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INDICE DE TABLAS.
INDICE DE FIGURAS.
Imagen1. Instrucciones de extraccin de muestra con hisopo. Fuente: Instrucciones del kit de
18
prueba SD BIO-LINE Influenza Antigen.
Imagen 2. Instrucciones de extraccin de muestra por aspiracin. Fuente: Instrucciones del kit de
18
prueba SD BIO-LINE Influenza Antigen.
Imagen 3. Interpretacin de los resultados. Fuente: Instrucciones del kit de prueba SD BIO-LINE
19
Influenza Antigen.
Imagen 4. Instrucciones de uso del kit ROTA-ADENO. Fuente: Instructivo del Kit de
22
Diagnstico.
Imagen 5. Interpretacin de resultados del kit ROTA-ADENO. Fuente: Instructivo del Kit de 22
Diagnstico.
Imagen 6. Instrucciones para colocar la muestra de suero o plasma en el pozo de muestra. Fuente:
27
Instructivo del Kit diagnstico de SD BIOLINE HIV-1/2 3.0
Imagen 7. Instrucciones para colocar la muestra de sangre total en el pozo de muestra. Fuente:
Instructivo del Kit diagnstico de SD BIOLINE HIV-1/2 3.0
27
Imagen 8. Interpretacin de resultados. Fuente: Instructivo del Kit diagnstico de SD BIOLINE HIV-
1/2 3.0
28
Imagen 9. Forma de color la muestra de suero o plasma. Fuente: Instructivo del Kit diagnstico de
SD BIOLINE HBsAg
32
Imagen 10. Forma de colocar la muestra de sangre total. Fuente: Instructivo del Kit diagnstico de
SD BIOLINE HBsAg.
32
Imagen 11. Interpretacin de resultados. Fuente: Instructivo del Kit diagnstico de SD BIOLINE
HBsAg.
32
Imagen 12. Instrucciones para colocar la muestra. Fuente: ONE Step Dengue IgG/IgM Antibody
Test.
36
Imagen 13. Interpretacin de resultados. Fuente: ONE Step Dengue IgG/IgM Antibody Test 36
Para que las prcticas se desarrollen adecuadamente y con xito se deben seguir
las siguientes indicaciones:
5. El alumno debe traer bata blanca, mantenerla siempre abotonada dentro del
laboratorio. Al final de cada prctica, debe retirarla y guardar.
6. Sobre las mesas de trabajo no se debe poner libros, cuadernos, mochilas; las
mochilas tienen su espacio y los libros o cuadernos pueden colocarlos en el rea
de arriba de las mismas mesas.
12. El alumno debe anotar las observaciones de cada una de las prcticas, y
debe completar y/o contestar las preguntas segn corresponda.
13. Una vez concluida la prctica, los integrantes del equipo se harn
responsables de limpiar y desinfectar el rea de trabajo y adicionalmente deben
de regresar el material de laboratorio que se le haya proporcionado para realizar
la prctica y revisar que los bancos estn arriba de las mesas.
Una vez que se obtiene la muestra para la deteccin de virus, lo ideal es que se procese
de inmediato.
Tabla 2. Tcnicas de diagnstico usadas en virologa clnica. (Luis Fidel Avendao, 2011)
4.- Cules son las caractersticas y funciones del medio de transporte universal viral
transport.?
5.- Actualmente cuales son los mtodos ms utilizados para la deteccin de infecciones
virales?
6.- Menciona para cada sitio anatmico y enfermedad que se indican a continuacin:
Cul es la muestra de ideal para la deteccin de virus? y Cules son los virus
patgenos habituales?
7.- Menciona algunos ejemplos de tcnicas que utilizan el mtodo directo y el mtodo
indirecto.
CONCLUSIONES.
ACTIVIDADES.
1.- Menciona 3 ejemplos de virus que se puedan manipular en laboratorio de acuerdo con
el nivel de bioseguridad requerido.
2.- Escribe tu punto de vista del porqu es importante conocer los niveles de bioseguridad
en los laboratorios.
Los virus infectan a seres humanos, animales inferiores, insectos, plantas, bacterias y
hongos. Su clasificacin y su nomenclatura son estandarizadas por el International
Committee on Taxonomy of Viruses. Los virus igual que las bacterias, se dividen en
gnero y especies. Los virus de importancia mdica para los seres humanos comprenden
6 familias de virus de DNA y 14 familias de virus de RNA.4
Los virus son unos parsitos intracelulares obligados y para replicarse dependen de la
maquinaria bioqumica de la clula husped. La replicacin de los virus ocurre ms por
ensamblaje de sus componentes individuales que por fisin binaria. 3
Los Virus
Propiedades Clasificacin
Son agentes filtrables Estructura: tamao, morfologa y cido
Son parsitos intracelulares nucleico.
obligados. Caractersticas bioqumicas: estructura y
No son capaces de producir energa modo de replicacin.
independientemente de la clula Enfermedades: virus de la encefalitis y
husped. virus de la hepatitis.
