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LABORATORIO

BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR

EDER REMOLINA CASTILLO


CDIGO 91516370
CARLOS ARTURO DELGADO BAREO
CDIGO 1097665681
LYDA YANIRA VENEGAS AYALA
CDIGO 52811020

GRUPO: 151009_6

TUTORA
DIANA CAROLINA PARRA

ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD ECISA


MARZO 06 DE 2017

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Grupo 151009_6
Laboratorio de Biologa Celular y Molecular
INFORME DE LABORATORIO
BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR

OBJETIVOS

La gua de prcticas del curso de Biologa Celular y Molecular tiene como objetivo
dar herramientas al estudiante para comprender las propiedades, estructura,
funciones, orgnulos celulares y las interacciones bioqumicas, genticas, con el
ambiente y su ciclo vital desarrollando su pensamiento cientfico y crtico respecto a
las relaciones que se dan en la Biologa celular y Molecular.

OBJETIVOS ESPECFICOS
Conocer y poner en prctica el conjunto de normas que se deben seguir para
evitar poner en riesgo la integridad fsica o vital de las personas reunidas en el
laboratorio.
Concientizar la importancia del uso adecuado de elementos de proteccin
personal
Conocer la forma correcta de usar los contenedores de desechos y el guardin
Conocer los riesgos a los que se expone al momento de trabajar con algunos
agentes patgenos e infecciosos como hongos y sangre en el laboratorio.
Reconocer los equipos que se utilizan en el laboratorio y su funcin
Reconocer la importancia de limpiar el rea de trabajo antes y despus de
trabajar en ella.
Conocer el material que se emplea para el trabajo en el laboratorio y la forma
correcta de usarlo
Conocer las partes del microscopio y la funcin de cada una
Aprender a manipular correctamente el microscopio
Aprender a realizar un montaje hmedo para las observaciones en el
microscopio
Aprender a calcular el dimetro de visin en el microscopio durante el trabajo con
el papel milimetrado

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Observar los procesos de isotnicos, hipotnicos e hipertnicos en clulas
sanguneas y vegetales usando la elodea
Observar los cambios que sufren las clulas durante su proceso reproductivo
(meiosis- mitosis)

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NDICE

Prctica No. 1: Bioseguridad


Prctica No. 2: Microscopa
Prctica No. 3: Clula: Crenacin, Hemlisis, Plasmlisis y Turgencia.
Prctica No. 4: Permeabilidad selectiva del eritrocito.
Prctica No. 5: Tejidos vegetales y Aislamiento de cloroplastos.
Prctica No. 6: Accin de lisosomas.
Prctica No. 7: Mitosis y Meiosis.
Bibliografa

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DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD

PRCTICA No. 1

BIOSEGURIDAD
Introduccin

El significado de la palabra bioseguridad se entiende por sus componentes: bio de


bios (griego) que significa vida, y seguridad que se refiere a la calidad de ser seguro,
libre de dao, riesgo o peligro. Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiologa es el
conjunto de normas y procedimientos que debe seguirse, para conservar la salud y
seguridad del personal que labora en el laboratorio y de la comunidad frente a los
riesgos de infeccin para evitar contaminarse y contaminar a los dems con agentes
potencialmente patgenos. Los microorganismos pueden entrar al husped por
diferentes mecanismos: contacto directo con la sustancia infectada (saliva, sangre, pus,
lesin); salpicaduras de sangre o saliva, secreciones nasofarngeas sobre la piel o
mucosa sana o erosionada, contacto directo con objetos contaminados y, por aerosoles
contaminados.

Objetivo
Se socializ la informacin descrita a continuacin y el uso adecuado de los elementos
de proteccin personal, se verific que los integrantes del grupo portaran la bata blanca
y se dio a conocer su importancia ya que es ella la que brinda proteccin evitando que
la ropa se contamine y contamine a otras personas fuera del laboratorio, a su vez,
permite identificar si en algn momento se tuvo contacto con algn tipo de reactivo o
fluido que ponga en riesgo la salud.
El lavado de manos es esencial antes y despus de cada prctica y debe hacerse de la
forma correcta para que estn seguras y libres de contaminacin.
Es indispensable limpiar el rea de trabajo antes y despus de cada prctica, ya que es
imposible conocer qu tipo de sustancias, fluidos o agentes se usaron durante la
actividad anterior en el laboratorio.
Es esencial aprender a identificar y separar el tipo de residuo que va en cada recipiente
de desechos ubicado en el laboratorio, se da a conocer el guardin, recipiente adicional
donde se almacenan para desechar todo tipo de elementos corto-punzantes y/o que
han tenido contacto con fluidos como sangre.

Material que se llev al laboratorio


Elementos de proteccin personal

Bata
Gorro
Guantes
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Tapabocas
Gafas de bioseguridad
Toallas desechables
Jabn antisptico

Material que proporcion en el Laboratorio

Alcohol Antisptico
Procedimiento:

1. Normas de Bioseguridad

Se Utiliz la "bata de Laboratorio" debidamente abotonada y limpia y se


retir antes de salir del laboratorio.

Se us guantes para manipular muestras y cultivos de microorganismos,


evitando contaminar el rea de trabajo y los implementos personales
(esfero, libros, apuntes); descartndolos en la caneca roja.

Se dio uso adecuado a los guantes.

Se recibi informacin de cmo utilizar mascarillas de respiracin, la cual


debe encajar cmoda y adecuadamente sobre el puente de la nariz para
evitar el empaamiento de las gafas protectoras. Esta protege sobre todo
la mucosa nasal que es ms susceptible a infecciones que la bucal,
debido a que esta ltima tiene mayor cantidad de flora normal que la
protege contra infecciones.

Se recibi informacin de cmo utilizar anteojos de proteccin para evitar


lesiones oculares causadas por partculas proyectadas hacia el rostro del
operador, a la vez que protege contra infecciones considerando que
muchos grmenes de la flora oral normal son patgenos oportunistas.

No se permiti comer, beber, fumar ni colocar otros objetos en la boca,


mientras se estuvo en el Laboratorio.

Se mantuvo el Laboratorio limpio y aseado.

