TERCER PARCIAL.

(Apuntes)
Fotometra: medida de las magnitudes relativas a las Ley de Lambert-Beer:
radiaciones, evaluadas segn la impresin visual
producida por stas y basndose en ciertas convenciones.

Fotmetro: instrumento que sirve para medir la

intensidad de una fuente luminosa.

Espectrmetro: Aparato utilizado para medir la

distribucin de una radiacin compleja en funcin de la
longitud de onda o de la frecuencia si se trata de ondas y
de la masa o de la energa de las partculas individuales si
se trata de partculas.
Espectrofotometra: en qumica analtica es una tcnica
de medicin que asocia el anlisis espectral de la
espectroscopia a la medicin de magnitudes fotomtricas
relativas, en la mayora de los casos relacionados con las
propiedades de la materia.
En base a este comportamiento, se aplican las
tcnicas analticas espectroscpicas para identificar
y/o cuantificar en muestras biolgicas los
parmetros indicadores de estados fisiolgicos o
patolgicos
Absorcin atmica: En los tomos, los electrones ocupan
alrededor del ncleo determinados niveles energticos
que definen orbitales caractersticos para cada tipo de
tomo. En estas condiciones, un tomo, se encuentra en
su estado fundamental o de menor energa, su
configuracin electrnica es estable y tiende a
mantenerla o a recuperarla si sta ha sido alterada, por
incidir sobre ella radiacin
Absorcin molecular: Los espectros de absorcin de las
molculas poli atmicas son ms complejos que los
espectros atmicos al presentar un mayor nmero de
transiciones entre sus numerosos estados, esto supone
una gran cantidad de lneas espectrales, tantas que se
superponen entre ellas dando lugar a los espectros de
bandas que abarcan un intervalo considerable de
longitudes de onda.
Emisin: Proceso que se produce cuando la materia se
relaja y cede su exceso de energa en forma de fotones.
Ley que indica la relacin directamente proporcional que
existe entre la absorbancia de una muestra y su
concentracin, al ser constantes los valores del trayecto
ptico, la longitud de onda de la radiacin incidente, la
absortividad (cantidad de luz absorbida por una solucin)
La relacin directamente
proporcional entre la absorcin
de la radiacin por parte del analito y su concentracin en
la muestra no es lineal en cualquier situacin.
Existen una serie de condiciones limitantes o desviaciones
de esta ley que dependen de determinadas caractersticas
del analito o que tienen un origen instrumental o qumico,
en las que la relacin no presenta linealidad. Estas
desviaciones son:
Dependientes de las caractersticas del analito
Limitaciones qumicas
Limitaciones instrumentales
Seleccin de longitud de onda de trabajo. La longitud de
onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud
de onda en la cual la absorbancia del analito (sustancia a
analizar) es mxima, y recibe la denominacin de Lambda
mximo (max). Para seleccionar el max., se hace un
espectro de absorcin o curva espectral, y que consiste
en una grfica de la absorbancia de
una solucin de la sustancia
absorbente de concentracin
adecuada, medida a distintas
longitudes de onda y en ella se
determina el max
TERCER PARCIAL. (Apuntes)
Curva de calibracin: Representacin grfica en un eje
de coordenadas de absorbancia (ordenadas) frente a
concentracin (abscisas). Para construir la curva de
calibracin (que debe ser una recta) se ensayan varias
soluciones de concentraciones conocidas y se determinan
sus absorbancias, luego se representan grficamente sus
concentraciones frente a sus absorbancias.
La concentracin de la muestra a analizar se obtiene
por interpolacin de su absorbancia en la curva de
calibracin.
Linealidad: en las determinaciones fotomtricas se debe
conocer la linealidad, que es el intervalo de
concentraciones del cromgeno entre las cuales existe
una relacin lineal entre concentracin y absorbancia.
A: Absorbancia.
n: Intercepto de la recta
m: Pendiente de la recta y que corresponde al producto
entre absortividad a de la muestra y el espesor b de la
cubeta.
Transmitancia (T): Es la razn entre la luz
monocromtica transmitida (P) por una muestra y la
energa o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energa
radiante incidente como la transmitida deben ser medidas
a la misma longitud de onda.
Absorbancia(A): Se define como la cantidad de energa
radiante absorbida por una sustancia pura o en solucin.
Matemticamente, corresponde al logaritmo negativo de
la transmitancia. Transmitancia expresada como fraccin
decimal %T, transmitancia expresada como porcentaje.
Espectrofotmetro: Instrumento que combina las
propiedades del espectrmetro y del fotmetro y permite
la determinacin de intensidades relativas de radiaciones
simples, elegidas a voluntad entre las muestras dadas.
Un espectrofotmetro consta de:
Fuente de radiacin: es el origen de la emisin
energtica en forma de radiacin
electromagntica lo suficientemente potente y
estable para que sea posible su deteccin y su
medida una vez que ha atravesado la muestra.
Sistema de depsito de la muestra biolgica
Selector de longitud de onda: tiene la funcin
de seleccionar o discriminar una banda
estrecha de longitud de onda de las
procedentes de la fuente de radiacin con la
finalidad de aumentar la sensibilidad de la
medida de absorbancia.
Detectores: sistemas que amplifican y
transforman la energa radiante no absorbida
por la muestra en energa elctrica y la
convierten en una seal elctrica y
cuantificable.
Sistemas de registro y presentacin de datos.
ESPECTROFOTOMETRA UV-VISIBLE
Es una espectroscopia (estudio de la interaccin entre la
radiacin electromagntica y la materia) de fotones y una
espectrofotometra. Utiliza radiacin electromagntica
(luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e
infrarroja cercana (NIR) del espectro
electromagntico. La radiacin absorbida por las
molculas desde esta regin del espectro provoca
transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas.
El color de las sustancias se debe a que absorben ciertas
longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas
y slo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de
onda no absorbida.
Esta espectrofotometra utiliza radiaciones del campo UV
de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm (UV
cercano) y de luz visible de 400 a 800 nm, por lo que es
de gran utilidad para caracterizar las soluciones en la
regin ultravioleta-visible del espectro. Se rige por una
ley muy importante: la ecuacin de Beer-Lambert.
TERCER PARCIAL. (Apuntes)
Fuentes de radiacin: FLUORESCENCIA
Lmparas descarga de Deuterio e Hidrgeno. La La fluorescencia se produce cuando una molcula absorbe
excitacin elctrica a presin reducida de estos luz de una determinada longitud de onda(energa), y emite
elementos genera una radiacin continua en la luz de una longitud de onda superior (menor energa).
banda espectral correspondiente al UV Cuando una molcula es excitada por un haz de luz de una
Lmparas de filamentos de Tungsteno. Origina intensidad y energa determinadas, absorbe energa y se
radiacin de la regin visible e infrarrojo produce el paso de sus electrones de un estado basal a un
cercano del espectro entre 350-2.500nm estado excitado, liberando esta energa en forma de luz,
Lmparas de arco de Xenn. La excitacin resultando en una emisin fluorescente o fluorescencia.
elctrica de una atmsfera de Xenn genera
una radiacin continua en la banda espectral de
250 a 600 nm.
Fluorimetra
La fluorimetra combina la fotometra con la alta
Nota: La espectrometra UV/Visible se utiliza
sensibilidad y especificidad del fenmeno fluorescente.
habitualmente en la determinacin cuantitativa de
Para la medida de la fluorescencia se usan:
soluciones de iones metlicos de transicin y
compuestos orgnicos muy conjugados. Fluormetros que usan filtros interferenciales o
filtros de vidrio.
Ventajas: Espectrofluormetros que usan prismas o redes
Rapidez de difraccin.
Uso fcil Los componentes bsicos de estos aparatos son:
Precisin extrema
Versatilidad
Eficiencia en el costo
Sensibilidad
Anlisis de superficies irregulares y materiales
duros
Preparacin mnima de la muestra

