Sunteți pe pagina 1din 63

LUCRARI LABORATOR MICROBIOLOGIE GENERALA

L.1. Reguli de protecie a muncii n laboratorul de microbiologie;


Microscopul. Utilizarea microscopului
L.2. Studiul microbiologic al bacteriilor - Studiul bacteriilor prin
colorare simpla
L.3. Studiul microbiologic al bacteriilor - Studiul bacteriilor prin
colorare difereniala
L.4. Studiul microbiologic al drojdiilor (Saccharomyces, Pichia,
Torulopsis)
L.5. Studiul microbiologic al drojdiilor (Candida, Rhodotorula,
Kloeckera)
L.6. Studiul microbiologic al mucegaiurilor (Mucor, Rhizopus)
L.7. Studiul microbiologic al mucegaiurilor (Aspergillus niger,
Aspergillus oryzae, Aspergillus glaucus, Penicillium expansum)
L.8. Studiul microbiologic al mucegaiurilor (Botrytis, Geotrichum,
Alternaria, Fusarium, Cladosporium)
L.9. Tehnici de izolare a culturilor pure
L.10. Tehnici indirecte (culturale) de evaluare a numrului de
microorganisme - Tehnica clasic de numrare prin cultivare pe medii
dense
L.11. Metoda direct de numrare a bacteriilor n preparate fixate i
colorate - Metoda Breed
L.12. Metode directe de numrare - Numrarea cu citometre
L.13. Influena factorilor de mediu asupra dezvoltrii
microorganismelor
Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

REGULI DE PROTECIE A MUNCII N LABORATORUL DE


MICROBIOLOGIE

ntr-un laborator de microbiologie trebuie respectate anumite reguli de ordine


interioar, dup cum urmeaz:
Este strict interzis accesul persoanelor strine n laborator;
Intrarea n laborator i participarea la lucrrile practice se va face numai dup
audierea i nsuirea regulilor de protecie a muncii (dovedit prin semntur
pe un proces verbal);
Intrarea n laboratorul de microbiologie necesit purtarea obligatorie a
echipamentului de protecie (halat cu mneci lungi, mnui sterile, etc.). Se
recomand ca echipamentul de protecie s fie pstrat separat de hainele
utilizate n exterior;
Nu se mnnc i nu se fumeaz n laborator.
Manipulrile trebuiesc efectuate cu multa atenie, chiar dac nu se lucreaz cu
microorganisme patogene. Culturile, preparatele microscopice umede, toate
materialele care conin sau s-au aflat n contact cu microorganisme vii trebuie
mnuite cu grija.
n laboratorul de microbiologie, poate exista i pericolul generat de utilizarea
tensiunii nalte, a radiaiilor ultraviolete i a altor radiaii. Radiaiile ultraviolete
(=250-270 nm) sunt folosite pentru sterilizarea aerului i suprafeelor de lucru.
iradierea se face timp de 15 min - 2 ore, n funcie de dimensiunea ncperii i
gradul presupus de contaminare a aerului. n timpul funcionarii lmpii, nu este
permis accesul personalului n ncpere dect cu ochelari de protecie i pentru
scurta durata, deoarece razele ultraviolete ataca retina, iar in doze mari pot
produce arsuri ale epidermei;
Rnile i zgrieturile de pe mini trebuie s fie complet protejate de pansamente
rezistente la apa i de mnui chirurgicale;
S se evite pe ct posibil atingerea prului, innd cent ca nivelul de
contaminare a acestuia este de aproximativ 1 milion/cm2. Persoanele cu pr
lung este necesar s-l strng, pentru a evita accidentele, innd seama ca de
obicei se lucreaz n. apropierea becului de gaz;
1 Cnd o cultura este pipetat din greeala pe bancul de lucru sau pe podea, nu
va grbii s tergei locul respectiv, ci aplicai peste suspensia respectiva o
soluie dezinfectanta, ateptai aproximativ 20 minute i abia apoi curai;

Laborator Microbiologie general|



Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

Evacuarea rapid a coninutului pipetelor poate produce aerosoli. Aerosolii pot fi


generai i la mnuirea firului sau ansei, i la ndeprtarea dopului de vata sau
de cauciuc din eprubetele cu culturi i la deurubarea capacelor sticlelor cu
culturi. n general, n munca din laboratorul de microbiologie se prefera micrile
lente, negrbite;
Utilizarea firului sau ansei necesit bune deprinderi la mnuirea acestora, pentru
a se evita contaminarea aerului i a zonei de lucru. Firul i ansa trebuie s fie
sterilizate nainte i dup utilizare, prin flambare la rou, n flacra unui bec
Bunsen pe toata lungimea firului metalic. mprtierea materialului aderent se
evita prin introducerea firului metalic n flacra, n mod gradat;
Eprubetele cu culturi vor fi inute ntotdeauna n stativele pentru eprubete. Nu
lsai niciodat eprubete sau pipete utilizate pe bancul de lucru. Placa Petri n
care se numra microorganismele nu va fi privit ca fiind lipsita de risc, chiar
dac inocularea ei s-a fcut dintr-un aliment bun pentru consum;
Dopul de vat de la captul pipetei se afl acolo pentru a preveni contaminarea
lichidului care trebuie pipetat i pentru a preveni infectarea utilizatorului. Pipetele
folosite nu se vor lsa nici o data pe bancul de lucru. Ele se vor introduce ntr-un
recipient coninnd soluie dezinfectant (bicromat de potasiu 5%). Lamele i
lamelele se vor aeza dup utilizare n vase coninnd soluii dezinfectante,
dup ce n prealabil lamelele au fost separate de lame cu ajutorul unei pensete;
S se eticheteze corect culturile nainte de depozitarea lor la termostate sau n
alte zone;
Dup terminarea lucrului se va cura zona de lucru. Aceasta se va terge cu o
soluie dezinfectanta (cloramina 6.5-3%, formol sau fenol 3-5%, HgCI2 0.1%).
Minile se igienizeaz prin introducerea lor ntr-o substan antiseptic pentru
cteva minute, apoi se spal cu ap cald si spun.

Laborator Microbiologie general|



Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

MICROSCOPUL. UTILIZAREA MICROSCOPULUI

Microscopul este instrumentul cel mai utilizat i cel mai important n laboratorul de
microbiologie. Cu ajutorul microscopului optic se realizeaz studiul morfologic al
microorganismelor (bacterii, drojdii i mucegaiuri) i numrarea direct a acestora.
Studiul virusurilor i a ultrastructurilor celulare necesita utilizarea microscopului
electronic.

Reguli de utilizare a microscopului

ntotdeauna microscopul se transport cu dou mini, o mn se aeaz la


baza, iar cu cealalt se prinde coloana sau stlpul microscopului;

Se aeaz cu atenie microscopul pe masa de lucru. n cazul unei micri


violente sau dup un oc acesta se poate deregla;

Nu se nclin niciodat microscopul, chiar dac exist aceast posibilitate.


Cnd se utilizeaz obiectivul de imersie, prin inclinare, uleiul de cedru se
rspndete pe msua microscopului;

Pentru curare, ntotdeauna se folosete hrtie special pentru curarea


lentilelor. Dac rezultatele nu sunt corespunztoare prin utilizarea hrtiei, se
poate folosi o cantitate mic de benzen. Nu se va utiliza alcoolul sau alt produs
care-poate determina desprinderea lentilelor;

S se observe permanent diferenele dintre obiectivele folosite pentru studiul


preparatelor microscopice umede i obiectivele de imersie (pentru studiul
preparatelor microscopice colorate). Obiectivul de imersie este fragil, el trebuie
utilizat cu foarte mult atenie;

De fiecare data cnd se utilizeaz microscopul este necesar s se curee toate


lentilele: ale obiectivului, ocularului i condensatorului;

Se aeaz ntotdeauna n centrul optic al microscopului obiectivul cel mai mic i


se coboar tubul ct este posibil;

Se acoper microscopul dup utilizare cu un sistem de protecie;

Nu se vor ntreprinde niciodat reparaii. Acest lucru se realizeaz de ctre


1
echipele specializate.

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

Elementele microscopului
Microscopul se compune dintr-un stativ portant, un sistem optic, o msu port-obiect i
un sistem de iluminare. Sistemul optic i msua sunt mobile.

1 Oculare 7 urub pentru deplasarea pe axa y


urub micrometric pentru clarificarea
2 Dispozitiv port-obiective 8
imaginii
3 Obiective 9 urub pentru deplasarea pe axa x
4 Clema pentru fixarea preparatului 10 Buton de pornire oprire
2 5 Msu 11 urub de ajustare a luminozitii
urub macrometric pentru prinderea
6 12 Lampa
imaginii

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

Ocularele
Curent se utilizeaz oculare care au puterea de mrire de x8, x10, x12.
Obiectivele
Dispozitivul port-obiectiv permite selecionarea obiectivului dorit prin simpla rotaie.
Obiectivele utilizate n microbiologie sunt n general obiective acromatice i dac este
posibil plan-acromatice. Gama obiectivelor necesare au puterea de mrire de x10, x20,
x40, iar obiectivele de imersie au puterea de mrire de x90, x100.
Msua port-obiect
Msua port-obiect reprezint un suport pentru lam. Deplasarea pe cele doua axe
orizontale perpendiculare se realizeaz cu ajutorul unui urub situat lateral.
Sistemul de iluminare
Se compune dintr-o sursa de lumina i un condensator. Condensatoarele curente sunt
dotate cu o diafragma. Sistemul de iluminare este independent sau ncorporat n
microscop.
Sistemul de deplasare a obiectivelor
Se realizeaz cu un urub pentru micrile rapide i un alt urub pentru reglare
micrometric. Distanta frontal, adic distanta ntre preparat i obiectiv, depinde de
puterea de mrire a obiectivului.
Puterea de mrire
Puterea de rezoluie este capacitatea de separare a doua obiecte foarte apropiate.
Puterea de mrire variaz de la 100-1200 corespunztor sistemului oculare obiectiv
utilizat. Se calculeaz prin produsul dintre puterea de mrire a ocularului i a
obiectivului.