Se descontaminaron las reas de trabajo antes de iniciar la prctica de


laboratorio y una vez terminada la prctica.

Se descart todo el material contaminado en los recipientes destinados


para ello.

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El lavado de manos se hizo al empezar el laboratorio y antes de
abandonarlo

Se conocieron las reglas del uso y cuidado de todos los equipos.

Se leyeron y se entendieron los pasos de cada procedimiento antes de


proceder a realizarlo.

2. Desinfeccin del rea de Trabajo.

Se limpi el rea de trabajo con Alcohol Antisptico antes y despus de cada


prctica

3. Manejo de elementos de proteccin personal.

4. Manejo de residuos.

Residuos infecciosos o de riesgo biolgico

Muchas enfermedades infecciosas se propagan a travs de la sangre y otros fluidos


corporales, de manera que es importante tomar las precauciones necesarias para no
exponerse a ellas innecesariamente. Los fluidos corporales incluyen la orina, heces,
sangre, saliva, leche materna, secreciones nasales y oculares, y secreciones
segregadas por heridas o tejidos.

La segregacin en la fuente es la base


fundamental de la adecuada gestin de
residuos y consiste en la clasificacin y
disposicin de los residuos en las canecas y
contenedores adecuados, de acuerdo con el
cdigo de color adoptado por la legislacin
vigente.

Los residuos se deben depositar en los


recipientes adecuados, los cuales deben ser
del color correspondiente a la clase de
residuos que se va a depositar en ellos y
deben estar marcados e identificados de
acuerdo con la siguiente tabla:

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5. Uso de Reactivos.

Se recibi informacin de que todos los reactivos que se utilizan en las operaciones y
reacciones en el laboratorio son potencialmente peligrosos por los que, para evitar
accidentes, debern trabajarse con cautela. Numerosas sustancias orgnicas e
inorgnicas son corrosivas o se absorben fcilmente por la piel, produciendo
intoxicaciones o dermatitis, por lo que se ha de evitar su contacto directo; si este
ocurriera, deber informar inmediatamente al docente

Para la manipulacin de los reactivos se debe tener en cuenta:

Los reactivos del laboratorio deben permanecer en su lugar respectivo.


Si necesita de un reactivo tome la cantidad que necesite del envase sin introducir
sustancias o utilizar las esptulas, que no hayan sido previamente limpiadas,
dentro del mismo.
Al finalizar coloque el envase en su sitio respectivo.
No devuelva material que ha sido sacado del envase al mismo, si no est seguro
de que no se encuentra contaminado o mezclado con otras sustancias

6. Uso Equipos.

Para la manipulacin de los equipos se debe tener en cuenta:

Los equipos deben ser mantenidos completamente limpios despus de haber


sido utilizados.
Si no sabe cmo opera un equipo, solicite el catlogo de funcionamiento o que
se le ensee a operarlo.

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Equipos del Laboratorio:

Incubadora: Equipo que permite depositar cajas de Petri y hacer cultivos de


microorganismos y cultivos celulares que necesitan calor.
Estufa: Equipo que sirve para esterilizar el material del laboratorio resistente al
calor.
Bao Mara: Equipo que permite calentar sustancias sobre una cama de agua.
Balanza: Equipo que permite medir la cantidad exacta de slidos, no se debe
mover de su ubicacin puesto que ha sido calibrada exactamente en ese lugar.
Se debe encender cinco minutos antes de usarla.

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Agitador: Equipo que permite mezclar lquidos y para ello se debe poner dentro
del recipiente una cpsula que permite que gire.
Centrfuga: Equipo que permite introducir tubos de ensayo, permite graduar las
revoluciones y el tiempo que debe permanecer las muestras dentro de ella.
Microscopio: Equipo que aumenta el tamao de un objeto de forma que pueda
ser observado por el ojo humano.

Cuidados con los equipos:


Microscopio:
Cuando hay necesidad de movilizar el microscopio de un sitio a otro, ste debe
sostenerse en posicin vertical, y tomarlo por el brazo y por la base, que son las partes
ms slidas del equipo.

Balanza:
Verificar siempre la nivelacin de la balanza.
Limpie la balanza de derrames y salpicaduras, estando apagada.
Al encender la balanza djela estabilizar por 10 minutos como mnimo.
Utilice siempre un recipiente para pesar, no ubique las sustancias o
especmenes directamente en el platillo.
Al pesar mantener las puertas cerradas para mejorar la estabilidad.
No pese sustancias corrosivas, calientes o que puedan degradar el interior de la
balanza.
No mover bajo ninguna circunstancia las balanzas de su posicin.
Revise la capacidad mxima del equipo.

Espectrofotmetro:
Estos equipos son muy delicados por lo cual es conveniente leer las instrucciones de
uso antes de ser utilizados.
Permitir que el instrumento se caliente antes de hacer algn procedimiento.
Verificar el 0 y el 100% T cada vez que se vaya a hacer lecturas y cuando vare
la longitud de onda.
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Asegurarse de que las cubetas estn limpias y libres de ralladuras y huellas
digitales. Esto debe hacerse cada vez que va a usarse.

Mantener cerrada la tapa del porta-muestras durante el proceso de medicin,


para asegurar una lectura adecuada.

7. Uso Material de Vidrio.


Recomendaciones
El material de vidrio se debe dejar limpio.
Cualquiera que sea el sistema que se utilice se debe enjuagar muy bien el
material de vidrio con agua corriente varias veces y finalmente con agua
destilada.
El material de vidrio graduado, como probeta, bureta, pipetas, matraz aforado,
nunca debe ser sometido a calentamiento.
Se pude calentar el material de contencin, como: vaso de precipitado, baln,
tubos de ensayo, erlenmeyer.
Descartar el material de vidrio roto en el contenedor dispuesto para tal fin.

Uso de Material de vidrio


Se recibi informacin del siguiente material existente en el laboratorio:
Embudo: Puede ser de vidrio el cual se usa para filtrar una solucin
empleando aparte de un filtro de papel doblado en cuatro partes y
abierto en la primera de ellas para depositar el lquido; o de plstico,
para cosas ms simples de acuerdo a su practicidad.

