1.

OBJETIVOS
1.1. Elaborar de la curva de crecimiento microbiano para la levadura Saccharomyces
Cerevisiae.
1.2. Identificar de las variables en una fermentacin alcohlica para un proceso discontinuo.
1.3. Visualizar del proceso de gemacin de la levadura Saccharomyces Cerevisiae.
1.4. Obtener metabolito primario de una fermentacin alcohlica.
2. TEORA
2.1. Gemacin
Es una divisin desigual, consistente en la formacin de prominencias o yemas sobre el
individuo progenitor, que al crecer y desarrollarse no originan nuevos seres que pueden
separarse del organismo parental o quedar unidos a l, iniciando as una colonia de abejas. A
nivel unicelular, es un proceso de mitosis asimtrica que se da en algunos seres unicelulares,
como las levaduras. (Hernndez, A. (2003))
2.2 Fases de la curva de crecimiento microbiano
Segn, Hernndez, A. (2003):
La curva del crecimiento de una poblacin bacteriana se divide en 4 fases:

Fig1. Curva de fases de crecimiento

Fuente: http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/10/curva-del-crecimiento.html

Latencia
Cuando una poblacin bacteriana es inoculada en un medio fresco el crecimiento no suele
comenzar d inmediato, sino despus de un tiempo llamado latencia.
La fase de latencia representa un periodo de transicin para los microorganismos cuando son
transferidos a una nueva condicin. En esta fase se producen las enzimas necesarias para que
ellos puedan crecer en un nuevo medio ambiente. En esta fase no hay incremento de clulas, pero
hay gran actividad metablica, aumento en el tamao individual de las clulas, en el contenido
proteico, ADN y peso seco de las clulas.
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Exponencial o logartmica
Es el periodo de la curva del crecimiento en el cual el microorganismo crece exponencialmente,
es decir que cada vez que pasa un cierto tiempo de generacin la poblacin se duplica. Bajo
condiciones apropiadas la velocidad de crecimiento es mxima. Las condiciones ambientales
afectan la velocidad de crecimiento exponencial.

Fase estacionaria
En cultivos en recipientes cerrados una poblacin no puede crecer indefinidamente de forma
exponencial. Las limitaciones de crecimiento ocurren ya sea por agotamiento de algn nutriente
esencial, por acumulacin de productos txicos, porque se alcance un nmero de clulas elevado
para el espacio disponible o por combinacin de las causas anteriores.

Fase de muerte
Si la incubacin continua despus de que una poblacin microbiana alcanza la fase estacionaria,
las clulas pueden continuar vivas y seguir metabolizando, pero va a comenzar una disminucin
progresiva en el nmero de clulas viables, y cuando esto ocurre se dice que la poblacin ha
entrado en fase de muerte.

2.3. Saccharomyces Cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae es una levadura, un hongo unicelular, del grupo de los ascomicetos.
Este grupo incluye a ms de 60000 especies, entre ellas las trufas, las colmenillas o
el Penicillium, el hongo que produce la penicilina, pero tambin a hongos patognicos tanto de
plantas como de animales, el ms conocido de los cuales es Candida. (Garca, 1995).
2.3.1. Condiciones de crecimiento

La levadura que se utiliza en la panificacin es la saccharomyces cerevisiae. Su temperatura

ptima de crecimiento vara entre los 22 y los 29C, y no sobrevive a ms 53C. Se puede
almacenar a temperaturas de 7C o menores. Fermenta una solucin de azcar con una
concentracin inferior al 12%; se inactiva cuando la concentracin de azcar supera el 15%,
por la presin osmtica del medio. (Garca, 1995).

2.3.2. Caractersticas.

La levadura de cerveza es un hongo microscpico. Est formado por clulas muy pequeas de
forma ovalada. Cuando se juntan un montn de estas clulas se forma una #especie# de
barrillo que suele ser de color blanco o gris. Esta levadura se cra desde hace muchsimos aos
en los depsitos de cerveza; vive cultivada en dicho lquido y se mantiene gracias a la glucosa
que obtiene de la malta de la cerveza. Contiene un fermento que es capaz de convertir dicha
glucosa en alcohol y gas carbnico, obteniendo la cerveza a partir del lquido con malta
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inicial. (Garca, 1995).

2.4. Reactores
Un reactor es un aparato o un equipo en el cual sucede una reaccin qumica en el cual los
reactivos se convierten en productos que son de inters. Estos cuentan con un diseo especfico
para cada actividad a realizarse, para el diseo se debe tomar en cuenta, las fases, velocidad,
cintica de las reacciones etc. (Alvares & Costa Lopez, 1991)

2.4.1. Tipos de Reactores

Los reactores segn su funcionalidad y dependiendo de la entrada de materia prima o de algn
fluido se clasifican en:
Por lotes (Bach) y continuos, los reactores continuos son aquellos en los cuales hay un flujo
volumtrico o msico de entrada, y generalmente se utilizan cuando se procesan grandes
cantidades de reactivos a convertirse en productos.
El reactor por lotes en cambio no existe una entrada continua sino la carga de entrada se hacer
por un tiempo especfico y estos se pueden utilizan para varios procesos cambiando
caractersticas miniamos. (Tiscareo, 2008)

2.4.2. Fermentador
Es un equipo que mantiene un sistema biolgicamente adecuado, donde se lleva a cabo un
proceso qumico que involucran microorganismos o sustancias bioqumicas activas este
proceso puede ser aerobio, es imprescindible la presencia de oxgeno para el desarrollo de
microorganismos y la produccin de producto deseado, la fermentacin anaerobia en cambio
el metabolito o producto final se desarrolla en un medio donde no exista la presencia de
oxgeno. (Hernandz, 1999)
2.5. Tiempo de duplicacin
El tiempo de duplicacin se refiere al nmero de generaciones requeridas para que la poblacin
de una zona o de microorganismos se dupliquen dada la tasa de crecimiento de dicha poblacin,
teniendo en cuenta condiciones ptimas de crecimiento. (Hernandz, 1999)

2.6. Velocidad especifica de crecimiento

La velocidad es un parmetro que relaciona el crecimiento Co con el tiempo t, es una medida de
la capacidad de generacin de biomasas que tiene la unidad de biomasa. Mide la cantidad de
gramos de biomasa que es capaz de generar cada gramo de biomasa en la unidad de tiempo.
(Alvares & Costa Lopez, 1991)
1
= (1)
Donde:
=
=
=
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2.7. Ecuacin de Monod

Esta es una ecuacin clsica de ingeniera conocida tambin como ecuacin de saturacin para
el crecimiento bacteriano, relacionando la tasa de crecimiento, la concentracin del sustrato,
teniendo en cuenta condiciones de crecimiento como un inoculo viable, una fuente de energa,
nutrientes, y condiciones fisicoqumicas adecuadas. (Egua, 1998)

= (2)
+
Donde:
= ( 1 )
= 3
= 3

3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Materiales y Equipos
3.1.1. Microscopio
3.1.2. Portaobjetos
3.1.3. Cubreobjetos
3.1.4. Tubos Ensayo
3.1.5. Estufa Memmert
3.1.6. Balanza Analtica Ap0,0001g R=(0-220)g
3.1.7. Fermentador
3.1.8. Potencimetro
3.1.9. Brixmetro Ap1Brix R=(0-30)Brix
3.1.10. Cajas petri
3.1.11. Vasos de precipitacin Ap50ml R=(0-1000)ml
3.1.12. Pipetas Ap0,05ml R=(0-20)ml
3.1.13. Reverberos
3.1.14. Olla R=(0-6)l
3.1.15. Globos (pequeos y 1 grande)
3.1.16. Papel Filtro
3.1.17. Embudo
4.2. Sustancias y Reactivos
4.2.1. Agua Estril. H2O(l)
4.2.2. Azcar. C12H22O118(s)
4.2.3. Sal. NaCl (s)
4.2.4. Saccharomyces Cerevisiae.
4.2.5. Lpulo.