Inconvenientes:
Fuente de luz de excitacin (energa radiante):
En aquellas muestras que requieren disolucin
Se pueden emplear lmparas de arco de xenn
es necesario que esta se lleve a cabo en el
o lmparas de mercurio
disolvente adecuado; y si estamos utilizando
Rendijas de excitacin y emisin: Son iguales a
una celda de paso fijo es necesario asegurarse
las del espectrofotmetro (orientan el haz de
que la distancia no vare para anlisis
luz).
cuantitativo.
Monocromadores (de excitacin y de emisin):
Los problemas asociados con dichas celdas
Monocromadores de excitacin: para
incluyen la aparicin de burbujas que dan lugar
seleccionar la longitud de onda de excitacin
a bandas errneas.
deseada.
Suele aparecer la banda del disolvente,
Monocromadores de emisin: para eliminar las
pudiendo llegar a interferir.
longitudes de onda emitidas no deseadas
Las ventanas de las clulas no estn
Detector: Fototubos multiplicadores capaces de
completamente paralelas.
cuantificar la pequea seal fluorescente.
En slidos, hay problemas a la hora de tomar la
misma cantidad de muestra.
TERCER PARCIAL. (Apuntes)
Ventajas.
La mayor ventaja de la fluorimetra su enorme
sensibilidad (respecto a las tcnicas
colorimtricas) por el aumento de la intensidad
de la radiacin de excitacin y la sensibilidad
del dispositivo de deteccin.
La seal fluorescente depender del solvente,
pH, temperatura, de la absorbancia de luz por la
solucin, de interferentes que aporten
fluorescencia no deseada, de compuestos que
atrapan luz (atenan la fluorescencia que se
pierde en forma de calor).

FOSFORESCENCIA Es un fenmeno en el cual ciertas

sustancias tienen la propiedad de absorber energa y
almacenarla, para despus emitirla gradualmente en
forma de luz.

FOSFORIMETRA
Tcnica espectroscpica luminiscente basada en la
deteccin y anlisis de la emisin de radiaciones
electromagnticas de una especie excitada por absorcin
de fotones.
Los mtodos fosforescentes y fluorescentes se
complementan, ya que los compuestos fuertemente
fluorescentes presentan una dbil fosforescencia y
viceversa.

Ventajas (con respecto a la fluorescencia)

Ms tiempo de vida
Ms sensibilidad
Ms selectividad
Ms linealidad de la respuesta
Posibilidad de utilizar concentraciones de <
ng/ml

Inconvenientes
Necesidad de utilizar bajas temperaturas
(nitrgeno lquido).
Imprecisin en las medidas.
Cierta dificultar experimental.

Tipo de luz utilizada:

- Ultravioleta, Visible, Infrarrojo prximo.