DETERMINACION DE LA INFLUENCIA DEL pH, DE LA TEMPERATURA Y DE LA

CONCENTRACION DE LA ENZIMA SOBRE LA ACTIVIDAD CATALTICA DE LA AMILASA

SALIVAL

Andrea Sierra Meja, Jos Danilo Rosero Narvez

Universidad Nacional Sede Medelln, Facultad de Ciencias, Programa Ingeniera Biolgica

Resumen

Las enzimas son macromolculas protenicas que catalizan reacciones qumicas. Esta
actividad catalizadora puede verse afectada por diversos factores estos pueden ser las
concentraciones (sustrato y enzima), la ausencia o presencia de cofactores, inhibidores y
efectores, el cambio de temperatura y de pH. A su vez para determinar como estos
factores influencian la actividad cataltica de la enzima es necesario medir la velocidad
inicial de la reaccin en funcin de los factores que pueden afectar esta o tambin
determinando la presencia o ausencia de un sustrato o de un producto de la reaccin, a
medida que se varia uno de los factores. En esta practica se pretendi evaluar como
afectan los distintos factores la reaccin enzimtica.

Para conseguir resultados, fue necesario la preparacin de una solucin de saliva y la

evaluacin de cmo el cambio en el pH y la temperatura influan en la reaccin enzimtica
de la amilasa. A su vez de cmo el cambio de concentracin de la enzima influa sobre la
reaccin de hidrlisis de la amilosa.

En la prctica se concluyo que a pH ms bsicos la reaccin enzimtica de la alfa amilasa

tiene un mayor porcentaje de reaccin alcanzando un pH ptimo en 7,5 y tambin que su
temperatura optima es de 37oC y que la concentracin de la enzima repercute
directamente en el porcentaje de reaccin que se da en una solucin enzima - sustrato.

Palabras clave: Alfa amilasa salival- Almidn- Amilosa - pH ptimo temperatura ptima-
homeostasis.

Introduccin

Las enzimas son macromolculas

protenicas cuya funcin es catalizar
reacciones qumicas, realizando un
cambio qumico especifico sobre el
sustrato sobre el que actan. La actividad
cataltica de una enzima puede verse
afectada por diversos factores, uno de
ellos es la variacin de pH, ya que un
cambio en este transforma la forma y la
estructura de la misma enzima, y debido
a que el pH al cual las enzimas adquieren
su mxima actividad es diferente para
cada una de ellas y depende de la
secuencia de aminocidos que las
conforman, por lo que si se ve afectada
su conformacin tambin se vera
afectada su actividad cataltica. A su vez
pH extremos se puede ocasionar la
desnaturalizacin de las enzimas, debido
a que se modifican las interacciones
inicas que intervienen en la estabilidad
de la enzima en su estado nativo. Otro
factor que puede afectar la actividad
cataltica es la concentracin del sustrato
bsicamente existe una relacin lineal es
decir al aumentar el sustrato la velocidad
aumenta, esto se da debido a que exista
una cierta cantidad de enzima libre, pero
al saturar esta se llega a la velocidad
mxima y a altas concentraciones del
sustrato, la velocidad de la reaccin es
independiente de su concentracin.
donde la enzima se encuentra saturada y
hay sustrato en exceso. A su vez al
aumentar la concentracin de enzima se
da aumento lineal en la velocidad de la
reaccin, proporcional a la cantidad de
enzima agregada. La temperatura afecta
de manera exponencial la actividad
cataltica de la enzima, ya que al
aumentar la temperatura la velocidad
aumenta exponencialmente, esto se
explica ya que a mayor temperatura,
mayor energa cintica tendrn las
molculas del sustrato, y las colisiones
entre ellas sern mas frecuentes,
favoreciendo as la rpida transformacin
en productos. Esto sucede hasta los
50C, ya despus de esta temperatura el
calor llega a desnaturalizar la enzima En
el caso especifico de la amilasa, que es
una enzima hidrolasa, es decir que tiene
la funcin de catalizar la reaccin de
hidrlisis de los enlaces -1,4 del almidn
(compuesto por amilosa y amilopectina)
y genera bsicamente dextrinas, maltosa,
isomaltosa, maltotriosa y eventualmente
glucosa libre, en otras palabras azucares
simples. La amilasa salival es una enzima
digestiva presente en la boca. (1) (2)
En la prctica, lo que se dispuso hacer en
primera instancia fue preparar una
solucin de saliva , para esto se segrego
saliva y se le adiciono solucin salina y
posteriormente se llevo a incubar en el
bao mara. Para medir el efecto del pH
en la reaccin cataltica fue necesario
tomar varios tubos adicionndole a la
solucin buffers a diferentes
temperaturas y despus de un proceso
de incubacin se les adiciono almidn y
finalmente lugol y se midi el porcentaje
de la reaccin. Para evaluar el cambio de
la concentracin de la enzima sobre la
reaccin de hidrolisis de la amilosa fue
necesario prepara otra solucin de saliva
de igual forma a la explicada
anteriormente, solo que a diferentes
concentraciones. A su vez se prepararon
varios tubos de ensayo a pH 7.5, junto
con solucin salina y almidn, despus
de sufrir un proceso de incubacin y se
les adiciono las soluciones de saliva a
diferentes concentraciones y se le
adiciono lugol para poder medir el
porcentaje de reaccin. Finalmente para
medir el efecto de la temperatura, se
prepararon 4 ambientes de temperaturas
diferentes, donde fueron depositadas las
soluciones de saliva a una misma
concentracin y a un mismo pH. Se
realizo un proceso de incubacin y
finalmente se le adiciono lugol para
poder medir el porcentaje de reaccin.
El objetivo principal de esta practica es
determinar como diferentes factores,
tales como a acidez del medio, la
temperatura y concentracin de la
enzima, afectan la actividad cataltica de
una enzima, en esta caso para la amilasa.
Materiales y mtodos
Los materiales utilizados en esta prctica
fueron los siguientes:
Equipos:
o Tubos de ensayo
o Pipetas volumtricas
o Pera
o Guantes de latex
Sustancias:
o Soluciones buffer 0.1 M, a
diferentes pH (3, 4, 5, 7.5,
9, 10, 11)
o Solucin de almidn al 0,5
%.
o Solucin salina al 0.85 %.
o Solucin de lugol
o Solucin acuosa de saliva
