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TEMA 3.

CROMATOGRAFA DE
GASES

TCNICAS ANALTICAS DE
SEPARACIN

1
1. INTRODUCCIN
Proceso de separacin en el que los
analitos se distribuyen entre una fase
estacionaria y una fase mvil.

Cuanto mayor sea la afinidad que una


sustancia presenta por la fase
estacionaria, ms tiempo
permanecer unida a ella y por tanto
su tiempo de retencin ser mayor.

2
1. INTRODUCCIN
Equilibrio de distribucin entre FE y FM

Objetivo
Separar sustancias principios termodinmicos

Temperatura
Aumenta Ec
Impide interacciones entre analito y FE
Elucin

3
1. INTRODUCCIN
FASE MVIL: gas
Se llama gas portador
Normalmente He, H2, N2, Ar, CO2
Depende del detector, eficacia y rapidez deseada

FASE ESTACIONARIA: columna cromatogrfica


Lquido no voltil
recubre el interior de la columna o soporte slido C. gas-liq
de reparto
Slido
El analito se adsorbe sobre las partculas slidas de la FE C.
gas-sol de adsorcin

ANALITO: trmicamente estable


Gas
Lquido voltil
4
2. COMPONENTES INSTRUMENTALES

5
1. EL PROCESO DE SEPARACIN

ELUCIN

6
3. INTRODUCCIN DE LA MUESTRA
3.1. COMPONENTES DEL INYECTOR
Septo
Debe cambiarse cada
20 inyecciones
manuales o 100 con
automuestreador

7
3.1. COMPONENTES DEL INYECTOR
Tipos de septum

8
3.1. COMPONENTES DEL INYECTOR
TIPOS DE FRRULAS

9
3.1. COMPONENTES DEL INYECTOR
Las impurezas se acumulan en el inserto que debe
cambiarse peridicamente

La superficie del vidrio de borosilicato es cida


contiene silanoles libres, silanoles hidratados o puentes
siloxano

La desactivacin permite bloquear dichos grupos con


grupos funcionales no polares, creando una superficie
ms inerte
trimetilclorosilano o dimetildiclorosilano en tolueno o
hexano seco
Rellenos de lana de vidrio silanizada, microbolas de
vidrio, vidrio sinterizado o adsorbente
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3.2. TIPOS DE MUESTRA
MUESTRAS GASEOSAS
Jeringas especiales con mbolo de tefln
0,5-100 mL (100 mL es necesario preconcentrar)
Vlvula de apertura y cierre: sistema de toma de muestra
Dificultad para medir volumen y Sobrepresin
Vlvulas de inyeccin

MUESTRAS SLIDAS
SHS, DHS, SPME (static heaspace, dynamic headspace, solid-
phase microextraction)

MUESTRAS LQUIDAS
Acero
1-10 L o grandes volmenes (muestras limpias, trazas)

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3.3. DISCRIMINACIN Y
ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
Calidad de la inyeccin:

ENSANCHAMIENTO DE BANDAS COMPOSICIN DE LA BANDA EN CABEZA DE COLUMNA


DISTINTA A LA MUESTRA/DISCRIMINACIN

Tcnica de inyeccin Inserto


Banda estrecha Analitos poco voltiles
Degradacin analitos
respecto a disolvente
Contaminacin

Volumen
Mnimo, concentrado Temperatura alta en Analitos con
inyector, termosensibles volatilidades diferentes

Temperatura columna
recondensacin
Volumen inyeccin
ensanchamiento banda
pequeo
(columnas capilares)

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3.3. DISCRIMINACIN Y
ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
Ensanchamiento de banda cromatogrfica por la inyeccin:

Velocidad de entrada de la muestra:


Ensanchamiento en el tiempo
Inyecciones rpidas, inyector automtico

Dispersin de la muestra en la columna:


Ensanchamiento espacio
Condensacin del disolvente: 40 C por debajo p.e. disolvente
La muestra debe tener 104 ms disolvente que analito
Enfoque
A travs de la FE: elevada solubilidad de analito en FE
Trmicamente: Baja T. Espesor de FE 2 m
150 C por debajo del p.e. solutos
< 25 C, crioenfoque (CO2 o N2). Analitos muy voltiles

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3.3. DISCRIMINACIN Y
ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
ENFOQUE MEDIANTE DISOLVENTE picos muy estrechos

El disolvente se evapora en el inyector y condensa en


cabeza de columna
Los componentes ms voltiles al tener volatilidades
similares a ste se enfocan en su cola

Inyeccin

Se desarrolla una zona


inundada por el disolvente
con los analitos disueltos

Al aumentar T se evapora
el disolvente enfocndose
los analitos en una14
banda
estrecha
3.3. DISCRIMINACIN Y
ENSANCHAMIENTO DE BANDAS
La condensacin del disolvente crea una pseudofase
Disminuye la relacin de fases columna vol. gas portador/vol. fe
Modifica la constante de particin masa soluto en f. liq/en gas portador
GAP DE RETENCIN. TUBO HUECO:
Reduce la longitud de la zona inundada de la columna
Protege de contaminaciones en la columna

15
SOLVENT FOCUSSING

16
3.4. TCNICAS DE INYECCIN
Limpiar la jeringa varias veces con un disolvente adecuado
En el que est disuelto el analito
De polaridad adecuada para la FE de la columna

Tcnica sandwich o del bolo de disolvente


Primera burbuja aire:
cuando la muestra llega a la jeringa sta ya est caliente y la
vaporizacin es muy rpida (picos estrechos hasta para los
pesados)
Evita prdida de los compuestos ms voltiles (discriminacin)
Segunda burbuja aire: Evita mezcla de muestra y disolvente
Disolvente: limpia restos de muestra de la jeringa
ltima burbuja: elimina el disolvente

disolvente 17
3.4. TCNICAS DE INYECCIN
Tcnica de aguja caliente
Se toma la muestra y se aspira aire que llena la aguja
Se calienta en inyector de 2-3 s
Se inyecta rpidamente
Adecuada en inyecciones manuales, muy reproducible

Tcnica aguja llena


Idem. Pero la aguja est llena de muestra

Tcnica aguja fra


Inyeccin muy rpida de la muestra, la aguja est llena
de aire

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3.4. TCNICAS DE INYECCIN
Efecto de la discriminacin como consecuencia de la tcnica de
inyeccin empleada para n-alcanos de diferente nm. At. C

19
K. Grob, H.P. Neumon, J HRC & GC, 2 (1979) 15
3.5. SELECCIN DEL INSERTO
Inserto recto es menos eficiente al transferir la energa
La base metlica del inyector se enfra ms rpidamente que el
vidrio
La columna est ms fra
Previamente se evapora disolvente y voltiles y se enfra

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3.5. SELECCIN DEL INSERTO
El volumen de la muestra al vaporizarse < volumen del
inserto para evitar flashback
S.e. la muestra se expandir por todo el volumen
disponible.
Puede producir prdida de voltiles (discriminacin)
La muestra debe vaporizarse en la base
no en el centro

Flashback
Picos fantasma
Picos con cola
Se llena linea purga y otras

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3.5. SELECCIN DEL INSERTO
La lana de vidrio debe estar en la base para vaporizacin
lo ms abajo posible
Cuanto ms estrecho mejor porque aumenta la velocidad
lineal del gas portador
Estrechamiento inferior: mejor para fraccin menos voltil
Estrechamiento superior: mejor para fraccin voltil

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3.5. SELECCIN DEL INSERTO
Flashback. Expansin del disolvente
Inserto 4 mm y 78,5 mm tiene un volumen 1 mL

T P Volumen

Agua 250 C 0,8 bar 1L1400 L

Metanol 1L567 L

Cloruro metileno 1L380 L


Acetato etilo 1L235 L
Pentano 1L197 L
Hexano 1L176 L
Isooctano 1L139 L

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3.5. SELECCIN DEL INSERTO
Inserto recto 1.2 mm/ Inserto lana vidrio centro 4 mm
Inserto recto estrecho
Mejor para los ms voltiles: Evita prdida por expansin
inicial del disolvente
Vaporizacin en zona inferior y mayor velocidad lineal gas

Inserto lana vidrio en centro


Vaporizacin en el centro y
menor velocidad gas
Se pierden los ms voltiles
Los menos voltiles se
vaporizan con inyector caliente

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Inyector Columna Modo Muestra Comentarios Muestra
concentracin a columna
Con/sin Capilar Divisin Alta Muy poca
divisin
Divisin a pulsos (pulsed split) Alta Puede ser til con Muy poca

3. INTRODUCCIN DE MUESTRA
inyecciones de gran
Sin divisin (splitless) Baja volumen Toda

Sin divisin a Baja til con inyecciones Toda


Tipos de inyectores
pulsos (pulsed de gran
splitless) volumen
Refrigeracin Capilar n/a Baja o lbil Discriminacin y Toda
en columna descomposicin
mnimas
Empaquetada Empaquetada n/a Cualquiera Toda
con purga Semicapilar n/a Cualquiera OK si la resolucin Toda
no es crtica
Vaporizacin a Capilar Divisin Alta Muy poca
temperatura Divisin a pulsos Alta Muy poca
programada (pulsed split)
Sin divisin Baja Toda
(splitless)
Sin divisin a Baja Toda
pulsos (pulsed
Splitless)
Eliminacin de Baja Inyecciones La mayora
disolvente mltiples con
analitos
concentrados y
salida de disolvente
Interfase de Capilar Direct (Directa) Baja El menor volumen Toda
voltiles muerto
Divisin Alta Flujo mximo = l00 Muy poca
ml/min 25
Sin divisin Baja Toda
(splitless)
3.6. TIPOS DE INYECTORES
3.6.1. INYECTOR PARA COLUMNAS EMPAQUETADAS

Columnas empaquetadas
3-4 mm x 1-5 m

Semicapilares
560 m

Poca resolucin

Poco habituales

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3.6. TIPOS DE INYECTORES
3.6.2. INYECCIN CON DIVISIN (SPLIT)
Parte de la muestra sale por el split
Inyeccin de 1 l 0,5 mL de gas y parte sale por septum
Razn de divisin: 50:1-600:1 (flujo split:flujo columna)
T alta: evita prdida de slo los componentes ms voltiles
T muy alta: La muestra se descompone

Split

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3.6.2. INYECCIN CON DIVISIN (SPLIT)
Entra en columna 0,2-2% muestra
Para una buena resolucin
Mnima cantidad de muestra 1 mL
1 ng analito

Aconsejable
Cuando concentracin > 0,1 %
Compuestos muy voltiles, los picos aparecen
inmediatamente despus del disolvente
Las muestras no pueden diluirse ms (p.e. disolventes)
Muestras sucias
Se usa una columna de alta resolucin que no admite
mucha carga

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INYECCIN CON DIVISIN (SPLIT)

AQU

29
3.6.3. INYECCIN SIN DIVISIN (SPLITLESS)
Anlisis de trazas (<0,01%)
No tiene cmara de mezcla
Entra en la columna ~80%
La T suele ser menor
La muestra ms tiempo en inyector
Puede descomponerse
Banda ancha
Splitless

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3.6.3. INYECCIN SIN DIVISIN (SPLITLESS)
A:
Split
T cte 75 C
Flujo divisin alto
La gua se limpia constantemente
B:
Se purga muy lentamente la gua
La muestra pasa a la columna durante
mucho tiempo
Las reas son mayores porque llega todo
C:
Splitless pero:
purga la gua a los 30 s eliminando vapores
D:
Igual a C pero:
enfriando inicialmente columna a 25C

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3.6.4. INYECCIN EN COLUMNA (ON-COLUMN)

Liner gua la aguja para que entre en la columna que se fija


mediante un estrechamiento
Para columnas 0,25-0,3 mm DI
la mejor resolucin: jeringas de slice. Vlvula, no septum

Para columnas 0,53 mm DI jeringas estndar

On-column

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3.6.4. INYECCIN EN COLUMNA (ON-COLUMN)

Para solutos que se descomponen por encima de su Pe

Mejor forma en anlisis cuantitativo por GC


Ausencia de discriminacin, la muestra se vaporiza en
columna
No hay descomposicin, la T es ms baja

T inicial debe ser baja (p.e. 50 C) para que condensen


en columna en banda estrecha. Luego aumento brusco

La muestra debe estar muy limpia


La columna se deteriora antes

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3.6.5.VAPORIZACIN DE TEMPERATURA PROGRAMADA

PTV

El elemento calefactor enrollado que lo calienta


rpidamente
Dispone de un circuito de refrigeracin por aire o lquido

34
3.6.5.VAPORIZACIN DE TEMPERATURA PROGRAMADA

Inyeccin de la muestra con liner fro


Evita discriminacin en la aguja
Aumento programado de la T para vaporizacin
El disolvente se elimina de forma controlada
Se puede emplear en modo split o splitless
Combina ventajas inyector con/sin divisin y on-column
Se puede enriquecer la muestra dentro del inyector
Introduciendo grandes volmenes de muestra
Liner empaquetado
La lana de vidrio puede estar en todo el liner

35
3.7. CONSUMIBLES
TIPOS DE SEPARADORES

36
3.7. CONSUMIBLES

37
3.7. CONSUMIBLES

38
CUESTIONES
1. Si la muestra se prepara mediante purga y atrapamiento,
cul sera el modo de inyeccin adecuado? Sin divisin

2. Seleccionar el modo de inyeccin adecuado en cada caso:


(a) plaguicidas a nivel de traza en un extracto de una muestra de agua de
un ro. On-column, sin divisin, inserto con adsorbente, grandes
volmenes, pulsado

(b) hidrocarburos en extracto de gasolina. Con divisin

(c) inyeccin de grandes volmenes de una muestra sucia. Con divisin


pulsado

(d) Aromas en zumo de naranja en un extracto de acetato de etilo


(volatilidad de los analitos muy prxima a la del disolvente). Con divisin
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4.COLUMNAS
TUBULARES ABIERTAS

Largas y estrechas
Fabricadas en slice fundida SiO2
Recubiertas de poliimida (plstico que resiste 350 C)
Dimetro interno: 0,1-0,53 mm
Longitud: 15-100 m

Respecto a las empaquetadas:


Mejor resolucin
Mayor rapidez
Mayor sensibilidad
Menor capacidad de muestra

40
4.COLUMNAS
TUBULARES ABIERTAS

41
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Comparacin de los picos cromatogrficos obtenidos con una
columna empaquetada (izda) y otra capilar (dcha)
Empaquetada: 1-5 m y 3-4 mm, semicapilar: 560 um
Capilares: 15-100 m y 0,1-0,53 mm

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4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
TIPOS:

Pared recubierta (WCOT Wall Coated Open Tubular)


Interior de la columna cubierta de FE lquida

Soporte cubierto (SCOT (Support Coated Open Tubular)

Pared interior de columna con soporte slido cubierto de FE


lquida

Capa porosa (PLOT Porous layer Open Tubular)

Pared interior de columna recubierta de FE slida

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4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Las columnas FSOT son parecidas a
WCOT pero el material es diferente,
en las FSOT es slice fundida y en las
WCOT es vidrio.
Sin embargo las FSOT no estn
disponebles a dimetros > a 0.53 mm
y las WCOT s

F.S.O.T. (Fused Silica Open Tubular)

44
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS

45
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Columnas de pared recubierta (WCOT)
Recubiertas de FE liq. de 0,1-0,5 m espesor
Al disminuir espesor:
Aumenta resolucin
Disminuye tiempo de retencin
Disminuye capacidad de carga

Recubierta de soporte (SCOT)


Pared interior de columna con soporte slido cubierto
de FE lquida

Capa porosa (PLOT)


Las partculas slidas son la FE

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4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Capa porosa (PLOT)
Mayor rea superficial
Mayor capacidad de carga