4.3. PROCEDIMIENTO
4.3.1. Parte A: Observacin de levaduras al microscopio
4.3.1.1. Preparar una mezcla con una pizca de levaduras, una cucharada de agua tibia y una
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pizca de azcar.
4.3.1.2. Dejar reposar 5-10 minutos.
4.3.1.3. Colocar sobre el portaobjetos y cubrir con el cubreobjetos.
4.3.1.4. Observar bajo el microscopio con un objetivo de fuerte aumento.
4.3.1.5. Dibujar lo que se observa.
Nota: en caso de no poder observar claramente se debe probar alternativas para mejorar el
preparado, por ejemplo, variando la cantidad de levadura que se coloca en la muestra.
4.3.2. Parte B: La fermentacin de las levaduras
4.3.2.1. Colocar los materiales en cada tubo en base a la tabla 5.1-1
4.3.3. Parte C: Preparacin del mosto
4.3.3.1. Pesar 1 kg de malta y moler (el tamao de la partcula no debe ser muy fino)
4.3.3.2. Colocar la malta en 5 litros de agua y llevar a calentamiento a 65 C por 1 hora
manteniendo agitacin constante
4.3.3.3. Colocar 10 g de lpulo al inicio del calentamiento; colocar 10 g de lpulo al final del
calentamiento
4.3.3.4. Filtrar la preparacin
4.3.3.5. Enfriar en una cama de hielo por el tiempo necesario hasta alcanzar la temperatura
ambiente
4.3.4. Parte D: Preparacin del Inoculo y Fermentacin
4.3.4.1. Tomar 200 ml del mosto y colocar la levadura, sin contacto con el aire. Guardar el
inoculo.
4.3.4.2. Colocar el mosto en una botella de plstico, evitando el contacto con el aire
4.3.4.3. Agregar el inoculo preparado y homogenizar la mezcla
4.3.4.4. Colocar el globo en la entrada de la botella y dejar fermentar de 2 a 3 das.
4.3.5. Parte E: Embotellado
4.3.5.1. Agregar 2 cucharas de azcar a cada botella que se va a envasar
4.3.5.2. Filtrar la cerveza con papel filtro y llevar a refrigeracin por un da.
4.3.5.3. Enfriar hasta la temperatura ms baja que sea posible.
4.3.6. Parte F: Mediciones de Peso Seco
4.3.6.1. Pesar una caja petri en la balanza analtica.
4.3.6.2. Sealar 20 cajas petri en funcin de la hora de toma de muestra.
4.3.6.3. Despus que se ha homogenizado el caldo (primera medicin), en un vaso de
precipitacin se toma un volumen por la zona de descarga del fermentador.
4.3.6.4. A este volumen se lo regresa al fermentador.
4.3.6.5. Nuevamente se vuelve a obtener un volumen de caldo en el vaso de precipitacin.
4.3.6.6. De este volumen se toma 5 ml y se coloca en la caja petri.
4.3.6.7. A la caja petri se la coloca en la estufa a una temperatura de 100C.
4.3.6.8. Se repite el procedimiento durante cada hora.
4.3.6.9. Ya que cada caja petri este seca, se registra el nuevo peso.
4.3.6.10. Con el mismo volumen extraido, medir BRIX y el pH y consecuentemente en su
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analizador de fermentacin del equipo correspondiente.

4. DATOS
4.1. Datos experimentales
Tabla 1. Fermentacin de las levaduras
TUBO AGUA AZCAR LEVADURA TRATAMIENTO CONDICIONES
1 3 ml. 1 cda. - AGITAR BIEN Colocar en hielo
Colocar en agua
2 3 ml. 1 cda. -
CADA TUBO Y tibia
3 1 cda. cdita. Colocar en hielo
TAPARLO CON Colocar en agua
4 1 cda. cdita.
tibia
5 3 ml. - cdita. UN GLOBO. Colocar en hielo
Colocar en agua
6 3 ml. - cdita.
AJUSTAR EL tibia
7 3 ml. 1 cda. cdita. Colocar en hielo
GLOBO CON UN Colocar en agua
8 3 ml. 1 cda. cdita.
tibia
3 ml. HILO Colocar en agua
9 1 cda. cdita.
hirviendo caliente

Tabla 2.
Datos experimentales
Tiempo, Peso Seco
h X,
g
15,2 0,0467
16,1 0,0394
17,05 0,0411
18 0,0474
19 0,0388
20,14 0,1015
21,14 0,0431
41,2 0,029
43 0,026
Fuente: Laboratorio de Biotecnologa Industrial, Facultad de Ingeniera Quimica, UCE.
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4.2. Datos Adicionales

Tabla 3.
Propiedades del Sustrato
Sustrato Cebada

Preparacin Macerado y molienda

Aditivos/Cantidad Lpulo 20g

Densidad 1,062

BRIX 12

pH 1

Fuente: Datos analizados antes de inoculacin en el Laboratorio de Biotecnologa

Tabla 4.
Condiciones ptimas de la Saccharomyces Cerevisiae
Tempreatura, C 30-35

Concentracion de Azucar (%m/v) 12

pH 4-6

Fuente: Laboratorio de Biotecnologa Industrial, Facultad de Ingeniera Quimica, UCE.

