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PRECIPITACIN, SEPARACIN Y PUNTO ISOELCTRICO DE PROTEINAS

OBJETIVO

Analiza el efecto que produce la modificacin de factores fisicoqumicos sobre la solubilidad de las
protenas y determinar el punto isoelctrico de la insulina, basndose en sus propiedades de
solubilidad a diferentes valores de ph.

INTRODUCCION

La multiplicidad de grupos cidos y bsicos de una protena hace que su solubilidad dependa de las
concentraciones de las sales disueltas, la constante dielctrica del disolvente, pH y temperatura.
Algunas protenas precipitan en condiciones en que otras an no estn bastante solubles. Este
efecto debe usarse como base para la purificacin proteica.

Efecto de la solubilidad de una protena.

La solubilidad de una protena en solucin acuosa es sensible a las concentraciones de sales

disueltas. La concentracin salina se puede expresar en trminos de fuerza inica, esta ltima se
define como:

La solubilidad de una protena a una determinada fuerza inica vara con las clases de iones en
solucin. El orden de eficacia de los distintos iones en cuanto a su influencia sobre la solubilidad
proteica es bastante similar para las diferentes protenas y parece deberse en primer trmino al
tamao y la hidratacin del in.

La solubilidad de una protena a baja fuerza inica se incrementa por lo general con la
concentracin salina. La explicacin del fenmeno salting in (incremento dela solubilidad por
sales), es que a medida que se incrementa la concentracin salina de la solucin proteica, los
contraiones adicionales recubren con mayor eficacia las numerosas cargas inicas de la molcula
de protena. Con lo que se incrementa la solubilidad de la protena. A fuerzas inicas elevadas se
reduce la solubilidad de las protenas, como la mayora de las sustancias. Este efecto conocido
como Salting out (reduccin de solubilidad por sales) es por la competencia por las molculas que
interactan entre los iones salinos agregados y los otros solutos disueltos.

Diagrama de flujo de los procedimientos:

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I. Colocar 6 ml de clara de huevo y 6 Agitar y filtrar durante

Biuret ml de sulfato de amonio. 15 min.

Suspender el precipitado en 2 Tomar 1 ml de el filtrado Tomar otra muestra,

ml de H2O y hacer reaccion de anterior y hacer reaccion de hacer la misma reaccin
biuret. biuret. y agregar sulfato de
amonio slido.

II Tubo 1
Filtrar 15 min y al
filtado volver a hacer la Efecto de ph y Aadir clara de huevo a un
misma reaccin. disolventes. tubo de ensaye +1 ml de HCL+
etanol 3ml.

Tubo 3
Tubo 2
Aadir clara de hevo+ 1 ml de
Aadir clara de huevo + 1 ml de hidroxido
regulador de acetatos+ 3ml de
de sodio+ 3 ml de etanol.
etanol.

Tubo1: Clara de huevo+.25 de cloruro de

III mercurio
Precipitacin por metales Tubo 2 :clara de huevo+.25 denitrato de plata.
pesados. Tubo 3: clara de huevo +.25 de acetato de
plomo

Tubo 4:clara de huevo+.25 de cloruro de

IV
bario. Preparar 5 tubos
Punto isoelctrico de la
Tubo 5: clara de huevo +.25 de cloruro de como se indica en la
Insulina.
sodio tabla.
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Bibliografa consultada: