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UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
MICROBIOLOGA GENERAL.
OCTUBRE DE 2007
UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
Rectora
Secretaria general
Decano
Secretaria
Coordinadora General
Docente Director
INDICE
Resumen.
I INTRODUCCION. xv
II OBJETIVOS. 17
bacterianas. 21
(mohos y levaduras). 28
de campo claro. 37
para su identificacin. 38
IV DISEO METODOLGICO. 46
BIBLIOGRAFA.
GLOSARIO.
ANEXOS.
5
INDICE DE TABLAS
Tabla N
INDICE DE FIGURAS
Figura N
comunes. 26
Papa dextrosa. 30
Papa dextrosa. 31
tcnicas microbiolgicas. 52
7
estudio de la microbiologa. 53
microbiolgica. 55
el reactivo de Kovacs. 95
77. Determinacin de coliformes totales y fecales por el mtodo del NMP. 184
INDICE DE ANEXOS
ANEXO N
1. Encuesta.
RESUMEN
hongos, en forma de una gua. Se concluye que este trabajo servir como un
I. INTRODUCCION
diversas fuentes muchas veces poco compresibles. Es por eso que se vuelve
interesadas en la materia.
15
II OBJETIVOS
16
2.0 OBJETIVOS
Salvador.
investigacin microbiolgica.
entre las bacterias, la mayora de ellas oscilan entre 0,2 y 2,0 m de dimetro
Los cocos (Fig. 1) pueden ser esfricos, ovalados, alargados o con un lado
permanecer unidos unos a otros. Los que permanecen unidos en parejas tras
forman grupos de cuatro se conocen como ttradas, los que se dividen por
aquellos que se dividen siguiendo planos al azar y forman racimos como los
de uva o anchas laminas son estafilococos (Fig. 1). Estas agrupaciones son
Los bacilos se dividen solamente a travs de su eje mas corto, de forma que
describen a continuacin.
GLUCOCALIX
FLAGELOS
FILAMENTOS AXIALES
FIMBRIAS
unidos a las clulas bacterianas de forma muy parecida a los flagelos pero
mucosas para producir la enfermedad. Otro tipo es la Pili sexual, que facilitan
PARED CELULAR
osmtica interna es mayor que la del medio externo. Sirve tambin de punto
pared celular esta formada por una red macromolecular llamada pptido
una tincin con cristal violeta) en bacterias Gram (+) y bacterias Gram (-)
(Fig. 6).
Las bacterias Gram (+) poseen varias paredes gruesas y rgidas de pptido
Las bacterias Gram (-), no contienen acido teicoico adems sus paredes son
Salmonella.
26
glicerol que es hidrfila (afn al agua) y soluble en agua y una cola apolar
el mosaico fluido.
27
Los hongos son clulas eucariticas de mayor tamao que las bacterias, en
Los hongos pueden ser unicelulares conocidos como levaduras o pueden ser
formas, suelen estar adaptados a ambientes que seran adversos para las
pH cido (5.0) que inhibe el crecimiento de las bacterias mas comunes. Los
capaces de crecer sobre sustancias con poca humedad a niveles tan bajos
levaduras.
LEVADURAS.
Estn formadas por clulas individuales (Fig. 7) las que se presentan muchas
numero de levaduras este aumento suele ocurrir por gemacin, una clula de
levadura puede formar hasta 24 clulas hijas por gemacin; las levaduras
MOHOS.
Estn formados por filamentos pluricelulares llamados hifas, que se renen
respiratoria, etc.
encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas
aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas
de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha
precisin.
Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido
El azul de metileno es un buen colorante simple que acta sobre todas las
clulas se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea.
Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para
Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con
realmente existente.
sus elementos puede diluirse con igual volumen de solucin salina fisiolgica
material.
(solucin de KOH) permite ver elementos de hongos ya que este digiere los
aparece como un halo claro alrededor de los microorganismos (Fig. 10). Azul
Fig. N 10: Cryptococcus neoformans en una tincin con tinta china. (15)
GRAM o la de Ziehl-Neelsen.
Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram (+) y Gram (-). Las
Pie o soporte, asa o brazo, platina, tubo porta ocular, tornillos, macromtrico
que estos mtodos se deben poner en prctica en zonas aspticas (cerca del
37
partir de muestras complejas tales como suelo, agua, alimentos, etc. en las
que hay una gran diversidad microbiana, as como para comprobar la pureza
de cultivos obtenidos .Los cultivos puros estn formados por un solo tipo de
primer caso se considera que cada clula bacteriana que se separa dar
simple vista.
bacterias dominantes.
selectivos o de crecimiento.
evaluacin de similitudes.
no.
bacteriano.
(medio de cultivo, indicador, revelador, etc.) que puede ser diferente an para
Gram negativas (Fig. 13), que consiste en una plantilla con microtubos
Listeria API.
NH (Neisseria - Haemophilus).
inters mdico).
degradacin.
actividad enzimtica.
En todos los casos se debe tener un cultivo fresco (18-24 hrs. de incubacin)
un nuevo lote de medio de cultivo para una prueba, deben llevarse a cabo los
en caldo tioglicolato.
proskauer.
desoxirribonucleasa.
ambiental.
- Aerobios (AC).
- Psicrfilos (AC).
43
- E. Coli
- Enterobacterias (EB).
Las diferentes aplicaciones que pueden tener las placas de PETRIFILM son
MTM
PETRIFILM METODO TRADICIONAL
Reduccin del tiempo labor Requiere tiempo extra con frecuencia
Listo para usar y de fcil manejo Preparacin larga y tediosa
Poco requerimiento de espacio y
Gran espacio de trabajo y equipo
equipo
Poca inversin en inventarios Alta inversin en inventarios
Bajo costo por prueba Mayor costo por prueba
44
IV DISEO METODOLGICO
45
salud, que sirva tanto para apoyar como para completar la presente
tratamiento de resultados.
forma parte del objeto de estudio, que vendra a ser el propsito fundamental
de la encuesta.
47
CARRERAS NUMERO
Doctorado en Medicina 2500
Licenciatura en Qumica y Farmacia 876
Ingeniera Agronmica y Veterinaria 630
Licenciatura en Ciencias Qumicas 142
Licenciatura en Biologa 363
Total de estudiantes 4,809
Encuestas de opinin: 30 encuestas X 6 carreras hacen un total de 180 encuestas.
48
estudiantes del sexo femenino con un 55% y del sexo masculino un 45%.
90
Porcentaje de estudiantes (%)
80
70
60
50 Femenino
40
Masculino
30
20
10
0
Se xo de los e s tudiante s
Tincin simple
90 Tincin de Gram
Porcentaje de estudiantes (%)
80
70 Tecnicas de inoculacin
60
Descripcin de hongos
50
40 Cuantificacin de
30 Microorganismos
20 Preparacin de medios de
10
cultivo
Otros
0
Tcnicas microbiolgicas Ninguno
90
Libros de microbiologa
Porcentaje de estudiantes (%)
80
Tesis de la facultad
70 Internet
60 Enciclopedias
50 Apuntes de clases
40 Otros
30
20
10
0
Fuentes de informacin
y Fig. 17).
90
Porcentaje de estudiantes (%)
80
70
60
50 Si
40 No
30
20
10
0
una breve explicacin acerca de las nuevas tcnicas tales como placas
90
Recopilacion de tecnicas,
Porcentaje de estudiantes (%)
80
aislamiento e identificacion de
70 microorganismos
60 Tecnicas de preparacin y uso de
medios de cultivo
50
40 Metodos Microbiolgicos oficiales
30
20
Ninguno
10
0
Otros
Tcnicas propuestas para la gua
tanto para el estudiante como para el investigador; por lo que se diseo una
microorganismos.
55
UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
PRESENTADO POR:
INDICE
1. INTRODUCCIN. 65
2. OBJETIVO GENERAL . 65
BACTERIAS. 68
MOHOS Y LEVADURAS. 73
Metileno. 74
Tubos. 85
MICROBIOLOGIA GENERAL. 89
Sacarosa). 92
Bioqumica). 130
Bioqumica). 133
Y MOHOS. 158
BACTERIAS. 160
1. INTRODUCCION
Esta gua esta diseada para ser utilizada por estudiantes que cursan la
laboratorio de microbiologa.
2. OBJETIVO GENERAL
PROCEDIMIENTO:
Una vez enfocado con el objetivo 10X pasarse a 40X despus a 100X.
alcohol acetona (7,3) (15) para quitar cualquier residuo (no abusar de esta
lugar, dado que la mayor parte de los desperfectos que sufre un microscopio
son producidos por los continuos golpes que recibe al ser introducido y
extrado de su estuche.