Los genomas vricos pueden ser de Modo de transmisin: insectos, aerosoles,
ARN o de ADN, pero no de ambos. contacto directo, entre otros.
Los virus poseen una morfologa de Clula husped: animal (ser humano,
cpside sin envoltura o con envoltura. ratn, pjaro), plantas, bacterias.
Los componentes de los virus se
ensamblan y no se replican.
Tabla 4. Propiedades y clasificacin de los virus, (Murray 2013)
El genoma de los virus est formado por ARN o por ADN. El ADN puede ser
monocatenario o bicatenario, lineal o circular. El ARN puede ser en sentido positivo (+)
(como el ARN mensajero [ARMm]) o de sentido negativo (-) (anlogo al negativo de una
fotografa), de doble cadena (+/-) o de doble sentido (conteniendo regiones de ARN + y
unidas extremo con extremo). As mismo, el genoma del ARN puede estar segmentado o
en piezas (cada cuales codifica un gen especfico). Existe otro grupo que requiere tanto
de ADN como de ARN en diferentes fases de su ciclo de replicacin y en este grupo se
incluye a los retrovirus.
1.- Escribe las 6 familias de virus de ADN y las 14 familias de ARN asociadas a las
enfermedades humanas.
Conclusiones.
Las IRA se clasifican en altas o bajas, segn afecten al tracto respiratorio superior
inferior, las altas afectan los rganos ubicados por encima de la laringe y los cuadros
clnicos pueden ser rinitis, laringitis supragltica, faringitis, sinusitis y otitis. Las IRA bajas
afectan los rganos ubicados por debajo de la laringe y los cuadros son: laringitis
subgltica, laringotraqueobronquitis, bronquitis, bronquiolitis y neumona. 3,4
Materiales.
Muestra.
Hisopado farngeo
Hisopado nasofarngeo
Aspirado nasofarngeo
Hisopado nasal
Aspirado nasal.
Metodologa de trabajo.
1.- Todas las muestras con hisopo sin un medio de transporte debern extraerse de
la siguiente manera:
Imagen1. Instrucciones de extraccin de muestra con hisopo. Fuente: Instrucciones del kit de prueba SD
BIO-LINE Influenza Antigen.
Imagen 3. Interpretacin de los resultados. Fuente: Instrucciones del kit de prueba SD BIO-LINE Influenza
Antigen.
ACTIVIDADES.
2.- Cules son los datos epidemiolgicos actuales del virus de la influenza?
Conclusiones.
Las enfermedades diarreicas son conocidas desde la antigedad como una de las causas
de morbi-mortalidad ms frecuentes en humanos en todo el mundo. La Organizacin
Mundial de la Salud, reporta que las diarreas son responsables del 15 al 34% del total de
las muertes reportadas en los pases en desarrollo, teniendo su mayor impacto en nios
menores de 5 de edad. El espectro clnico de la enfermedad diarreica es muy amplio,
abarcando desde infecciones asintomticas hasta deshidratacin grave y muerte. 3
Los virus identificados, denominados virus entricos, incluyen adems del virus Norwalk
(hoy conocido como norovirus) y rotavirus, a coronavirus, calicivirus, astrovirus y
parvovirus. Posteriormente se agregaron picornavirus, torovirus, picobirnavirus y el ms
reciente es el bocavirus, sin embargo hasta el ao 2010 son cuatro virus entricos
universalmente reconocidos por su relevancia epidemiolgica: rotavirus, calicivirus
humanos (norovirus), astrovirus y adenovirus entricos.4
Tabla 5. Caracteristicas de las enfermedades diarreicas producidas por virus. (Guadalupe Carballal,
2014)
Materiales.
Muestras.
2.- Se debe desenroscar la cubierta y con ayuda del palito se toma una muestra de las
heces recogidas, si la muestra es lquida tomar 150l de la misma con un pipeta e
introducir la muestra en el tubo para dilucin.
3.- Cerrar el tubo que contiene la muestra y el diluyente. Agitar para facilitar la dispersin
de la muestra. No olvidar rotular el diluyente.
Facultad de QFB. Pgina 21
Preparacin.
Imagen 4. Instrucciones de uso del kit ROTA-ADENO. Fuente: Instructivo del Kit de Diagnstico.
Imagen 5. Interpretacin de resultados del kit ROTA-ADENO. Fuente: Instructivo del Kit de
Diagnstico.
ACTIVIDADES.
Conclusiones.
Actualmente el VIH, es agrupado dentro del gnero Lentivirus, hasta el momento han sido
descritos dos tipos del virus de la inmunodeficiencia humana, el VIH-1 y el VIH-2. Ambos
se asocian con el SIDA, pero las infecciones por el VIH-1 se encuentran ampliamente
distribuidas y el VIH-2 se encuentra en la regin de frica Occidental, al sur del Sahara,
teniendo solo casos espordicos en el resto del mundo. 3
El curso de la infeccin viral por el VIH-1 tiene gran variacin inter-individual, desde
meses a ms de 10 aos, el curso clnico de la infeccin se divide en tres fases: 1)
infeccin aguda primaria; 2) perodo de latencia clnica o fase crnica de la infeccin; 3)
fase sintomtica del SIDA.
En la infeccin aguda primaria, una que el VIH-1 atraves la piel y mucosas, las primeras
clulas blanco que encuentran son las clulas dendrticas de la mucosa epitelial, estas
van a transportar los virus a la regin ganglionar. En el reclutamiento de las clulas T
CD4+ activadas, que simultneamente y potencialmente son blancos de los virus,
teniendo diseminacin local. Surgen una serie de eventos virolgicos e inmunolgicos que
reflejan la extensin de la diseminacin viral. El periodo de la infeccin primaria abarca de
4 a 8 semanas. Durante las primeras semanas no se detectan anticuerpos especficos
contra el VIH-1 (periodo de ventana). Posteriormente se hace la deteccin de la respuesta
Materiales.
Muestras.
Suero o plasma
Sangre total.
Metodologa de trabajo.
Imagen 8. Interpretacin de resultados. Fuente: Instructivo del Kit diagnstico de SD BIOLINE HIV-1/2 3.0
4.- Realiza el esquema del virus de inmunodeficiencia humana de tipo 1 (HIV-1), con
todos sus componentes virales.
7.- Menciona cules son las tcnicas que se pueden utilizar para el diagnstico
confirmatorio de VIH y escribe una pequea descripcin de las tcnicas?
Conclusiones.
Los virus del Hepatitis son muchos, pertencen a varias familias y causan enfermedades
en los humanos. Se pueden transmitir de distinta forma y causar enfermedades con
distinta gravedad, la cual resulta de la destruccin de las clulas del hgado por la
replicacin viral en este rgano blanco. En esta practica se raelizara la determinacin del
virus hepatitis B, la envoltura del HBV es una estructura macromolecular compleja
constituida casi exclusivamente por lpidos deivados de la membrana interna de las
clulas afectadas, contiene carbohidratos y tres glicoprotenas virales relacionadas. La
protena S, tambin conocida como antgeno de superficie del HBV (HBsAg) es una
protena pequea de 226 aa y es la ms abundante de las tres cas en un 70%, de ah su
importancia como antgeno principal, tambin contiene una fosfoprotena de 22 kDa que
constituyen el antgeno del core o HBcAg, asociada a la nucleocpside, donde se localiza
el DNA polimerasa viral. Su DNA es carcterstico e inusual, ya que se adopta una
configuracin circular laxa, es parcialmente doble catenario y el ms pequeo de los virus
de DNA. Su doble asimetria es lo que tambin lo distingue de la familia Hepadnaviridae 4,5
De los mtodos que existen para la deteccin, estn las pruebas rpidas como la SD
BIOLINE HBsAg, el cual es un anlisis inmuno-cromatogrfico de un solo paso diseado
para la determinacin cualitativa de HBsAg en suero o plasma humano. El Casete de
prueba contiene una tira de membrana que est pre-impregnada con anticuerpos de
Materiales.
Muestras.
Suero o plasma
Sangre total.
Metodologa de trabajo.
Imagen 10. Forma de colocar la muestra de sangre total. Fuente: Instructivo del Kit diagnstico de SD
BIOLINE HBsAg
INTERPRETACIN DE RESULTADOS.
Imagen 11. Interpretacin de resultados. Fuente: Instructivo del Kit diagnstico de SD BIOLINE HBsAg
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ACTIVIDADES.
2 Cules son los datos epidemiolgicos actuales por el virus del hepatitis B?
5 Cules son las tcnicas ms utilizadas en la actualidad para el diagnstico del virus de
la hepatitis B?
Conclusiones.
El dengue posee una extensin geogrfica en zonas urbanas de los pases tropicales
desarrollados, hoy en da, el dengue es considerado como una de las enfermedades
virales transmitidas ms importantes en humanos en trminos de morbilidad y
mortalidad.6 En Mxico, una gran parte de la poblacin se encuentra expuesta a la
infeccin, sobre todo en las zonas costeras, tanto del Golfo de Mxico como en el Ocano
Pacfico. Segn los datos epidemiolgicos al 4 de enero de 2016 de los casos de Fiebre
por Dengue y Fiebre Hemorrgica por Dengue, se registr que para la Fiebre por Dengue
casos confirmados fue de 21,201 y de Fiebre Hemorrgica por Dengue de casos
confirmados fue de 5,464, teniendo que el 50% de los casos confirmados corresponden a
Veracruz, Sonora, Jalisco, Guerrero y Michoacn. 13
Varios Flavivirus son transmitidos a los humanos por medio de mosquitos (vectores),
como en el caso del dengue, la fiebre amarilla, entre otros. La Fiebre del Dengue y el
Dengue hemorrgico (DH) son enfermedades febriles agudas, causadas por 4 tipos de
virus: DEN-1, DEN-2, DEN-3 o DEN-4, relacionados con los serotipos del gnero
Flavivirus de la familia Flaviviridae. En general, los Flavivirus poseen una estructura
uniforme, la envoltura del virion es ligeramente esfrica y el nucleocpside contiene al
virion. La estructura de la partcula viral infecciosa del dengue es diferente; la superficie
viral es inusualmente lisa y la membrana est completamente lisa y la membrana est
cubierta por la protena E. Su genoma est compuesto por RNA de cadena sencilla lineal,
de sentido positivo, de 10703 nucletidos y de alta variabilidad genmica. El material
gentico se encuentra protegido por una nucleocpside circular de simetra polidrica, el
dimetro del ncleo es de 25-30nm. Entre la envoltura y el nucleocpside se encuentra
una bicapa lpidica, cuyos lpidos se derivan de la membrana celular del hospedero.
El virus se transmite a los humanos por el mosquito hembra denominado Aedes aegypti,
especie diurna, con mayor actividad al amanecer y durante la puesta de sol. Vive y
deposita sus huevos en los alrededores e interior de las casas, as como recipientes que
se utilizan para el almacenamiento de agua. 6
Las infecciones por Fiebre del Dengue o infecciones primarias, es el tipo ms comn de
las enfermedades del dengue. Se asocia con fiebre media o alta, dolor de cabeza, dolor
muscular y erupcin cutnea. En cambio la Fiebre del Dengue Hemorrgico o infeccin
secundaria se presenta con fiebre alta y en muchos casos con eventos de hemorrgicos e
insuficiencia circulatoria. Los estudios de serologa han demostrado que durante la
Existen diferentes pruebas rpidas para la deteccin de los anticuerpos, el One Step
Dengue IgG/IgM Antibody test, es una de ellas y es un ensayo Inmunocromatogrfico de
captura de anticuerpos para la deteccin simultnea y diferenciacin de anticuerpos IgG e
IgM para el virus del dengue en muestras de suero humano, plasma y/o sangre entera,
antgenos especficos del virus del Dengue se conjugan con oro coloidal y se depositan en
la almohadilla de conjugado. Una combinacin nica de anticuerpos IgG e IgM anti-
humano se inmoviliza en la zona de prueba (T1 Y T2) de la membrana de nitrocelulosa,
como dos lneas de prueba individuales. La lnea IgG (T1) en la ventana de prueba ms
cerca del pozo de muestra y la lnea de IgM (T2). Cuando se aade la muestra se
rehidrata el conjugado de oro-antgeno. Si anticuerpos de IgG y/o IgM de Dengue estn
presentes en la muestra, interactan con el antgeno conjugado de oro. El complejo
antgeno anticuerpo-oro va a migrar hacia la zona de prueba (T1 y T2), donde ser
capturado por el IgG anti-humano (T1) y/o IgM anti-humano (T2) relevantes. Formando
una lnea visible rosa, indicando un resultado positivo. Si los anticuerpos de dengue estn
ausentes en la muestra, no aparecer la lnea rosa en la zona de prueba, teniendo un
resultado negativo. Como prueba de control interno debe solo aparecer la lnea en la zona
(C) despus de haber trascurrido el tiempo de lectura.14
Materiales.
Muestras.
Suero o plasma
Sangre total.
Imagen 12. Instrucciones para colocar la muestra Fuente: ONE Step Dengue IgG/IgM Antibody Test.
INTERPRETACIN DE RESULTADOS.
ACTIVIDADES.
Conclusiones.