(fuente de la -amilasa)
Para la evaluacin del cambio de pH
sobre la actividad de la enzima amilasa
se sigui el siguiente procedimiento:
1. Se preparo 8ml de solucin de
saliva al 25%, para esto uno de los
integrantes del grupo segrego 2ml
de saliva sin espuma y se llevo
hasta 8ml adicionando solucin
salina.
2. Se tomaron 7 tubos de ensayos; y
en cada uno de ellos se prepar
una solucin a pH distintos , como
se puede ver en la tabla 1.
Tabla 1. Soluciones a preparar.
3. Se depositaron los 7 tubos de
ensayo en el bao maria durante
5min a 37oC.
4. Se adiciono a cada tubo 1mL de la
solucin de almidn y 2 mL de
solucin de salina. Y se colocaron
nuevamente los tubos a 37 C
durante 5 minutos.
5. Luego se le agrego a cada tubo de
ensayo 3 gotas de Lugol y se
mezclo por inversin y se formo
un complejo coloreado.
6. Finalmente se observo el grado
de intensidad del color azul en c/u
de los tubos y esta fue reportado
en su respectiva tabla. A su vez se
midi el porcentaje de la reaccin
empleando la formula %
Reaccin = 100 - % Intensidad
Para la evaluacin del cambio de
concentracin de la enzima sobre la
reaccin de hidrlisis de la amilosa , se
sigui el siguiente procedimiento:
1. Se preparo 7 soluciones de saliva
a diferentes concentraciones
(50%, 25%, 12,5%, 6,2%, 3,1% ,
1,6% y 0,8%) para esto uno de los
integrantes del grupo segrego 1ml
de saliva sin espuma y se le
adiciono 1ml de solucin salina y
se siguieron los siguientes pasos:
Para la solucion al 50%: se
tomo1mLsalivasindiluiry
se le adiciono 1 mL de
solucinsalina.
 Para la solucin al 25%: se
tomo1mLsaliva50%ysele
adiciono 1 mL de solucin
salina.
Para la solucin al12.5%: se
tomo 1 mL saliva 25% y se
adiciono 1 mL de solucin
salina.
Paralasolucin6.2%:setomo
1 mL saliva 12.5% y se le
adiciono 1 mL de solucin
salina.
Paralasolucinal3.1%:tse
tomo1mLsaliva6.2%ysele
adiciono 1 mL de solucin
salina.
Paralasolucinal 1.6%:se
tomo1mLsaliva3.1%ysele
adiciono 1 mL de solucin
salina.
Para la Solucin 0.8%: se
tomo 1mL saliva 1.6%y se
adiciono 1 mL de solucin
salina.
2. Se tomaron 7 tubos de ensayos; y
en cada uno de ellos se prepar
una solucin de 4 mL de buffer a
pH 7.5, 2 mL de solucin salina
0.85% y 4 mL de almidn al 0.5%.
3. Se depositaron los 7 tubos de
ensayo en el bao maria durante
5min a 37oC.
4. Se adiciono a cada tubo 1mL de
solucin de saliva en la
concentracin respectiva. Y se
colocaron nuevamente los tubos a
37 C durante 5 minutos.
5. Luego se le agrego a cada tubo de
ensayo 3 gotas de Lugol y se
mezclo por inversin y se formo
un complejo coloreado.
6. Finalmente se observo el grado
de intensidad del color azul en c/u
de los tubos y esta fue reportado
en su respectiva tabla. A su vez se
midi el porcentaje de la reaccin
empleando la formula %
Reaccin = 100 - % Intensidad
para la evaluacin del cambio de de
temperatura sobre la actividad de la
amilasa, se sigui el siguiente
procedimiento:
1. Se preparo Prepare 4 ambientes
de temperaturas diferentes:
Un bao de hielo (4 C)
Temperatura ambiente(24 oC)
Un bao termostatizado a 37
C.
Un bao de agua hirviendo
(94C)
2. Se preparo 8ml de solucin de
saliva al 25%, para esto uno de los
integrantes del grupo segrego 2ml
de saliva sin espuma y se llevo
hasta 8ml adicionando solucin
salina.
3. Se realizo un pretratamiento a la
enzima incubando en 4 tubos de
ensayo 1 mL de la solucin de
saliva y 4 ml de Buffer pH 7.5.
4. Se Llevo cada uno de los tubos a
las temperaturas anteriormente
mencionadas, durante 5 minutos.
5. Se dejo cada uno de los tubos a
temperatura ambiente y se le
agrego a cada tubo 2 mL de la
solucin salina y 4 mL de solucin
de almidn.
6. Se depositaron los tubos de
ensayo en el bao mara durante
5min a 37oC y se agitaron por
inversin.
7. Luego se le agrego a cada tubo de
ensayo 3 gotas de Lugol y se
mezclo por inversin y se formo
un complejo coloreado.
8. Finalmente se observo el grado
de intensidad del color azul en c/u
de los tubos y esta fue reportado
en su respectiva tabla. A su vez se
 midi el porcentaje de la reaccin Para el tubo 6, el pH era de 10 y el %
empleando la formula % Intensidad era de 45% y se realizaron los
Reaccin = 100 - % Intensidad (3) siguientes clculos:

Resultados % Reaccin = 100 45% = 55%

Los primeros resultados en obtener Para el tubo 7, el pH era de 11 y el %

fueron el % de intensidad de color azul
en los tubos tratados con pH diferente
para la evaluacin del cambio de pH
sobre la actividad de la enzima amilasa y
una vez obtenida esta fue posible calcular
el porcentaje de la reaccin empleando
la siguiente formula :
% Reaccin = 100 - % Intensidad
Para el tubo 1, el pH era de 3 y el %
Intensidad era de 85% y se realizaron los
siguientes clculos:
Intensidad era de 0% y se realizaron los
siguientes clculos:
% Reaccin = 100 0% = 100%
Para el tubo 8, el pH era de 7,5 y el %
Intensidad era de 100% y se realizaron
los siguientes clculos:
% Reaccin = 100 100 % = 0%
Estos resultados se encuentran reportados
en la tabla 2:

% Reaccin = 100 85% = 15% Tubo pH % %

Intensidad Reaccin
Para el tubo 2, el pH era de 4 y el % 1 3 85 15
Intensidad era de 90% y se realizaron los 2 4 90 10
siguientes clculos: 3 5 40 60
4 7,5 30 70
% Reaccin = 100 90 % = 10% 5 9 42 58
6 10 45 55
Para el tubo 3 ,el pH 5 y el % Intensidad 7 11 0 100
era de 40% y se realizaron los siguientes 8 7,5 100 0
clculos:
Tabla 2. Resultados de la evaluacin de
% Reaccin = 100 40 % = 60% cambio de pH sobre la actividad de la
amilasa
Para el tubo 4, el pH era de 7,5 y el %
Intensidad era de 30% y se realizaron los A su vez con los datos obtenidos fue
siguientes clculos: posible graficar % de reaccion vs el pH
como se ve en la grafica 1:
% Reaccin = 100 30 % = 70%

Para el tubo 5, el pH era de 9 y el %

Intensidad era de 42% y se realizaron los
siguientes clculos:

% Reaccin = 100 42 % = 58%

 Para el tubo 4, con solucin al 6,2% y el %
Intensidad era de 30% y se realizaron los
siguientes clculos:

% Reaccin = 100 30 % = 70%

Para el tubo 5, con solucin al 3,1% y el %

Intensidad era de 35% y se realizaron los
siguientes clculos:

% Reaccin = 100 35 % = 65%

Grafica 1. % reaccin vs pH Para el tubo 6, con solucin al 1,6% y el %

Los siguientes resultados en ser
obtenidos fueron el % de intensidad de
color azul en los tubos tratados con
solucin de saliva a diferentes
concentraciones para la evaluacin del
cambio de concentracin de la enzima
sobre la reaccin de hidrlisis de la
amilosa y una vez obtenida esta fue
posible calcular el porcentaje de la
reaccin empleando la siguiente formula:
% Reaccin = 100 - % Intensidad
Intensidad era de 40% y se realizaron los
siguientes clculos:
% Reaccin = 100 40% = 60%
Para el tubo 7, con solucin al 0,8% y el
% Intensidad era de 45% y se realizaron
los siguientes clculos:
% Reaccin = 100 45% = 55%
Estos resultados se encuentran reportados
en la tabla 3:

Para el tubo 1, con solucin al 50% y el % Tubo % % %

Intensidad era de 10% y se realizaron los Saliva Intensidad Reaccin
siguientes clculos: 1 50 10 90
2 25 15 85
% Reaccin = 100 10% = 90% 3 12,5 20 80
4 6,2 30 70
Para el tubo 2, con solucin al 25% y el % 5 3,1 35 65
Intensidad era de 15% y se realizaron los 6 1,6 40 60
siguientes clculos: 7 0,8 45 55