65
minuciosas.
BACTERIAS.
procedimiento.
MATERIAL Y EQUIPO:
Portaobjetos y cubreobjetos.
Mechero Bunsen.
Asa de Inoculacin.
Metanol etanol.
PROCEDIMIENTO:
pequea muestra del cultivo que se toma siguiendo las indicaciones del
Fijar los frotis de cultivos lquidos con dos gotas de metanol o etanol
MATERIALES Y EQUIPO:
Frotis.
Safranina.
PROCEDIMIENTO:
minuto.
Esta tcnica de tincin fue propuesta por el mdico dans Cristian Gram en
Luego de tener el frotis listo se puede realizar una tincin de Gram para
MATERIALES Y EQUIPO:
Cristal violeta.
Lugol.
Metanol.
Safranina.
PROCEDIMIENTO:
segundos a 1 minuto.
Sacudir un poco y sin dejar secar cubrir el frotis con 2 gotas de lugol por
30 segundos.
LEVADURAS.
MATERIAL Y EQUIPO:
Portaobjetos y cubreobjetos.
Mechero Bunsen.
Asa de inoculacin.
PROCEDIMIENTO:
las bacterias.
nuevamente el asa.
varias veces.
MATERIALES Y EQUIPO:
Frotis reciente.
Azul de metileno.
PROCEDIMIENTO:
a 1 minuto.
MATERIALES Y EQUIPO:
Portaobjetos.
Cinta adhesiva.
Azul de lactofenol.
Mechero bunsen.
PROCEDIMIENTO:
Cerca del mechero abrir la caja de Petri conteniendo la muestra del hongo
de la colonia.
estructuras.
23 y 24).
75
MATERIALES Y EQUIPO:
Soporte poroso.
Kitasato.
Mangueras.
Bomba de vaco.
Pinzas estriles.
Algodn.
Tijeras de acero inoxidable.
78
Pipetas estriles.
PROCEDIMIENTO (16) :
esterilizadas.
muestra.
dilucin estril.
79
INCUBACION:
LECTURA:
descrito para la dilucin y cuenta en placa Plate Count (9.3) en este manual.
Una temperatura elevada con una alta humedad (vapor de agua) es uno de
La accin rpida del vapor depende en gran parte del gran calor latente del
agua (540 cal/g). Los objetos fros son as rpidamente calentados por
cultivos preparados.
MATERIAL Y EQUIPO:
Autoclave.
PROCEDIMIENTO:
un sistema de purgado, se debe cerrar la llave de purga una vez que sale
hmedo, ya que el aire de vapor es peor conductor del calor que el vapor de
agua. Por esta razn hay que elevar mucho la temperatura y el tiempo de
MATERIAL Y EQUIPO:
Estufa incubadora.
esterilizar
PROCEDIMIENTO:
Se conecta la estufa.
MATERIAL Y EQUIPO:
Mechero Bunsen.
PROCEDIMIENTO:
MATERIALES Y EQUIPO:
Balanza granataria.
Esptula.
Agua destilada.
Mechero Bunsen.
Soporte.
Malla de asbesto.
PROCEDIMIENTO:
granulado que indica la etiqueta del frasco, hacer los clculos necesarios
con una pipeta Pasteur poco a poco se agrega gotas de solucin de HCl
Se vacan 5 ml del medio de cultivo en cada uno de los tubos con tapn
para ello se utilizan las placas de Petri con medios de cultivo. Sin embargo
contaminacin.
85
MATERIALES Y EQUIPO:
Balanza granataria.
Esptula.
Agua destilada.
Mechero Bunsen.
Soporte.
Malla de asbesto.
PROCEDIMIENTO:
slido.
estriles.
Para los tubos se utilizaran 5 ml del medio en cada uno los cuales se
un soporte.
Microbiologa general.
COMPOSICIN (g/L):
Peptona de casena 5.0; extracto de levadura 2.5; D (+) glucosa 1.0; Agar-
Agar 14.0.
88
PREPARACIN:
Disolver 22.5 g/l y esterilizar en autoclave (15 min 121 C). Verter el medio en
INCUBACION:
LECTURA:
COMPOSICIN (g/L):
Triptosa 20.0; lactosa 5.0; cloruro de sodio 5.0; laurilsulfato sal sdica 0.1;
PREPARACIN:
INCUBACIN:
LECTURA:
exigentes.
