La molina, Marzo del 2016

I. INTRODUCCION

CRECIMIENTO MICROBIANO
El crecimiento microbiano hace referencia al aumento de microorganismos durante
un periodo largo de tiempo. Puesto que, no se refiere solo al crecimiento de un
nico microorganismo, sino de varios; se denomina crecimiento poblacional. El
crecimiento de una poblacin resulta de la suma de los ciclos celulares de todos
sus individuos. Este crecimiento suele ser asincrnico puesto que cada
microorganismo se encuentra en un punto diferente del ciclo celular. Por
consiguiente, en un momento determinado en una poblacin se encuentran
clulas que acaban de dividirse, otras que estn replicando su ADN y
elongndose, otras que estn iniciando la divisin celular, etc. En un crecimiento
sincrnico todas las clulas se encuentran simultneamente en la misma fase del
crecimiento celular. Los cultivos sincrnicos son muy difciles de mantener por lo
que su importancia est principalmente ligada a los estudios bsicos de biologa
microbiana.
Las poblaciones de bacterias pueden crecer de una forma explosiva acumulando
grandes nmeros en un periodo de tiempo muy reducido. Puesto que, el efecto
nocivo (infecciones o intoxicaciones) de los microorganismos depende de su
nmero en la mayora de los casos, entender cmo se produce el crecimiento
microbiano es importante para poder evitar o reducir dichos efectos nocivos.
Las bacterias crecen siguiendo una progresin geomtrica en la que el nmero de
individuos se duplica al cabo de un tiempo determinado denominado tiempo de
generacin (). De esta forma, podemos calcular el nmero de bacterias (N) al
cabo de un nmero de generaciones (n) usando la ecuacin siguiente:

Siendo N0 el nmero de clulas en el momento actual. El nmero de

generaciones se puede calcular de la siguiente forma:
Donde t es el tiempo transcurrido.

II. OBJETIVO

Entender la cinetica de crecimiento microbiano , determinando la

tasa de crecimiento , tiempo de generacin del cultivo de
Escherichia Coli.

III. MATERIALES

con 50 ml de caldo nutritivo estril

Cultivo de E. coli Erlenmeye de 250 ml 2 pipetas de 1 mL

 Escala de McFarland por bloque
10 Tubos de ensayo con tapa
2 pipetas de 10 ml rosca

IV. PROCEDIMIENTO

Primera parte

Agitar en el vortex o
Luego estimar el
nmero de bacterias
manualmente el cultivo
por ml observando
proporcionado de E.coli y a su que tubo de la EM se
asemeja ms al de
vez agitar los tubos de ensayo E.coli

de la Escala de MacFarland

(EM).

Segunda parte

Con una pipeta Luego inocular en un

coger 0.05 ml de matraz Erlenmeyer e Matraz 1
E.coli incubar por 20 horas

Con una pipeta Luego inocular en un

coger 0.2 ml de matraz Erlenmeyer e Matraz 2
E.coli incubar por 20 horas
 La incubacin se
realiza en bao agitado
a 37 C o en placas de
agitacin magntica a
temperature ambiente.

Tercera parte

Despus de la Luego transferir Finalmente agitar en el

incubacin, mezclar bien exactamente 10 ml de vortex y estimar la
los dos frascos cada frasco a un tubo de concentracin de clulas
tapa rosca diferente de cada tubo con la EM.

V. RESULTADOS

Despus de incubar 10ml en un tubo tapa rosca de 0.05ml y 0.02ml de

cultivo ; se determinara el nmero de generaciones, tiempo de generacin
,tasa de crecimiento para ambas muestras.
1) Para 0,05ML
Calculamos la concentracin inicial de bacterias en el matraz
C1V1=C2V2
(1800 X cel/mL)(0.05mL)= C2 (50mL)
C2=1.8x106 cel/ml
De donde C2 =N0

a) Nmero de generaciones n
N=No2n
logN logNo
N0=1.8x106 cel/ml =
log(2)

N0.05= 2,700x106 cel/ml log(2,700x106 ) log(1.8x106 )

=
log(2)

= .

b) Tiempo de generacin g
g =
20
g=
10.55
t= 20 horas
60
n= 10.55 generaciones = 1.90h
1

c) Tasa de crecimiento

N0.05= 2,700x106 cel/ml

N0=1.8x106 cel/ml

t=20 horas
 Fase exponencial
25
y = 0.3657x + 14.403
20

15
LnN
10

0
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21
tiempo(h)

Grafica N1 numero de microorganismos viables vs tiempopara 0.05ml de

cultivo de Escherichia Coli

2) Para 0,2ML

Calculamos la concentracin inicial de bacterias en el matraz

C1V1=C2V2
(1800 X106 cel/mL)(0.2mL)= C2 (50mL)

C2=7.2x107 cel/ml

De donde C2=N0

a) Nmero de generaciones n
N=No2n
N0=1.8x106 cel/ml
.
N0.2= 3,000x106 cel/ml =
()

(, ) (. )
=
()

= . generaciones

b) Tiempo de generacin g
 =

t= 20 horas =
.

n= 8.70 generaciones = .