Tubo de ensayo: Permite la mezclar reactivos con


soluciones, es resistente al calor, la forma correcta de usarlo
sobre un mechero es en posicin inclinada, sujetndolo por
medio de una pinza de madera y haciendo movimientos de
rotacin sobre el calor. Existen tubos de ensayo de dimetros
variados; para usarlos en la centrfuga se debe tener en
cuenta que el material del que est hecho sea plstico y traiga una tapa, no es
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recomendable para depositar sangre ya que se quedara adherida a sus
paredes.

Gradilla: Plataforma de plstico o de madera donde se deposita


los tubos de ensayo.

Cpsulas: Son en porcelana, se utilizan para calentar sustancias


en la estufa hasta obtener el reactivo puro.

Mortero: Se usa para macerar o mezclar sustancias en el


laboratorio.

Vasos de Precipitado: Sirve para preparar y calentar soluciones


sobre un trpode con malla de asbesto.

Probeta: Es una pieza volumtrica por lo tanto es la ms exacta, el valor


aforado debe estar siempre sobre la lnea llamada menisco. Permite
medir de forma estricta una solucin; las hay de vidrio, plstico y se
encuentran de diferentes volmenes. No se debe preparar soluciones
dentro de ella.

Vidrio de Reloj: Se usa para pesar en la balanza.

Pipeta: Permite tomar la solucin y para ello se usa junto con una pieza
llamada Pipeteador. No se debe dejar sobre el mesn sin ningn tipo de
proteccin y se debe procurar que la punta est libre de cualquier tipo de
contaminacin.

Agitador de Vidrio: Permite mezclar soluciones hasta que


queden homogneas.
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Termmetro: Se usa en los vasos de precipitado y su
funcin es medir la temperatura.

Pipeta Pasteur: Permite tomar volmenes pequeos y aplicar


gotas.

Tubo de Centrfuga: Recipiente alargado de plstico con tapa


y se usa para poner sustancias dentro de la centrfuga.

Frasco Lavador: Recipiente con una boquilla larga que debe


permanecer siempre bien cerrado y permite lavar con agua estril los
recipientes del laboratorio.

Esptula: Se usa para sacar del recipiente reactivos


slidos.

Mechero de Bunsen: Se usa para dar calor a las soluciones y


est conectado a la lnea de gas natural. El material de vidrio
graduado no se debe calentar.

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Presentacin de resultados
Teniendo en cuenta la frmula V1xC1=V2xC2; en una tabla presente diluciones al
0.5%, 1%, 1.5% y 5% de hipoclorito de sodio que tiene una concentracin inicial de
10% indicando la concentracin inicial, concentracin final, volumen inicial de
hipoclorito, volumen de agua y volumen final para cada dilucin.

HIPOCLORITO DE HIPOCLORITO DE HIPOCLORITO DE HIPOCLORITO DE


SODIO AL 0.5% SODIO AL 1% SODIO AL 1.5% SODIO AL 5%

NaCIO al 0.5% = NaCIO al 1% = NaCIO al 1.5% = NaCIO al 5% =


10ml NaCIO + 10ml NaCIO + 10ml NaCIO + 10ml NaCIO +
200ml H2O 100ml H2O 66.6ml H2O 20ml H2O

Cuestionario:
Defina que es Bioseguridad: la bioseguridad se integra por medidas y normas que
tratan de preservar la seguridad del medio ambiente en general y de los trabajadores,
pacientes y visitantes de algn lugar donde se utilizan elementos fsicos, qumicos o
biolgicos, sobre todo sangre y fluidos corporales que puedan provocar dao, por su
carcter potencialmente infecciosos o contaminante.

1. Cmo puede usted evitar en el laboratorio daos a su salud?

Antes de entrar al laboratorio asegrese de llevar puesta la bata para evitar


manchas o daos en la ropa.
Saber que procedimiento se va a desarrollar en la prctica, en el laboratorio.
Utilizar siempre los elementos de proteccin personal como guantes, gorro y
tapabocas.

2. Defina el concepto de Limpieza, contaminacin, desinfeccin, descontaminacin


y esterilizacin

- El termino limpieza se emplea para denominar a todas aquellas acciones


que permiten eliminar la suciedad de algo o alguien, la finalidad de la
limpieza no es ms que la eliminacin total de aquellas bacterias o

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microorganismos que se encuentran en el cuerpo y en los diferentes
entornos en donde se encuentren las personas.

- Descontaminacin: Es la reduccin de la cantidad de microorganismos con


el fin de disminuir el riesgo de infeccin y carga bacteriana de los
efluentes, es necesario que el material sea desinfectado en el lugar donde
se utiliza, as para evitar que se adhieran restos de materia orgnica

- Contaminacin: Se denomina a la presencia en el ambiente de cualquier


agente qumico, fsico o biolgico nocivos para la salud o el bienestar de la
poblacin.

- Desinfeccin: Es un proceso fsico o qumico que mata o inactiva agentes


patgenos tales como bacterias, virus y protozoos impidiendo el
crecimiento de microorganismos patgenos en fase vegetativa.

- Esterilizacin: Eliminacin o muerte de todos los microorganismos que


contiene un objeto, superficie o sustancia, y que se encuentren
acondicionados de tal forma que no puedan crecer nuevamente.

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ACTIVIDAD PRCTICA No. 2
MICROSCOPA
Introduccin
El microscopio es un instrumento que permite
aumentar el tamao de un objeto un nmero
determinado de veces. Existen dos grandes tipos
de microscopio: el microscopio ptico (que usa
luz) y el microscopio electrnico (que usa
electrones). El microscopio ptico fue el
instrumento que llev al descubrimiento de la
clula, mientras que el microscopio electrnico,
dado su enorme poder de resolucin, permiti
establecer una descripcin detallada de las
estructuras subcelulares (como por ejemplo los
organelas celulares).
El microscopio ptico funciona en base a lentes de
vidrio convergentes, que como su nombre lo
indica, provocan que los rayos de luz converjan en
un punto, al cual se le llama foco. Al lograr que un
nmero de rayos de luz que normalmente
veramos separados, enfoquen en nuestra retina,
podemos interpretar esa imagen (que es una imagen virtual) como una ampliacin de la
imagen real.

Su sistema ptico posee un lente condensador (que


concentra la luz proveniente de la fuente), una serie de
lentes objetivos (que recogen los rayos difractados por la
muestra), con diferentes poderes de aumentos
(usualmente 4x, 10x, 40x y 100x) y uno o dos lentes
oculares (cerca de los ojos) que generalmente
proporcionan un aumento de 10x. Los trminos de
aumento se expresan en x, de tal forma que un aumento
de 10x (diez por) significa que una imagen est
aumentada 10 veces el tamao original.
El aumento total del microscopio es el producto de los
aumentos del lente objetivo ms el lente ocular.

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Objetivo
Comprender el funcionamiento del microscopio y reconocer los diferentes poderes del
microscopio mediante diferentes montajes.
1. El procedimiento de microscopa comenz identificando las partes del microscopio
que se describen a continuacin:
o Oculares, pueden ser de 10x o de 16x (veces de aumento), tiene dos juegos de
lentes de los cuales un juego invierte la muestra y el otro aumenta su tamao.
o Porta-oculares
o Tornillo ojo izquierdo, conocido tambin como graduador de Dioptras para
personas con defectos visuales.
o Cabeza, es la parte que sostiene los porta-oculares y el tornillo de graduacin.
o Brazo, sirve para sostener con una mano el microscopio mientras se mueve, la
otra mano debe ir debajo de la base.
o Revolver, es la pieza giratoria que sostiene los objetivos. Estos pueden ser de 4x
(anillo color rojo), 10x (anillo color amarillo), 40x (anillo color azul) y 100x (anillo
color blanco) se llama objetivo de inmersin; para ello se usa con una gota de
aceite sobre la muestra ya que permite una mayor refraccin en la observacin y
se usa en montajes secos o permanentes.
o Platina o carro mecnico, tiene una pinza que permite coger y sostener la muestra.
Tiene dos tornillos ubicado uno encima de otro, el de arriba mueve la platina y el
otro mueve la pinza.
o Diafragma, controla la cantidad de luz y la lleva a un punto.
o Tornillo macromtrico y micromtrico para desplazamientos grandes y dar enfoque
a las observaciones respectivamente.
o Fuente de Luz
o Base, da soporte y estabilidad al microscopio.
o Las observaciones se deben hacer bien sentados, con los brazos sobre el mesn
de trabajo.

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o La intensidad de la luz se puede variar con una palanca que trae el condensador o
en el botn que hay al lado del botn de encendido.

Material que se llev al laboratorio para esta actividad


Papel milimetrado, Hilos de colores, Recorte de peridico con la letra asimtrica,
laminas portaobjetos, laminillas, elementos de proteccin personal.

Material que proporcion el Laboratorio

Planta acutica Elodea, Microscopio ptico. Lamina con extendido coloreada, Aceite de
inmersin, Papel de Arroz o de ptica, Alcohol isoproplico.

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Procedimiento:

1. Identificacin de las partes del microscopio

2. Funciones del Microscopio

Partes del microscopio Funcin


Fuente de Luz Foco que proyecta la luz hacia el condensador
Condensador Sistema de lentes que concentran y dirigen la luz hacia un
punto de la lmina portaobjetos.
Diafragma Regula la luz que llega al condensador
Platina y pinza Plataforma con una perforacin donde se ubica y se
sostiene por medio de una pinza las lminas portaobjetos.
Permite desplazarla hacia adelante y atrs por medio de
un sistema de cremalleras.
Objetivos Conjunto de lentes sostenido por el revolver que permite
ampliar las imgenes
Oculares Juego de lentes que amplan las imgenes.
Tornillo Macromtrico Se usa para desplazamientos grandes de la platina.
Tornillo Micromtrico Se usa para enfocar una imagen
Revolver Sostiene y permite girar el juego de objetivos de 4x, 10x,
40x y el de inmersin.
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3. Se realiz el Montaje hmedo de la siguiente forma:

Para dar inicio al montaje se siguieron los siguientes pasos:

o Se tom una lmina portaobjetos


o Se tomaron dos gotas de agua de la planta acutica Elodea y se ubicaron
sobre la lmina.
o Se tom una laminilla cubreobjetos y se ubic en posicin oblicua en el borde
de la lmina, permitiendo que cayera sin dejar burbujas en su interior.
o Se limpi el exceso de lquido de la lmina con una toalla de papel.
o Se encendi el microscopio.
o Se verific que el objetivo que posicin fuera el de 4x (anillo amarillo)
o La platina del microscopio deba estar en la parte de abajo antes del montaje.
o Se ubic la lmina sobre la platina y se sostuvo con la pinza.
o Se subi la platina hasta el tope.
o Se ajustaron los oculares
o Se dio inicio a la exploracin usando los tornillos macro y micromtrico.

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4. Observacin con el objetivo de inmersin 100X

Procedimiento para montajes secos Testculo de Ratn

Para la observacin de este


montaje se us el lente de
inmersin (100x) junto con
el aceite.
o Se gir el revolver hasta
que el lente de 100 x y el
de 40x deja el espacio libre en el centro para aplicar la gota de aceite.
o Se subi el condensador hasta que la luz se concentr e indic el punto donde
se debe aplicar la gota.
o Se ubic la lmina micropreparada del testculo de ratn
o Se ubic el objetivo de inmersin 100x
o Se subi la platina observando directamente hasta que la gota subi.
o Al terminar la observacin se limpi el objetivo con alcohol isoproplico.

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5. Comprobacin de los poderes o capacidades del microscopio

Se hizo el montaje del recorte de la letra a de la siguiente forma:


o Se recort la letra
o Se ubic sobre una lmina portaobjetos humedecindola un poco
o Se cubri con una laminilla cubreobjetos
o Se verific que el objetivo 4x (anillo amarillo) estuviera en posicin de
observacin.
o Se ubic la lmina sobre la platina y se sostuvo con la pinza.
o Se subi la platina hasta el tope.
o Se ajustaron los oculares
o Se dio inicio a la observacin usando los tornillos macro y micromtrico.