5. CLCULOS
5.1. Clculo de la velocidad especifica de crecimiento
= + (1)

= +

( )
=

(0,0394 0,0467)
=
0.9
1
= 0,08886

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5.2. Clculo del tiempo de duplicacin

= + (2)
2
=

2 0,95
=
0,0411 0,0394
= 15,19
6. RESULTADOS
Tabla 5.
Datos registrados para la curva
Tiempo, Peso Ln X
h seco
X, g
15,2 0,0467 -
3,0640
16,1 0,0394 -
3,2340
17,05 0,0411 -
3,1917
18 0,0474 -
3,0491
19 0,0388 -
3,2493
20,14 0,1015 -
2,2877
21,14 0,0431 -
3,1442
41,2 0,029 -
3,5405
43 0,026 -
3,6497

Tabla 6.
Resultados finales
Fermentacin Microorganismo Velocidad Tiempo de
especifica de duplicacin, h
crecimiento,(h-
1)

Alcohlica Saccharomyces 0,8435 0,8571

Cerevisiae
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Tabla 7.
Identificacin de fases
Fase Tiempo de fermentacin

Lag 15 h

Exponencial 18h

Estacionaria 20h

Muerte 41h

7. DISCUCIN

8. CONCLUSIONES
9. BIBLIOGRAFA
9.1. Hernndez, A. (2003). Microbiologa Industrial. Costa Rica: Universidad Estatal a distancia.
9.2. Garca, V. (1995). Introduccin a la Microbiologa. Costa Rica: Universidad Estatal a distancia.

9.3. Alvares, M., & Costa Lopez. (1991). Curso de ingeniera Qumica. Barcelona: Revert.

9.4. Egua, E. (1998). El problema del biofouling en intercambiadores de calor-condesadores.

Santander: Servicios de publicaciones de la Universidad de Cantabria.

9.5. Hernandz, A. (1999). Microbiologa Industrial. Barcelona: EUNED.

9.6. Tiscareo, F. (2008). Reactores Qumicos con multireaccin. Mxico : Revert.

10. ANEXOS
10.1. Grafica X=f(t) con fases identificadas (Ver anexo 11.1)
10.2. Grafica ln X = ln Xo + ut (Ver anexo 11.2)
10.3. Diagrama de equipo (Ver anexo 11.3)
10.4. Diagrama de flujo (Ver anexo 11.4)
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11. CUESTIONARIO
11.1. Cules son las diferencias entre fermentacin aerobia y anaerobia?
En la fermentacin aerobia se produce una asimilacin de la materia orgnica por parte de
microorganismos en presencia de oxgeno y nutrientes, en cambio la fermentacin anaerobia
se produce cuando la materia orgnica se degrada en ausencia de oxgeno por medio de
bacterias, produciendo biogas, que es una mezcla de mltiples componentes, donde predomina
el metano y donde se encuentra una variada cantidad de elementos.
11.2. Por qu se realiza la fermentacin en discontinuo?
Porque se necesita llevar a cabo una incubacin, es decir que se necesita un tiempo
determinado para que se produzca la fermentacin tiempo en el cual no se aade nada excepto
oxigeno que viene en forma de aire, este proceso debe ser llevado a cabo un un reactor
discontinuo que brinde las condiciones estriles para la fermentacin.

11.3. Redacte cortamente tres procesos en donde se realice una fermentacin alcohlica.
Fermentacin alcohlica del arroz
Se la utiliza para obtener sake, para obtener sake se debe inocular el arroz cocido al vapor
con esporas del hongo koji, las cuales despus de un rato producen esporas que germinan y
sus filamentos de hongos empiezan a propagarse. Aproximadamente a los dos das, el arroz
cocido al vapor, aqu se produce un proceso de fermentacin alcohlica para la se selecciona
una levadura de calidad excepcional, destinada exclusivamente para la elaboracin del sake.
Fermentacin del vino.- se produce para elaborar vino, este es obtenido de frutas en
donde
Se utiliza levaduras de la vinificacin estos son unos hongos microscpicos que se
encuentran de forma natural en los hollejos de las. Los vinos deben tener una cantidad de
alcohol debido a la fermentacin de al menos un 9% en volumen.
Fermentacin alcohlica de la leche
Se realiza por una fermentacin lctica y etlica es muy sensible a la temperatura, el producto
ms conocido es la bebida koumiss elaborado mediante la adicin de sacarosa a la leche
pasteurizada obtenindose bebidas de bajo contenido alcohlico.

12. DIAGRAMA DE FLUJO