COMPOSICIN (g/L):
PREPARACIN:
Disolver 20.0 g/L (Agar nutritivo) 8 g/L para preparar caldo nutritivo y
Las placas con medio de cultivo y el caldo preparados son claros e incoloros
INCUBACIN:
LECTURA:
Las colonias que crecen en este medio de cultivo son redondas de bordes un
microorganismos
Sacarosa).(14)
COMPOSICIN (g/L):
PREPARACIN:
INCUBACIN:
LECTURA:
a Escherichia coli.
azcar.
COMPOSICIN (g/L):
Peptona de casena 17.0; peptona de carne 3.0; cloruro de sodio 5.0; lactosa
10.0; mezcla de sales biliares 1.5; Rojo neutro 0.03; cristal violeta 0.001;
PREPARACIN:
INCUBACIN:
LECTURA:
Las colonias lactosa (-) negativa son incoloras y las lactosa (-) positiva son
rojas con un halo turbio debido al descenso de pH provocado por los acidos
biliares.
Shigella, las grandes rojas con halo turbio son tpicas de cepas de
iluminar con luz UV. Para confirmar el ensayo se utiliza como indicador la
COMPOSICIN (g/L):
Tryptosa 5.0; cloruro de sodio 5.0; sorbitol 1.0; tryptofano 1.0; Fosfato
dipotsico 2.7; Fosfato potsico 2.0; lauryl sulfato de sodio 0.1; 5 - bromo - 4
PREPARACIN:
INOCULACIN:
LECTURA:
Parker (1962). Este medio de cultivo contiene cloruro de litio y telurito para la
piruvato sdico 10.0; glicina 12.0; cloruro de litio 5.0; Agar-Agar 15.0.
PREPARACIN:
INCUBACIN:
LECTURA:
lustrosas, con un borde estrecho blanquecino rodeado por un halo claro, las
95
Meningococos y otros.
PREPARACIN:
LECTURA:
microorganismos .
Agar selectivo para el cultivo de hongos y bacterias del suelo, segn Czapek
(1902 1903) y Dox (1910). Este medio de cultivo contiene sacarosa como
medio, los hongos pueden crecer bien, en tanto que de la flora bacteriana
COMPOSICIN (g/L):
Sacarosa 30.0, nitrato sdico 3.0; sulfato de magnesio 0.5; cloruro potsico
0.5; sulfato de hierro (II) 0.01; hidrogenofosfato dipotsico 1.0; Agar Agar
13.0.
PREPARACIN:
pH: 7.3 + 0.2 a 25 C las placas con medio de cultivo son ligeramente turbias.
INCUBACION:
LECTURA:
aproximadamente 3.5.
COMPOSICIN (g/L):
PREPARACIN:
Disolver 39 g/L y esterilizar en autoclave (15 min a 121 C), pH 5.6 + 0.2 a
INCUBACIN:
LECTURA:
de microorganismos exigentes.
98
COMPOSICION (g/l):
Sodio azida 0.2; Extracto de carne 3.0; Peptona 10.0; cloruro de sodio 5.0;
Agar 15.0.
PREPARACION:
INCUBACIN:
LECTURA:
COMPOSICION (g/L):
Extracto de levadura 2.5; Gelatina 30.0; Lactosa 2.0; D (-) manita 10.0;
PREPARACION:
25 C.
INCUBACION:
LECTURA:
COMPOSICIN (g/L):
PREPARACIN:
6.9 + 0.2 a 25 C.
INCUBACIN:
gas en los tubos de Durham y la reaccin positiva para Indol con el reactivo
membrana.
COMPOSICIN (g/L):
potsico 1.375; lactosa 12.5; sodio desoxicolato 0.1; lauryl sulfato de sodio
PREPARACIN:
pH 7.2 + 0.2 a 25 C
INCUBACIN:
2 3 h A 35 C
LECTURA:
probable).
102
MODO DE ACCIN:
Durham.
COMPOSICIN:(g/L):
Peptona 10.0; lactosa 10.0; bilis seca 20.0; verde brillante 0.0133.
PREPARACIN:
pH 7.2 + 0.2 a 25 C.
INCUBACIN:
LECTURA:
tubos a 44 C.