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Se hizo el montaje de los hilos de la siguiente forma:
o Se cortaron hilos de colores
o Se ubicaron sobre una lmina portaobjetos humedecindolos un poco.
o Se cubrieron con una laminilla cubreobjetos.
o Se ubic la lmina sobre la platina y se sostuvo con la pinza.
o Sube la platina hasta el tope.
o Se ajustaron los oculares.
o Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.
o De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x

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6. Clculo del dimetro del campo de visin

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Cuestionario
1. Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine:

a. Cmo se manifiesta el poder de resolucin? El poder de resolucin se


manifiesta cuando podemos ver dos puntos que estn unidos como si estuvieran
separados, como se observ en la tinta de la letra o en las hebras de los hilos, el
ojo humano no es capaz de alcanzar esta distincin.
b. Cmo se manifiesta el poder de aumento? Se manifiesta en el montaje de la
letra asimtrica, el aumento total se da por el aumento del ocular x el aumento
del objetivo.
c. Cmo se manifiesta el poder de definicin? El poder de definicin se da cuando
se puede observar una imagen perfecta con contornos definidos.
d. Cmo se manifiesta el poder de penetracin o profundidad? Este poder permite
ver los diferentes planos de una preparacin.
2. Cul es la utilidad del microscopio? El microscopio es un equipo de laboratorio
cuya importancia recae en la posibilidad de ver entes que a simple vista para el ojo
humano es imposible.

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PRCTICA No. 3
CLULA: CRENACIN, HEMLISIS, PLASMLISIS Y TURGENCIA
Introduccin
Se record que las clulas sanguneas y vegetales permiten la entrada y la salida de
agua la cual modifica su forma dependiendo del estado de hidratacin la cual se
determina de la siguiente por los siguientes fenmenos:

- Isotnico : Se conoce como el estado natural de la clula, la


concentracin del soluto es igual a la concentracin interna.
- Hipotnico : Se presenta cuando es menor la concentracin del soluto
y mayor la concentracin de solvente.
- Hipertnico : La concentracin de soluto es mayor que la concentracin
de solvente.

La membrana plasmtica de las clulas vegetales y animales es muy permeable al


agua, siendo pocas las sustancias que la atraviesan con igual facilidad, esto ocasiona
que cuando exista entrada y salida de ella, la clula tambin se altere en su forma, ya
que sta, en parte est determinada por el estado de hidratacin de los coloides
celulares.

Objetivo
El objetivo de este procedimiento fue reconocer el estado de hidratacin de las clulas
sanguneas y vegetales. Se observ los fenmenos de hipotona, isotona e hipertona
en clulas animales y vegetales.

Material

Microscopio compuesto.
6 portaobjetos y 6 cubreobjetos.
Vasija con agua destilada.
Pipeta Pasteur.
Solucin de NaCl al 0.6%
Solucin de NaCl al 0.9%
Solucin de NaCl al 1.2%
Solucin de NaCl al 10%

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Para empezar el trabajo se dispuso la balanza en situacin de encendido

Se prepar la solucin de NaCl al 0.6%, 0.9%, 1.2% y 1.0% de la siguiente forma:

1. Para la solucin de NaCl al 0.6%.


- Se tom 10 ml de agua con una pipeta Pasteur
- Se deposit en un vaso de precipitado
- Con una esptula se tom Cloruro de Sodio y se deposit en un vidrio de reloj
dispuesto sobre la balanza hasta obtener 0.06gr
2. Para la solucin de NaCl al 0.9%.
- Se tom 10 ml de agua con una pipeta Pasteur
- Se deposit en un vaso de precipitado
- Con una esptula se tom Cloruro de Sodio y se deposit en un vidrio de reloj
dispuesto sobre la balanza hasta obtener 0.09gr.
3. Para la solucin de NaCl al 1.2%.
- Se tom 10 ml de agua con una pipeta Pasteur
- Se deposit en un vaso de precipitado
- Con una esptula se tom Cloruro de Sodio y se deposit en un vidrio de reloj
dispuesto sobre la balanza hasta obtener 0.12gr
4. Para la solucin de NaCl al 1.0%.
- Se tom 10 ml de agua con una pipeta Pasteur
- Se deposit en un vaso de precipitado
- Con una esptula se tom Cloruro de Sodio y se deposit en un vidrio de reloj
dispuesto sobre la balanza hasta obtener 1gr.

Luego de tener la medida exacta de NaCl, cada grupo la deposit en el vaso de


precipitado y usando un agitador de vidrio obtuvo una mezcla homognea.

Clulas sanguneas:

1. Proceso de montaje isotnico en clulas sanguneas:


Se ubic una gota de sangre sobre una lmina portaobjetos
Se cubri con una laminilla cubreobjetos.
Se ubic la lmina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza.
Se subi la plataforma hasta el tope.
Se ajustaron los oculares.
Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.
De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x

2. Proceso de montaje hipotnico en clulas sanguneas:


Se ubic una gota de sangre sobre una lmina portaobjetos
Se agreg tres gotas de solucin de NaCl al 0.6%
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Se cubri con una laminilla cubreobjetos.
Se ubic la lmina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza.
Se subi la plataforma hasta el tope.
Se ajustaron los oculares.
Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.
De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x

3. Proceso de montaje hipertnico en clulas sanguneas:


Se ubic una gota de sangre sobre una lmina portaobjetos
Se agreg tres gotas de solucin de NaCl al 1.2%
Se cubri con una laminilla cubreobjetos.
Se ubic la lmina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza.
Se subi la plataforma hasta el tope.
Se ajustaron los oculares.
Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.
De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x

4. Proceso de montaje hipertnico en clulas sanguneas:


Se ubic una gota de sangre sobre una lmina portaobjetos
Se agreg tres gotas de solucin de NaCl al 1.0%
Se cubri con una laminilla cubreobjetos.
Se ubic la lmina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza.
Se subi la plataforma hasta el tope.
Se ajustaron los oculares.
Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.
De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x
Clulas vegetales (Elodea):

1. Proceso de montaje isotnico en clulas vegetales:


Se tom la muestra del pice de la Elodea
Se ubic la Elodea por el envs sobre una lmina portaobjetos
Se cubri con una laminilla cubreobjetos.
Se ubic la lmina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza.
Se subi la plataforma hasta el tope.
Se ajustaron los oculares.
Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.

