Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al

medio base. Por esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un
importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate
es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos
ymeningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos otros microorganismos
exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizs en uno de los medios ms enriquecidos
si aadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas,
denominadas de forma diferente segn las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.)
contienen ms de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades
nutritivas extraordinarias. Por adicin de uno o varios antibiticos pueden lograrse medios
inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo
clsico es el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa
que un agar chocolate enriquecido al cual se ha aadido unamezcla de tres antibiticos
especficos que impedirn el crecimiento del resto de la flora acompaante.

La sangre de carnero es la ms adecuada para la preparacin de Agar Sangre y Agar Chocolate.

Comnmente se utiliza la sangre de carnero entre 5 - 10% como un medio de enriquecimiento
nutritivo en la preparacin de medios de cultivo. ste es utilizado principalmente para el
crecimiento, identificacin y observacin de las reacciones hemolticas causadas por algunas
bacterias con importancia clnica.

El Agar chocolate lleva Hemoglobina que aporta al medio un importante elemento para
el crecimiento: el factor X o Hemina termoestable.

Otros factores, en particular el factor V (dicotn-adenina nucletido) termosensible, que

no se encuentran en el Agar chocolate pueden aportarse en una mezcla qumicamente
definida: el PolyViteX.

El Agar chocolate con PolyViteX permite el cultivo de la mayor parte de los grmenes
encontrados en patologa humana o veterinaria.

La siembra de lquidos cefalorraqudeos, pus, resiembra de hemocultivos, etc., es

favorable en este medio, pero est particularmente indicado para aislamiento de las
Neisserias patgenas y de los Haemophilus.

Aislamiento e identificacin de Haemophilus

Los microorganismos del gnero Haemophilus se cultivan en Agar chocolate con

PolyVitex. Como en el caso del gonococo el cultivo es rpido y abundante sobre todo
en atmsfera rica en C02. Estos grmenes encuentran en este medio los factores X y V
necesarios para su crecimiento. El diagnstico de la serie al respecto puede conducirse
de la manera siguiente:

Si se siembra en cuatro medios diferentes:

- Agar Trypcase-soja que no contenga ni factor V, ni factor X

- Agar Trypcase-soja con PolyViteX (factor V)
- Agar chocolate (factor X)
- Agar chocolate con PolyVitex (factores X y V)

El recuadro que se da a continuacin indica los resultados obtenidos en estas

condiciones con los principales Haemophilus:

H. parainfluenzae crece en Trypcase soja con PolyViteX (V) y en chocolate con

PolyViteX (V yX)
H. aphrophilus crece Chocolate (X) y en chocolate con PolyViteX (V yX)
H. influenzae, H. haemolyticus, H. aegiptius crecen en los 4 medios

otras pruebas que ayudan a diferenciarlos:

H. aegiptius aglutina hematies humanos (prueba en porta), H. influenzae no los

aglutina
H. haemolyticus da hemlisis en Agar con 5% de sangre de caballo
Debido a que Haemophilus influenzae no crece en los medios rutinarios para
efectuar antibiograma, se necesita preparar un medio especial que adems de la
base de Mueller-Hinton contiene 15ug/mL de beta-NAD, 15ug/mL de hematina
bobina, 5mg/mL de extracto de levadura y un pH de 7.2 a 7.4. De acuerdo con el
Comit Nacional de Estndares en Laboratorio Clnico (NCCLS-USA) el Agar
chocolate no debe usarse para efectuar antibiograma de Haemophilus.

Agar Chocolate Thayer Martin

Medio enriquecido preparado con un medio base tal como agar tripticasa (TSA) o agar
infusin cerebro corazn (BHIA) suplementado con sangre animal desfibrinada y calentada a
80C durante 10 min. A veces el calentamiento excesivo destruye el factor V (NAD), por lo que
se suele adicionar este factor. Es un medio adecuado para el cultivo de N. gonorrhoeae y varias
especies de Haemophilus, entre otras bacterias.

Recuento del inoculo bacteriano utilizado

El recuento del inculo se realiza con el fin de determinar la exactitud de la concentracin de

bacterias de la suspensin utilizada en la siembra.

Extienda el inculo en cada caja de agar con un bastn de vidrio o con asa bacteriolgica, tenga
cuidado de no tocar los bordes de la caja, ya que es difcil contar las colonias que crecen en los
bordes. Incube las cajas en 5% de CO2, de 18-20 horas a 35C.

Para realizar la lectura despus del perodo de incubacin, cuente las colonias aisladas en cada
una de las placas, actividad que puede realizar con ayuda de un cuenta-colonias. Si alguna de las
placas presenta demasiadas colonias, informe el recuento como "demasiadas para contar".

Para calcular la cantidad de bacterias en cada placa, multiplique el nmero de colonias en cada
una por el factor de dilucin y por la inversa del volumen de inoculo utilizado y expresar el
conteo como UFC/ml.

# UFC / ml = # de colonias * factor de dilucin

ml sembrados en la placa