Ej. FE de carbn poroso de


0,2 m espesor adherida sobre
la pared interior de una columna
tubular abierta

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4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Eleccin de la FE lquida
Lo semejante disuelve a lo semejante
Analito polar FE polar y viceversa

Polaridad de solutos:

48
Fases estacionarias

Polidimetilsiloxano

Polietilenglicol
49
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
TIPOS DE FE Y DISOLVENTES RECOMENDADOS

50
51
SKOOG,Douglas y LEARY,James. Anlisis Instrumental. 4 Edicin. McGraw-Hill. Espaa.1994
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Fases estacionarias de uso
frecuente en CG capilar

52
4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
La columna se degrada
Cuando envejece
FE se altera dejando grupos silanol descubiertos (Si-O-
H)
Aumentan las colas

La silanizacin reduce las colas porque los OH


son bloqueados con grupos no polares de
trimetilsililo

Contacto con oxgeno a altas temperaturas


Se reduce modificando la superficie de la slice
Enlaces covalentes con reactivos enlazada
Enlaces covalentes consigo misma entrelazada

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4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Eleccin FE slida:
Almina Al2O3

Tamices moleculares
Materiales inorgnicos o polmeros provistos de
grandes cavidades donde las molculas pequeas
penetran y se retienen parcialmente
Pueden separar H2, O2, N2, CO2 y CH4
Retienen fuertemente el agua y los gases se secan
Pueden regenerarse
Liberando agua
Mediante calentamiento a 300 C a vaco o bajo corriente de N2

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4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS

Estructura de un tamiz molecular de zeolita


Na12(Al12Si12O48)27H2O
a) Red de aluminosilicato de un cubo-octaedro
de zeolita
b) Interconexin de ocho cubo-octaedros que
forman una cavidad en cuyo interior pueden
alojarse pequeas molculas

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4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
FASE ENLAZADA QUIRAL: PTICAMENTE ACTIVA

FE basada en el aa quiral
L-valina
Separa enantimeros
Separa enantimeros
voltiles derivados de
aas

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4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Todos los aas naturales son L

Midiendo la fraccin de aas que se han


transformado en D en un fsil es posible
estimar la edad hasta 500 m.a.

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4.COLUMNAS TUBULARES
ABIERTAS
Ciclodextrinas enlazadas con la FE
Tipo de FE quiral para CG o CL
Son azcares cclicos
Tienen cavidad quiral hidrfoba 0,78 mm
diam.
Los -OH se pueden bloquear con grupos
pentilo (-C5H11) o trifluoroacetilo
[-C(C=O)CF3]. Que disminuyen la
polaridad.
Permiten la separacin de enantimeros
de un determinado compuesto, ya que
cada unos de llos tiene mayor o menor
afinidad por la cavidad que se produce.

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5.COLUMNAS EMPAQUETADAS
Soporte slido:
Partculas finas
Tierras de diatomeas (esqueletos silceos de algas)
Se silanizan para reducir puentes de H con compuestos
polares

Tefln
Para solutos que se unen con ms fuerza
Polmero qumicamente inerte CF2-CF2-CF2-
Temperatura < 200 C

Recubierto de:
Slido adsorbente
El slido mismo es la FE
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5.COLUMNAS EMPAQUETADAS
Menor eficacia

tiles:
a escala preparativa
Para separar gases, se retienen poco

Material:
Acero inoxidable
Nquel
Vidrio

Dimensiones:
3-4 mm dimetro
1-5 m longitud

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5.COLUMNAS EMPAQUETADAS
Gran uniformidad en tamao partcula:
Disminuye el trmino de caminos mltiples A en la Ec. Van Deemter
Aumenta resolucin
Disminuye H

Si las partculas son pequeas:


el soluto alcanza rpido el equilibrio mejora eficacia
Disminuye espacio entre partculas se requiere ms presin para forzar paso FM

Tamao partcula
m
nmero de mallas:
nmero de aberturas del tamiz por unidad de longitud
Partcula de 100/200 mallas pasa por tamiz de 100 mallas pero no de 200
16 mallas = aberturas son cuadrados de 1.18 mm
20 mallas = aberturas son cuadrados de 0.85 mm
Si una muestra pasa por 16 mallas y no por 20 tenemos partculas con dimetro
entre 0.85 y 1.18 mm. Partculas = 16/20 mallas

61
COMPARACIN DE COLUMNAS
USADAS EN CG

62
6.NDICE DE RETENCIN
Los tiempos relativos de retencin varan a medida que vara la
polaridad de la FE

(a) columna tubular abierta no polar de poli(dimetilsiloxano)


(b) columna tubular abierta muy polar de poli(etilenglicol)

(a) tr segn volatilidad


(b) tr: alcanos <cetonas< alcoholes
Cetonas: interacciones dipolares
Alcoholes: Puentes de H

63
6.NDICE DE RETENCIN
El ndice de retencin relaciona el tiempo de retencin
de un soluto con los tiempos de retencin de los
alcanos lineales

El ndice de Retencin de Kovats (I) de un alcano lineal


es igual a 100 veces su nmero de carbonos

Octano: I = 800, Nonano: I = 900

Un compuesto entre el octano y el nonano tiene un I


intermedio entre 800 y 900:

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6.NDICE DE RETENCIN

log tr(desconocido) - log tr(n)


ndice de retencin : I 100n (N - n)
log tr (N) - log tr(n)

n: nmero de carbonos del alcano ms corto


N: nmero de carbonos del alcano ms largo
tr(n): tiempo de retencin ajustado del alcano ms
corto
tr(N): tiempo de retencin ajustado del alcano ms
largo

65
6.NDICE DE RETENCIN
El I del benceno en poli(dimetilsiloxano) es 657 por lo que eluye entre
hexano y heptano usando FE no polar
El nitropropano eluye justo despus que el heptano en la misma columna
A medida que bajamos en la tabla aumenta la polaridad de la FE
Con la ltima FE, el benceno eluye despus del decano y el nitropropano
despus del n-C14H30 (tetradecano)

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7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN
Aumentando la
temperatura de la
columna:
Aumenta la presin de
vapor de los solutos
Disminuye el tiempo de
retencin
Los picos son ms
pronunciados

(a) 150 C
Los ms voltiles salen
juntos y los menos no
salen
(b) Rampa 50-250 C a
8C/min
67
7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN
En la CG la "afinidad" de un soluto por la FM
depende

la volatilidad del soluto


su presin de vapor,

es funcin de la estructura del compuesto y de la


temperatura.
Modificndose la temperatura, se altera tambin la
presin de vapor y, por consiguiente, la "afinidad"
de una sustancia por la FM

La temperatura debe ser compatible con la FE


empleada, pues las FE lquidas se volatilizan o se
degradan con temperaturas excesivas
68
7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN

Si la temperatura de la columna fuera excesivamente


baja
los constituyentes de la muestra tendrn presiones de vapor
muy bajas
permaneceran casi todo el tiempo disueltos en la FE,
su migracin por la columna ser muy lenta.
Tiempo excesivo de anlisis
picos muy anchos y de baja intensidad (cuanto ms tiempo
pasa la sustancia en la columna, ms se dispersa).
Eventualmente, el compuesto no eluye de la columna.

Si la temperatura muy elevada


implica presiones de vapor muy grandes
los compuestos apenas pasan algn tiempo disuelto en la FE,
eluyen muy rpidamente de la columna sin ser separados.

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7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN
En el caso de muestras que contienen constituyentes
con presiones de vapor muy diferentes,

si la temperatura se ajusta para la separacin apropiada


de los compuestos menos voltiles (temperaturas altas),
los voltiles sern retenidos muy poco y no sern
separados.
Por otro lado,
si se hace el ajuste para separar los voltiles (temperaturas
bajas), los constituyentes pesados se presentarn sobre la
forma de picos excesivamente anchos y bajos o sern
retenidos en la columna.

Este problema puede controlarse usando la


programacin lineal de temperatura (PLT) gradiente
de T
70
7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN
El programa de temperatura puede ser ms complejo y
separar hasta 50 plaguicidas y PCBs:

GC-MS/MS: cromatgrafo de gases (3800 Varian) con detector de


masas (Saturn 2000 Varian). GC-ECD (6890N Agilent Technologies)
Columna 30 m x 0,25 mm x 0,25 m
He 1 ml/min
1l extracto
Inyector 250 C; modo sin divisin de flujo
Trampa (200 C), manifold (50 C) y lnea de transferencia (280 C)

PROGRAMA CROMATOGRFICO
Temperatura C C/min Tiempo (min) Tiempo final
60 2 2
180 25 10 16,8
300 4 5 51,8

71
7.PROGRAMACIN DE
TEMPERATURA Y PRESIN
Si T aumenta mucho
Descomposicin trmica de analito y FE

Generalmente los CG tienen controles electrnicos de la


presin del gas portador
Al aumentar, aumenta el caudal

Puede hacerse programacin de presin (de caudal)


Para reducir los tr de los compuestos que eluyen ms tarde
til para analitos lbiles

72
8.GAS PORTADOR
El He es el ms comn y compatible con la mayora de
detectores

En FID el N2 da mejores LODs

H2, N2 y He dan aproximadamente la misma H ptima (0,3


mm) a caudales diferentes

Los caudales ptimos aumentan en orden H2 >He > N2

Las separaciones ms rpidas se obtienen con H2 pudindose


alcanzar mayor rapidez trabajando por encima de su
velocidad ptima aunque perdiendo resolucin

73
8.GAS PORTADOR
INCONVENIENTES DEL USO DE H2 EN CG:

Puede reaccionar catalticamente con compuestos


no saturados sobre superficies metlicas
Descompone el aceite de la bomba de vaco del
detector MS
Forma mezclas explosivas con aire cuando su
proporcin es > 4% v
Es poco probable que los caudales en CG creen
peligro
Los generadores elctricos producen H2 de gran
pureza frente a las balas de H2 comprimido
74
8.GAS PORTADOR
H2 y He proporcionan mejor resolucin (menor H) que N2 a
caudales altos
Los solutos difunden ms rpidamente a travs de ellos
Menor Cux (transferencia de masa)

75
8.GAS PORTADOR
Cux

Tiempo finito que necesita el soluto para alcanzar el


equilibrio entre la FM y la FE

Aunque algo de soluto se queda en la FE, el resto que


est en la FM avanza y se ensancha la banda

H debido al tiempo de equilibrado trmino de


transferencia de masa:
Cs: coef. de tranf. Masa
a travs de la FE
H transf.masa Cu x (Cs Cm )u x
Cm: a travs de la FM
76
K= (tr-tm)/tm