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De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x

2. Proceso de montaje hipotnico en clulas vegetales:


Se ubic la Elodea por el envs
sobre una lmina portaobjetos
Se agreg tres gotas de solucin
de NaCl al 0.6%
Se cubri con una laminilla
cubreobjetos.
Se ubic la lmina sobre la
plataforma y se sostuvo con la
pinza.
Se subi la plataforma hasta el
tope.
Se ajustaron los oculares.
Se inici la observacin con el
objetivo 4x (anillo amarillo) usando
los tornillos macro y micromtrico.
De la misma manera se hizo la
exploracin con los objetivos de Observacin de Elodea con ocular y objetivo
10x y 40x de 10x

3. Proceso de montaje hipertnico en


clulas sanguneas:
Se ubic la Elodea por el envs sobre una lmina portaobjetos
Se agreg tres gotas de solucin de NaCl al 1.2%
Se cubri con una laminilla cubreobjetos.
Se ubic la lmina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza.
Se subi la plataforma hasta el tope.
Se ajustaron los oculares.
Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.
De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x

4. Proceso de montaje hipertnico en clulas sanguneas:


Se ubic la Elodea por el envs sobre una lmina portaobjetos
Se agreg tres gotas de solucin de NaCl al 1.0%
Se cubri con una laminilla cubreobjetos.
Se ubic la lmina sobre la plataforma y se sostuvo con la pinza.
Se subi la plataforma hasta el tope.

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Se ajustaron los oculares.
Se inici la observacin con el objetivo 4x (anillo amarillo) usando los tornillos
macro y micromtrico.
De la misma manera se hizo la exploracin con los objetivos de 10x y 40x
Presentacin de resultados

- Se detect que al usar sangre que no es fresca afecta el resultado al


momento de la observacin. No se detecta la diferencia entre las soluciones
- Con el objetivo de 40x no es posible obtener una imagen definida.
- La enervadura (parte oscura de la superficie de la elodea) contiene tejido
parnquimo fotosinttico, en el cual estn contenidos los cloroplastos; las
clulas tienen forma rectangular, se estimulan con la luz y cuando se agrupan
en el borde de la clula lo hacen porque la vacuola ocupa todo el centro de la
clula en una solucin hipertnica.
- Con una solucin de NaCl al 1.0 los cloroplastos se agrupan hacia el centro
de la clula ya que ha salido agua de ella y por lo tanto se ha reducido su
tamao.

Cuestionario

1. Mencione las diferencias observadas entre el comportamiento de la clula vegetal y


animal. Explique.

Rta.: Se observ que la principal diferencia entre las clulas sanguneas y de la


Elodea hace referencia a su color rojo y verde respectivamente. Las clulas
vegetales tienen una estructura ms definida y es de forma alargada mientras en las
clulas sanguneas se presenta de forme redondeada.

2. Describe lo que sucede en una clula cuando se coloca en un medio:

a) Hipotnico: En este medio las clulas aumentan su tamao debido a la absorcin


de la solucin

b) Isotnico: Este es el estado natural de las clulas, en este medio no presenta


ningn tipo de modificacin

c) Hipertnico: Las clulas reducen su tamao debido a la extraccin de agua


buscando una nivelacin en la concentracin del soluto.

3. Explique en qu consisten los fenmenos de smosis y de difusin.

a) Osmosis: Es un medio de transporte celular por medio del cual un disolvente


como el agua pasa a travs de una membrana semipermeable. Las molculas de
agua se mueven de una mayor concentracin a una menor concentracin.

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b) Difusin: Es el movimiento que hacen los tomos y las molculas de una regin
de mayor concentracin a una de menor concentracin

4. Por qu los sueros fisiolgicos que se aplican a pacientes intravenosamente deben


ser isotnicos?

Rta.: Porque la osmolaridad del lquido isotnico se aproxima a la concentracin del


plasma en suero. Con esto se busca evitar que las clulas tengan una reaccin
hipotnica o hipertnica que pueda afectar la salud de un paciente.

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PRCTICA No. 4

PERMEABILIDAD SELECTIVA DE LA MEMBRANA DEL ERITROCITO


Introduccin

Cuando un eritrocito es colocado en una solucin isotnica, que contiene molculas que
pueden atravesar la membrana, la molcula penetrante entra en la clula ocasionando
que sta estalle. Este estallamiento de los eritrocitos es llamado hemlisis y puede ser
detectado por medio de un espectrofotmetro, que mide el cambio en la absorcin de la
luz, debido al paso de la hemoglobina hacia el exterior.

Objetivo

Se visualiz y determin el porcentaje de hemlisis en eritrocitos causada por diferentes


molculas.

Material

4 vasos de precipitados de 100 ml.


6 vasos de precipitado de 250 ml.
Una pipeta de 1 ml.
6 pipetas de 10 ml.
Un agitador de vidrio.
Una pizeta con agua destilada.
Espectrofotmetros.
Celdas para espectrofotmetro.

Reactivos

Solucin de NaCl 0.17 M Solucin de Glicerol 0.32 M


Solucin de Metanol 0.32 M
Solucin de Butanol 0.32 M
Solucin de Oxalato de amonio 0.12 M
Solucin de Fructuosa 0.25 M
Solucin de cido ctrico 0.26 M
Material biolgico Sangre desfibrinada (10 ml) por grupo de trabajo.
Sangre humana con anticoagulante EDTA

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Procedimiento

Se prepar una solucin llamada stock de la siguiente forma:


- Se coloc con una pipeta 5 ml de sangre en un vaso de precipitado
- Se adicion 45 ml de solucin isotnica de NaCl 0.17 M.
- Se agit levemente para homogenizar.

Se prepar una solucin al 100% de hemolisis de la siguiente forma:


- Se dispuso en un vaso de precipitados 0.5 ml de solucin stock
- Se agreg 3 ml de agua destilada
- Se adicion 26.5 ml de solucin de NaCl 0.17 M.
- Se agit levemente para homogenizar

Se prepar una solucin al 100% de hemolisis de la siguiente forma:


- Se deposit en un vaso de precipitados 0.5 ml de solucin stock
- Se agreg 29.5 ml de solucin de NaCl 0.17 M.
- Se agit ligeramente.