Utilizarea microscopului

Curarea cu ajutorul unei hrtii speciale a elementelor optice ale microscopului;

Reglarea luminozitii;

Fixarea preparatului pe msu cu ajutorul unei cleme. Partea preparatului care


intereseaz se aeaz n centrul port-obiectului;

3 Obiectivul este selecionat: iniial se fixeaz obiectivul cu puterea de mrire cea


mai mic (x10) pentru prinderea imaginii;

Se coboar obiectivul la o distan de 0.5-1 cm de preparat cu ajutorul urubului

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

macrometric;

Pentru studiu se schimba obiectivul cu un altul cu putere de mrire superioar


prin rotirea dispozitivului port obiective;

Dup obinerea imaginii, se realizeaz clarificarea acesteia cu ajutorul urubului


micrometric;

n cazul utilizrii obiectivului de imersie, se depune o pictur de ulei de imersie


n zona care intereseaz i se imerseaz obiectivul n aceasta zon;

Dup utilizare, obiectivele de imersie trebuie sa fie curate cu benzen;

Lamele examinate vor fi imediat ndeprtate pentru a se evita contaminarea.

Cauzele care duc la obinerea unor imagini necorespunztoare sunt:

Executarea unor preparate necorespunztoare;

Preparate care nu sunt centrate corespunztor;

Elemente optice murdare;

Obiective i oculare dereglate;

Luminozitate reglat necorespunztor.

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

STUDIUL BACTERIILOR

Definiie
Bacteriile sunt microorganisme monocelulare de tip procariot cu un cromozom unic,
care se nmulesc asexuat prin sciziune binar.

Rspndire
n sol - concentraia de celule poate ajunge la valori de 107-109/g att n straturile
superficiale (bacterii aerobe), ct i n straturile de profunzime (bacterii
anaerobe).
din sol, bacteriile s-au adaptat s triasc n ape, unde concentraia de celule
poate fi ntre 10/cm3 n apa de izvor, pn la valori de 1012/cm3, de exemplu, n
ape fecalo-menajere.
existena n aer a bacteriilor este temporar i prin intermediul curenilor de aer
sunt rspndite la distane foarte mari. Din aer, sunt antrenate din nou n sol prin
intermediul precipitaiilor atmosferice.
fac parte din microbiota naturala a plantelor i animalelor

Rol
rol important n natur:
n transformarea compuilor macromoleculari n compui simpli, prin
mineralizarea materiei organice nevii, contribuind astfel la realizarea natural
a circuitului unor elemente de importan vital: carbon, azot, sulf, fosfor, fier
.a.
n industria alimentar - culturi starter al proceselor fermentative
bacteriile lactice sunt folosite la fabricarea produselor lactate, a
brnzeturilor, n industria panificaiei, la conservarea legumelor, mslinelor,
furajelor verzi etc.
bacteriile propionice sunt utilizate la fabricarea brnzeturilor tip schwaitzer
bacteriile acetice la fermentaia alcoolului etilic obinerea industrial a
oetului.
n biotehnologie se pot obine:
enzime, proteine, aminoacizi, acid lactic, acid acetic, solveni (aceton, alcool
izopropilic, alcool butilic);
hormoni insulina produs de un mutant de Escherichia coli;
ngrminte biologice Azotobacter;
insecticide biologice Bacillus thuringiensis;
antibiotice Streptomyces sp.
vitamine de ex. vitamina B12 Propionibacterium shermani

Aspecte negative:
1
n industria alimentar bacterii ageni de alterare a produselor
alimentare (acrirea berii, vinului, putrefacia crnii .a.);

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

bacterii patogene ingerare alimente contaminate toxiinfecii


alimentare;
bacterii patogene pot s paraziteze organismele vii dnd
mbolnviri grave (tuberculoza, febra tifoid, dizenteria, sifilis, bruceloza,
antrax, .a.), bacterioze la plante.

Caractere morfologice
Bacteriile prezint forme celulare foarte diversificate, dintre care forme de baz,
monocelulare, precum i forme derivate ale acestora ce rezult n urma asocierii
celulelor rezultate prin reproducere.
Dintre formele de baz fac parte urmtoarele (Anexa 2):
- forma sferic coccus sfera este perfect (micrococi), ovalar (enterococi),
lanceolat (pneumococi) i reniform (gonococi);
- forma bacilar cilindric drepte cu capete rotunjite (g. Enterobacter), cu
capete retezate (g. Bacillus), fusiforme, mciucate (g. Corynebacterium), cu
diametru variabil (g. Mycobacterium);
- formele spiralate-elicoidale specifice bacteriilor patogene
forma vibrio
forma spirillum filamente rigide cu spire largi
forma spirocheta filamente flexibile cu mai multe spire;
- formele filamentoase specifice bacteriilor miceliene (actinomicete,
chlamydobacterii etc.).

Mediul de baz pentru cultivarea bacteriilor bulionul de carne lichid sau solidificat
cu agar (BCA). Prin reproducere pe mediu nutritiv solidificat ia natere o colonie
alctuit din biomasa de celule rezultate prin sciziune din celula unic:
- colonii de tip S (smooth neted lucios)
- colonii de tip R (rough rugos, aspru, zbrcit)
- colonii de tip M la bacterii productoare de capsule, cu consisten gelatinoas,
mucoid
Coloniile de bacterii:
pe medii solide
9 culori de alb, alb-crem, galben-auriu, oranj-rou, albastru
9 fluorescen
pe medii nutritive lichide
9 pot da tulburare i sediment bacteriile anaerobe
9 formeaz voal caracteristic, fragil, cutat, gelatinos bacteriile aerobe.

Caractere fiziologice generale


bacteriile se dezvolt ntr-un domeniu larg de temperatura 10C i 90C;
n raport cu oxigenul majoritatea bacteriilor sunt aerobe (ex. bacterii acetice), care
cresc n semiaerobioz (ex. bacterii lactice), dar un grup restrns de bacterii sunt
2 adaptate s creasc n strict anaerobioz (ex. genul Clostridium).
pH=1-11 optim la valori acide pentru bacterii acidotolerante (bacterii acetice,
lactice) sau la valori neutre pentru bacterii de putrefacie.
Laborator Microbiologie general|


Facultatea
a tiina i Ing
gineria Alimen
ntelor

STUDIU
S L BACT
TERIILOR
R PRIN COLOR
RARE SIM
MPL

Prepara
atele micros
scopice sunt de dou
tipuri:
A. Preparate
e umede pentru stu
udiul drojdiiilor si a mu
ucegaiurilorr;
B. Frotiuri (p
preparate-u
uscate) pe
entru studiu
ul bacteriilo
or.
Coloranii utilizai n
studiul bacteriilor
b au
a ca scop accentuare ea contrasttul prepara
atelor
(colorarre simpl) sau n sco opul identificrii (colorrrile diferreniale).
Colorare
ea simpl prezint
p do
ou etape:
1. Obinerea
O frrotiurilor;
2. Colorarea
C simpl prop priu-zis.

Etapele prelevrii probelor pe


entru realiz
zarea frotiu
urilor sunt p
prezentate n figura 1.

Figu
ura 1. Etapele prelev
rii probelo
or

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Facultatea
a tiina i Ing
gineria Alimen
ntelor

Obinereea frotiurilo
or presupu une etalare
ea celulelo r de studia
at, urmat de uscare
e, de
fixare i de colorarre (Fig. 2)

1. Sterilizare lam
m

F 2. Adugare
A ap diistilat

R 3. Sterilizare ansa

O 4. Prelevare proob

5. Plasare
P prob pee lam

T 6. Etalare probb

I 7. Uscare

U 8. Fixare

9. Rcire


Figura 2. Etap
pele realiz
rii frotiuluii
Etalarea a este reaalizat porn
nind de la
a prelevareea probele
e, etap id
dentic cu cea
utilizat pentru pre
eparatele um
mede n sta
are proasp
t.
Pictura
a de suspe ensie se etaleaz cu ajutorul firrului metaliic steril asttfel nct ss se
obin o distribuie
e foarte fin
, omogen
.
Uscarea a se efectueaz deasupra flcrrii unui becc de gaz pe
entru a se e
evita o nc
lzire
violent.
Fixarea se realizea az trecnd lama de 2-3 ori pri n flacra b
becului de g
gaz, dup care
se realiz
zeaz rcirrea.
Frotiul poate
p fi ana
alizat n con
ntinuare su
ub aceasta form sau colorat.

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Facultatea
a tiina i Ing
gineria Alimen
ntelor

Se realiz
zeaz prin acoperirea
a frotiurilor fixate cu c
teva pictturi de colo
orant timp d
de 30
sec 2 min (A), du
up care se
e realizeaz splarea (B) i zvnntarea prep paratelor (C
C).