=

c) Tasa de crecimiento

=

N0.2= 3,000x106 cel/ml
Fase Exponencial =
= +
25
N0=7.2x106 cel/ml
y = 0.3016x
+ 15.79

20 =
t=20 horas
15
(, ) (. )
LnN

10 =

5
= .
0
0 5 10 15 20
tiempo(h)

Grafica n2 Nmero de microorganismos viables vs tiempo para 0.02ml de cultivo

de Escherichia Coli

Resultados del saln

Mesas Mesa N 1 Mesa N 3 Mesa N 4
Concentracin 0.05 mL 0.05 mL 0.05 mL
Tasa de =0.3657 = =
crecimiento
Promedio =
Varianza S2=
Desviacin S=
estndar

Mesas Mesa N 1 Mesa N 3 Mesa N 4

concentracion 0.2 mL 0.2 mL 0.2 mL
Tasa de =0.3016 = =
crecimiento
Promedio =
Varianza S2=
Desviacin S=
estndar

VI. CONCLUSIONES

La escala de Mac Farland , es un mtodo indirecto para evaluar el

crecimiento bacteriano , se puede estimar la cantidad de bacterias/ml
presentes en un inoculo inicial o final .
Es importante conocer la cintica de crecimiento de los cultivos
microbianos para predecir cmo va a evolucionar un cultivo, cmo va
a ir consumindose el substrato y cmo se van a ir acumulando los
productos del cultivo.
El tiempo que tarda una clula en dividirse se denomina tiempo de
generacin ,donde el nmero de clulas se duplica, siguiendo un
incremento exponencial ,para lo cual se requiere conocer el tiempo de
incubacin y la cantidad de bacterias tanto al inicio como al final del
proceso de incubacin .
El crecimiento de una poblacin resulta de la suma de los ciclos
celulares de todos sus individuos. Este crecimiento suele ser
asincrnico puesto que cada m.o se encuentra en un punto diferente
del ciclo celular, en un momento determinado en una poblacin se
encuentran clulas que acaban de dividirse, otras que estn
replicando su ADN y elongndose, otras que estn iniciando la
divisin celular, etc
VII. CUESTIONARIO

1. Cul es la diferencia entre la tasa especfica de crecimiento y su tiempo de

generacin?

La tasa especifica de crecimiento es el cambio del nmero de clulas o masa por

unidad de tiempo; en cambio, el tiempo de generacin (G) es el tiempo requerido
para que una clula se divida o una poblacin se duplique (G=t/n).

2. Describa un mtodo directo y otro indirecto para medir el crecimiento

bacteriano.

Los mtodos directos se basan en la medida de la evolucin del nmero de

clulas vivas (tcnicas de plaqueo) o del nmero de partculas (tcnicas
microscpicas y de contadores de partculas).

Los mtodos indirectos se basan en la medida de algn parmetro del cultivo que
nos permite deducir informacin sobre la evolucin del nmero de
microorganismos. La eleccin de un mtodo de seguimiento del cultivo en
concreto depende de las caractersticas del cultivo y del proceso.

3. Por qu es til representar los datos de crecimiento de

un cultivo microbiano?

Es til porque nos ayuda a contabilizar el aumento de microorganismos

durante un periodo de tiempo. A esto se le denomina crecimiento
poblacional.

1 generacin -------------> 2 clulas = 21

2 generaciones -------------> 4 clulas = 22
3 generaciones -------------> 8 clulas = 23
4 generaciones -------------> 16 clulas = 24
5 generaciones -------------> 32 clulas = 25

VIII. BIBLIOGRAFA
 Reproduccin y crecimiento microbiano( Tema 6)
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMi
cro/08_Tema_6_crecimiento.pdf

Madigan y col. ( 2010) Brock Biologa de los Microorganismos.

Dcima edicin. Editorial Pearson Prentice Hall. Espaa