DETERMINACION CUANTITATIVA POR UNA PORCION DE

EXTRACTO
OBJETIVO
Calcular la cantidad de clorofila que se encuentra en una
determinada porcin de extracto por una determinacin cuantitativa.

MATERIALES
1 mortero
1 Embudo de Buchner
1 Matraz de filtracin
1 Matraz aforado de 50 mil
Probeta de 100 ml
Vaso de precipitados de 200ml
Tubos de ensayo
1 Pipeta de 5ml.
1 Embudo
Pipeta Pasteur, mechero, tripie y rejilla
Espectrofotmetro y celdas
2 Discos de papel filtro
Gradilla
1 gr de hojas frescas de espinacas
Arena

REACTIVOS
Acetona al 80% (v/v)

METODOLOGIA
1.- Coloque en el mortero 1 g de hojas de espinacas, sin las venas
grandes, cortadas en pequeos tamaos.
2.-Agregue arena y 4 ml de acetona al mortero, para moler el tejido
y obtener una pasta fina. Adicione 20ml ms de acetona.
3.-Transfiera cuidadosamente el extracto resultante al embudo de
Buchner provisto de papel filtro, y filtre al vaco.
4.- Agregue otros 50ml de acetona a la pulpa de las hojas y reanude
la molienda y el filtrado. Este segundo extracto agrguelo al
primero. El tejido debe de quedar sin clorofila, de lo contrario repita
el proceso con otros 20ml de acetona y rena todos los filtrados.
5.- Lave el mortero y el embudo con 50ml de acetona que se
incorporara al filtrado. En todo el proceso no debe de usar ms de
100ml de acetona se aconseja aforar a 50ml en un matraz.
6.- Lea la densidad ptica (D) a 645. 652.663 nm del extracto.
Usando como blanco el acetona. Anota las densidades medidas
DISCUSIN
La fotosntesis es un proceso que transforma en carbono
orgnico el gas carbnico tomado del aire o disuelto en el agua.
En el proceso interviene un pigmento, la clorofila, que es una
sustancia capaz de absorber las radiaciones luminosas. Esta
captacin de energa luminosa se realiza en una primera etapa en
la fotosntesis, en la cual se produce energa qumica en forma de
molculas de adenosintrifosfato (ATP) y se desprende oxgeno,
que produce de la escisin de una molcula de agua. En una
segunda etapa, que se denomina fase obscura porque puede tener
lugar en ausencia de
luz, el dixido de carbono se combina con una pentosa para formar
glucosa a travs de
una serie de reacciones qumicas. La clorofila absorbe sobre todo la
luz roja, violeta y
azul, y refleja la verde.
La luz roja es la de mayor eficacia para la fotosntesis, ya que el
espectro de absorcin de
la clorofila es ms amplio en la zona del rojo. En
cambio la luz verde carece
de accin sobre este proceso.
Lo anterior nos explica porque cuando llevbamos la solucin de
clorofila a la luz del sol
esta cambiaba a un color rojo.
Cabe mencionar que no todas las soluciones obtenidas en la
prctica por los dems
equipos tenan la misma tonalidad de verde, esto es porque no
todas las hojas de
espinacas tenan la misma frescura, esto es que entre ms frescas
se encuentren las hojas
mayor contenido de clorofila.
CONCLUSIN
Sabemos que la clorofila es un factor importante en la fotosntesis y
que es capaz de
absorber la energa luminosa y gracias a ello puede promover la
serie de reacciones que
conducen al almacenamiento de dicha energa en un compuesto de
alto poder calrico.
La luz roja es la de mayor eficacia para la fotosntesis, ya que el
espectro de absorcin de
la clorofila es ms amplio en la zona del rojo. En cambio la luz
verde carece de
activacin sobre este proceso.
DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE CLOROFILAS TOTALES
DE LA BIOMASA SE UTILIZA EL MTODO
ESPECTROFOTOMTRICO PROPUESTO POR HANSMANN
(1973).

Material:
- Tubos de ensayo
- Pipetas Pasteur
- Pipetas de 1,2,5 y 10 mL
- Espectrofotmetro y cubetas de 1 cm
- Centrfuga
- Acetona: agua 90% (v/v)

Procedimiento:
La muestra (2 g) se tritura y suspende en un volumen determinado
(5-10 ml) de acetona-agua al 90% (v/v) como disolvente extractor
de los pigmentos. Se agita y se deja reposar en la oscuridad a 4 C
durante 24 h. Despus de este periodo se lleva a temperatura
ambiente, se repone el disolvente que pueda haberse evaporado y
se centrifuga a 2700xg durante 5 minutos. Se mide la densidad
ptica del sobrenadante a 665, 645 y 630 nm, comprobando que no
existe turbidez ni partculas en suspensin. Como blanco se utiliza
el propio disolvente.