A B C

Examen
nul microscopic se efe
ectueaz cu
u obiective
ele de imerrsie (x90, x
x100).

Coloranii utilizai frecvent


f sun
nt: albastru
u de metilen
n sau fucsiina.

Etapele realizrii colorrii


c sim
mple sunt prrezentate n
n figura 3.

C 1. Obinere
e frotiu
O
L
2. A
Adugare colo
orant (fucsin )
O
R
A 3. Meninere collorant 1 min.
R
E
4. Splare ccolorant
S
I
M 5. Zvntare preparat

P
L 6.. Adugare ule
ei de cedru

Figu
ura. 3 Etap
pele realiz
rii colorrii simple
3

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

BacteriiidinIA
AURT

Iaurturile sunt fab


bricate cu ajutorul la
aptelui passteurizat, in
noculat cu
u dou baccterii
termofile
e:
9 Lacto
obacillus bu
ulgaricus, agent
a de accidifiere i a
arom;
9 Strep
ptococcus th
hermophilus
s, formeaz
aroma.
Exist un
u sinergism m ntre cele dou baccterii; acesstea producc compui utili una pe
entru
cealalt (activitate peptidazic de ctre prima bactterie, acid fformic prod
dus de cea de a
doua).

1. L
Lactobacilllus bulgarricus

Sunt bacili a alungii, G Gram pozzitivi,


nesporu ulai, imoobili, homofermenttativi,
termofilli (temperattura de dezzvoltare 45C).
Fermen nteaz gluccoza, lacto
oza, fructozza i
cteoda at galacto
oza cu prod ducere de acid
lactic.

2. S
Streptococ
ccus therm
mophilus
Sunt c coci, Graam pozitivvi, nesporrulai,
imobili, grupai n
n perechi i cteodatt n
lanuri.
Fermennteaz lacto
oza, zaharoza, glucozza i
uneori g
galactoza ccu formare
e de acid la
actic,
temperaatura maxi ma de cretere 50-52
2C.

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

BactteriidiinSM
NTN
N

Streptoc
S occus crremoris

Smntna
S acid
a este fe
ermentat de
d Streptoccoccus crem
moris.
Sunt
S coci (llanuri de coci), G+, nesporula
ai, micro-aerofili, foarrte exigeni din
punct de
d vedere nutriional, cresc la a temperaatura de + +10C, dar nu cressc la
tempera
atura de 45C.
Fermenteaz
F lactoza ii maltoza.

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Bacteri
B iidinB
BOR

Lactobac
L cillus delb
brueckii

Sunt baacili alung


gii, Gram pozitivi, ne
esporulai, imobili, homofermen
ntativi, term
mofili
(tempera
atura de de
ezvoltare 45
5C).
Lactoba
acillus delbrrueckii ferm
menteaz la
actoza.

orator Microb
Labo biologie gene
eral|

Tema: STUDIUL BACTERIILOR PRIN COLORARE SIMPL
Scopul: Formarea deprinderilor de manipulare a ustensilelor i aparaturii de laborator;
Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare identificrii bacteriilor

Bacterii din IAURT

Bacterii din SMNTN

Bacterii din BOR

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data

Cadrul didactic
Facultatea
a tiina i Ing
gineria Alimen
ntelor

STU
UDIUL BA
ACTERIILOR PR
RIN COL
LORARE
E DIFER
RENIAL
L
(G
GRAM)

Prepara
atele micros
scopice sunt de dou
tipuri:
A. Prepa
arate umed
de pentru
u studiul drrojdiilor si a mucegaiu
urilor;
B. Frotiu
uri (prepara
ate-uscate) pentru sttudiul bacte
eriilor.
Coloranii utilizai n
studiul bacteriilor
b au
a ca scop accentuare ea contrasttul prepara
atelor
(colorarre simpl) sau n sco opul identificrii (colorrrile diferreniale).
Colorare ea Gram pe ermite diviz
zarea bacteeriilor n do
ou grupe: GRAM PO OZITIVE (GG+) i
GRAM NEGATIVE E (G-). Aceasta me etoda se bazeaz p pe diferena structurrii i
compoz ziiei perete
elui celular la cele do
ou grupe de bacteriii. Bazele mmetodei au fost
stabilite de bacteriologul danez Hans Christian Grram, n anu ul 1884.
Colorare
ea GRAM prezint
p do
ou etape:
1. Obinerea
O frrotiurilor;
2. Colorarea
C GRAM
G proppriu-zis.

Obinereea frotiurilo
or presupu
une etalare
ea celulelo r de studia
at, urmat de uscare
e, de
fixare i de colorarre

Frotiul uscat
u i fix
xat se acop per cu cteva pictuuri de viole
et de genian sau cristal
violet, timp de 1 minut
m (A), apoi
a se cl
tete cu ap
p (B). Se acoper a apoi prepa ratul
timp de e cteva se ecunde (30 0 sec) cu soluie Lu gol (iod nn iodura dee potasiu) care
joaca rool de morda ant (C);

A B C
1
Frotiul este
e supus s aciunii alcoolului etilic - 96 ((D). Dup splarea ppreparatulu
ui cu
ap (E), acesta se e acoper cu al doile ea colorantt (fucsina bazic) ca are recolore
eaz
celulele
e bacteriilorr Gram neg gative (F).

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Facultatea
a tiina i Ing
gineria Alimen
ntelor

D E F
Dup splarea
s preparatulu
p ui cu ap (G) se rrealizeaz zvntare a (H) i apoi
studiere
ea acestuia
a cu obiecttiv de 90x imersat n ulei de ce dru.

G H
n urmaa acestei metode
m de colorare bacteriile
b G
G- vor ave
ea culoarea
a roz-roie
e; iar
bacteriile G+ se vor colora n violet.
Prezenttarea schematic a colorrii
c Grram se reg sete n ffigura 1.

1. Obinere frotiu
u
C
O 2.
2 Adugare colo
orant (violet dee genian sau
cristal violet)
L nere colorant 1 min.
Menin
O
R 3. A
Adugare Lugol
A Me eninere 30 secc.
R
E 4. S
Splare cu alcoo
ol

D
5. Splare cu ap

I
F
E 6. Aduggare colorant (fu
ucsin)
R Menin
nere colorant 1 min.

E
N 7. S
Splare cu ap


I
8. Zvvntare preparatt
A
L
2 9. Adu
ugare ulei de cedru

Figu
ura. 1 Etap
pele realiz
rii colorrii GRAM

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Facultatea
a tiina i Ing
gineria Alimen
ntelor

ANEXA
A
Ettapele colorrii
c GRAM

Reactivi/PPrepa Duratta de Rea


acii Aspec
ct celule Gram pozitiv
ve Gram
rat aplica
are (G+) negative (G-)
Frotiu fixat, - - Celule fr
necolorat e i dificil
culoare
de vizu
ualizat

Cristal viollet 1, apoi Coloranii bazici


b Att bacteriile
cltire
e cu ap reacioneaz cu Gram pozitive ct
grupe ncrrcate i ceele Gram
gativ din pe
neg erete negativve sunt
memmbran i citosol coloratte n violet
nchis.
Soluie Lug
gol 1, apoi Iodul are efect
e Ambele e grupe de
e cu ap
cltire morrdant i mrrete bacteriii rmn
ata
area coloratte n violet
nchis.

Alcool etilic 96 10-15, apoi Solvenii spal


s Bacterriile Gram
cltire
e cu ap colo
orantul i iodu ul din pozitiv e rmn
celu
ule. Colora antul coloratte n violet
uzeaz din celula
difu nchis n timp ce
baccteriilor Gram
G bacteriiile Gram
pozzitive mult mai lent negativve devin
decct n cazul celorc incolorre i dificil
Graam negaative, de obsservat.
datoorit compo oziiei
chim
mice i gro osimii
peretelui celular
Fucsin, 1, apoi Colorantul bazic c se Celule le Gram
colorant de cltire
e cu fixe
eaz de gru upele pozitiv e rmn
contrast ap, ncrcate negativ v din coloratte n violet
zvnta are n amb bele tipuri de nchis (culoarea
aer cald, celu
ule. La bacteriile coloranntului
studiuu cu Graam pozitive sunt primar ) n timp ce
obiecttiv de ns puine grupe g celulel e Gram
90x imersat libe
ere de cristal violet
v devin colorate n
n ulei
u de commparativ cu cele roz sau rou
cedru Graam negative care (culoarrea
sunnt complet liberre coloranntului de
contrasst)

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Bacillu
ussub
btilis

1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale).
fo
ormeaz pe e Plate Coun
nt Agar, dup
p 48h de ccultivare la 3
37C, coloniii alb-crem, plate
i neuniformee.
2. Caractere
C microscop
m pice
bacterii cu forma
f de bastonae,
b G+, aerob
be, mezofile
e n generral mobile. Sunt
ca
aracterizai prin aptitudinea de spo
orulare.
3. Rspndire
R e i rol
sunt foarte r
spndite n
n natur, n special
s n so
ol i pe prod
dusele vege
etale.