103
LQUIDOS.
considera que cada clula bacteriana que se separa dar origen a una
MATERIALES Y EQUIPO:
Mechero bunsen
Asa de inoculacin
Incubadora a 35 C
PROCEDIMIENTO:
Tomar con la mano izquierda una caja de Petri, de manera que la base de
Agar opuesto a usted. Hacer estras con el inoculo de lado a lado trazar
inocular tocando la superficie del Agar lejos del conjunto de las estras
recin hechas.
Rozar una vez la superficie del conjunto original de estras con el asa de
Bajar la tapa de la caja, repetir nuevamente las estras hasta abarcar toda
la superficie de la placa.
MATERIALES Y EQUIPO:
Mechero Bunsen.
Asa de inoculacin.
106
Incubadora a 35 C
PROCEDIMIENTO:
Tomar con una mano el asa de inocular flamearla por completo hasta que
Introducir el asa inoculada dentro del tubo con medio de cultivo estril,
Flamear una vez ms los bordes del los tubos y taparlos nuevamente.
bacterias.
Los tubos con agar inclinado se inoculan segn las siguientes indicaciones:
describe antes.
Introducir el asa sobre la superficie del agar inclinado, hasta el fondo del
lado conforme se van sacando de ella para extraerla del tubo sin romper
MATERIAL Y EQUIPO:
Incubadora 35 C + 1C
PROCEDIMIENTO:
rotuladas.
incubarlas a T de 37 C durante 24 48 h.
muestra.
El factor dilucin puede hacer difcil el conteo de las placas desde un punto
asterisco para denotar que el conteo esta fuera del rango de 25-250 UFC.
Originalmente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes
PROCEDIMIENTO:
Agregar con gotero o pipeta pasteur una gota de H 2O2 al 30% sobre el
inoculado.
LECTURA:
PROCEDIMIENTO:
a fondo.
LECTURA:
EQUIPO Y MATERIALES:
Incubadora.
MEDIOS Y REACTIVOS:
Medio de Baird-Parker
Buffer fosfato
PROCEDIMIENTO:
secadas).
LECTURA:
aguja.
largos periodos podran presentar colonias con menor coloracin negra que
las tpicas y pueden con frecuencia tener aspecto spero y textura seca.
MATERIALES Y EQUIPO:
Pipetas estriles.
Incubadora.
PROCEDIMIENTO:
dilucin).
entre 6.6 y 7.2 (para productos cidos, usar NaOH 1 N, para productos
dejarlo caer.
Con la cara lisa hacia abajo, colocar el aplicador en el film superior sobre
el inoculo.
INCUBACIN:
Incubar a 35 C por 24 2 h
LECTURA:
Staph. (3)
MATERIALES Y EQUIPO:
bacteria.
negativos o positivos de GLU (Glucosa) los test MNE (D- Manosa) y XLT
(Xilitol) pueden verse naranjas cuando los test que los rodean o preceden
Strep (3).
Los test de identificacin son inoculados con un medio enriquecido que tiene
Tabla N 9. Continuacin.
Alfa naftol 6g
Reactivo VP 25 ml
Etanol 100 ml
Tris-hidroximetil-aminometano 25 g
HCl 37% 11 ml
Reactivo ZYM A 8 ml
Laurel sulfato de sodio 10 g
Agua 100ml
Fast Blue BB 0.35 g
Reactivo ZYM B 8 ml
2-metoxi-etanol 100ml
El reactivo NIN es muy sensible a trazas de agua y aire, para ello transferirlo
cerrado.
La interpretacin de los resultados del test debe ser realizada por un analista
particular el antibiograma
123
PREPARACION DE LA MUESTRA:
Tomar una colonia bien aislada y hacer una suspensin bien homognea
Incubar 18 - 24 h a 35 37 C en anaerobiosis.
Incubar a 18 h en anaerobiosis a 35 37 C.
atmsfera hmeda.
arriba).
Para los test VP al LAP colocar en cada cpula 3 gotas de aceite mineral
Llenar las cpulas de los test subrayados ADH a GLYG con aceite
Releer las reacciones ESC, ADH y RIB a LAP, anotando los resultados.
A los microtubos PYRA, Alfa-GAL. B-GUR, B-GAL, PAL, LAP agregar 1 gota
de ZYM A Y ZYM B.
