Aplicaii pentru studiul osmolaritii drojdiilor:

Experiment 1A - lucrul practic: Observarea diferenelor dintre strile de osmolaritate celular

1. Se cantresc 0,005 g drojdii i se pun ntr-un tub Corning de 50 mL

2. Dilum adugnd 50 mL ap distilat i agitm bine pna se omogenizeaz soluia
3. n 2 tuburi Corning de 15 mL punem cte 10 mL din soluia preparat
4. Centrifugm 5 minute, 1500 rpm
5. Aruncm supernatantul i peste peletul de celule dintr-un tub punem 1mL ap distilat
iar peste peletul de celule din al doi-lea Corning punem 1 mL NaCl 150 mM
6. Dup 20-30 minute resuspendam bine i lum din tubul n care avem celule + dH2 O
20L i adugm n camera de numrat
7. Numrm celulele conform regulei de mai jos

Aria1 = 0,04 mm2

Aria2 = 0,0025 mm2

Se vor numra celulele a 5 ptrele din cele 16 dup care se va calcula media aritmetic
pentru determinarea numrului de celule/ptrel.
n fiecare ptrel se numr celulele din stanga, celulele de sus i cele din centrul
ptraelului (celulele cu rou).
Celulele care se numr
Celule de care facem abstracie

Pentru a afla numarul de celule/1mL vom efectua urmtoarele calcule:

Pentru nceput este nevoie s determinai volumul camerei de numrat tiind c:
 Adncime camer = 0,1 mm

Volum camer = Adncime X Aria1

Determinai numrul de celule/ 1mL soluie

# numr celule.......................V camer l X celule/1l =
1

? celule................................... 1 l

8. Reluai numrarea (dup ce ai curat foarte bine camera de numrat) i calculele

pentru determinarea numrului de celule/1mL din cea de a doua condiie, respectiv cea
cu celule + NaCl
9. Efectum calculele necesare pentru a determina numrul de celule ce se gsete n
stok-ul de 1 mL cu celule.
10. Comparai rezultatele obinute pentru cele 2 condiii (celule + dH2 O i celule + NaCl)
i interpretai datele.

Experiment 1B - lucrul practic: Cultivarea celulelor

1. Cultivai fiecare celulele pe vase Petri de 33 mm, la urmtoarele densiti, efectund

calculele i diluiile necesare n prealabil, sintetizate mai jos
a) densitatea 3x105 celule/mL, pe 4 vase Petri
b) densitatea 3x106 celule/mL, pe 5 vase Petri
c) densitatea 3x104 celule/mL, pe 6 vase Petri

Y celule/1 mL
= Z (factorul de diluie)
densitatea dorit
Numrul de vase Petri 1,5 ml mediu = W mL (volumul final)
W
103 = volumul de celule (n L)
Z

Formule de calcul necesare pentru cultivarea celulelor pe vase Petri

2. Din soluia stok de 1mL de celule se ia volumul de celule aflat n L i se adaug n

volumul final ce mai nti trebuie optimizat
3. Cultivm celulele pe Petri-uri punnd cte 1,5 mL din volumul final n fiecare vas