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Bacteri
B riidinO
OET

Aceto
obacter a
aceti

Sunt
S bacili, G-, nesporulai, n ge
eneral mob
bili, aerobi.
Sunt
S ageni de fermen
ntare acetic, care e
este de fap
pt o oxidare
e incomple
et a
etanolului.
Caracteristic
C ca principa
al este pro
oducerea de
e acid acettic pornind de la etano
ol.
Prin
P colorare
ea Gram ele apar de culoare roie.
Sunt
S bacteriii de contam
minare a prroduselor a
alcoolizate pe care le acidific.
n
n industrie sunt utiliza
ate pentru obinerea
o o
oetului.

orator Microb
Labo biologie gene
eral|

Tema: STUDIUL MORFOLOGIC AL UNOR SPECII DE BACTERII PRIN
COLORARE GRAM
Scopul: Formarea deprinderilor de manipulare a ustensilelor i aparaturii de
laborator; Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare identificrii
bacteriilor

Bacillus subtilis

Bacterii din OET

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data

Cadrul didactic
Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

STUDIUL DROJDIILOR

Definiie
Drojdiile reprezint un grup taxonomic complex i eterogen de microorganisme
monocelulare de tip eucariot, care se nmulesc prin nmugurire, ca form general de
reproducere i n mod particular prin ascospori formai pe cale asexuat i sexuat.

Importan/rol
produc fermentarea glucidelor simple n anaerobioz cu formare de alcool etilic
i dioxid de carbon fabricarea alcoolului, a vinului, berii i pinii.
sunt utilizate ca surs de proteine n alimentaia uman, cu denumirea de SCP
(single cell protein) sau n alimentaia animalelor.
din biomasa de drojdie se obin:
- extracte folosite ca aditivi alimentari;
- vitamine hidrosolubile: B1, B2, PP, ergosterol;
- enzime: - fructofuranozidaza i - galactozidaza;
- prin hibridizri i inginerie genetic, din mutani ai speciei
Saccharomyces cerevisiae s-a obinut interferonul.
Rspndire
n sol, celulele de drojdie se ntlnesc n straturile superficiale pn la adncimi
de aproximativ 30 cm, n concentraii de 102- 2105/g.
din sol, prin aciunea unor factori (fizici, mecanici, biologici), microorganismele se
pot afla temporar n aer i s se rspndeasc la distane mari;
din sol i aer drojdiile pot ajunge n ape i unele specii pot fi ntlnite chiar la
adncimi de 4000 m.
in microbiota epifita a plantelor.
Caractere morfologice generale

Exemple de genuri cu importan in industria alimentar:


forma oval (elipsoidal) g. Saccharomyces;
forma sferic g. Torulopsis;
forma apiculat (de lmie) g. Kloeckera;
forma cilindric g. Candida;
forma de sticl g. Saccharomycodes.

Cultivarea celulelor de drojdie pe medii nutritive lichide:


Fermentare
anaerobaa
zahrului

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

[1]. Tulburare mediu


[2]. Producere spum
[3]. Depunere sediment
[4]. Limpezirea supernatantului

Cultivarea celulelor de drojdie pe medii nutritive solide sau solidificate (de exemplu:
must de mal cu agar)
nmugurire

succesiv

Coloniile de drojdii
au aspect cremos
lucioase sau mate
alb-crem drojdii din g. Rhodotorula colonii rou-pastelat

Colonia n seciune poate avea:


un profil lenticular, semicircular sau triunghiular
perimetrul circular, umbonat, cu margini ondulate

Caractere fiziologice generale ale drojdiilor


O proprietate important a unor drojdii cu utilizri n industria alimentar este aceea de
a fermenta n condiii de anaerobioz glucide (hexoze, diglucie, triglucide) cu formare
de alcool etilic i dioxid de carbon i produse secundare care dau aroma caracteristic
produselor fermentate.
n condiii de aerobioz, drojdiile asimileaz glucidele transformndu-le prin respiraie la
CO2 i H2O, iar energia eliberat favorizeaz creterea i nmulirea celulelor.

Celulele de drojdie, n funcie de condiiile de cultivare i vrst pot prezenta activitate


metabolic difereniat concretizat prin trei stri n care se pot afla celulele i anume:

starea de metabioz (activ), n care celulele au activitate metabolic maxim.


n condiii favorabile de cultur, celulele cresc, se reproduc i acumuleaz
intracelular substane de rezerv glicogen i trehaloz;
starea de anabioz (latent), celulele i menin caracteristicile vitale, dar nu se
pot nmuli. Aceast stare apare cnd substanele nutritive ale mediului sunt
epuizate, iar celulele consum din substanele de rezerv intracelulare;
starea de autoliz (moartea fiziologic). Se produce o solubilizare a
compuilor intracelulari sub aciunea enzimelor proprii celulei.

2

Laborator Microbiologie general|


Sacch
harom
mycesccerevissiae



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale).
Dup 3 zile de cultivare la
a 25C, forrmeaz pe MEA (Malt Extract A Agar),
co
olonii de culoare alb-crrem, conveexe, cu perrimetrul circcular i sup
prafaa lucio
oas,
av
vnd diamettrul de 1 - 2 mm.

2. Caractere
C microscop
m pice
celuleele au form ma elipsoiddal, globoa
as sau ellipsoidal alungit i p pot fi
dis
spuse singu
ular, in pere
echi sau lan
nuri;
se repproduc prinn nmuguriree, iar mugurele poate ffi alipit de ccelula mam
.

3. Rspndire
R e i rol

micro
oflora epifit a fructelor dulci (strug guri, mere, p
pere, prune,, gutui, coaccze,
ag
grie);
este utilizat
u la:
9 fab bricarea spirrtului;
9 la obinerea
o drojdiei comp primate;
9 n panificaie;
9 la fabricarea
f unor
u sortimeente de bere
e.

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Pichia
amem
mbrana
aefacieens



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale).
forme eaz, pe must
m de mal cu agar, colonii cu perimetrul slab lobatt sau
chiar ne
eregulat, cu
u aspect ma
at, rugos, de
e culoare a
alb sau alb
b-cenuie.

2. Caractere
C microscop
m pice
prezin
nt celule alungite,
a cilin
ndrice, cu ccapetele asccuite sau ro
otunjite disp
puse
n lanu
uri sau aso
ociaii, form
mnd pseu udomicelii rezultate prin nmugurire multipo olar.
Poate fo
orma 1- 4 ascospori.
a

3. Rspndire
R e i rol
micro oflora produsselor vegeta
ale conserva ate prin murrare;
se de ezvolta pe lic
chide slab alcoolice
a ( 7-- 9 alcool)), producnd
d oxidarea ttotal
a alcoollului etilic;
este agent de alterarea a buturilor sslab alcoolizzate (vin d de masa, bbere),
pstrate
e in vase cu u gol de aer..

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Torulop
T psisho
olmii



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale).
forme eaz pe muust de mal cu agar, du up 3 zile d
de cultivate la 25C, co
olonii
albe, circulate, con
nvexe, aplattizate, cu su
uprafaa luccioas.

2. Caractere
C microscop
m pice
celule
ele sunt mic
ci, elipsoidale;
se rep
produc prin nmugurire
e i apar izo
olate sau associate;
forme
eaz 1-4 ascospori,
a cu
c form ssferic pn
n la elipsoidal i p
perei
netezi.

3. Rspndire
R e i rol
drojdiia este pre
ezent n saramura
s n fazele in
ncipiente de fermenta
are a
murturrilor;
a fostt izolat din buturi rc
coritoare, de
e pe mslin
ne verzi i frructe citrice.

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Tema: STUDIUL MICROBIOLOGIC AL DROJDIILOR
Scopul: Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare identificrii drojdiilor

Saccharomyces cerevisiae

Pichia membranaefaciens

Torulopsis holmii

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data

Cadrul didactic
Candiidava
alida(C
Candid
damyccoderm
ma)



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale).
coloniile dezvolta
ate pe med diu solidificcat prezint
un aspectt mat, cuta
at, de
culoare alb-cenuie
e sau uneorri alb-crem.

2. Caractere
C microscop
m pice
celule ele sunt de form
f elipso
oidal - alung
git, cilindricc, cu extre
emitile rotu
unjite
sau slab
b ascuite.
pot fo orma pseu udomiceliu, deoarece prin nmug gurire multiipolar, cellulele
rmn alipite.
a

3. Rspndire
R e i rol
face parte
p din microbiota ep
pifit a fructe
elor i a uno
or legume;
n ca azuri rare, se ntlne ete n m microbiota sseminelor oleaginoasse i
cerealie
ere;
este agent de alterare a vinurilor sllab alcoolicce, slab su ulfitate, pro
oduce
defectul numit floa
area vinului"";
produ uce alterri ale buturrilor rcorito
oare i a p produselor conservate e prin
murare.

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Rh
hodoto
orulag
glutiniss



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale).
forme eaz pe MEA (Malt Extract
E Agaar), dup 3 zile de ccultivare, co
olonii
convexee, cu perimetrul circula
ar, cu supra
afaa lucioass sau aspe
ect mucos, de culoare rou
pastelat.

2. Caractere
C microscop
m pice
celule ele au form elipsoidall i dimensiuni medii;; reproduce
erea are locc prin
nmugurrire pe ntrea
aga suprafaa;
celule e pot fi izo
olate sau asociate
a perechi. Unelle tulpini p
pot forma ccelule
alungite..

3. Rspndire
R e i rol
este larg
l rspn
ndit pe sup prafaa fructtelor i legu
umelor proasspt recolta
ate;
se ntlnete n microbiota a epifit a frunzelor i tulpinilor, a boabelo or de
cereale, a mslinelo
or ;
poatee produce ra
ar alterri ale fructelor ssi legumelorr;
poatee produce alterri ale e sucurilor insuficient pasteuriza ate de mere i
cpuni.