8.GAS PORTADOR
Cs y Cm dependen del tipo de cromatografa
En CG con columna tubular abierta:

2 K d 2
Cs
3(k1) 2 Ds d: espesor de la FE
Ds: coef. Difus. Soluto en FE
1 6 K 11K r
2 2
Cm
24( K 1) 2 Dm
Al disminuir d disminuye H debida a la transferencia de masa
aumenta la eficacia debido a que el soluto puede difundirse
ms rpidamente desde las partes ms profundas de la FE a la
FM

77
8.GAS PORTADOR
En columnas tubulares abiertas con FE suficientemente fina
(< 0,5 mm) Cux se rige por la lentitud de difusin a travs
de la FM y en segundo lugar de la FE

Cs<<Cm

Para un soluto de ky una columna de radio r dados, el nico


factor que afecta es el coeficiente de difusin

Coeficientes de difusin: H2>He>N2

78
8.GAS PORTADOR

A veces el caudal ptimo para la separacin


es muy bajo para el funcionamiento correcto
del detector
Flujo auxiliar o make-up

Impurezas en el gas portador


Deterioran la columna
Deben ser de alta pureza
Deben pasar por filtros de oxgeno, agua e
impurezas orgnicas

79
9. DETECTORES
ANLISIS CUALITATIVO:
Detectores que permiten anlisis cualitativo:
MS
Transformada de Fourier
Libreras de espectros
Comparacin con tr (no fiable)
Co-cromatografa: fortificar la muestra con el analito que se sospecha
Uso de dos columnas con distintas FE

ANLISIS CUANTITATIVO:
rea de pico
A mano (si el pico tiene forma gaussiana):
rea = 1,064 x altura de pico x w1/2
Altura de pico (cuando son muy estrechos)
80
9.1. Detector de Conductividad trmica, TCD

Utilizado particularmente con columnas empaquetadas,


detecta H2O, CO, CO2 e H2

La velocidad de prdida de calor de un cuerpo caliente hacia


un cuerpo ms fro es proporcional a la conductividad trmica
del gas que separa estos cuerpos
81
9.1. DETECTOR DE
CONDUCTIVIDAD TRMICA (TCD)

Universal
Sencillo
Sensibilidad limitada a nivel traza y columnas <0,53 mm
Mide la modificacin de la conductividad trmica del gas
portador, ocasionada por la presencia de substancias eludas
La conductividad trmica mide la capacidad de una
sustancia para transferir calor de una regin a otra ms fra

82
9.1. DETECTOR DE
CONDUCTIVIDAD TRMICA (TCD)
El He es el ms usado
He e H2 dan la mejor sensibilidad
H2 es el de ms conductividad
Todos los analitos disminuyen su
conductividad

Primera ley Fick: flujo masa:

mol dc
Flujo 2 J D
m s dx
83
3.1. DETECTOR DE
CONDUCTIVIDAD TRMICA (TCD)
El eluato pasa por filamento caliente de wolframio-renio
Disminuye la conductividad del gas
El filamento de calienta
Aumenta su resistencia elctrica
Vara el voltaje
El detector mide esa variacin

84
3.1. DETECTOR DE
CONDUCTIVIDAD TRMICA (TCD)
Generalmente se usa una columna de referencia conectada
a otro filamento
Minimiza las diferencias de flujo al variar T
Rango lineal: 104
La sensibilidad
Aumenta con el cuadrado de la corriente del filamento
Puede quemarse
Inversamente proporcional al caudal
Aumenta con la diferencia de T entre filamento y bloque
exterior

85
3.2. DETECTOR DE
IONIZACIN DE LLAMA (FID)
Consiste en una llama de
hidrgeno-aire y una placa
colectora

El efluente de la columna pasa


a travs de la llama, que ioniza
las molculas orgnicas

Los iones se recogen en un


electrodo de polarizacin
negativa y producen una seal
elctrica

Es sensible y es el detector
ms ampliamente utilizado,

Es destructivo
Empleado para hidrocarburos, poco 86

sensible a compuestos muy oxidados


9.2. DETECTOR DE IONIZACIN DE
LLAMA (FID)
El eluato se quema y los tomos de C (excepto carbonilos
y carboxilos) producen radicales CH que producen CHO+

Mide las variaciones de la corriente de ionizacin en la


llama que produce la presencia de sustancias eludas
CH + O CHO+ + e-

Slo uno de 105 tomos de C produce un ion

La produccin es proporcional al n C ionizables

La corriente se produce entre:

Punta del quemador: nodo


Colector: ctodo

87
9.2. DETECTOR DE IONIZACIN DE
LLAMA (FID)

88
9.3. DETECTOR DE CAPTURA
ELECTRNICA (ECD)

Utiliza un emisor beta radiactivo


(63Ni) (gran energa) para ionizar
parte del gas portador y para
producir una corriente entre un par
de electrodos.

Cuando las molculas orgnicas que


contienen grupos funcionales
electronegativos, pasan por el
detector, capturan algunos de los
electrones y reducen la corriente
medida entre los electrodos.