REACCIONES/ RESULTADOS
TEST SUBSTRATOS
EANZIMAS NEGATIVO POSITIVO
Produccin de VP 1 + VP 2 hasta 10 mn
VP Piruvato
acetona Incoloro Rosa-Rojo
NIN hasta 10 mn
HIP Hipurato Hidrolisis
Incoloro / azul plido Azul fuerte / violeta
4h 24h 4h 24h
Incoloro
Incoloro
ESC Esculina -glucosidasa Amarillo Negro
Amarillo Negro
palido Gris
Pilido
Gris claro
ZYM A + ZYM (PYRA a LAP) (10 mn)
si es necesario decololorado por luz
Pirrolidonil pirrolidonilanilami
PYRA intensa (1)
2 naftilamina dasa
Incoloro o Naranja muy
Naranja
plido
6-Bromo-2-Naftil
D- Pirrolidonilarilami
GAL Incoloro Violeta
galactopiranosid dasa
o
Naftol AS-BI
GUR glucoronidasa Incoloro Azul
-D-glucoronato
2-Naftil- -D
GAL galactopiranosid Galactosidasa Incoloro o violeta palido Violeta
o
Fosfatasa
PAL 2-Naftil fosfato Incoloro o violeta palido Violeta
alcalina
L Leucina-2 naftil Leucina
LAP Incoloro Naranja
Amida arilamidasa
Argninina
ADH Arginina Amarillo Rojo
dihidrolasa
4h 24h 4h 24h
Naranja/
RIB Ribosa Acidificacin Rojo Naranja/rojo Amarillo
Amarillo
Naranja/
ARA L- Arabinosa Acidificacin Rojo Naranja/rojo Amarillo
Amarillo
Naranja/
MAN Manitol Acidificacin Rojo Naranja/rojo Amarillo
Amarillo
Naranja/
SOR Sorbitol Acidificacin Rojo Naranja/rojo Amarillo
Amarillo
127
NaCl 0.5 %.
PROCEDIMIENTO:
p-dimetilaminobenzaldehido 10 g
HCl 50 ml
128
10.2.2 Prueba TSI Agar hierro tres azucares (Pba. Bioqumica). (14)
PROCEDIMIENTO:
INCUBACIN:
LECTURA:
Parte superior del tubo y fondo del tubo alcalino (Color rojo intenso) azucares
sin fermentacin.
Parte superior del tubo color rojo (alcalino) y fondo del tubo negro, glucosa
sulfhdrico.
Parte superior del tubo color rojo (alcalino) fondo del tubo amarillo (cido)
Parte superior del tubo y fondo del tubo color amarillo lactosa y/o sacarosa y
PROCEDIMIENTO:
LECTURA:
este medio y liberarn iones amonio lo que junto con la eliminacin del citrato
(cido), generar una fuerte basificacin del medio que ser aparente por un
verde a azul.
PROCEDIMIENTO:
Rojo de Metilo: A uno de los tubos se le aade unas gotas cuatro o cinco de
permanece amarillo.
Fig. N 32: Prueba Voges Proskauer positiva (tubo izquierdo) y negativa (tubo
derecho). (6)
133
utiliza sobre todo para diferenciar este gnero de otras Enterobacterias que
PROCEDIMIENTO:
despus del autoclavado con 50 ml/L de urea. Esta ser degradada por
Esta degradacin produce amonaco que har variar el color del indicador de
TSI Rojo de
Bacterias Urea Indol VP Citrato Movilidad
Bisel Fondo Gas H2 S metilo
Shigella K A - - - +- + - - -
E.coli AK A +- - - + + - - +-
Salmonella K A + + - - + - + +
Salmonella
typhi
K A - + - - + - - +
Citrobacter KA A + + -+ - + - + +
Klebsiella A A + - -+ -+ -+ + + -
Enterobacter
cloacae
A A + - -+ - - + + +
Enterobacter
aerogenes
A A + - - - - + + +
Serratia
marcenses
K A -+ - -+ - -+ + + +
Serratia
liquefaciens
A A -+ - -+ - -+ + +- +-
Proteus
vulgaris
AK A + + + + +- - +- +
Proteus -
mirabilis K A + + + - + + +
+
Providencia K A -+ - - + + - + +
Edwarsiella K A + 3+ - + + - - +
Yersinia
enterocolitic A A - - + +- + - - -
a
Pseudomona K A - -
- - - - + +
aeruginosa
coliformes.