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Klo
oeckerraapicculata
a



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale).
forme eaz pe ME
EA (Malt Exttract Agar) d
dup 3 zile de cultivare e la 25C, co
olonii
de culoa
are alb-crem
m, aproape semisferice
e, cu margin
ni circulare i suprafaa lucioas.

2. Caractere
C microscop
m pice
celule ele au fie forma
fo elipso
oidal, fie a
apiculat, d
datorit mug
gurilor term
minali,
mono sa
au bipolari, care
c se gseesc singuri sau
s perechi.

3. Rspndire
R e i rol
a fostt izolat de pe cpuni; afine, struguri, must dde struguri, sucuri de ccitrice
i siropuri de fructe
produ uce fermentaaia alcoolic
c a mustulu
ui de struguri;
produ uce alterarea
a smochinelor, tomateloor i cireelor.

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Tema: STUDIUL MICROBIOLOGIC AL DROJDIILOR
Scopul: Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare identificrii drojdiilor

Candida mycoderma

Rhodotorula glutinis

Kloeckera apiculata

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data

Cadrul didactic
Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

STUDIUL MUCEGAIURILOR

Definiie
Mucegaiurile sunt microorganisme de tip eucariot, monocelulare sau pluricelulare,
difereniate din punct de vedere morfologic i care se reproduc prin spori formai numai
pe cale asexuat sau pe cale mixt (asexuat i sexuat).

Rspndire
n sol, n special n stratul superficial al solului care le asigur condiii de
cretere i supravieuire.
din sol, sporii de mucegai sunt antrenai pe calea aerului la distane
foarte mari. n aer, mucegaiurile sub form de spori sau hife vegetative pot
supravieui un timp ndelungat.
n ap prezena mucegaiurilor este ocazional
sporii de mucegai se ntlnesc frecvent la suprafaa plantelor, n tractul
digestiv, n special la ierbivore.
n microbiota plantelor, pe suprafaa fructelor i legumelor.
la om i animale mucegaiurile patogene produc un numr mai redus de
mbolnviri, se dezvolt pe piele, unghii, pr.

Rol
rol important n natur:
Prin activitatea lor de degradare a materiei organice vii, mucegaiurile
particip la transformarea unor compui organici (celuloza, hemiceluloze,
substane pectice, amidon, lipide) la compui mai simpli i sunt considerai
ageni de putrezire.
Mucegaiurile particip astfel la circuitul carbonului n natur i mbogesc
solul n substane cu molecule mici care pot fi folosite de alte microorganisme
sau de ctre plante.
n industria alimentar, culturi fungice selecionate se pot folosi la fabricarea
brnzeturilor tip Roqueforti, Camemberti sau la maturarea salamurilor crude.
n biotehnologie se pot obine compui deosebit de valoroi:
antibiotice: peniciline Penicillium chrysogenum, etc.;
acizi organici (citric, lactic, gluconic, kojic, malic, fumaric);
vitamine (B2, ergosterol provitamina D2);
1 enzime (amilaze, proteaze, lipaze, celulaze etc.).
mbogirea n proteine a finurilor vegetale
ageni de depoluare a apelor reziduale
obinere SCP

Laborator Microbiologie general|



Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

Caractere morfologice
Mucegaiurile se rspndesc n natur sub form de spori rezisteni la
uscciune, form n care se menin n stare viabil ani de zile.
Dac un astfel de spor ajunge pe suprafaa unui mediu favorabil pentru cretere,
cu o cantitate suficient de ap liber care s-i permit absorbia substanelor nutritive,
n primul stadiu care poate s dureze 3-4 ore, are loc absorbia apei i activizarea
sistemelor enzimatice, apoi are loc germinarea celulei sporale i formarea tuburilor
vegetative numite hife (lat. hypha) sau thal (thallus).
Hifele cresc numai prin vrf i deci au o cretere apical dup care se ramific
rezultnd miceliul.
Hifele se extind pe suprafaa mediului, se diversific i ndeplinesc anumite
funcii specializate.
Hifele de extindere se pot dezvolta i n profunzimea mediului realiznd
absorbia nutrienilor i au rol de susinere;
Hifele de rspndire se pot dezvolta de-a lungul mediului sau aerian. La un
anumit grad de dezvoltare a acestor hife vegetative se formeaz hifele
reproductoare, generatoare de spori, difereniate n funcie de gen i specie.
Totalitatea hifelor vegetative i reproductoare alctuiete miceliul.

Dezvoltarea mucegaiurilor are loc destul de rapid n condiii favorabile; astfel n


interval de 2-3 zile pe mediu nutritiv se formeaz colonii vizibile, difereniate.
n cazul mucegaiurilor inferioare coloniile se dezvolt rapid, sunt extinse,
cu tendina de a ocupa tot spaiul disponibil, au aspect pslos i culori, alb,
bej, cenuiu, brun.
Mucegaiurile superioare caracterizate formeaz colonii cu o cretere
radial limitat i culori ce difer de la alb la galben, brun, verde, portocaliu,
albastru, cu diferite nuane specifice n funcie de gen i specie.

Caractere fiziologice generale


sunt microorganisme aerobe deci necesit pentru cretere prezena oxigenului
din aer sau a oxigenului dizolvat n mediul lichid. Un numr limitat de specii sunt
microaerofile i pot produce mucegirea intern a untului i a oulor.
se dezvolta n limite largi de pH (15-9), valoare optim n domeniu acid 5.5-6.
microorganisme mezofile cu temperaturi optime de cretere la 25C, un numr
restrns sunt termofile - cele patogene au temperatura optim la 37C, iar altele
sunt adaptate la temperaturi sczute (0-3C). Majoritatea sunt inactivate la
temperaturi de 80C; cei mai rezisteni spori sunt distrui la 88C/10 minute.
2

Laborator Microbiologie general|



Muco
ormuccedo


1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale)
colonii dense, p
sloase i o culoare ce
e variaz de
e la cenuiu-argintiu p
n la
glbui;

2. Caractere
C microscop
m pice
Spora angioforii lungi i neramifica ai, de obicei perpenndiculari pe hifa
vegetativ;
Spora angii sfericii;
Colum mela form ma cilindric
, piriform sau oval;
Colarrul se ob bserv prin ruperea sau u solubilizarrea membra
anei sporan
ngelui
i eliberrarea sporilo
or;
Spora angiosporii oval-cilindrici, neteezi i hialini.

3. Rspndire
R e i rol
se nttlnete pe resturi vege
etale i dejeccii.
produ uce mucegirea cerealelor, pinii, a produsellor lactate a
acide, a crrnii i
prepara
atelor de carrne.

orator Microb
Labo biologie gene
eral|

Rh
hizopu
usstolo
oniferr



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale)
colonii extinse, cu
u un miceliu
u dens, psllos i culoarre cenuie

2. Caractere
C microscop
m pice
Stilos
sporangele
e sferic, de
d culoare b brun - neagr la maturitate;
Colummela seemisferic, cu
c apofiza laarg;
Sporaangiosporii elibera
ai prin sparg
gerea spora
angelui suntt de form o
oval,
brun - n
nchis.

3. Rspndire
R e i rol
n nattur, n sol i
pe produs
se vegetale;;
altera
area fructeloor i legumelor depozita
ate;
produuce muceg irea produs
selor alimentare i poate
e elabora m
micotoxine.

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|

Tema: STUDIUL MICROBIOLOGIC AL MUCEGAIURILOR
Scopul: Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare identificrii
mucegaiurilor

Mucor mucedo

Rhizopus stolonifer

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data

Cadrul didactic
Asperg
A gillusn
niger



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale)
colonia se dezvo olt rapid, cu
c un mice eliu catifelatt, de culoarre alb sau u alb-
glbuie. Odat cu formarea co onidiosporilor, colonia capt un a aspect gran
nular i culooarea
devine brun nchis - negru;
reverssul coloniei poate fi inc
color sau co
olorat n galben-pal; ma arginile colo
oniilor
rmn albe
a sau sla ab glbui.

2. Caractere
C microscop
m pice
Conid dioforii se dezvolta
d de obicei direcct din substrrat;
Vezic cula este maare, sferic sau globoa as;
Fialid dele se dezzvolta radial pe ntreaga a suprafaa a lateral a veziculei i sunt
dispuse
e n dou rnduri:
I. Fialidele primare
p sunt mai lungii dect cele secundare;
II. Fialidele secundare e sunt mult mmai scurte.
Fialos sporii se de
ezvolta basipetal, n lannuri lungi, d
din fialidele secundare; au o
form sferic
s sau globoas.
g

3. Rspndire
R e i rol
se nttlnete n sol, materii vegetale n descomp punere, miccroflora veggetal

(tubercuuli, rdcini,, semine, frructe, cereaale) i produsele lor de prelucrare,d


depozite, pivvnie,
sli de fabricaie.
f
tulpini seleciona ate se folos sesc industrrial pentru o
obinerea de acizi orga anici:
acid glu
uconic, galicc, citric, fumaaric, oxalic.

orator Microb
Labo biologie gene
eral|

Aspergiillusorryzae



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale)
colonia are culoa
are glbuie spre
s galben
n-orange, brrun-oliv;
revers
sul coloniei este incolorr.