Empleado frecuentemente para 89


compuestos halogenados: plaguicidas, PCBs, PBBs,
9.3. DETECTOR DE CAPTURA
ELECTRNICA (ECD)

Selectivo
Molculas con halgeno
Carbonilos conjugados
Nitrilos
Fsforo
Nitrocompuestos
Compuestos organometlicos

Insensible a:
Hidrocarburos
Alcoholes
90
Cetonas
9.3. DETECTOR DE CAPTURA
ELECTRNICA (ECD)
Gas de make-up:
N2
Ar con 5% metano
La humedad disminuye la sensibilidad
Muy sensible

91
9.3. DETECTOR DE CAPTURA
ELECTRNICA (ECD)

92
9.4. DETECTOR DE
FOTOIONIZACIN (PID)

Utiliza luz ultravioleta (UV) para ionizar las molculas de gas.


Puede detectar componentes orgnicos voltiles (VOCs),
compuestos aromticos y no saturados.

No responde a hidrocarburos saturados o halohidrocarburos

Una lmpara genera energa UV que ioniza las molculas del


analito en estado gaseoso.

Los electrones libres resultantes colisionan con los electrodos del


instrumento, produciendo una corriente.

La magnitud de la corriente es proporcional a la concentracin de


analito.

93
9.4. DETECTOR DE
FOTOIONIZACIN (PID)

94
9.5. DETECTOR FOTOMTRICO
DE LLAMA (FPD)

Emplea una llama pequea de hidrgeno.

Los compuestos orgnicos que poseen tomos de Pb,


S, P o Sn, se atomizan en la llama y estos elementos
sufren un proceso de excitacin en la misma,
emitiendo una radiacin que es cuantificada por el
tubo multiplicador que posee el sistema.

Detector fotomtrico de llama pulsado (PFPD):


Anlogo al anterior pero funcionando la llama de forma
pulsante, lo que incrementa la sensibilidad de la seal
para determinados analitos.

95
9.5. DETECTRO FOTOMTRICO
DE LLAMA PULSADO (PFPD)

96
97
9.6. OTROS DETECTORES

Detector de emisin atmica (AED): Se basa en el


uso de un plasma donde va a tener lugar la
atomizacin de todos los compuestos. Parte de estos
tomos se ionizan y excitan electrnicamente emitiendo
energa
Todos los elementos de la tabla peridica producen
emisin

Detector selectivo de masas (MSD): En l tienen


lugar tres etapas, ionizacin y/o fragmentacin del
analito, separacin en el analizador y obtencin de la
seal elctrica cuando estos iones/fragmentos llegan al
electromultiplicador.
98
9.6. OTROS DETECTORES
Detector microculombimtrico (CD): Esta formado
por cuatro electrodos de los cuales, dos se usan para la
produccin de un in qumica y electrolticamente
activo. Mide la cantidad de electricidad consumida en
el proceso.

Detector de quimioluminescencia (QLD): Se basa


en el uso de un gas reactivo que interacciona con el
analito dando lugar a la formacin de un compuesto
electrnicamente excitado. El paso de ste al estado
fundamental produce la emisin de energa que se
cuantifica con un fotomultiplicador.

99
9.6. OTROS DETECTORES

REACCIONES QUE SE SUPONE QUE PRODUCEN LA


QUIMIOLUMINESCENCIA DEL AZUFRE

compuesto de azufre H SO productos


2 -O 2 llama

SO O3 SO2 * O2
SO2 * : estado excitado
SO2 * SO2 h

100
Compuestos del S en gas natural
a) FID, los comp. Org. S no se detectan porque estn
muy diluidos; b) QLD, insensible a hidrocarburos

101
9.6. OTROS DETECTORES
Detector de nitrgeno-fsforo.
Es bsicamente el mismo FID, pero se le adiciona un metal alcalino,
por lo que en algn momento se le llam (AFID) detector de
ionizacin de llama alcalino, tambin se le ha llamado detector de
ionizacin (TID), detector termoinico de llama (FTD), detector
especfico termoinico (TSD).

Posee un alambre de Pt recubierto de NaOH colocado en la llama o


fuente de silicato de rubidio o cesio productora de metales inicos
alcalinos

102
Detector de N-P

La presencia del lcali en la llama, aumenta la


volatilidad de los compuestos que contienen N, P,
halgenos, sulfuro, As, Sn y Pb aumentando la
corriente y por tanto la sensibilidad

Sensibilidad 300 veces que el FID para P y 15


veces para otros

Anlisis de frmacos (la mayora contienen N) y


plaguicidas organofosforados. Tambin responde a
hidrocarburos
Caractersticas Detectores

Detector Lmite de Rango lineal Comentarios Tratamiento


deteccin g soluto

TCD 10-5-10-6 103-104 Detector No destructivo


universal
FID 10-12 106-107 Detector Destructivo
universal
ECD 10-14 102-103 Detector No destructivo
selectivo
FPD 10-13 102 Detector Destructivo
Selectivo S,P,
Pb, Sn
NPD 10-8-10-14 105-107 Detector Destructivo
Selectivo N,P

MSD 10-12 Segn tipo Detector Destructivo


detector universal
104
DETECTORES GC
Detector Comentarios Detector
TCD Detector universal Muy poco sensible
FID Detector universal Poco sensible comp. muy oxidados (no carbonilos ni
carboxilos)
ECD Detector selectivo Molculas con halgeno
Carbonilos conjugados
Nitrilos
Fsforo
Nitrocompuestos
Compuestos organometlicos
PID Detector selectivo VOCs. No HC saturados ni haloHC