135
MATERIALES Y EQUIPO:
Pipetas estriles.
Incubadora.
Cuenta colonias.
Aplicador PETRIFILM
PROCEDIMIENTO:
dilucin).
entre 6.6 y 7.2 (para productos cidos, usar NaOH 1 N, para productos
superior.
dejarlo caer.
136
Con la cara lisa hacia abajo, colocar el aplicador en el film superior sobre
el inoculo.
INCUBACIN:
LECTURA:
bacterias seguir los mismos parmetros que para conteo de UFC en este
manual.
acido lctica contiene Agar Plate Count, gel, cloruro de trifenil tetrazolium
MATERIALES Y EQUIPO:
Pipetas estriles.
Incubadora.
Cuenta colonias.
PROCEDIMIENTO:
anaerbicas
LECTURA:
Se observan colonias rojas o color caf rojizo, las colonias con gas son
PETRIFILM.
MATERIALES Y EQUIPO:
Pipetas estriles.
Incubadora.
Cuenta colonias.
139
PROCEDIMIENTO:
manual (10.2.7).
INCUBACIN:
32 35 C por 24 h
LECTURA:
Las colonias de E. coli se observan de color azul con gas (Fig. 36).
Las placas PETRIFILM contienen los nutrientes del Violeta rojo Bilis
MATERIALES Y EQUIPO:
Pipetas estriles.
Incubadora.
Cuenta colonias.
PROCEDIMIENTO:
INCUBACIN:
LECTURA:
Colonias rojas con gas, colonias con zona amarilla y colonias rojas con zona
de agua.
del agua, se puede usar con agua limpia, coloreada, o con agua turbia que
MATERIALES Y EQUIPO:
Incubadora a 35 37 C + 0.5 C 44 + 0.5 C
Pipetas estriles
PROCEDIMIENTO:
Ordene tres filas de cinco tubos con tapn de rosca y conteniendo una
campana de Durham por tubo cada uno, rotular para cinco tubos de la
143
primera fila conteniendo 10ml del medio presuntivo caldo lactosado (13) en
Con una pipeta estril agregue 10 ml de muestra a cada uno de los cinco
Con una pipeta estril, agregue 0.1ml de la dilucin a cada uno de los
cuadro.
final del periodo, observar los tubos para detectar la produccin de gas.
de 24 h, como la de 48 h.
BRILA)(13).
Por lo tanto los resultados pueden codificarse como 5-3-1, que representan el
coliformes (9)
MATERIALES Y EQUIPO:
Bao Maria a Temperatura de 45.5 C + 0.2 C
Incubadora 35C + 1.0 C
Caldo de EC.
PROCEDIMIENTO:
minutos.
Reincubar los tubos que dieron negativo (sin cambio de color) por 24
horas ms, luego realizar otra vez la lectura para detectar la formacin de
fluorescencia.
los tubos por 45.5 C por 24 h examinarlos para detectar produccin de gas,
coliformes fecales.
Nota: Los anlisis para coliformes fecales se hacen a 45.5 C + 0.2 C para
20E . (3)
(-). La galera esta compuesta de 20 microtubos los que se inoculan con una
PROCEDIMIENTO:
N 21
Con una pipeta extraer una sola colonia bien aislada del cultivo
bacterias en el medio.
del menisco.
Prueba TDA: Agregar una gota de reactivo TDA un color marrn rojizo
Prueba VP: agregar una gota de los reactivos VP1 y VP2, esperar un
mnimo de diez minutos. Un color rosa o rojo indica una reaccin positiva
realizada en ltimo lugar pues esta reaccin libera gases que pueden alterar
instrucciones:
anteriormente).
INTERPRETACIN:
Xantomonas.
indicada en el equipo.
153
PREPARACION DE LA GALERIA:
atmsfera humedad.
cpula.
h de incubacin, tenemos que recubrir los test NO y TRP con aceite mineral
e incubar de nuevo a 30 C por 24 h ms, excepto los tres primeros test NO,
REACCIONES/ RESULTADOS
TEST SUBSTRATOS
ANZIMAS NEGATIVO POSITIVO
Reduccin de NIT 1 + NIT 2/5 mn.
nitratos a nitritos Incoloro Rosa-rojo
NO3 Nitrato de potasio
Reduccin de Zn /5mn
nitratos a azoe Rosa Incoloro
James inmediato
Formacin de
TRP Triptofano Incoloro verde
indol Rosa
plido
GLU Glucosa Fermentacin Azul verde Amarillo
Arginina Naranja, rosa
ADH Arginina Amarillo
dehidrolasa rojo
Naranja rosa
URE Urea Ureasa Amarillo
rojo
Hidrlisis(B- Gris, marrn,
ESC Esculina Amarillo
glucosidasa) negro
155
MATERIALES Y EQUIPO:
Mechero bunsen.