% Reaccin = 100 15 % = 85% Tabla 3. Resultados de la evaluacin del

Para el tubo 3 , con solucin al 12,5% y el
% Intensidad era de 20% y se realizaron
los siguientes clculos:
% Reaccin = 100 20 % = 80%
cambio de concentracin de la enzima
sobre la reaccin de hidrlisis de la
amilosa.
A su vez con los datos obtenidos fue
posible graficar % de reaccion vs
concentracin de la enzima como se ve
en la grafica 2:
 Para el tubo 4, a temperatura de 94 oC y el
% Intensidad era de 95% y se realizaron
los siguientes clculos:

% Reaccin = 100 95% = 5%

Estos resultados se encuentran

reportados en la tabla 4:

Tubo Temp % %
(oC) Intensidad Reaccin
1 4 40 60
2 24 35 65
Grafica 2. % de reaccin vs Concentracin de la 3 37 20 80
enzima 4 94 95 5

Finalmente los ltimos resultados en ser Tabla 4. Resultados de la evaluacin del

obtenidos fueron el % de intensidad de
color azul en los tubos tratados a
temperaturas diferentes para la
evaluacin del cambio de de temperatura
sobre la actividad de la amilasa y una vez
obtenida esta fue posible calcular el
porcentaje de la reaccin empleando la
siguiente formula:
cambio de de temperatura sobre la
actividad de la amilasa.
A su vez con los datos obtenidos fue
posible graficar % de reaccion vs Temp
como se ve en la grafica 3:

% Reaccin = 100 - % Intensidad

Para el tubo 1, a temperatura de 4 oC y el

% Intensidad era de 40% y se realizaron
los siguientes clculos:

% Reaccin = 100 40% = 60%

Para el tubo 2, a temperatura ambiente

24oC y el % Intensidad era de 35% y se
realizaron los siguientes clculos:
Grafica 3. % reaccin vs temperatura
% Reaccin = 100 35 % = 65%
Para el tubo 3 , a temperatura de 37 oC y
el % Intensidad era de 20% y se
realizaron los siguientes clculos:
% Reaccin = 100 20 % = 80%
Discusin
En esta prctica la saliva utilizada se tom
de uno de los integrantes del grupo, los
resultados pueden variar dependiendo
de cada persona ya que las caractersticas
y concentraciones de los compuestos
varan de una persona a otra. La saliva
para la prueba deba estar sin espuma ya
que esto afecta en la medicin del
volumen dando medidas errneas.
Evaluacin del cambio de pH sobre la
actividad de la enzima amilasa.
Para encontrar cual era el pH optimo al
cual la enzima alcanza su mayor
eficiencia, en 7 tubos de ensayo se
introdujo 1ml de saliva, se dej uno el No
8 sin agregar saliva para que sirviera de
patrn mostrando el comportamiento de
una solucin sin la accin de la enzima.
Cada tubo de ensayo contaba con una
solucin buffer diferente, el No 8 conto
con un pH de 7.5 para evitar la hidrolisis
del almidn causada por pHs muy cidos
o muy bsicos. Los tubos se incubaron
por 5 minutos en bao mara a 37C para pH los grupos ionizables de las cadenas
lograr que el pH del medio actuara sobre
la enzima.
Posteriormente se agreg el almidn y la
solucin salina, la solucin salina fue
agregada para solubilizar la enzima y
servir como un cofactor, la -amilasa
contiene en los restos aminoacdicos de
su sitio activo Cl -2 , y por ello, al agregar
NaCl, los aniones cloruro se unen al sitio
activo aumentando la actividad
enzimtica. Se incubaron nuevamente los
8 tubos de ensayo a bao mara por 5
minutos, dejando que la enzima alfa
amilasa salival actuara sobre el sustrato
de almidn presente en la solucin,
seguido a esto se agreg a cada tubo 3
gotas de lugol. Todas las soluciones
contenidas en los tubos excepto la del
tubo 7, tomaron una coloracin azul-
violeta en diferente tonalidad cada una,
indicando la presencia de un complejo
coloreado el cual nos da indicios de la
presencia de cadenas unidas de glucosa
formando hlices en la cuales tomos de
yodo pueden introducirse dando como
resultado una estructura capas de
refractar color azul-violeta, el tubo No 7
no presento coloracin ya que al estar en
un pH tan bsico seguramente la enzima
se desnaturalizo y no fue esta sino el
medio el que logro hidrolizar las cadenas
de amilosa del almidn impidiendo la
formacin del complejo coloreado por lo
que este tubo no se debe tener en
cuenta como prueba positiva de la accin
de la alfa amilasa.
En este experimento se pudo verificar
que la enzima alfa amilasa presenta
mayor actividad a pH bsicos; el tubo que
presento la menor coloracin indicando
mayor accin de la enzima alfa amilasa
fue el No 4 con pH de 7.5, el pH salival
fisiolgico normalmente esta entre los
rangos de 7 y 7,5.
La mayor actividad es debida a que a este
laterales de los aminocidos que
componen la enzima se encontraban con
una conformacin inica apropiada para
la accin de esta, pudiendo as mantener
una buena conformacin estructural y
cataltica.
Todas las aproximaciones de los
porcentajes en valor de la actividad de la
alfa amilasa segn la coloracin fueron
hechas por criterio humano por lo que
pudieron arrojar resultados subjetivos.
Evaluacin del cambio de concentracin
de la enzima sobre la reaccin de
hidrolisis de la amilosa
Para comprobar que a mayor
concentracin de enzima hay mayor
degradacin del sustrato de almidn, se
utilizaron 7 tubos de ensayo en los cuales
se introdujeron concentraciones
diferentes de enzima, cada concentracin
de enzima fue la mitad de la anterior,
luego se agreg solucin salina, almidn
y un buffer a pH 7,5 y se incubaron
durante 5 minutos a 37C dejando as
que la enzima actuara sobre el almidn,