Para calibrar el espectrofotmetro se siguieron los siguientes pasos:

- Se ajust al 0% de Transmitancia y a una longitud de onda de 525 nm,


- Se llen una celda con la solucin de 100% de hemolisis
- Se calibr a 100% de Transmitancia a la misma longitud de onda.

Una vez calibrado el espectrofotmetro, se obtiene la lectura de Transmitancia para la


solucin de 0% de hemolisis.

Es de resaltar que los datos obtenidos sirvieron para realizar la curva estndar para
Hemlisis de la sangre, graficando % de Transmitancia contra % de Hemlisis.

Posteriormente en un vaso de precipitados se dispuso 29.5 ml de cada una de las


soluciones:
- Oxalato de amonio
- Metanol
- Butanol
- Fructosa
- cido ctrico

Luego de esto se procedi de la siguiente forma:

Se adicion 0.5 ml de solucin stock, agitando suavemente y se llen la celda con la


mezcla.

Se introdujo la celda en el espectrofotmetro calibrando de antemano

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Se tomaron las lecturas de cada una de las soluciones las cuales arrojaron los
siguientes datos:

0% Hemolisis 2.8076

100% Hemolisis 6.1646 Clulas Estalladas

Oxalato de amonio 20.300

Metanol 63.220 > hemlisis clulas + hemoglobina al medio; >


Glbulos rojos rotos + espacio para paso de electrones

Butanol 62.793

Fructosa 8.4229 < hemlisis + clulas

cido ctrico 53.955

Nota: Los valores que arroja el espectrofotmetro no tienen unidad

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PRCTICA No. 5
Accin de lisosomas

Introduccin

Las sustancias que penetran en la clula por


fagocitosis o pinocitosis van a experimentar la accin
de las enzimas digestivas intracelulares, contenidas
en orgnulos llamados lisosomas. Estos orgnulos
son corpsculos esfricos que miden
aproximadamente 0.5 micrmetros, estn delimitados
por una unidad de membrana y contienen enzimas
hidrolticas. Se han encontrado lisosomas en todas las
clulas animales y vegetales.

Los lisosomas promueven la digestin intracelular, tanto del material exgeno que
penetra en la clula por pinocitosis, como tambin el material endgeno. Este ltimo
puede estar constituido por orgnulos degenerados o por productos de desasimilacin
del metabolismo celular.

Objetivo

Se observ la funcin de los lisosomas de manera anloga en ciliados.

Material

Microscopio compuesto Porta y cubreobjetos.


Pipeta de un ml.
Mechero de Bunsen
6 tubos de ensayo 15 x 150 mm.
Gradilla.
Pinzas
Tela de asbesto.
Tripie Recipiente para bao Mara.
Pipeta Pasteur

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Termmetro.
Hoja de papel aluminio.

Reactivos
Solucin de Rojo Congo al 0.4%
Material biolgico
Cultivo de levaduras de pan. (30 ml.)
Procedimiento

Se tomaron tres tubos de ensayo


En cada uno de ellos se dispuso un mililitro del cultivo de levaduras.
Un tubo se puso en el hielo durante 10 minutos.
Otro se coloca en el bao Mara a 30C
El ltimo se tap con papel aluminio y se puso en un bao Mara hirviendo
durante 10 minutos.

Al trmino de la exposicin de cada temperatura, se coloc de inmediato en cada tubo


0.5 ml de rojo de Congo al 0.4%. Se Agit cada tubo y se dej en reposo durante 5
minutos.

Al hacer las observaciones al microscopio de cada uno de los tubos, poniendo atencin
al grado de tincin que se presentaron se observ que cuando se presentaron los
cambios fuertes de temperatura y con la exposicin a la luz el color se hizo ms oscuro,
mientras que el tubo que estuvo protegido de la exposicin su color se mantuvo claro.

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PRCTICA No 6

Tejidos vegetales: Aislamiento de cloroplastos intactos

Introduccin

La clula es la unidad bsica de la vida que contiene una amplia variedad de distintos
tipos de orgnulos. Si se requiere estudiar la funcin particular de los cloroplastos u otro
orgnulo resulta de gran valor poder aislar en estado puro el orgnulo que interesa. La
separacin de un orgnulo, por lo general se hace mediante la tcnica de centrifugacin
diferencial, la cual depende del principio de que las partculas de tamao diverso se
desplazan hacia el fondo del tubo de centrifuga a diferentes velocidades cuando se les
coloca en un campo centrfugo.

Una suspensin de material de clulas rotas se somete al principio de la fuerza


centrfuga muy baja durante un corto perodo de tiempo, de modo que solo los ncleos
y las clulas ntegras se sedimentan formando un precipitado. Con fuerzas centrfugas
cada vez mayores se pueden separar los cloroplastos y las mitocondrias en suspensin,
luego los microsomas y para finalizar los ribosomas. Este ltimo paso requiere de una
ultracentrfuga, la cual genera velocidades que producen hasta 100 000 veces la fuerza
de la velocidad.

Los cloroplastos cuando son aislados cuidadosamente son capaces de reducir el


colorante 2,6-Diclorofenol-Indo fenol (DCPIP), lo cual debe ser medido
espectrofotomtricamente comparado con una muestra control. La reduccin se debe a
que capta los electrones en lugar del NADPox en la parte no cclica de la fotosntesis.

Objetivo:

Se prob un mtodo de aislamiento de cloroplastos y se observ su funcionamiento en


condiciones ptimas y con SHOCK osmtico.

Materiales y Reactivos

Linterna
Mortero y pistilo
Pipeta de 10 ml.
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Pipeta de un ml
Vaso de precipitados de 100 ml. Tijeras.
6 tubos de ensayo 15mm X 150 mm. y Gradilla.
Embudo.
Bolsa de hielo.
Sobre de gasas.
Charola metlica.
Pipeta Pasteur con goma.
Cubeta con agua destilada.
3 espectrofotmetros.
6 celdas para espectrofotmetro.
Una centrfuga clnica.
6 tubos para centrfuga.
Solucin de NaCl 0.35 M en Buffer de fosfatos 0.02 M, pH 8. (buffer salino)
Solucin de DCPIP 0.3 M.

