CLDC/ FUNDAMENTOS Y TCNCIAS DE ANLISIS BIOQUMICOS

Unidad de trabajo 7: OSMOMETRA Y REFRACTOMETRA DE

LQUIDOS.

1. Osmometra.

1.1. Concepto de osmolaridad y osmolalidad.

1.2. Instrumental de la osmometra.
1.3. Inters clnico.
1.4. Interpretacin clnica.

2. Refractometra.

2.1. Principios bsicos de la refractometra.

2.2. Refractmetro clnico.
2.3. Aplicacin clnica de la refractometra

U.T.7: OSMOMETRA Y REFRACTOMETRA DE LQUIDOS. 1

CLDC/ FUNDAMENTOS Y TCNCIAS DE ANLISIS BIOQUMICOS

1. OSMOMETRA.

1.1. Concepto de osmolalidad y osmolaridad.

La osmometra es una tcnica para medir el efecto osmtico de una

solucin, es decir, la concentracin de partculas de soluto disueltas en la
solucin, y es independiente del tamao, la carga del in o molcula.
Un osmol de una sustancia equivale al peso molecular gramo dividido
por el nmero de partculas (molculas o iones) en los que la sustancia se
disocia en solucin.
1 osmol de glucosa = 1 mol = 180 g, ya que las molculas de glucosa no se
disocian en solucin acuosa.
El Na OH se disocia en dos iones en solucin acuosa por lo tanto, 1 osmol
de NaOH = 0,5 mol, o 40/ 2 = 20 g.
Existen dos formas de expresar la concentracin de partculas de soluto en
solucin:
Osmolalidad: es el nmero de partculas de soluto por unidad de masa
del solvente (mOsm/kg). Una solucin que contiene 1 osmol de soluto por
kg de disolvente tiene una concentracin 1 osmolal.
Osmolaridad: es el nmero de partculas de soluto por unidad de
volumen de la solucin (mOsm/L). Una solucin que contiene 1 osmol de
soluto por litro de disolucin tiene una concentracin 1 osmolar.
La osmolalidad es una medida ms adecuada ya que es una relacin slo
constante peso/peso, y no depende del tipo de partculas en disolucin sino del
nmero; es por ello una propiedad coligativa. Adems la osmolaridad vara
con la expansin del lquido por efecto de la T.
Es importante para conocer la osmolalidad saber como se disocian las
molculas en disolucin, si total o parcialmente o en cuantos iones, ya que de
sto, depender el cambio de osmolalidad de una disolucin.
Para las soluciones acuosas de bajas concentraciones, como los
lquidos biolgicos, la diferencia entre osmolalidad y osmolaridad es muy
pequea.

1.2. Instrumental de la osmometra.

Los aparatos empleados se llaman osmmetros y pueden ser diferentes,

segn la medida que hagan.
Los solutos disueltos modifican las 4 propiedades coligativas de las
soluciones:
- Presin osmtica.
- Presin de vapor.
- Punto de ebullicin.
- Punto de congelacin.

Punto de congelacin = 0
Agua pura Punto de ebullicin = 100
Presin de vapor = 47 mmHg

U.T.7: OSMOMETRA Y REFRACTOMETRA DE LQUIDOS. 2

CLDC/ FUNDAMENTOS Y TCNCIAS DE ANLISIS BIOQUMICOS

Descenso del punto de congelacin

Aumento del punto de ebullicin
Agua + soluto Disminucin de la presin de vapor
Incremento de la presin osmtica

En clnica slo se emplean tres de ellas, ya que la elevacin del punto de

ebullicin produce la coagulacin de las protenas de la muestra impidiendo un
resultado correcto.

Osmmetro de punto de congelacin o crioscpico. Es el ms usado;

est basado en el hecho de que la sal es capaz de fundir el hielo y la
nieve, es decir, la sal modifica la osmolalidad de la disolucin con
respecto al disolvente (agua) dando lugar a un punto de congelacin
menor.
Con este fundamento se elaboran osmmetros capaces de medir el punto
de congelacin de la muestra (plasma, suero u orina) de modo, que
pueden traducir el descenso del punto de congelacin, respecto a unos
valores normales, en una diferencia de osmolalidad.
Estos aparatos suelen estar formados por una cubeta que contiene una
solucin refrigerante, una varilla agitadora y una sonda trmica, de modo
que cuando se enfra la muestra se produce una agitacin enrgica que
hace que se congele rpidamente. Este punto de congelacin permanece
estable aproximadamente 1 minuto y luego desciende la T bruscamente.
Todos estos pasos estn medidos por la sonda trmica y el aparato es
capaz de dar una medida de la osmolalidad de la muestra, despus de
haberse calibrado con diversas soluciones salinas de concentracin
conocida.