FPD Detector S,P, Pb, Sn


Selectivo
NPD Detector N,P, halgenos, sulfuro, As, Sn y Pb
Selectivo
AED Emisin Toda la Tabla Peridica
MSD Detector universal Destructivo
105
106
9.7. CROMATOGRAFA DE GASES
ESPECTROMETRA DE MASAS
Alta sensibilidad
Universal y selectivo-especificidad
El mejor detector de CG
El ms costoso
Informacin cualitativa y cuantitativa

107
9.7. CROMATOGRAFA DE GASES
ESPECTROMETRA DE MASAS
ANALIZADORES DE MASA
TRAMPA DE IONES
CUADRUPOLO

MODOS DE ADQUICISIN
BARRIDO COMPLETO
MONITORIZACIN DE UNA REACCIN SELECCIONADA
(MS/MS)
DETECCIN DE UN ION SELECCIONADO

MODOS DE IONIZACIN
IMPACTO ELECTRNICO
IONIZACIN QUMICA
108
9.7. CROMATOGRAFA DE GASES
ESPECTROMETRA DE MASAS

BARRIDO COMPLETO
MS/MS

109
Ionizacin electrnica
Las molculas que entran en la fuente de ionizacin
se convierten iones por ionizacin electrnica

Los electrones emitidos por un filamento caliente


(como el de una bombilla) son acelerados a travs
de un potencial de 70 V antes de que interacten
con las molculas que entran.

Algunas molculas (0,01%) de analito (M)


absorben entre 12 y 15 eV, que es suficiente para
su ionizacin:

110
Ionizacin electrnica
Casi todas las molculas estables tienen un nmero par de
electrones.

Cuando se pierde un electrn, el catin que resulta con un


electrn desapareado se designa por M+ el ion molecular.

Despus de la ionizacin, el ion M+ normalmente tiene


suficiente energa interna residual (~1 eV) para romperse
en fragmentos.

La fuente de iones tiene una placa repulsora, que se


encuentra a un pequeo potencial positivo, y que empuja
los iones hacia el tubo analizador, y asimismo, unas placas
focalizadoras, que se encuentran tambin a un pequeo
potencial, y que focalizan el haz de iones.

111
Ionizacin electrnica
La energa cintica de los electrones de 70 eV es
mucho mayor que la energa de ionizacin de las
molculas con las que colisionan.

MOLCULA DE FORMALDEHDO:

Los electrones que se pierden ms fcilmente son los


procedentes del orbital no enlazante (pares
solitarios), localizados en el oxgeno, de una energa
de 11,0 eV.

Esto significa que 11,0 eV es suficiente para eliminar un


electrn no enlazante del formaldehdo.

Para eliminar un electrn enlazante de una molcula


de formaldehdo se requieren 14,1 eV,

y para eliminar el electrn de mxima energa


enlazante de la molcula neutra se requieren 15,9 eV.

112
Ionizacin electrnica
La interaccin con electrones de 70 eV eliminar con muchsima
probabilidad los electrones que tienen la mnima energa de
ionizacin.

El ion molecular resultante, M+, puede tener un exceso tan grande de


energa que se rompa en fragmentos, hasta tal grado que el pico de
M+ puede ser pequeo e incluso estar ausente en un espectro de
masas.

Figura:
no presenta el pico M+ que debera tener de una m/z 226.

picos de m/z 197, 156, 141, 112, 98, 69 y 55, correspondientes a prdidas
de fragmentos del ion M+.

Estos picos suministran claves para deducir la estructura de la molcula.


Bsquedas en libreras.

113
Ionizacin electrnica

Si se disminuye la energa cintica de los electrones en la


fuente de ionizacin, p. ej. a 20 eV, habr mucho menor
rendimiento de iones y mucha menos fragmentacin se
observar una mayor abundancia de iones moleculares.

Normalmente se utiliza una energa de 70 eV, porque


proporciona pautas de fragmentacin reproducibles, que
pueden ser comparadas con los espectros de una librera.

El pico ms intenso en un espectro de masas se llama pico


base.

Las intensidades de los dems picos se expresan como


porcentajes de la intensidad del pico base
114
Ionizacin qumica
Produce menos fragmentacin que la ionizacin
electrnica.

La fuente de ionizacin se llena con un gas


reactivo, como metano, isobutano o amoniaco,
a una presin de ~ 1 mbar.

Los electrones energetizados (100-200 eV)


convierten el CH4 en una variedad de productos
reactivos: CH4 + e- CH4+ + 2 e-
CH4+ + CH4 CH5+ + CH3
CH4+ CH3+ + H
CH3+ + CH4 C2H5+ + H2
115
Ionizacin qumica
El ion CH5+ es un gran dador de protones, y reacciona con
el analito para dar MH+, que de ordinario es el ion ms
abundante en los espectros de masas por ionizacin
qumica

CH5+ + M CH4 + MH+

El ion molecular, M+, se puede formar mediante reacciones


como:

CH4+ + M CH4 + M+

La especie MH+ se llama molcula protonada, no ion


molecular

116
Ionizacin qumica
El pico MH+, de m/z 227, es el segundo pico ms intenso del espectro.

tienen menos fragmentos que en un espectro por ionizacin electrnica.

Para controlar el grado de fragmentacin de MH+; en lugar de metano se usan como


gases reactivos amoniaco e isobutano.

Estos reactivos se unen a H+ con ms fuerza que el metano, y comunican menos


energa a MH+, cuando el protn pasa de la forma protonada a M.

M(C2H5)+

117