MARCHA FITOQUMICA PRELIMINAR EN LA DETERMINACIN
DE LOS PRINCIPIOS ACTIVOS ocasiona bandas espectromtricas, determinando la estructura
1.- RECOLECCIN Y CLASIFICACIN BOTNICA DEL MATERIAL A
ESTUDIAR
Identificacin botnica experto taxonmico
Plantas libre de enfermedades
Estado freso Alcohol en ebullicin
Estado seco bajo condiciones controladas
2. EXTRACCIN, SEPARACIN Y PURIFICACIN DE LOS
CONSTITUYENTES QUMICOS.
Extraccin aislamiento
Modo preciso de extraccin depende de la textura y el
contenido de agua del material de la planta y del tipo de
sustancias que estn siendo aisladas.
Hojas y flores frescas - maceracin y filtrado
Corteza, semillas secas, raz, hojas en estado seco Uso del
aparato SOXHLET
Separacin Purificacin
Combinacin de tcnicas cromatogrficas.
CROMATOGRAFA: Distribucin de los componentes de una
muestra en dos fases, una mvil (G L) y una estacionaria (S
L)
Sustancias adsorbentes Inorgnicos para separar
compuestos lipoflicos:
Fosfato c. De magnesio se separan carotenoides.
Sulfato de Calcio separan cidos grasos e hidratos de carbono.
Mezclas de gel de slice G y almina G (1:1) para separar
azcares y fenoles.
Sustancias adsorbentes orgnicos para separar
compuestos hidroflicos:
La celulosa y sus derivados, almidn, sacarosa; y geles de
dextrano.
MTODOS CROMATOGRFICOS
CC CCD, CLAP Y CG
CC es la ms usada en la separacin de productos naturales; Se
encuentra CLL, CLS, CII, CE.
CLL Consiste en la separacin de los componentes de una
mezcla a base de los coeficientes de particin de cada uno de
ellos entre dos solventes inmiscibles, uno fijo (fase estacionaria)
y el otro mvil.
CLL se llama fase normal si la fase estacionaria es ms polar que
la fase mvil y se llama fase inversa si la fase mvil es ms polar
que la fase estacionaria.
CLS Esta tcnica depende de la adsorcin del soluto sobres
adsorbentes polares, tales como gel de slice o almina.
CII Esta tcnica es aplicada tanto aniones como a cationes, se
base en el intercambio de iones entre la fase mvil y los sitios
inicos de relleno.
CE Esta tcnica de separacin, se basa en el tamao molecular
del soluto, que pasa a travs de un gel que posee una superficie
porosa inerte.
CLAP Esta tcnica es aplicable a solutos solubles en solventes
orgnicos y no inico y es especialmente til para separar
ismeros.
CG Esta tcnica posee como fase mvil un gas inerte que
generalmente es nitrgeno. La fase estacionaria puede ser CGL,
CGS.
Adems puede usarse combinada con tcnica espectroscpica,
como espectroscopia de masa (CGL-EM).
3. DETERMINACIN ESTRUCTURAL DEL COMPONENTE
QUMICO AISLADO.
Los componentes puros y aislados se analizan con tcnicas
espectroscpicas y/o espectromtricas y con mtodos
qumicos, los cuales son mtodos fsicos empleados en la
determinacin estructural de las sustancias con el uso de
aparatos especiales en cuya celda se coloca la muestra disuelta
por el cual se hace pasar el haz luminoso y como consecuencia
molecular de la sustancia en estudio.
EL ULTRA VIOLETA VISIBLE (UV-Vis)
Es uno de los mtodos espectromtricos de mucha utilidad y es
complementario en la determinacin estructural de las
sustancias. Tratndose de alcaloides es una de las herramientas
ms importantes en la identificacin y elucidacin estructural
de los alcaloides. Una vez determinado el esqueleto carbonado
y el tipo de compuesto (carotenoide, flavonoide, etc.), brinda
informacin sobre la presencia de ciertos grupos funcionales
con absorbancia en UV-Vis. De compuesto carbonlicos
insaturados.
EL INFRARROJO (IR)
Este espectro proporciona informacin sobre la presencia o
ausencia de ciertos grupos sustituyentes o grupos funcionales,
as como la disposicin de los mismos dentro de la molcula. En
la mayora de los compuestos orgnicos puede dividirse en dos
partes:
Bandas de vibracin de sustituyentes especficos entre 1300 y
4000 cm-1 (sustituyentes).
Bandas de vibracin entre 650 y 1450 cm-1 (del esqueleto
carbonado: C-C y C-H).
RESONANCIA MAGNTICA
La posicin de lnea (desplazamiento qumico)
La estructura fina (dado por el acoplamiento Spin-Spin
El rea de seal que es proporcional al nmero de ncleos que
contribuyen a dicha lnea.
RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR DE PROTN
En este caso, los acoplamientos observados son entre
hidrgeno e hidrgeno (1H-1H) u homonucleares.
RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR DE CARBONO
En este caso, los acoplamientos observados son
heteronucleares (13C-1H), es decir entre un carbn y el
hidrgeno.
ESPECTROMETRA DE MASA
Se selecciona los picos principales y se los interpreta, con
frecuencia primero se debe localizar el ion molecular y luego se
caracteriza las distintas rupturas a base de los picos ms
intensos presentes. 3 grupos: Sustancias voltiles, sustancias
polares y molculas de elevado peso, como son los hipolmeros,
cidos nucleicos, polisacridos, etc.
4. LOS ENSAYOS FARMACOLGICOS A LO LARGO DEL PROCESO
Son las diferentes pruebas que se debe realizar a lo largo
del proceso analtico.
Se realizar el ensayo experimental frecuentemente con
ratas o algn otro tipo de animal, adicionando en su
alimentacin cierto porcentajes del extracto o material
purificado para posteriormente tratndose de plantas
medicinales, hacer una validacin como medicamento a
ser utilizado en la especie humana concluida las pruebas
preclnicas experimentada de la sustancia pura
identificada en animales.