Osmmetro de presin de vapor o de punto de condensacin. Est
basado en la influencia que ejercen los solutos sobre la presin de vapor
de un disolvente puro (agua). Esto puede ser medido mediante la
comparacin de la temperatura del punto de condensacin de ese
disolvente con diferentes concentraciones de solutos.
Para ello estos aparatos disponen de una cmara cerrada (termocpula)
en la que se introduce la muestra permitindole alcanzar un equilibrio
trmico y de vapor a la temperatura ambiente. En este momento, la

U.T.7: OSMOMETRA Y REFRACTOMETRA DE LQUIDOS. 3

CLDC/ FUNDAMENTOS Y TCNCIAS DE ANLISIS BIOQUMICOS

muestra se enfra hasta que el disolvente se condensa y, posteriormente,

se calienta hasta que se evapora, mantenindose un equilibrio entre la
evaporacin-condensacin. Esta es la temperatura que se mide, y el
descenso en el punto de condensacin es proporcional a la presin de
vapor del disolvente, pudindose relacionar con la concentracin de
solutos presentes en la muestra.

1.3. Inters clnico.

La medida de la osmolalidad se utiliza como una indicacin del equilibrio de

lquidos y electrolitos en el organismo y para conocer la posible presencia de
sustancias anormales como alcoholes (etanol, isopropanol y metanol) y de
cuerpos cetnicos.
Otra de las aplicaciones posibles es para evaluar la capacidad de
concentracin renal (funcionamiento renal) mediante la medida de la
osmolalidad de la orina. La medida de la osmolalidad es mucho ms exacta
que la determinacin de la densidad urinaria. Depende del nmero de
partculas de soluto en una unidad de solucin, mientras que la densidad
depende tanto de la cantidad como de la naturaleza precisa de las partculas.
Las protenas, la glucosa y otras molculas elevan en forma desproporcionada
la densidad de la orina ms que la osmolalidad.
Los valores normales de la osmolalidad urinaria son de 100-900 mOsm/kg.
Si hay una restriccin de lquidos de ms de 12 horas, la osmolalidad
debera ascender a como mnimo 800 mOsm/kg. Sin embargo, en caso de
insuficiencia renal no se superan los 400 mOsm/kg de la misma manera que se
pierde la capacidad de concentracin en la diabetes inspida.
Tambin la determinacin de la osmolalidad plasmtica se emplea
habitualmente para detectar los estados hiperosmolares se consideran como
tales los que cursan con osmolalidades superiores a los 325 mOsm/kg. Cuando
esta cifra alcanza los 350 mOsm/kg la situacin reviste una extrema gravedad y
el paciente se halla en coma hiperosmolar.
Los valores normales son de 280-300 mOsm por litro de plasma, de los
cuales los solutos no electrolticos representan slo 10 mOsm. En las medidas
del plasma se expresa habitualmente como mOsm por litro de solucin.
La mayor contribucin a la presin osmtica del plasma se debe al sodio.
Debido a esto los cambios rpidos en la concentracin de sodio afectan a la
hidratacin celular. Los niveles normales de glucosa y urea contribuyen poco a
la osmolalidad plasmtica. Sin embargo, las concentraciones elevadas de
uremias e hiperglucemias graves contribuyen significativamente a aumentar la
osmolalidad.

1.4. Interpretacin clnica.

La osmolalidad del plasma aumenta con la deshidratacin y disminuye con

la sobrehidratacin. En general, las mismas condiciones reducen o aumentan
el sodio srico afectan a la osmolalidad.

U.T.7: OSMOMETRA Y REFRACTOMETRA DE LQUIDOS. 4

CLDC/ FUNDAMENTOS Y TCNCIAS DE ANLISIS BIOQUMICOS

A continuacin se presentan se presentan las principales alteraciones de la

osmolalidad plasmtica y urinaria:
Alteraciones de la osmolalidad urinaria

Alteraciones de la osmolalidad plasmtica

2. REFRACTOMETRA

2.1. Principios bsicos de la refractometra.

Esta tcnica est basada en la variacin de la velocidad que experimenta

una radiacin electromagntica al atravesar un medio distinto al vaco, debido a
la interaccin entre el campo elctrico de la radiacin y los electrones de la
materia. Al atravesar una solucin la luz se desva y al ngulo de desvo se le
denomina ngulo de refraccin.
El ndice de refraccin de una sustancia se define como el cociente
entre la velocidad de la radiacin electromagntica (luz) en el vaco y en el
medio que atraviesa. Este ndice vara de forma proporcional
dependiendo de la concentracin de esa sustancia.
En el suero y plasma, el ndice de refraccin depende fundamentalmente de
la protena mayoritaria, la albmina.