Material biolgico

Hojas de espinacas o de acelgas (3 o 4 por equipo)

Procedimiento

1. Se enfri con anticipacin el mortero con hielo, se le agreg 20 ml de buffer salino


fro y las partes verdes de sus hojas de espinacas.

2. Se trituraron durante 5 minutos y luego se filtr el homogenizado a travs de gasa


doble previamente humedecida con 10 ml de buffer salino.

3. El filtrado se distribuy de manera equitativa en dos tubos de ensayo y se centrifug


a 1000 rpm. Durante tres minutos, se obtuvieron dos fases:

- El sobrenadante: que contiene los cloroplastos en suspensin.


- El precipitado: que tiene clulas intactas y ncleos.

El sobrenadante obtenido se coloc en tubos de ensayo fros.

Se desech el precipitado.

Se coloca de nuevo el sobrenadante en tubos de centrfuga y se centrifug a


3000rpm durante 5 minutos.

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Al final de este tiempo se descart el sobrenadante y el precipitado se suspende en
buffer salino fro utilizando en total 2 ml por cada tubo.

De esta manera se prepar la suspensin de cloroplastos intactos.

Para preparar la suspensin de cloroplastos con shock osmtico:

Se coloc en un tubo 1 ml de la suspensin de cloroplastos intactos y 4 ml de


agua destilada.

Se envolvi 4 tubos de ensayo con papel aluminio, y despus se prepararon los


tubos de la siguiente manera:

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Tubo 1 2 3 4
(este tubo no se
(Blanco)
expone a la luz)

Solucin de DCPIP 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml


0.3 M.

Buffer Salino 9.5 ml 9.5 ml 9.5 ml 9.5 ml

Suspensin 0.2 ml __ __ __
cloroplastos con
SHOCK osmtico

Suspensin de __ 0.2 ml 0.2 ml __


Cloroplastos
intactos

Antes de proceder a tomar las lecturas correspondientes debe agitar perfectamente bien
todos los tubos.

- Se calibr el espectrofotmetro a 0% de absorbancia a una longitud de onda de 450


nm
- Se llen una celda con el contenido del tubo No. 4 (tubo blanco) y se calibr a 0%
de absorbancia a la misma longitud de onda.
- Una vez calibrado el espectrofotmetro se obtuvo las lecturas de absorbancia a 450
nm de los tubos 1, 2 y 3 al tiempo de 0 minutos de exposicin a la luz.
- Enseguida se expuso los tubos 1, 2 y 4 a la luz, colocndolos a una distancia
aproximada de 15 cm de la linterna durante un minuto.
- Al trmino de este tiempo se taparon nuevamente con papel aluminio

Se procedi a realizar las lecturas de absorbancia a 450 nm de los tubos 1, 2 y 3 en el


espectrofotmetro.

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Presentacin de resultados

Se presentan en la siguiente tabla los datos experimentales obtenidos.

Tubo/Tiempo de exposicin 0 min 5 min

Tubo 1. Suspensin
cloroplastos con SHOCK 7.2021 9.3750
osmtico
Tubo 2. Suspensin de
Cloroplastos intactos 2.7954 3.2837
(expuesto a la luz)
Tubo 3. Suspensin de
Cloroplastos intactos (no 3.7354 5.707
expuesto a la luz)
Tubo 4. Blanco 10.022 11.365

Nota: el Buffer presenta contaminacin por lo tanto los valores deben ser confirmados.

- Se nota un incremento en los valores a medida que pasa el tiempo aunque


solo tiene reactivos
- El cambio en los valores del tubo 3 debi mantenerse intacto, sin embargo al
tener la boca del tubo descubierta permiti el ingreso de luz por la parte
superior del tubo.
- Los resultados del tubo blanco deberan ser iguales al no haber cloroplastos
que reaccionen a la luz.

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PRCTICA No 7
Meiosis y Mitosis

Son procesos de divisin celular, la meiosis consiste en que una clula madre al
dividirse produce dos clulas hijas que contienen la mitad de cromosomas que la clula
madre; la mitosis se da cuando la clula duplica su material gentico y produce dos
clulas hijas idnticas a la clula madre.

Objetivo

Se aprendi a diferenciar los periodos del ciclo celular.

Material

Microscopio.
Aceite de inmersin.
Acetocarmn
Metanol
Bistur
Micropreparados que ilustran los procesos de mitosis y meiosis.

Procedimiento mitosis

Para la observacin de este montaje se us el lente de inmersin (100x) junto con el


aceite.

o Se gir el revolver hasta que el lente de 100 x y el de 40x deja el espacio libre
en el centro para aplicar la gota de aceite.
o Se subi el condensador hasta que la luz se concentr e indic el punto donde
se debe aplicar la gota.
o Se ubic la lmina micropreparada del pice radical de la cebolla
o Se ubic el objetivo de inmersin 100x
o Se subi la platina observando directamente hasta que la gota subi.
o Al terminar la observacin se limpi el objetivo con alcohol isoproplico.

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Presentacin de resultados

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Procedimiento meiosis

Para la observacin de este montaje se us el lente de inmersin (100x) junto con el


aceite.

o Se gir el revolver hasta que el lente de 100 x y el de 40x deja el espacio libre
en el centro para aplicar la gota de aceite.
o Se subi el condensador hasta que la luz se concentr e indic el punto donde
se debe aplicar la gota.
o Se ubic la lmina micropreparada del corte transversal del testculo de ratn
o Se ubic el objetivo de inmersin 100x
o Se subi la platina observando directamente hasta que la gota subi.
o Al terminar la observacin se limpi el objetivo con alcohol isoproplico.

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REFERENCIAS

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Mecanismos De Accin Hormonal A Travs De Receptores Ubicados En La Membrana
Celular. Recuperado de: http://www.cpicmha.sld.cu/hab/pdf/vol11_1_05/hab08105.pdf

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Clula. Editorial Omega. 4 Edicin

Campbell, Neil A., Reece Jane B. (2007). Biologa. Espaa:Ed. Mdica Panamericana.

Curtis, H. (2009). Biologa Educacin Media. Editorial Panamericana.

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Ed. El Ateneo.

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