Asa en anillo.
hongos).
PROCEDIMIENTO:
Para sembrar los hongos filamentosos, separar una parte del micelio de
un periodo de 3 - 5 das.
LECTURA:
BACTERIAS.
MICROBIOLOGA GENERAL.
Cultivo bacteriano
1 ml 1 ml
0.50 ml de
plasma de
conejo
Prueba negativa: No se
observa formacin de
coagulo despus de 6
horas.
Prueba positiva: se
observa la formacin
de un coagulo
NMP.(16).
183
Pesar 10 g de muestra o
10 ml de muestra,
agregar 90 ml de Buffer
fosfato y mezclar durante
2 minutos.
MOHOS).
levaduras).(2)
196
GENERAL.
V CONCLUSIONES
208
5 CONCLUSIONES
en la materia.
Microbiologa General.
210
VI RECOMENDACIONES
211
6.0 RECOMENDACIONES
Universidad de El Salvador.
BIBLIOGRAFIA
213
BIBLIOGRAFIA
France.
coli.usal.es/micro/cap04.
http//www.mc3.edu.
8. JacKson G. F.D.A., 2005 Center for Food Safety & Applied Nutrition,
rim/kwg/las/dav/cjm.
www.BAM.com
www.cienciasbiologicas.uniandes.edu.co.
215
.org.ve.
ATLAS.ASP
16. O.P.S. sa. Gua para la calidad del agua potable. Washington DC. 132
Pg.
http//www.doctorfungus.org.
werner@aecom.yu.edu.
en: www.3M.com/microbiology.
217
GLOSARIO
218
GLOSARIO
polisacrido agarosa; son las que se emplean para los medios de cultivo, con
bacteria.
y promueve un proceso qumico sin ser ella misma alterada o destruida. Son
a reacciones particulares.
Especie cultivada (11): Especie en cuyo proceso de evolucin han influido los
Hifa (5): Filamento tubuloso unidad estructural del micelio de los hongos.
Medio de Cultivo (5): Es una solucin acuosa bien como tal, o bien
microorganismo(s).
Medios diferenciales (11): Son aquellos que permiten distinguir a simple vista
presente en el medio.
positivas).
Micra (11): Milsima parte del milmetro. Por tanto 1mm= 1000 micras.
el cultivo de bacterias.
figuran las toxinas colrica y tetnica que interaccionan con las clulas diana
ANEXOS
223
ANEXO 1
ENCUESTA
UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA
DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y CONTAMINACION AMBIENTAL
____________________________________________
____________________________________________________
II PREGUNTAS
a) Tincin simple.
b) Tincin de Gram.
224
g) Otros.
h) Ninguno.
2. Enumere uno o mas de los recursos bibliogrficos que mas utiliza para el
a) Libros de Microbiologa.
b) Tesis de la Facultad.
c) Internet.
d) Enciclopedias.
e) apuntes de clases.
f) otros.
Cules?:
__________________________________________________________
manipulacin de microorganismos :
a) no.
b) S .
Cules?
________________________________________________________
225
identificacin de microorganismos.
d) Ninguno.
e) Otros.
Cuales?
_________________________________________________
226
ANEXO 2
INTERPRETACIN DE RESULTADOS API STAPH
LISTA DE PERFILES
227
ANEXO 3
INTERPRETACION DE RESULTADOS API 20 STREP
LISTA DE PERFILES
228
ANEXO 4
INTERPRETACIN DE RESULTADOS API 20 E
LISTA DE PERFILES
229
ANEXO 5
INTERPRETACIN DE RESULTADOS API 20 NE
LISTA DE PERFILES
230
ANEXO 6
HOJA DE RESULTADOS API 20 E
231
ANEXO 7
HOJA DE RESULTADOS API 20 NE
232
ANEXO 8
HOJA DE RESULTADOS API STAPH
233
ANEXO 9
HOJA DE RESULTADOS API STREP