U.T.7: OSMOMETRA Y REFRACTOMETRA DE LQUIDOS. 5

CLDC/ FUNDAMENTOS Y TCNCIAS DE ANLISIS BIOQUMICOS

2.2. Refractmetro clnico.

Para medir el ndice de refraccin de una sustancia empleamos unos

aparatos llamados refractmetros. Ver figura.

Constan de dos prismas entre los cuales se

coloca la muestra y sobre los cuales
hacemos incidir la radiacin (luz). Este haz
de luz, al atravesar la muestra, se refracta y
se recoge como un nico rayo de luz blanca
cuyo ngulo puede ser medido por un
sistema ptico. A travs de un ocular,
podemos ver un crculo en el que aparecen
diferenciados una zona clara y otra oscura.
Existe tambin una escala que indica el
ndice de refraccin correspondiente a la sustancia problema y que coincidir
con el lmite entre esas dos zonas del crculo. Las partes de un refractmetro,
se muestran en la figura siguiente:

En estos aparatos la anteojera de goma (7) evita posibles interferencias

originadas por la luz exterior, a la hora de realizar la lectura, entre el ojo y el
ocular. Facilita adems una mejor observacin al resaltar la escala y la lnea de
separacin.
El cuerpo est recubierto de goma para evitar que la temperatura de la
mano se transmita a la muestra, ya que las variaciones de la T influyen en la
validez de los resultados.
La escala de lectura est graduada y calibrada en trminos de peso
especfico para slidos totales en orina humana y para niveles proteicos en
suero. Con respecto a la lectura de peso especfico urinario, en el refractmetro
se obtienen datos del orden de 0,002 unidades menos que en los urinmetros
de rutina.

U.T.7: OSMOMETRA Y REFRACTOMETRA DE LQUIDOS. 6

CLDC/ FUNDAMENTOS Y TCNCIAS DE ANLISIS BIOQUMICOS

La calibracin de los refractmetros puede

hacerse con agua destilada o con solucin
salina de densidad conocida. Moviendo el
tornillo de ajuste se hace coincidir la lnea de
separacin con el valor exacto
Es importante mencionar que el ndice de
refraccin vara con la T de la sustancia, de
manera que debemos controlar que la
temperatura de la sustancia de calibracin sea
igual a la temperatura de la muestra. En caso
de no ser as, se emplear un factor de
correccin, aumentando en 0,001 unidades el
ndice de refraccin por cada 3 C de ms en
la temperatura de la muestra respecto al calibrador, y disminuyndolo en la
misma proporcin por cada 3 C de menos.

Utilizacin correcta del refractmetro.-

Sacarlo del embalaje y abrir la tapa que cubre el prisma.

Limpiar la placa y el prisma con un pao suave y procurar no rayar la
superficie del prisma.
Dirigir la parte del prisma hacia la luz.
Ajustar el anillo de dioptras hasta que se pueda ver claramente la
escala.
Realizar la calibracin como ya se ha explicado.
Colocar sobre el prisma una gota de la solucin a analizar y se cierra la
placa.
Dejar un tiempo para que la solucin problema fluya sobre la superficie
del prisma.
Colocar el refractmetro hacia la luz para obtener un buen contraste
luz-sombra.
Rotar el ocular hasta enfocar la escala.
Mirar por el ocular leyendo directamente en la escala de concentracin.
Corregir la medida en caso de diferencias de T.

U.T.7: OSMOMETRA Y REFRACTOMETRA DE LQUIDOS. 7

CLDC/ FUNDAMENTOS Y TCNCIAS DE ANLISIS BIOQUMICOS

2.3. Aplicacin clnica de la refractometra

Se emplea para obtener la densidad de la orina con refractmetros que

llevan, adems de la escala con el ndice de refraccin, una escala con la
densidad relativa de la muestra.
Tambin podemos utilizarlo para saber la concentracin de protenas
totales del suero o plasma, empleando refractmetros con una escala
especial de protenas adems del ndice de refraccin.
Es un aparato que se emplea poco en la actualidad ya que sus medidas
estn incluidas en otros sistemas analticos ms sencillos, rpidos (como las
tiras reactivas) y automatizados (autoanalizadores que incluyen tanto el peso
especfico como la concentracin de albmina).

U.T.7: OSMOMETRA Y REFRACTOMETRA DE LQUIDOS. 8