luego se agregaron 3 gotas de lugol a
cada tuvo para formar el complejo
coloreado y comparar la tonalidad que
tomaba cada tuvo con esto se logr
determinar que a mayor concentracin
de enzima mayor era el porcentaje de
sustrato procesado por la alfa amilasa.
Evaluacin del cambio de temperatura
sobre la actividad de la amilasa
Para encontrar la temperatura optima a
la cual al enzima alfa amilasa acta a
mayor capacidad, en esta prctica se
prepararon 4 ambientes cada uno a una
temperatura diferente 4C, 24C, 37C y
94C en cada uno de estos ambientes se
incubo un tubo con una concentracin de
25% de saliva y solucin buffer,
incubando cada tubo durante 5 minutos,
ocasionando que las temperaturas de los
distintos ambientes acten sobre la
enzima salival, luego se agreg a cada
tubo solucin salina y solucin de
almidn, se llevaron a bao mara
durante 5 minutos haciendo as que la
alfa amilasa actu sobre el almidn,
finalmente se agregaron 3 gotas de lugol
a cada tubo, al formarse el complejo
coloreado se observ que el tubo No 4
correspondiente al ambiente con
temperatura de 94C presentaba una
coloracin mucho ms fuerte que los
dems tubos, esto puedo ser debido a
que la alta temperatura desnaturalizo la
enzima alfa amilasa daando su
conformacin impidiendo
posteriormente su actividad sobre el
sustrato, por el contrario en el tubo No 1
con temperatura de 4C tambin se
esperaba una disminucin significativa en
la actividad enzimtica pero se
obtuvieron resultados del 60% de
reaccin por lo que podemos concluir
que las bajas temperaturas solo afectan
la cintica enzimtica y el nmero de
colisiones que se pueden presentar entre
molculas mas no su conformacin
estructural y funcional, en los tubos 2 y 3
con temperaturas de 24C y 37C se
evidencio la mayor actividad de la enzima
del 65% para el No 2 y 80% para el No 3,
siendo el tubo No 3 a temperatura de
37C el que presento la mayor actividad
enzimtica. El rango de temperatura
fisiolgica humana normal esta entre los
36C y los 37,5C por lo que la actividad
de la alfa amilasa siempre se ve
beneficiada en el organismo.
Conclusiones
Las enzimas son biomolculas
sensibles a cambios de
temperatura y pH, estos son
capaces de afectar su actividad
metablica.
El porcentaje de reaccin de una
enzima sobre una misma cantidad
de sustrato es directamente
proporcional a la concentracin
de esta que se halle en la
solucin.
La enzima alfa amilasa tiene un
pH ptimo de 7.5 y una
temperatura optima de 37C, a
estas condiciones la enzima
presenta mayor actividad
catablica.
La enzima alfa amilasa presenta
mayor actividad catablica a pHs
bsicos.
Las altas temperaturas son
capaces de desnaturalizar y
cambiar la conformacin
estructural de las protenas
causando que cese su actividad,
las bajas temperaturas tienen
efectos sobre la entropa
causando que las colisiones
enzima sustrato disminuyan.
Los organismos vivos deben
mantener condiciones de
homeostasis para el buen
funcionamiento de sus enzimas y
dems componentes celulares,
 estas condiciones de homeostasis
en humanos oscilan entre pH 7-
7.5 y temperatura 36C-37.5C.
Referencias
1. Voet, D., & Voet, J.
(1995). Biochemistry (2nd
ed.). New York: J. Wiley &
Sons
1. Efecto de la variacion de pH
sobre la actividad catalitica
(n.d.). Retrieved March 31,
2015, from
http://laguna.fmedic.unam.m
x/~evazquez/0403/velocidad
reaccion enzimatica4.html
2. Tomado de la guia de
laboratorio de la asignatura de
bioqumica, Prctica No.3
Actividad cataltica de la
amilasa salival.
3. Factores Que Modifican La
Actividad De Las Enzimas:
Efecto De La Concentracin De
Sustrato Y De Un Inhibidor.
(n.d.). Retrieved March 31,
2015, from
https://bioquimexperimental.
files.wordpress.com/2009/08/
seccic3b3n3-sustrato-e-
inhibidor-final.pdf
4. Regulacin de la actividad
enzimtica (n.d). Retrieved
March 4, 2015, from
http://www.ehu.eus/biomolec
ulas/enzimas/enz22.htm

Anexos:

Cuestionario Gua de laboratorio de bioqumica Practica No.3 Actividad

cataltica de la amilasa salival
1. Para el procedimiento 4.1 complete la tabla de datos y resultados de %
reaccin y pH como se indica en la tabla 4.1. R/ Esta tabla se puede encontrar
en la parte de resultados.

Conteste las siguientes preguntas:

Realice una grfica de % Reaccin vs pH.

Respuesta:

Esta grfica se puede encontrar en la parte de resultados.

De una explicacin de cmo el pH afecta la actividad cataltica de la

enzima, Cul es el pH ptimo obtenido en el experimento?

Respuesta:
 El pH optimo al cual trabaja la enzima alfa amilasa obtenido en el
experimento es fue de 7.5, esto es debido a que los grupos
ionizables de las cadenas laterales de los aminocidos que la
componen deben estar en la forma inica apropiada para la
conformacin del sitio activo, acoplar los sustratos o catalizar la
reaccin.

Cul ser a funcionalidad del tubo No 8 durante la evaluacin de la

actividad cataltica de la enzima, es un control positivo o negativo de
la reaccin de hidrlisis de amilosa?

Respuesta:
En la evaluacin de la actividad cataltica de la enzima alfa amilasa el
tubo No 8, es un control negativo ya que su color azul oscuro nos da
el patrn de actividad 0% de la enzima sobre el sustrato, al estar la
solucin coloreada nos da indicio de que el complejo de almidn-
lugol no est desnaturalizado, se hizo este patrn a pH de 7,5 ya que
a un pH ms alto o ms bajo cabe la posibilidad como en el tubo No
7 de que las condiciones del medio desnaturalicen y rompan los
enlaces de la amilosa.

Cul es la funcin de la solucin de NaCl 0.85 % en los

experimentos realizados?

Respuesta:
Las enzima alfa amilasa utiliza como cofactor el ion Cl de la solucin
salina, la -amilasa contiene en los restos aminoacdicos de su sitio
activo Cl -2, y por ello, al agregar NaCl, los aniones cloruro se unen al
sitio activo aumentando la actividad enzimtica, esta tambin es una
protena globular por lo que su solubilidad aumenta al estar en
soluciones salinas.

Explique a qu se debe la formacin del color azul o marrn en

algunos de los tubos, consulte la estructura del compuesto
coloreado.

Respuesta:
 La coloracin azul se debe a que las molculas de yodo se
introducen dentro de las hlices formadas por las cadenas de
glucosa dando como resultado un complejo que es capaz de
refractar luz azul o violeta. Esta reaccin es el resultado de la
formacin de cadenas de poliyoduro a partir de la reaccin del
almidn con el yodo presente en la solucin del Lugol. La amilosa
presente en el almidn forma hlices donde se juntan las molculas
de yodo, formando un color azul oscuro. La amilopectina presente
en el almidn por tener cadena ramificada, forma hlices mucho
ms cortas, y las molculas de yodo son incapaces de juntarse,
obtenindose un color entre naranja y amarillo. Al romperse
o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de
carbohidrato, el color azul-violeta desaparece. Por lo que lo se
puede usar como un indicador de la accin de la alfa amilasa.

2. Para el procedimiento 4.2, elabore una tabla de datos y resultados de % de

Reaccin y concentracin de enzima, como se indica en la tabla del punto 4.2.
Conteste las siguientes preguntas:

Realice una grfica de % Reaccin vs [Enzima].

Respuesta:

Esta grfica se puede encontrar en la parte de resultados.

 Cmo se interpretan los resultados en trminos de la reaccin de
hidrlisis de amilosa y de la concentracin de amilasa? Cul
concentracin de la enzima fue la de mayor actividad?

Respuesta:
Los resultados obtenidos en la prctica nos indican que a una mayor
concentracin de enzima hay un mayor porcentaje de reaccin si la
cantidad de sustrato es la misma, esto es causado ya que al haber mayor
cantidad de enzimas presentes en la solucin habrn ms molculas
capaces de metabolizar el sustrato, entonces al aumentar la
concentracin de enzima aumentamos la velocidad y el porcentaje de
reaccin, por esta razn a la concentracin de 50% de saliva en el tubo
No 1 de la evaluacin del cambio de concentracin se obtuvo el mayor
porcentaje de reaccin.

3. Para el procedimiento 4.3 elabore una tabla de datos y resultados como se

indica en el punto
Realice una grfica de % Reaccin vs Temperatura.

Respuesta:

Esta grfica se puede encontrar en la parte de resultados.

En cul temperatura la actividad de la enzima fue mxima? y En cul

fue mnima?, Cmo se puede explicar el comportamiento de la enzima
con respecto a los cambios de temperatura?

Respuesta:
La actividad mxima de la enzima se dio a la temperatura de 37C a esta
temperatura la conformacin del sitio activo y estructural de la enzima
son las adecuadas para el metabolismo del almidn; su actividad
mnima se dio a 94C esto es debido a que a altas temperaturas la
enzima se desnaturaliza, tambin se obtuvo una disminucin en el
porcentaje de reaccin a una temperatura de 4C ya que a bajas
temperaturas disminuyen el nmero de colisiones moleculares en la
solucin necesarias para que se lleve a cabo la reaccin enzimtica.