen y sus alrededores es colectada por el objetivo para
formar una imagen contra un fondo brillante el campo claro es la forma ms simple de microscopa
donde la luz pasa a travs de o reflejada del espcimen la iluminacin no se altera por aditamentos que
cambien las propiedades de la luz5 entonces en campo claro sus aplicaciones son en la biologa
ampliamente usadas en tinciones, pigmentos naturales y especmenes altamente contrastados, esta
tcnica es usada principalmente para patologa esto no aplica para las clulas vivas sin teir e incluso
tejidos igual sin teir.

Figura 3.Microscopio campo claro sacada de

http://morfoudec.blogspot.mx/2008/07/microscopa-
de-campo-claro.html

Contraste de fases

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Inventado en 1932 por el fsico neerlands Frits Zernike, el contraste de fases nos va a permitir
observar las clulas sin colorear esto sirve de mucho ya que varias clulas vivas que son
teidas debido a lo que contiene los colorantes pueden alterar o daar la estructura celular
hasta el punto de muerte, en esta tcnica de microscopia de las partes distintas de una clula
se aprovechan las pequeas diferencias de ndice de refraccin Las partes oscuras de la
imagen corresponden a las porciones densas del espcimen; las partes claras de la imagen
corresponden a porciones menos densas.

Figura 4.Microscopio contraste de fases imagen

sacada de http://oscar-
mecatronica88.wix.com/labhisto#!microscopio-de-
contraste-de-fases

Campo oscuro
La microscopia de campo oscuro es una tcnica de contraste donde solo la luz difractada desde el
espcimen se usa para formar la imagen, el espcimen aparece brillante contra un fondo oscuro la
microscopia de campo oscuro crea un contraste en especmenes transparentes sin tincin como las
clulas vivas, en lugar de iluminar la muestra con luz completa el condensador forma un cono hueco
con luz que pasa alrededor del cono en lugar de pasar a travs de este, sirve ms para los contornos
y bordes pero este no brinda informacin sobre la estructura interna del espcimen.

Figura 5.Microscopio de campo oscuro imagen

sacada de
http://morfoudec.blogspot.mx/2008/07/microscopa-
de-campo-oscuro.html

Inmunofluorescencia
La inmunofluorescencia es una tcnica de inmunomarcacin que hace uso de anticuerpos
unidos qumicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una
determinada molcula. Es una tcnica que tiene variantes cuantitativas (por ejemplo FPIA) y
cualitativas (la inmunotincin de clulas para su observacin por microscopa fluorescente).
6

6
 Figura6. Microscopio de inmunofluorescencia
imagen sacada de
http://www.lablapurisima.com.mx/

Confocal
El microscopio confocal es la tecnologa que va a permitir unas observaciones con mucha ms
resolucin que con la que se puede lograr solo utilizando el microscopio ptico convencional,
este emplea un sistema laser que en forma de barrido aplica un haz de luz, el lser que es
aplicado sobre el espcimen hace que las molculas se exciten y as emitan una fluorescencia,
tambin debido a que penetra fcilmente al espcimen o muestra que se est estudiando este
microscopio logra sacar imgenes en diferentes planos focales y estos ligados a un programa
de computadora se va a poder reproducir una imagen tridimensional.

Figura 7.Microscopio confocal imagen sacada de

http://iie.fing.edu.uy/investigacion/grupos/gti/timag/tr
abajos/2007/proteus/confocal.html

Tabla 2- Caractersticas, usos, ventajas y desventajas del microscopio ptico

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 Microscopio electrnico
Fue inventado entre los aos de 1925 y 1932 por los alemanes Ernst Ruska y Max Knoll este
microscopio ya no utiliza la luz visible o los fotones para la visibilidad de la muestra si no que
el dispositivo utiliza un haz de electrones dirigidos hacia la muestra a analizar y produciendo
una imagen en una pantalla sensible a los electrones este logra permitir realizar aumentos de
hasta 2.000.000x este microscopio revoluciono mucho principalmente a la medicina y a la
farmacologa ya que en este microscopio uno puede alcanzar a ver detalladamente las partes
de un virus, protenas, partes de clula etc.

Figura 8. Microscopio electrnico imagen sacada

de http://www.infobiologia.net/2012/11/microscopio-
electronico.html

Estructura y tcnicas

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La muestra biolgica presenta dos problemas fundamentales: el entorno de vaco y la
transferencia de energa, se utilizan distintas tcnicas dependiendo del tamao de la muestra
para poder resolver el problema
Para muestras que son grandes como los rganos o tejidos se llevan a cabo 3 tcnicas:
1-La fijacin qumica
2-La inclusin en resinas
3- La rplica metlica
Para muestras pequeas como son los complejos macromoleculares aparte de que se puede
aplicar una misma tcnica que la anterior (replica metlica) se utilizan las siguientes dos:
1-La tincin negativa

2- La crio microscopia

Figura 9. Estructura microscopio electrnico (1)

carcasa, (2) emisor de electrones, (3) electrones,
(4) ctodo, (5) nodo, (6) Lente condensador, (7)
muestra analizada, (8) Lente objetivo, (9) Lente
proyector, (10) Detector (sensor o pelcula
fotogrfica). Imagen sacada de
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_electr%C3
%B3nico

Transmisin de electrones

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Un microscopio electrnico de transmisin (TEM, por sus siglas en ingls, o MET, en espaol)
es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la
potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de la luz
visible. Lo caracterstico de este microscopio es el uso de una muestra ultra fina y que la
imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra. Los microscopios electrnicos
de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces. 7

Figura 10. Esquema de un microscopio electrnico

de transmisin imagen sacada de
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_electr%C3
%B3nico_de_transmisi%C3%B3n

Sombreado metlico

Es una tcnica utilizada y que es muy importante en el microscopio electrnico de transmisin

esto consiste en el espcimen con una fina capa de un metal pesado como oro o platino,
desde un cierto ngulo los objetos de la preparacin producen sombras en la capa de metal
dando lugar a una imagen con una cierta apariencia tridimensional que permite calcular el
tamao de este.

Figura 11. Sombreado metlico imagen sacada de

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiol
ogia/unidades/documen/uni_02/56/cap308.htm

Criofractura

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Esta tambin es una tcnica muy importante igual aplicada en el microscopio electrnico de
transmisin esto se lleva acabo congelando la muestra biolgica reduciendo su temperatura
hasta -196C esto se logra con nitrgeno lquido luego de esto la muestra se fractura as
dejando expuesta varias superficies externas e internas de la muestra llevada a cabo, las
superficies se sombrean con algn metal pesado para su mejor estudio.

Figua12. Una cofractura imagen sacada de

http://www.hjaldanamarcos.bravepages.com/unidad
es/unidad2/crio.htm

Barrido
Fue Manfred von Ardenne quien logr inventar el Microscopio de Barrido en 1937 es una
tcnica que nos da la posibilidad de observar la morfologa de las muestras con unas
imgenes de muy alta resolucin utilizando las interacciones electrn-materia y esto en vez
de requerirse un haz de luz utiliza un haz de electrones es una tecnologa que nos permite
ver y estudiar superficies de rea muy pequea en cualquier tipo de material sin necesidad
de preparaciones complicadas.

Figura 13. Microscopio de barrido imagen sacada

de
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_electr%C3
%B3nico_de_barrido#/media/File:JEOL_JSM-
6340F.jpg

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Tabla 3- Caractersticas, aplicaciones, ventajas y desventajas microscopio electrnico

Referencias
1-http://hnncbiol.blogspot.mx/2008/01/microscopia_22.html
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo3_3.htm
http://histologiaunam.mx/descargas/ensenanza/portal_recursos_linea/apuntes/2_microscopia
.pdf
2-http://www.ehowenespanol.com/ampliacion-microscopio-sobre_166844/
(microscope image by Lulu Berlu from Fotolia.com)
3, 4-http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo5_4.htm
http://www.monografias.com/trabajos-pdf5/partes-microscopio-tipos/partes-microscopio-
tipos.shtml
5-http://www.tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_campo_claro.htm
http://morfoudec.blogspot.mx/2008/07/microscopa-de-campo-claro.html
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_de_contraste_de_fases

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http://oscar-mecatronica88.wix.com/labhisto#!microscopio-de-contraste-de-fases
http://morfoudec.blogspot.mx/2008/07/microscopa-de-campo-oscuro.html
6-https://es.wikipedia.org/wiki/Inmunofluorescencia
http://www.stri.si.edu/espanol/investigaciones/microscopia/confocal/index.php
http://colegiocristorey.com/nenuca/uca/biologia/biologia_2_bcc/biologia_2_bcc_apuntes_micr
oscopio.pdf
http://iie.fing.edu.uy/investigacion/grupos/gti/timag/trabajos/2007/proteus/confocal.html
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_electr%C3%B3nico
http://www.infobiologia.net/2012/11/microscopio-electronico.html
7-https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_electr%C3%B3nico_de_transmisi%C3%B3n
http://cienciaybiologia.com/microscopio-electronico/
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_electr%C3%B3nico_de_barrido
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap30
8.htm
http://www.hjaldanamarcos.bravepages.com/unidades/unidad2/crio.htm

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