2. Caractere
C microscop
m pice
Conid dioforii sun
nt nali cu pe
erei subiri i aspect ru
ugos, sub ve ezicul.
Capu ul conidial este
e sferic.
Veziccula este sfe
eric i prez zint pe 2/3 din suprafa aa
dele sunt un
Fialid niseriate. Un neori pot fi p
prezente i ffialide secun
ndare.
Conid diosporii suunt elipsoidaali, piriformi, sau globoi la maturita
ate

3. Rspndire
R e i rol
se po oate izola din sol, de pe
e resturi veg
getale, sem
mine, n spe
ecial de orezz (lat.
oryzae - orez), mal fructe, pro
oduse alimen
ntare.

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Asspergiillusgllaucuss



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale)
colonia are culoa
are verde g
lbui sau verde cenuie
e;
revers
sul coloniei este slab colorat n n
nuane galb
ben-verzui, brun - roccat la
margini.

2. Caractere
C microscop
m pice
Conid dioforii sunnt netezi, in
ncolori, cu d
diametrul ca are se lrge
ete treptat spre
vezicul
, de form oval.
Capu ul conidial este
e mare, sferic
s sau ovval.
Fialid dele se formmeaz direc ct pe vezicu ul, la parte
ea superioaar. Adeseoori pe
vezicul
se pot form
ma noi coniddiofori scuri.
Fialos sporii au fo
orma elipsoidal sau pirriform.

3. Rspndire
R e i rol
este rspndit
r n natura, fiind
d frecvent n
ntlnit n soll.
Asperrgillus glau ucus este agent de mucegire al produsselor alimentare
conservvate prin usscare (cere eale, semine oleaginoa ase, fructe uscate) sa
au cu adao
os de
zahr (s
sucuri, sirop
puri, fructe confiate).
c
a fostt izolat de pe e pine, lapte concentrarat, unt.

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Pen
nicilliu
umexp
pansum
m


1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale)
colonia are culoa
are verde-albbstrui, cu a
aspect catife
elat;
revers
sul este colo
orat n brun--nchis sau portocaliu-b
brun.

2. Caractere
C microscop
m pice
Coniddioforii au perei
p netezzi.
Prezin
nt fialide fie
f cu form de fiol, fie cu form cilindric.
Formeeaz conid dii elipsoidale, cu perei netezi.

3. Rspndire
R e i rol
Penic cillium expan nsum este un mucega ai psihrofil (p
poate crete
e la -6C; ccrete
viguros la 0C). See dezvolt optim la 28 8C. Tempe eratura maxxim de dezzvoltare estte de
35C.
Este prezentat n n mod frecv vent pe me ere i pere la care pro oduce putre ezirea
brun.
A fostt izolat i de
e pe cpuni i tomate.
Foarte e rspndit pe alimente e cum sunt ccarnea i prrodusele din n carne.
Produ uce micotox xine de tipul patulinei i citrininei.

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Tema: STUDIUL MICROBIOLOGIC AL MUCEGAIURILOR
Scopul: Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare identificrii
mucegaiurilor

Aspergillus niger Aspergillus oryzae

Aspergillus glaucus Penicillium expansum

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data
Cadrul didactic
Botryt
B tiscineerea


1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale)
forme
eaz colonii extinse, floconoase. M
Miceliul este iniial alb, d
dar devine g
gri-gri
nchis pe
p msura fo
ormarii conidiilor.
revers
sul este de culoare gri.

2. Caractere
C microscop
m pice
Conid dioforii se formeaz din hifele aeriene, a au diferite lungimi, fie
ecare
purtnd
d terminal un
n mnunchi de ramuri scurte,
s avnnd capetele rotunjite.
Conid diile formate
e pe aceste
e ramuri scu
urte sunt elip
psoidale, ne
etede i lung
gi.

3. Rspndire
R e i rol
Botryt
ytis cinerea se
s dezvolta a n domenii de temperraturi minim me de -2 - .--5C,
maxime e de 28-35C C i optime la 22-25C,, i ntr-un in
nterval de p
pH de 2-8.
este un mucega ai ntlnit nn zonele te emperate, p pe legume (roii) i ffructe
(strugurri, mere, perre, cpuni ).
poatee s produc putrezirea a fructelor i legumelor i n condiiii de refrigera
are.
n toaamnele nso orite produc ce "botritizaarea nobila"" cu obinerrea de vinu uri de
calitate superioara din boabele e stafidite.

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Geo
otrichu
umcan
ndidum
m



1. Caractere
C macroscop
m pice (colon
niale)
miceliul are culo oare alb-cre em, nlimi reduse i textura assemntoarre cu
cea a drojdiilor. Pe
e MEA colon niile sunt ex
xtinse, au cu
uloare alb
, aspect pu
ulverulent.
revers s necoloratt

2. Caractere
C microscop
m pice
Prezint hife vegetative,
v ramificate dichotomiic, pe carre se dezzvolta
perpend dicular hife reproduc toare, care e nu se difereniaz de e hifele vegeetative.
Hifele e reproduc ctoare se fragmentea
f az la maturritate aproa ape n ntreg
gime,
formnd d arthrospo ori hialini, cilindrici
c sau
u elipsoidali,, cu capete rotunjite.
Arthrrosporii au u tendina de aranjare e n zig-zaag, iar la mmaturitate ddevin
sferici.

3. Rspndire
R e i rol
se de ezvolt la temperaturi optime
o de 25-30C i m maxime de 3 35-38C. Crete
slab la temperaturi
t i sub 10C.
este agentul
a de contaminatte al produ uselor lactatte, al zemii de murtu uri, al
drojdiei comprima ate. Produc ce putrezire ea acr, n special a fructelorr citrice (l mi,

grapefruuit), n timp
pul depozita arii acestorra. Producee rncezirea a untului i a altor grsimi
alimentare.
este contaminan
c nt frecvent al
a utilajelor d
din industria
a laptelui, m
motiv pentru care
a fost denumit "mu ucegaiul utila
ajelor".

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Altternarriaalteernata
a



1. Caractere
C coloniale
c
miceliul este puffos, are iniial culoare alb murda
ar-gri, iar ap
poi devine b
brun-
cenuie
e.
revers
sul coloniei are culoare
e brun pn
la negru.

2. Aspect
A mic
croscopic
prezin nt hife sub
biri, septate
e.
forme eaz lanuri de conidii (cca., 10 cconidii), rammificate nere
egulat, la ca
aptul
unor coonidiofori fo
oarte scuri care nu se pot disstinge. Con nidiile preziint 2-3 seepturi
longitud
dinale, sunt piriforme ii dispuse cu
u partea asccuita elong
gata, spre co onidiofor.

3. Rspndire
R e i rol
se n ntlnete n
n microfloraa cerealeloor, semine elor oleagin
noase proa aspt
recoltatte cnd prez
zena lor po
oate fi considerat drep
pt indice de prospeimee ale acesto
ora.

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Fusa
ariumgramiinearu
um



1. Caractere
C coloniale
c
Miceliul are asp
pect pslos, dens, i se extinde
e rapid n p
placa. Culo
oarea
este roz
z-cenuiu spre
s auriu-b
brun
Reversul este colorat
c n portocaliu- brun cu nuane mai deschise spre
marginee.

2. Aspect
A mic
croscopic
n pre
eparat micrroscopic se pot observva:
; macroco onidii, carre se forrmeaz pe e conidiofo ori simpli sau
ram
mificai, de obicei
o n mnunchi, fu
usiformi, cu 5 septuri.
; clamidos spori, care e-sunt mono o sau pluricelulari, de
e obicei globoi,
formai interca
alar, de-a luungul hifelo
or sau la nivelul macrooconidiilor; sunt
nettezi sau rug
goi, hialini sau de culoare brun ppal.

3. Rspndire
R e i rol
Se de ezvolta optiim la 24-266C, la pH 6
6,7-7,2.
Este rspndit n natura i este fitoppatogen al g gramineelo
or (putrezire
ea n
coroana
a la plante de gru, poorumb).
Se po oate ntlni si pe plantte (mazre,, cartofi, ba
anane).
Poate e elabora micotoxine
m de
d tipul scirrpene (zearralenone).

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Clad
dosporiiumheerbaru
um



1. Caractere
C coloniale
c
colonii catifelate, netede uoor ridate, de
e culoare oliv.
revers
s de culoare e brun oliv pn
p la neggru-bleumarrin (ca o patt de cerne
eal).

2. Aspect
A mic
croscopic
prezin
nt hife sub
biri, septate
e.
Coniddioforii suunt ramifica ai neregula
at, ceea cce le conffer un asspect
dendritic.
forme eaz conid dii elipsoid
dale pn la cilindricce, cu exxtremiti uneori
neregullate datorita
a cicatricilorr mugurale. Conidiile sunt de obiccei neseptatte, dar cele mari
pot prez
zenta 1-2 seepturi transversale.

3. Rspndire
R e i rol
se po oate dezvoltta pn la un
u aw de 0..88 i ntr-un domeniu de tempera atura
cuprins ntre -1-0C
C i 32C.
este unu contamin nant frecvent al produsselor alimenntare, este ntlnit pe ccame
i produ
use din carnne, oua, legume proasp pete, alune, cereale.
produ uce pete negre pe carnnea pstrat, n condiiii de refrigerrare.

