Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pblica

Instituto Nacional de Salud

ISSN versin electrnica 1726-4634

Rev Med Exp. 1999; 15 (1-2) : 5-14

EVALUACIN DE LA INTRADERMORREACCIN CON ANTGENOS DE

Leishmania (Viannia) peruviana y Leishmania (Viannia) braziliensis EN REAS
ENDMICAS DE LEISHMANIASIS EN EL PER

Minaya G1, Torres Y2, Farfn M1, Mendizabal L1, Colchado M3, Arroyo E3.

Se elabor extractos de antgenos solubles de Leishmania (leishmanina), a partir

de formas promastigotes de Leishmania (Viannia) peruviana y Leishmania
(Viannia) braziliensis. Los antgenos fueron evaluados respecto a su sensibilidad,
especificidad y efectos colaterales. Los ensayos se llevaron a cabo en una rea
de transmisin de la "uta" (leishmaniasis andina), en un rea de transmisin de
la "espundia" (leishmaniasis selvtica) y en pacientes atendidos en Lima. El
antgeno de Leishmania (Viannia) peruviana, 25 g/ml, result adecuado para la
deteccin de la reaccin de hipersensibilidad cutnea tarda en pacientes con
lesiones cutneas y/o cutneo-mucosas activas, encontrando una sensibilidad
promedio de 95,9%. La misma sensibilidad, pero con reacciones ms intensas
(potentes) fue observada con el antgeno homlogo de 30 g/ml. Los antgenos
de Leishmania (Viannia) braziliensis de 25 y 30 g/ml mostraron similar
ensibilidad y potencia a las dosis equivalentes de Leishmania (Viannia)
peruviana. La sensibilidad y la potencia de la reaccin se incrementaron
mnimamente con el incremento en la concentracin de protenas. No se
observaron efectos colaterales como vesiculacin y ulceracin en el sitio de
inoculacin. Los antgenos demostraron ser altamente especficos. La
especificidad en el grupo control alcanz el 100,0%, mientras que en el grupo
control endmico fue 95,7%.

Palabras clave: Leishmaniasis, Leishmania, antgeno, Per.

SUMMARY

Extracts of Leishmania soluble antigens (leishmanina) were made from

Leishmania (Viannia) peruviana and Leishmania (Viannia) braziliensis
promastigotes. Antigens were evaluated for sensitivity, specificity and side
effects. Assays were perfomed in transmission areas for "uta" (andean
leishmaniasis), "espundia" (sylvatic leishmaniasis), and also in patients seen in
Lima. Leishmania (Viannia) peruviana antigen, 25 g/ml, was adequate to
detect late skin hypersensitivity reaction among patients with active cutaneous
and/or mucocutaneous lesions, with an average sensitivity of 95,9%. The same
sensitivity, but with more intense (potency) reactions were observed with the
homologous 30 g/ml antigen. Antigens of Leishmania (Viannia) braziliensis, 25
and 30 g/ml, showed similar sensitivity and potency to the equivalent doses of
 Leishmania (Viannia) peruviana. The reaction's sensitivity and potency increase
minimally with increased protein concentration. No side effects, such as
vesiculation and ulceration on the site of the innoculation, were observed.
Antigens showed high specificity. Specificity in the control group reached
100,0% whereas in the endemic control group, it was 95,7%.

Key words: Leishmaniasis, Leishmania, antigen, Peru.

INTRODUCCIN

La prueba intradrmica (IDR) de Montenegro, que mide la reaccin de hipersensibilidad

cutnea (RHC) de tipo retardada a antgenos homlogos o heterlogos de
promastigotes de Leishmania, es una prueba til en el estudio clnico y epidemiolgico
de la leishmaniasis tegumentaria de las Amricas1-4.

Desde que Montenegro5, en 1926, empleara por primera vez la IDR en el diagnstico
de la leishmaniasis cutneo-mucosa (LCM), diversos autores han encontrado altos
ndices de positividad en personas con leishmaniasis cutnea (LC), leishmaniasis
cutneo-mucosa (LCM) y leishmaniasis visceral (LV)4,6-11. Hay datos para considerar
que la IDR es altamente especfica. Se ha obtenido reacciones negativas en pacientes
con paludismo, tuberculosis pulmonar, lepra, blastomicosis, as como en diversas
dermatosis4,11,13. An cuando regionalmente no se disponga de antgenos
estandarizados, la sensibilidad y especificidad de antgenos elaborados en algunos
laboratorios es utilizada como prueba auxiliar en el diagnstico clnico de las
leishmaniasis cutnea13,14. En reas endmicas de Ecuador2, se evalu la prueba
cutnea frente a la prueba de ELISA, reportando una sensibilidad del 82,4% y
recomendndola como herramienta diagnstica para las leishmaniasis cutneo-
mucosas. En 1991, los mismos autores concluyen que el extracto crudo soluble de L.
braziliensis panamensis, a una concentracin de 10 g/mL es altamente sensible,
100% en pacientes con LC de 3-6 meses de evolucin8.

Sin embargo, la IDR no puede distinguir infecciones actuales de infecciones

leishmanisicas previas, una caracterstica muy comn en reas donde la prevalencia
de leishmaniasis es alta15. Con la finalidad de reforzar el conocimiento derivado de los
estudios transversales de las leishmaniasis, se han llevado a cabo estudios
longitudinales, los que permitieron una mejor comprensin de la historia natural de la
enfermedad y sus factores de riesgo16,17. Similar a estudios longitudinales efectuados
en la tuberculosis empleando el PPD12, la conversin de no reactivos a reactivos a la
leishmanina, en estudios prospectivos, podra ser utilizado como un marcador de
infecciones recientemente adquiridas.

La ausencia de un antgeno (leishmanina) estandarizado apropiadamente4 limita la

utilidad epidemiolgica de esta prueba. Adicionalmente, interrogantes sobre la
sensibilidad y especificidad de la IDR, as como la duracin de la RHC a la leishmanina,
dificultan la interpretacin de la prueba en el estudio de las diferentes formas clnicas
de las leishmaniasis.

Resultados de estudios longitudinales no sustentan el concepto generalizado de que la

respuesta RHC a la leishmaniasis tegumentaria sea permanente16, 17.

En el Per, se ha llevado a cabo algunos estudios epidemiolgicos de tipo transversal

empleando la IDR con leishmanina; en ellos, factores de riesgo tales como edad, sexo,
ocupacin y tiempo de residencia han sido asociados a la reactividad a la
leishmanina6,7,19-21, sin embargo no se dan mayores referencias sobre las
caractersticas del antgeno empleado.

Con el objetivo de disponer de un antgeno de Leishmania para la IDR,

aplicable al diagnstico de las leishmaniasis en el Per, se evalu desde
el punto de vista de su sensibilidad, especificidad y efectos colaterales
diferentes antgenos (leishmanina) utilizando cepas de Leishmania (V.)
peruviana y L.(V.) braziliensis, especies consideradas responsables de
las dos formas clnicas de mayor importancia en la salud pblica de
nuestro pas.

MATERIALES Y MTODOS

Preparacin de la Leishmania

La leishmanina, extracto soluble del parsito, fue preparada siguiendo la metodologa

de Reed y col10. Se utiliz formas promastigotes de las cepas L. (V.) peruviana
MH0M/PE/84/LC 26 y L. (V.) braziliensis MHOM/PE/84/LC 53, identificadas por anlisis
de zimodemas e hibridacin del kDNA, procedentes del Instituto de Medicina Tropical
"Alexander von Humboldt"-Universidad Peruana Cayetano Heredia.

Los promastigotes fueron cultivados en forma sucesiva en los medios de agar sangre
bifsico suplementado con 15% de sangre desfibrinada de conejo (USAMRU) y el
medio lquido LIT suplementado con 10% de suero fetal bovino, cosechados en la fase
logartmica de crecimiento, centrifugados a 3 500 rpm por 15 minutos a 4C y lavados
3 veces con solucin salina 0,89 %. Subsecuentemente, se lisaron por ultrasonido
(tres ciclos de 1 minuto a 25,000 Kc/s en bao de hielo). El lisado, diluido en solucin
salina, fue centrifugado a 10 000 rpm por 30 minutos a 4C. El sobrenadante obtenido,
solucin antignica, fue esterilizada mediante filtros Millipore de 0,22 m y
almacenados a -80C hasta su uso. Previamente, se separ una alcuota de esta
solucin, para la medicin de protenas por el mtodo de Lowry. La concentracin final
de protenas fue ajustada en lotes a 25 y 30 g/mL, adicionando 0,5 % de fenol como
conservador.

Se elabor los siguientes tipos de leishmanina:

- antgeno de L. (V.) peruviana, 25 ug/mL

- antgeno de L. (V.) peruviana, 30 ug/mL

- antgeno de L. (V.) braziliensis, 25 ug/mL

- antgeno de L. (V.) braziliensis, 30 ug/mL

Tres lotes de leishmanina fueron preparados en fechas diferentes y almacenados en

refrigeracin, previos al trabajo de campo.

Para garantizar la esterilidad e inocuidad del antgeno, se realiz el estudio

microbiolgico en placas de agar sangre y saboraud, e incubados a 37C por 30 das.
Evaluacin de las Leishmanias

Para el enrolamiento de las personas que conformaron el grupo de estudio, se tomaron

en cuenta las siguientes consideraciones:

Para el estudio de sensibilidad:

Criterios de inclusin:

- personas portadoras de lesiones activas y/o cicatriciales de etiologa leishmanisica

confirmada por demostracin del parsito mediante las tcnicas de frotis y/o cultivo.

- personas portadoras de lesiones activas y/o cicatriciales adquiridas en reas

endmicas de transmisin, compatibles con etiologa leishmanisica, demostrables por
la deteccin de inmunoglobulinas antileishmania mediante la prueba de
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI).

Para el estudio de especificidad:

Criterios de inclusin:

- residentes de la ciudad de Lima, rea no endmica, sin antecedentes clnicos, ni de

visita a zonas de transmisin de leishmaniasis.

- residentes de reas endmicas sin antecedentes clnicos de leishmaniasis.

- personas portadoras de lesiones activas con diagnstico clnico de otras patologas.

POBLACIN DE ESTUDIO

El estudio se llev a cabo en pobladores de la localidad de Colasay (Dpto. Cajamarca),

rea de transmisin andina, donde L. (V.) peruviana ha sido identificada, as como en
residentes de Putina Punco, rea selvtica del Dpto. de Puno, en el cual L. (V.)
braziliensis es el agente causal de la enfermedad. Integraron tambin este grupo los
individuos que acudieron al Instituto Nacional de Salud (INS) solicitando el servicio de
diagnstico de leishmaniasis (Figura 1).

I. REA DE TRANSMISIN CUTNEA ANDINA

- Lugar de estudio

La evaluacin del antgeno en el rea de transmisin de la forma andina se realiz en

el casero de Colasay, distrito del mismo nombre (provincia de Jan, Dpto. Cajamarca)
ubicado a 1790 msnm, distante 60 Km de la carretera Panamericana norte.

- Poblacin en estudio

Para el estudio de sensibilidad, el grupo estuvo constituido por 22 pobladores

portadores de lesiones activas y/o cicatriciales, quince (68,2%) de ellos fueron
confirmados por demostracin de amastigotes en frotis coloreados con Giemsa.

Los siete restantes fueron cicatriciales, tres de ellos no acudieron nunca a un centro de
salud por el diagnstico respectivo y cuatro tenan antecedentes de un examen
anterior de frotis con resultado negativo; sin embargo, integrantes de su familia tenan
o haban tenido leishmaniasis confirmada; cinco respondieron al tratamiento con
glucantime y dos aparentemente curaron con mtodos caseros.

Para el estudio de especificidad, el grupo control endmico estuvo conformado por

siete residentes sin antecedentes clnicos de leishmaniasis.

La presencia de dos individuos portadores de lesiones, diagnosticados clnicamente

como poco compatibles con etiologa leishmanisica permiti investigar reacciones
cruzadas con otras patologas.

II. REA DE TRANSMISIN SELVTIVCA

- Lugar de estudio

Para la evaluacin de la leishmanina en rea de transmisin selvtica, se eligi la

localidad de San Juan del Oro (Putina Punco), situada en la provincia de Sandia, Dpto.
de Puno. Comprende reas boscosas de la vertiente oriental de los Andes y es de
relieve accidentado; el clima es tropical hmedo, tpico de selva alta.

- Poblacin en estudio

La poblacin estuvo constituida por comunidades nativas y mestizas asentadas en las

mrgenes del ro Putina; los pobladores se dedican a labores agrcolas, principalmente
cultivos de panllevar, frutales y actividades extractivas temporales, especialmente
madera y oro, razn por la cual muchos se trasladan al Dpto. de Madre de Dios.

Se realiz la prueba de IDR a 42 personas con lesiones activas y/o cicatriciales

sospechosas de patologa leishmanisica y a 16 residentes sin antecedentes clnicos de
leishmaniasis.

Con la finalidad de investigar la existencia de reaccin cruzada con infecciones

micticas, se incluy a dos nios con lesiones drmicas diagnosticadas clnicamente
como micosis, en el centro de salud de Putina Punco.

Adems de considerar los criterios clnico- epidemiolgicos, se compar los resultados

de la reaccin de hipersensibilidad tarda con los obtenidos en la prueba de IFI, la cual
es altamente sensible y especfica en el diagnstico de las leishmaniasis.

III. pACIENTES ATENDIDOS EN EL INS (Lima)

De los diecinueve individuos que fueron derivados al INS para descarte de

leishmaniasis, 13 de stos presentaban lesiones cutneas, mientras que los seis
restantes presentaban, adems, lesiones mucosas compatibles con etiologa
leishmanisica.
PROCEDIMIENTOS

Datos relativos al nombre, edad, sexo, ocupacin, procedencia, tiempo de residencia

en la localidad, nmero, descripcin y tiempo de evolucin de las lesiones, etc., de
cada participante, fueron consignados en una ficha clnico epidemiolgica.

Muestras de tejido y exudado para la investigacin parasitolgica, mediante las

tcnicas de frotis y cultivo, fueron obtenidas de todas las personas que presentaron
lesiones activas compatibles con leishmaniasis. Previa informacin de los fines del
estudio, fue requerido el consentimiento oral en cada caso; de los menores de edad, se
requiri autorizacin de sus padres.

Adicionalmente, a fin de determinar la inmunidad de tipo humoral, se colect una

muestra de sangre por puncin venosa; el suero obtenido fue conservado en
condiciones de refrigeracin hasta su procesamiento mediante la prueba de
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI). Segn estandarizacin de la tcnica en nuestro
laboratorio, las muestras de suero, en las cuales se detect inmunoglobulinas IgG a la
dilucin mnima de 1/40, fueron consideradas positivas.

El antgeno para la prueba de IFI fue elaborado con promastigotes de L. (V.)

braziliensis, siguiendo la metodologa de Guimaraes y col23.

Los antgenos de leishmanina e IFI fueron preparados en el Laboratorio de

Leishmaniasis y Chagas de la Divisin de Parasitologa del Centro Nacional de
Laboratorios en Salud Pblica, Instituto Nacional de Salud (INS).

APLICACIN DEL ANTGENO (PRUEBA DE MONTENEGRO)

Se aplic va intraepidrmica, 0,1 mL de la leishmanina preparada, en la cara anterior

de los antebrazos (Figura 4) de los siguientes grupos de individuos (Tabla 1):

- 49 individuos con lesiones activas de etiologa compatible con leishmaniasis: 30 con

lesiones cutneas y 19 con lesiones cutneo-mucosas.

- 33 individuos con lesiones cutneas curadas (cicatricial): 15 de zona andina y 18 de

zona selvtica.

- 23 residentes de reas endmicas sin antecedentes clnicos (control negativo

endmico).

- 20 residentes de la ciudad de Lima (rea no endmica) sin antecedentes clnico

epidemiolgicos de leishmaniasis (grupo control).

- 8 individuos afectados con otras patologas.

La lectura de la reaccin de hipersensibilidad se verific, segn patrn establecido,

entre las 48 y 72 horas posteriores a la aplicacin24-25.

La prueba fue considerada positiva si el dimetro promedio de induracin (ppula) era

> 5 mm en el sitio de inoculacin (Figura 4). Para ello, tanto el dimetro mayor como
su perpendicular fueron medidos y promediados; utilizando un bolgrafo, la ppula fue
delimitada y estos bordes transferidos a un papel humedecido en alcohol al 70%, para
su registro permanente.

RESULTADOS

ESTERILIDAD E INOCUIDAD

En los tres lotes de leishmanina preparados, no se detect contaminacin bacteriana ni

mictica. Asimismo, la ausencia de reaccin en ratones inoculados con estos antgenos
demostr la inocuidad de los mismos.

SENSIBILIDAD

Para el estudio de sensibilidad, la condicin de enfermos de leishmaniasis fue

determinada a travs de pruebas que permitieron confirmar la naturaleza de la
enfermedad, mediante la demostracin directa o indirecta del agente etiolgico causal,
denominadas pruebas o patrn de oro.

Los Patrones de confirmacin considerados en el presente estudio fueron:

1. Observacin del amastigote de leishmania mediante la tcnica del frotis.

2. Aislamiento del promastigote de leishmania mediante la tcnica de cultivo.

3. Deteccin de inmunoglobulinas circulantes antileishmania mediante la tcnica de

IFI.

La sensibilidad, porcentaje de reacciones positivas en una poblacin de enfermos fue

determinada mediante la aplicacin de la leishmanina en personas portadoras de
lesiones cutneas y/o cutneo-mucosas activas y cicatriciales (grupos 1, 2 y 3).

Grupos 1 y 2. Lesiones activas cutneas y/o cutneo-mucosas

Cuarenta y nueve personas, incluyendo los consultantes al INS, con lesiones activas,
30 cutneas (Figura 2), 19 cutneo-mucosas (Figura 3), mostraron una sensibilidad
promedio de 95,9%. Estos porcentajes son comparables con hallazgos de otros autores
en pases vecinos4,5,13.

En la tabla 2, se consolida la reactividad mostrada, cuando menos a uno de los

antgenos evaluados.

En personas con enfermedad cutnea activa, 28/30 (93,3%) fueron sensibles a la

leishmanina. En relacin a la reactividad demostrada por pacientes afectados con LCM
activa, 19/19 (100,0%) fueron sensibles a todos los antgenos (Tabla 3).

La sensibilidad promedio en el grupo cicatricial fue 86,4%. Una nia de 3 aos de

edad, con diagnstico parasitolgico confirmatorio previo al tratamiento con
glucantime, reaccion a la leishmanina L. (V.) peruviana 30 g/mL, pero no a su
homlogo de 25 g/mL. Situacin similar ocurri con un nio de 11 aos que dio
reaccin positiva a los antgenos de L. (V) peruviana, 30 g/mL y L. (V) braziliensis, 25
g/mL, pero reaccin negativamente a L. (V) peruviana, 25 g/mL.

En el grupo evaluado en la localidad de Putina Punco (Puno), rea de transmisin

selvtica de la enfermedad, 17/17 (100,0%) respondieron a los antgenos de L. (V.)
braziliensis (Tabla 2).

Los resultados de los conformantes de este grupo, evaluados en la localidad andina de

Colasay, indican que 14/15 (93,3%) fueron sensibles a la prueba intradrmica. Un
individuo con leishmaniasis curada de procedencia selvtica, que acudi al INS para
control serolgico, no respondi a ningn antgeno (Tabla 4).

ESPECIFICIDAD

La especificidad, nmero de reacciones negativas en una poblacin de sanos, fue

determinada con los grupos 4, 5 y 6 evaluados (Tabla 5).

Grupo 4. Control negativo endmico

En los residentes de rea endmica sin antecedentes clnicos de leishmaniasis, la

especificidad promedio fue 95,7%.

Grupo 5. Otras patologas

Con relacin a la reactividad frente a otras patologas, ninguno de los ocho individuos
que presentaron lesiones cutneas de origen no leishmanisico respondieron a los
diferentes antgenos evaluados. Su procedencia y conformacin fue la siguiente (Figura
5):

* Putina Punco: dos personas con dignostico clnico de micosis.

* Colasay:

a) Varn de 21 aos con lesin cutnea protuberante, sin diagnstico establecido.

b) Escolar de 12 aos con lesin punzocortante originada por accidente.

* Pacientes examinados en el INS:

a) Mujer de 21 aos con aislamiento de Mycobacterium tuberculosis en cultivo de

lesin cutnea.

b) Mujer de 85 aos, con lesin nasal cutnea de origen neoplsico.

c) Escolar de 14 aos, sexo femenino.

d) Escolar de 9 aos, sexo masculino.

Estos dos ltimos presentaron lesiones cutneas superficiales, diagnosticadas

clnicamente para otras patologas.
Grupo 6. Control

Todos los antgenos evaluados en este grupo, individuos sanos residentes de Lima,
rea no endmica, demostraron alta especificidad, no reaccionando a ningn tipo de
antgeno.

RESULTADO GENERAL DE SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD

La sensibilidad, porcentaje de reacciones positivas en una poblacin de enfermos, fue

determinada mediante la aplicacin de la leishmanina en 82 personas portadoras de
lesiones cutneas y/o cutneo-mucosas activas cicatriciales, correspondientes a los
grupos 1, 2 y 3 de la poblacin estudiada. En tanto, la especificidad, porcentaje de
reacciones negativas en una poblacin de sanos, fue determinada por aplicacin de la
leishmanina en 51 individuos pertenecientes a los grupos 4, 5 y 6 evaluados (Tabla 6).

REACCIONES COLATERALES

En general, reacciones normales como eritema y prurito fueron observadas en los

casos activos de leishmaniasis. Excepcionalmente, un individuo conformante del grupo
control negativo endmico exhibi reaccin similar a las 24 horas con la leishmanina
de Leishmania (Viannia) peruviana 30 g/mL, persistiendo una reaccin mnima a las
48 horas. Durante su juventud, este individuo haba sido intervenido quirrgicamente
por estar afectado de tuberculosis sea.

Reacciones colaterales como vesiculacin y reaccin necrtica no fueron observadas en

los grupos presentados, pero s con el lote 2: Leishmania (Viannia) peruviana, L.(V.)
braziliensis a 30ug/mL, aplicados en individuos con LC y/o LCM activos, en el Hospital
de Quillabamba, provincia La Convencin, departamento Cusco, los que sern objeto
de una comunicacin posterior.

El incremento en la dosis de antgenos de Leishmania (V.) braziliensis ha sido asociado

con un incremento en la presentacin de efectos colaterales no deseables6,9. Por
consiguiente, es preciso ser cautos al seleccionar la dosis del antgeno a ser empleado,
en especial, cuando las infecciones son causadas por miembros del complejo
braziliensis, como ocurre en nuestro pas.

DISCUSIN

La leishmanina no represent dificultad en su preparacin y aplicacin para las pruebas

de intradermorreaccin.

La sensibilidad promedio 95,9% (47/49) que informamos en pacientes cutneos y

cutneo-mucosos activos es similar a los hallazgos de otros autores en pases vecinos
(Tabla 7). Reed y col4, evaluando extracto soluble de L. donovani donovani a la dosis
de 25 g protenas/mL, encontraron 97% de sensibilidad en individuos con LV curada;
su sensibilidad disminuy a 82% cuando, a estos mismos individuos, se les aplic
extracto de L. mexicana amazonensis, 25 g/mL. En Colombia, Weigle y col14,
empleando parsitos fenolados de L. (Viannia) braziliensis refieren una sensibilidad de
98,5%.

En 1997, en el Estado de Campeche-Mxico, Monroy y col 9, aplicando parsitos

fenolados de L. mexicana en pacientes leishmanisicos, obtuvieron una sensibilidad del
100%. Por su parte, Furuya y col8, utilizando extracto soluble de L. (Viannia)
panamensis 10 g/m, informaron reaccin positiva en 25/25 pacientes ecuatorianos,
casos confirmados por demostracin del parsito.

Porcentajes menores de positividad como el 82,7% han sido reportados por Weigle y
col14, mientras que Furuya y col2, empleando exracto soluble L. (Viannia) braziliensis
de 25 g/mL, hallaron una sensibilidad de 93,3% en pacientes con LC activa
confirmada.

En nuestro estudio, 28/30 personas con LC activa fueron sensibles a los antgenos
evaluados. Uno de los dos casos con leishmanina negativa correspondi a un joven de
17 aos de edad, de la localidad de Putina Punco con lesin cutnea nica de 17 das
de evolucin, de la cual se obtuvo formas de promastigote en cultivo. Es conocido que
la reaccin intradrmica se hace positiva de 4 a 6 semanas despus de iniciada la
infeccin5, lo cual explicara este resultado. El otro caso, tambin de Putina Punco,
correspondi a un nio de 11 aos, con serologa positiva (1/40) a leishmaniasis.

En Colasay, rea de transmisin de leishmaniasis andina, un nio de 9 aos fue

sensible a los antgenos de L. (V.) peruviana 25 y 30 g/ mL, mas no a la leishmanina
L. (V.) braziliensis 25 g/mL. En este caso, hubo mejor respuesta frente al antgeno
homlogo.

En el Per, se han efectuado algunos estudios epidemiolgicos con aplicacin de

leishmanina. En pacientes cutneos y cutneo-mucosos activos del valle del Apurmac
(San Francisco, Dpto. de Ayacucho). Castro y col21 encontraron una reaccin del
87,1%, mientras que Canario y col20 refieren un 100% en pacientes cutneos del
casero de Tambora (San Miguel, Dpto. de Cajamarca); por otro lado, en la provincia
de la Convencin, Dpto. de Cusco. Cjuno y col22 evaluaron, con fines diagnsticos, a
210 personas con diagnstico clnico de leishmaniasis, encontrando una positividad del
71,2% para la prueba intradrmica. No se tiene evidencia, en ninguno de estos
estudios, que la leishmanina haya sido aplicada en pacientes con leishmaniasis
confirmada.

En cuanto al 86,4% de sensibilidad demostrada en el grupo cicatricial participante de

este estudio, resultados similares han sido informados; en el Ecuador, 25/29 personas
con leishmaniasis cicatricial demostraron reaccin de hipersensibilidad tarda al
antgeno de L. Braziliensis panamensis8.

En el grupo control de individuos sanos residentes de Lima, rea no endmica, la

especificidad fue del 100,0%. Estos resultados concuerdan con el 98,5% informado por
Weigle y col13 utilizando promastigotes de L. (V.) panamensis, y el 96,6% obtenido
por Reed y col10 con extracto soluble de L. donovani donovani, a la concentracin de
25 g/mL de protenas. En el Brasil, resultados semejantes fueron obtenidos por
Navarrete y Biagi26, con promastigotes fenolados de L. (V.) braziliensis y, Mayrink y
col3 utilizando un extracto soluble preparado con una mezcla de cepas de L. (V.)
braziliensis, L. (V.) guyanensis, L. (L.) mexicana y L. (L.) amazonensis.

En nuestro grupo control negativo endmico, slo 1/23 con antecedente de

tuberculosis sea reaccion a la aplicacin del antgeno de L. (V) peruviana, 30 g/mL.
Estos resultados difieren del 26%, reportado por Arzubiaga y col19 en Per, en el cual,
utilizando promastigotes de L. (V) braziliensis a una concentracin protenica
equivalente a 35 g/mL, se obtuvo 21% de respuesta positiva, la cual estara con
relacin a la mayor concentracin protenica del antgeno empleado. La determinacin
de anticuerpos IgG mediante la prueba de IFI, en los sueros de estos individuos,
dieron resultados positivos slo a la dilucin de 1/16, no obtenindose, en ningn caso,
el ttulo positivo (1/40) a infecciones por leishmania, que consideramos en nuestro
grupo de estudio.

Con relacin a la reactividad cruzada frente a otras patologas, los ocho individuos
afectados por otras patologas no reaccionaron a ningn tipo de los antgenos
evaluados.

Las diferencias en cuanto a la intensidad de la reaccin, potencia, tamao de la ppula

en milmetros no guardaron relacin con el tipo de antgeno utilizado, habiendo sido el
eritema y el rea de induracin en unos casos, algo mayor para el antgeno homlogo,
mientras que en otros la situacin fue inversa.

Debido a la estrecha relacin taxonmica que muestran los parsitos de Leishmania y

Trypanosoma, diversos autores han evaluado antgenos de Leishmania en pacientes
con xenodiagnstico y serologa positivos a T. cruzi; unos, no encontraron reacciones
positivas3,11 en tanto que Reed y col10 informaron menos del 5% de reacciones con
dimetros mnimos de induracin entre 5-6 mm.

Fuller y col7 informaron que antgenos hechos con cultivos de T. cruzi pueden dar
reacciones positivas en casos activos de LC en las Amricas, pero en magnitud menor
a los producidos por antgenos de Leishmania.

La dificultad en detectar pacientes con la Enfermedad de Chagas en las reas

estudiadas no permiti su inclusin en la presente evaluacin.

CONCLUSIONES

* El antgeno de Leishmania (Viannia) peruviana, 25 g/mL, result adecuado para la

deteccin de la reaccin de hipersensibilidad cutnea tarda, en pacientes con lesiones
cutneas y/o cutneo-mucosas activas, encontrando una sensibilidad promedio de
95,9%. La misma sensibilidad, pero con reacciones ms intensas (potencia) fue
observada con el antgeno homlogo de 30 g/mL.

* Los antgenos de Leishmania (Viannia) braziliensis, 25 y 30 g/mL, mostraron similar

sensibilidad y potencia a dosis equivalentes de Leishmania (Viannia) peruviana.

* Los antgenos demostraron ser altamente especficos. La especificidad en el grupo

control alcanz el 100%, mientras que en el grupo control endmico, fue 95,7%.

Recomendaciones

La prueba de IDR, empleando el antgeno de Leishmania (Viannia) peruviana 25

g/mL, podra ser usado como prueba auxiliar en el diagnstico de las leishmaniasis a
nivel nacional.

Agradecimientos
Los autores desean dejar constancia de su agradecimiento al Dr. Csar Nquira
Velarde, por la revisin y crtica del manuscrito; a los Drs. Eduardo Falcon Rosadio y
ngel Garay, por la evaluacin clnica de los pacientes que acudieron al INS y los de
Colasay respectivamente. As mismo a la Blga. Silvia Vega Ch. por la asistencia tcnica
prestada.