UNIVERSIDAD DE CRDOBA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA N 3

ALGUNAS PROPIEDADES DE LAS PROTEINAS

OBJETIVOS:
Comprobar la desnaturalizacin y coagulacin de protenas..
Realizar ensayos de precipitacin de protenas al mezclarlas con sales de metales
pesados, o con reactivos cidicos.
Verificar la importancia de la reaccin de Biuret para el reconocimiento de
protenas.

TEORIA RELACIONADA

Las protenas son un grupo de biomolculas caracterizados por su gran variedad

estructural y enorme diversidad de funciones biolgicas. Las protenas de cada ser vivo,
animal o vegetal son especficas ya que estn codificadas por su genoma. A pesar de
que desempean la misma funcin, las protenas presentan ligeras variaciones
estructurales en las diferentes especies. Qumicamente pueden diferenciarse en
protenas simples, constituidas nicamente por aminocidos y protenas complejas que
contienen material adicional como carbohidratos, lpidos o cidos nucleicos.

Las protenas pueden variar sus caractersticas de solubilidad mediante alteraciones en

el medio acuoso en el que se hallen disueltas. Cuando una protena se disuelve en agua,
las fuerzas hidroflicas, electrostticas y los puentes de hidrgeno, participan
positivamente, aportando un mayor grado de solubilidad entre ms efectivas sean estas
interacciones. Sin embargo factores fsicos como el calor, radiaciones, variaciones en
los valores de pH y la presencia de solventes que afecten estas interacciones, pueden
producir serias alteraciones en la solubilidad. Algunas veces pueden ocurrir cambios en
la estructura nativa de la protena y se considera que en estas condiciones la protena se
ha desnaturalizado. El fenmeno fsico observado en este caso, es la formacin de un
cogulo o proceso de coagulacin.

MATERIALES Y REACTIVOS

10 tubos de ensayo
1 Pinza para tubo de ensayo -soluciones:Albmina, casena y gelatina
3 Pipetas de 5 ml -Acido tnico al 10%
1 Frasco lavador - Sulfato cprico al 2%
1Gotero. - Ferriacianuro de potasio acuoso.
1 Estufa o calentador - Acetato de plomo al 2 %
1 Beaker de 400 ml - Cloruro de mercurio al 2%
1 Gradilla - Reactivo de Biuret
1 termmetro
cido Pcrico saturado
cido Actico 10%
Buffer pH 4.7
.
PROCEDIMIENTO:

I. Preparacin de solucines de protenas. solucin de albmina: Se prepara

mezclando lentamente una clara de huevo con aproximadamente 100ml de agua, la
mezcla se filtra sobre gasa para eliminar la mayor parte de la espuma. casena: se toma
1 g de caseina y se le agrega lentamente 100 ml de NaOH 0.5 M . con agitacin
continua, reposar la mezcla durante 5 min y de haber espuma se filtra sobre gasa.
Gelatina: se disuelve 1 g de gelatina en 100ml de solucion salina al 1 %.

III. Determinacin del punto de coagulacin de una protena y demostracin de la

desnaturalizacin:

Rotule 2 tubos de ensayo grandes con las letras A y B, agregue a cada uno 4.5 ml de
solucin de albmina de huevo. Agregue 0.5 ml de Buffer pH 4.7 al tubo A.
Coloque los tubos en un bao de Mara y aumente la temperatura en forma gradual
anotando cualquier cambio en los tubos y la temperatura a que ocurre. Contine
calentando hasta la ebullicin del agua y prolongue el calentamiento por 5 minutos mas,
separe el tubo A, djelo enfriar y agregue 4 ml de buffer pH 4.7, llvelos al bao de
agua caliente hasta ebullicin. Determine si el precipitado que se ha formado, redisuelve
despus de enfriar o diluir con agua.
El punto isoelctrico de la albmina de huevo esta alrededor de pH 4.7; aqu la
coagulacin por calentamiento ocurre mas rpidamente a pH diferente; la
desnaturalizacin ocurre primero despus de calentar; entonces se presenta floculacin,
cuando el punto isoelectrico se restablece, el calentamiento da origen a que la
floculacin se transforme en coagulacin.

IV. Precipitacin de Protenas

a) Precipitacin con sales metlicas: En una serie de tres tubos se adiciona en

cada uno 1 ml de solucin ALBUMINA de huevo; adicione a uno 4 gotas de
solucin de cloruro mercrico al 2%, al segundo 4 gotas de una solucin de
acetato de plomo al 2%, mas 3 gotas de acido actico y al tercero 4 gotas de
sulfato cprico al 2%. , obsrvese cuidadosamente la formacin o no de
precipitados. Explique. Repetir el procedimiento con solucin de casena y
luego por solucin de gelatina..
b) Precipitacin con reactivos acdicos: En tres tubos de ensayo coloque en
cada uno 1.5 ml de solucin de casena.. Adale al primero 3 gotas de una
solucin acuosa saturada de cido pcrico, al segundo igual cantidad de una
solucin de cido tnico al 10% y al tercero 3 gotas de una solucin acuosa de
ferricianuro de potasio y 1 gota de cido actico al 10%. Observe lo que ocurre.
Repetir el procedimiento remplazando la solucin de casena por solucin de
albmina.

V. Reacciones coloridas:

Las protenas pueden formar compuestos coloreados al reaccionar con

determinados reactivos, entre los que se encuentra el reactivo de Biuret.
 Reaccin de Biuret: Es caracterstica del enlace peptdico. A 1.5 ml de la solucin
proteica, aada 1 ml de reactivo de Biuret. Deje reposar la mezcla y observe lo que
ocurre.

PREGUNTAS:

1. Consultar en forma clara y breve en que consiste la desnaturalizacin de las

protenas.
2. Explique que sucede cuando el cabello se somete a los tintes, de ris y alisado,
este proceso es reversible o irreversible.
3. Explique por que las pezuas, los cuernos, las uas, el cabello y las plumas no
se disuelven con el agua..
4. Consultar de qu depende la solubilidad de las protenas.
5. Explique cuando es positiva la reaccin de biuret, escriba la reaccin
6. Consulte otras tcnicas utilizadas para la cuantificacin de protenas.

BIBLIOGRAFA:

PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mxico. MaGraw- Hill

Latinoamericana, S.A.

CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioqumica F.

LPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de Ciencias.

Universidad Nacional sede Bogot.