Labo
orator Microb
biologie gene
eral|

Tema: STUDIUL MICROBIOLOGIC AL MUCEGAIURILOR
Scopul: Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare identificrii
mucegaiurilor

Botrytis cinerea Geotrichum candidum

Alternaria alternata Fusarium graminearum Cladosporium herbarum

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data
Cadrul didactic
Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

TEHNICI DE IZOLARE A CULTURILOR PURE

Tehnicile de izolare a microorganismelor, indiferent de natura lor, presupun operaii de


prelevare a probelor biologice din medii naturale, inoculare n medii de cultur specifice i,
dup cultivare n condiii optime, izolarea i studiul coloniilor izolate, repicare pentru
obinerea de culturi pure.
Prin cultur pur se nelege biomasa de celule rezultate prin reproducere
dintr-o singur celul aflat ntr-un mediu nutritiv steril cu volum limitat.
Astfel, o cultur pur este format din celule aparinnd unei singure
specii sau unei singure tulpini.
In funcie de principiul realizrii lor, metodele de izolare a culturilor pure pot fi clasificate n
dou grupe mari, i anume:
; metode bazate pe principiul separrii fizico-mecanice a celulelor;
; metode biologice.
La rndul lor, fiecare din aceste dou grupe cuprinde metode generale, care se preteaz a
fi utilizate pentru izolarea majoritii microorganismelor, sau metode de izolare specifice
pentru un anumit grup sau un microorganism individual.

Procedee fizice de izolare a culturilor pure


Metoda Koch
Se bazeaz pe rspndirea microorganismelor recoltate din medii naturale ntr-un mediu
nutritiv i fixarea distanat a celulelor n urma solidificm mediului cu formare prin
multiplicare de colonii izolate ntre ele.
Metoda este folosit n special pentru izolarea culturilor pure de drojdii. Mediul de
rspndire este mustul de mal cu gelatin, repartizat cte 20cm3 n 3 eprubete,
fluidificat i meninut la 35-40C. Din proba aleas pentru izolare se recolteaz celulele cu
ajutorul unei anse, care apoi este trecut succesiv n cele 3 eprubete. Dup inoculare
i uniformizare, coninutul fiecrei eprubete se repartizeaz n cte o plac Petri, iar prin
solidificarea mediului celulele care rmn fixate n gel vor forma prin multiplicare colonii
izolate.
n funcie de densitatea celulelor recoltate iniial, n placa a 2 a sau a 3 a pot exista colonii
izolate (la o distan de cca. 2 cm), iar dup studiul caracterelor microscopice ale
coloniilor reprezentative se face repicarea n eprubete cu Malt Extract Agar, obinndu-se
culturi pure (fig. 1).
1

Laborator Microbiologie general|


a tiina i Ing
Facultatea gineria Alimen
ntelor

Fig
g. 1. Tehnic
ca de izolare
e a culturilo
or pure
Metoda scarificat

n plci Petri
P sterile
e se repartiz
zeaz mediul de culturr adecvat ((BCA sau M
MMA) (fig. 2
2).

Fig. 2 Repartiz
zare mediu d
de cultur a
adecvat
Cu ajuto orul firului metalic
m se recolteaz celule din mediul nattural sau d din culturi m
mixte
(fig. 3), apoi cu firu ul ncrcat cu celule se
s traseaz striuri dife
ferite pe suprafaa med diului
2 solidifica
at, astfel nc
ct prin drum
mul ct maii sinuos parrcurs de fir (Fig.4), ntrr-o zon a plcii
celulele s rmn ataate dee mediu i prin termoostatare 48--72 h s se e dezvolte i s
formeze colonii izola ate.

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|
a tiina i Ing
Facultatea gineria Alimen
ntelor

Fig
g. 3 Recoltarrea celulelo
or din culturri mixte
Se realiz
zeaz apoi studiul
s morffologic al cooloniilor reprrezentative i culturile ccare interesseaz
sunt repicate n epru
ubete cu me ediu steril, obinndu-s
o se astfel cultturi pure (fig
g. 5).

Fiig. 4 Trasarre striuri pe


e suprafaa unui mediu solidificat

Fig. 5 Obin
nere de cultturi pure

La
aborator Micro
obiologie gen
neral|
Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

TEHNICI INDIRECTE (CULTURALE) DE EVALUARE A


NUMRULUI DE MICROORGANISME
Tehnica clasic de numrare prin cultivare pe medii dense
Metoda culturala Koch

Metodologia de analiz presupune inoculare n masa mediului solidificat, cnd 1 cm3 din
fiecare diluie se transfer cu cte o pipet steril n plci Petri sterile. Peste suspensia din
fiecare plac se repartizeaz cte o eprubet de mediu de cultur specific, cu agar (10-15
cm3), fluidificat i temperat. Mediul se omogenizeaz cu suspensia din plac prin micri
orizontale, circulare ale plcii. Dup solidificarea mediului, prin termostatare n condiii
optime, se vor forma colonii att la suprafaa mediului ct i n profunzimea acestuia.

Acest mod de cultivare este cel mai favorabil pentru microorganismele facultativ
1 anaerobe, dar i microorganismele aerobe le tolereaz destul de bine. n cazul
microorganismelor anaerobe se recomand cultivarea n dublu strat, adic dup
nglobarea celulelor n mediu i solidificare, primul strat de mediu se acoper cu nc un
strat de mediu steril.

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

Citirea i interpretarea rezultatelor


Dup termostatarea n condiii optime, apariia vizibil a coloniilor va depinde de
particularitile fiziologice ale microorganismelor cultivate i de condiiile de cultivare,
de obicei dup 48-72 h de cultivare.
n funcie de numrul de colonii evideniate n plcile din care s-a fcut numrarea n,
se va calcula numrul de microorganisme pe gram sau cm 3 prob de analiz, cu
formula:

N numrul de celule/cm3(g) prob;


n suma numrului coloniilor din plcile din care se face numrarea;
x1 numrul plcilor din prima diluie aleasa pentru numrare;
x2 - numrul plcilor din a doua diluie aleasa pentru numrare;
k coeficientul de diluie corespunztor primei diluii aleas pentru numrare;
0,1 coeficient care egaleaz diluiile.
Atenie!!! Numrarea se realizeaz din plcile Petri n care s-au dezvoltat ntre 25 250 de colonii

n cazul n care numrul de colonii pe plac este mare, n imposibilitatea repetrii


analizei, pentru a nlesni numrarea fie se mparte placa n mai multe sectoare, se
numr coloniile pe un sector i, n final, se nsumeaz coloniile pe ntreaga plac, fie
se delimiteaz pe reversul mediului o suprafa de 1 cm2, care conine un numr mediu
de microorganisme, se numr coloniile de pe aceast suprafa i, n final, se
raporteaz la total suprafa mediul din plac.

Laborator Microbiologie general|


Tema: TEHNICI INDIRECTE (CULTURALE) DE EVALUARE A NUMRULUI DE
MICROORGANISME
Scopul: Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare evalurii numrului de
microorganisme
1. Completai schema de lucru pentru realizarea diluiilor si inocularea probelor

2. nregistrai in tabelul de mai jos numrul de colonii/plac (in plcile selectate pentru numrare)

Proba Nr. colonii/plac


Diluia
1
2
3. Stabilii gradul de contaminare exprimat in uniti formatoare de colonii (ufc) per gram sau ml
produs:

Proba 1 _______________
Proba 2 _______________

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data

Cadrul didactic
Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

METODA DIRECT DE NUMRARE A BACTERIILOR N


PREPARATE FIXATE I COLORATE
METODA BREED

Celulele de bacterii aflate ntr-un volum cunoscut de lichid se repartizeaz pe o


suprafa limitat de frotiu, iar dup fixare i colorare simpl se stabilete
numrul de celule prin examen microscopic direct.
Pe o lam de sticl degresat se contureaz cu markerul o suprafa Sd de
2
2-6 cm (a).

b
c d
Se inverseaz lama i, central, cu ajutorul unei micropipete sterile, se
plaseaz o pictur din suspensia de analizat cu un volum cunoscut Vp, egal cu 0.02-0.05
cm3 (b). Imediat cu ajutorul firului se repartizeaz cantitatea de prob ct mai uniform,
pe ntreaga suprafa conturat.

e f g

Se realizeaz uscarea n curent de aer cald (c, d), fixarea (de preferat cu
soluie de alcool 96%, timp de 20 min) (e), colorarea simpl (f), splarea (g) i uscarea.
1 Preparatul se studiaz apoi la microscop, cu obiectiv de imersie, avnd grij
ca pictura de ulei de cedru s fie pus n momentul n care se face numrarea.
Se numr celulele de bacterii din mai multe cmpuri microscopice
(minimum 25; n=600-1000) aflate n diferite zone ale frotiului. Dup numrare; se

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

calculeaz numrul mediu de celule pe cmp microscopic (x = numrul de cmpuri


cercetate):

Pentru determinarea numrului de celule prezente ntr-un gram sau cm3


produs analizat este necesar s se cunoasc: gradul de diluie, volumul de suspensie
folosit la obinerea frotiului, mrimea suprafeei delimitate pe care s-a realizat frotiul i
suprafaa cmpului microscopic.
Suprafaa cmpului microscopic Sc se determin cu ajutorul micrometrului
obiectiv. Se nlocuiete preparatul analizat cu lama micrometrului obiectiv i, cu acelai
obiectiv cu care s-a fcut numrarea, se msoar diametrul cmpului dc cu ajutorul scrii
gradate (1 mm:100 diviziuni):

unde: nd este numrul de diviziuni de pe scara micrometrului obiectiv care se


cuprind exact n cmpul microscopic:

Numrul de cmpuri microscopice posibil de studiat pe suprafaa de frotiu


delimitat - Nc se calculeaz cu formula:

Numrul de bacterii prezente ntr-un cm3 sau un g produs analizat se


determin cu formula:

n care: k este coeficientul de diluie.

Laborator Microbiologie general|


Tema: METODA DIRECT DE NUMRARE A BACTERIILOR N PREPARATE
FIXATE I COLORATE - METODA BREED
Scopul: Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare evalurii
numrului de microorganisme
1. nregistrai datele obinute n tabelul de mai jos:

Suprafaa delimitat, cm2 Sd =


Volumul suspensiei de analizat, cm3 Vp =
Numrul mediu de celule pe cmp microscopic:
x (numrul de cmpuri n (nr. celulele de x (numrul de cmpuri n (nr. celulele de
cercetate) bacterii) cercetate) bacterii)
1 13
2 14
3 15
4 16
5 17
6 18
7 19
8 20
9 21
10 22
11 23
12 24
25

Diametrul cmpului microscopic, mm dc =

Suprafaa cmpului microscopic, cm2 Sc =

Numrul de cmpuri microscopice pe suprafaa de frotiu delimitat Nc =

Numrul de bacterii prezente ntr-un ml sau un g N=


NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data

Cadrul didactic
Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

METODE DIRECTE DE NUMRARE


NUMRAREA CU CITOMETRE

Celulele de drojdii i sporii de mucegai se pot numra, prin examen microscopic


direct, cu ajutorul citometrelor (camerelor de numrat) .
Se cunosc mai multe tipuri de citometre: Thoma, Trk, Brker, Rosenthal,
Goreaev .a., construite pe acelai principiu.
Un citometru este o lam de sticl groas, prevzut cu trei platforme separate
ntre ele prin rigole n sticl. Platforma central este denivelat fa de celelalte dou
cu o nlime de 0,1- 0,2 mm (nscris pe fiecare camer). Pe platforma central este
gravat o reea de linii perpendiculare, care delimiteaz o anumit suprafa divizat
de ctre linii perpendiculare n microcelule de form ptratic (ptrele elementare).
Diferenierea dintre tipurile de citometre const n mrimea variabil a
suprafeei unui ptrel elementar, n cazul citometrului Thoma, suprafaa de 1
mm2 este divizat de ctre linii n 400 de ptrele elementare cu (Fig. 1) latura de
1/20 mm.

Fig. 1 Profilul i reeaua citometrului Thoma


Pentru numrare se plaseaz o pictur din suspensia de celule de analizat pe
1 platforma central, n dreptul suprafeei delimitate. Peste suspensie se plaseaz o
lamel care se sprijin pe cele dou platforme laterale i astfel ntre lamel i citometru
se creeaz o pelicul de lichid cu nlime egal cu denivelarea platformei centrale (0,1
mm).

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

Preparatul obinut se studiaz la microscop cu obiectiv cu grosisment x 40, cnd


n cmpul microscopic poate fi vizualizat un grup de 16 ptrele elementare, din care
se numr celulele a cror suprafa se afl mai mult de jumtate n interiorul careului
de 4x4 ptrele elementare. Se fac numrri de celule din mai multe cmpuri
microscopice (n = 100) i se calculeaz numrul mediu de celule pe un ptrel
elementar.
Suprafaa (S) de 1 mm2 este divizat de ctre linii n 400 de ptrele
elementare cu latura de 1/20 mm. Suprafaa ptrelului elementar este:

nlimea platformei centrale:

Volumul ptrelului elementar:

Numrul mediu de celule pe un ptrel elementar:


Numrul de celule prezente ntr-un cm3 de suspensie de analizat se


determin cu formula:

n care:
n - numrul mediu de celule pe un ptrel elementar;
k - coeficient de diluie.
n cazul bacteriilor, aceast metod este greu de aplicat, att din cauza
dimensiunilor reduse ale celulelor ct i a faptului c de multe ori ele prezint
mobilitate.

Laborator Microbiologie general|


Tema: METODE DIRECTE DE NUMRARE NUMRAREA CU CITOMETRE
Scopul: Cunoaterea i utilizarea adecvat a noiunilor necesare evalurii
numrului de microorganisme
1. Analizai profilul i reeaua citometrului Thoma

2. nregistrai datele obinute n tabelul de mai jos:

Suprafaa ptrelului elementar, mm 2 Spe =

nlimea platformei centrale, mm h=

Volumul ptrelului elementar, cm 3 Vpe

Numrul mediu de celule pe un ptrel elementar:


x (numrul de cmpuri n (nr. x (numrul de cmpuri n (nr.
cercetate) celulele ) cercetate) celulele )
1 6
2 7
3 8
4 9
5 10

Numrul de celule prezente ntr-un cm3 de suspensie N=

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data
Cadrul didactic
Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU ASUPRA DEZVOLTRII


MICROORGANISMELOR

n procesul de nutriie i deci n cel de dezvoltare a microorganismelor, acestea sunt


supuse influenelor unor factori de mediu care condiioneaz activitatea microbian
determinnd fie stimularea creterii i reproducerii, fie inhibarea activitii
(inactivarea microorganismelor).

Procesele metabolice se desfoar n limite stricte de temperatura, specifice


fiecrui microorganism. Factorul temperatur poate favoriza sau inhiba dezvoltarea
microorganismelor, iar n anumite cazuri poate chiar determina moartea acestora.

Modul de lucru
Pentru a testa influena temperaturii asupra dezvoltrii microorganismelor se
folosesc dou microorganisme test (Bacillus subtilis i Saccharomyces cerevisiae),
sub form de suspensie.
Pentru fiecare microorganism luat n studiu, se iau cte trei plci Petri sterile. Cu o
pipet steril se introduc n fiecare plac, cate 1 cm3 suspensie. n fiecare plac
Petri se toarn apoi cca. 15 cm3 mediu de cultura (BCA bulion de carne cu agar,
pentru Bacillus subtilis i MMA must de mal cu agar, pentru Saccharomyces
cerevisiae) fluidificat i rcit la 455C. Mediile se repartizeaz uniform n plci prin
rotirea acestora n plan orizontal, apoi sunt lsate n repaus pn se produce
solidificarea. Pe capacul plcilor se noteaz numele probei, mediul utilizat i apoi se
termostateaz la temperaturi de 4, 25, 37C, timp de 3 zile. Dup perioada de
termostatare se va evalua creterea microorganismelor n fiecare plac i se va nota
nivelul de cretere, n tabelul din fisa de lucru.

Pentru a aprecia dezvoltarea microorganismelor sau activitatea enzimelor este


1
necesar s se cunoasc valoarea activitii apei.

Laborator Microbiologie general|


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

Disponibilitatea apei dintr-un mediu de cultur pentru transferul de substane i


reaciile chimice este exprimat prin activitatea apei (aw). Acest parametru ia valori
de la 0 la 1. Prezena substanelor solubile n apa face ca activitatea apei pure s
scad sub valoarea 1. Cu ct concentraia unei soluii este mai mare, cu att
scderea valorii activitii apei este mai mare i vice-versa, ceea ce poate crea un
soc osmotic.

Mod de lucru
Pentru a testa influena temperaturii asupra dezvoltrii microorganismelor se
folosesc dou microorganisme test, Bacillus subtilis i Saccharomyces cerevisiae,
sub form de suspensie i medii de cultura cu concentraii diferite de sare (0%,
0.5%, 2% NaCl)/ diferite activiti ale aw.
Pentru fiecare microorganism luat n studiu, se iau cte trei placi Petri sterile. Cu o
pipet steril se introduc n fiecare plac, cate 1 cm3 suspensie. n fiecare plac
Petri se toarn apoi cca. 15 cm3 mediu de cultura (BCA bulion de carne cu agar
pentru Bacillus subtilis i MMA must de mal cu agar pentru Saccharomyces
cerevisiae) fluidificat i rcit la 455C. Mediile se repartizeaz uniform n placi prin
rotirea acestora n plan orizontal, apoi sunt lsate n repaus pn se produce
solidificarea. Pe capacul plcilor se noteaz numele probei, mediul utilizat,
concentraia de sare i apoi se termostateaz la temperatura de 25C timp de 3-5
zile plcile inoculate cu suspensie de Saccharomyces cerevisiae i temperatura de
37C, timp de 48 ore, plcile inoculate cu suspensie de Bacillus subtilis. Dup
perioada de termostatare se va evalua creterea microorganismelor n fiecare plac
i se va nota nivelul de cretere n tabelul din fisa de lucru.

Laborator Microbiologie general|


Tema: FACTORI CARE INFLUENEAZ DEZVOLTAREA
MICROORGANISMELOR
Scopul: nelegerea modului n care diveri factori influeneaz dezvoltarea
microorganismelor

1. Influena temperaturii asupra dezvoltrii microorganismelor

Notai n tabel nivelul de cretere a microorganismelor dup termostatare la diferite


temperaturi.

MICROORGANISM TEMPERATURA
4C 25C 37C
Bacillus subtilis

Saccharomyces cerevisiae
++ cretere maxim
+ cretere medie
- cretere nul

2. Influena activitii apei asupra dezvoltrii microorganismelor

Notai n tabel nivelul de cretere a microorganismelor dup inoculare pe medii de cultura


cu concentraii diferite de NaCl si valori diferite ale activitii apei.

MICROORGANISM Concentraie NaCl/aw


0% 0,5% 2%
Bacillus subtilis
Saccharomyces cerevisiae
++ cretere maxim
+ cretere medie
- cretere nul

NUME/PRENUME STUDENT
GRUPA
Data

Cadrul didactic