PRUEBAS DE TAMIZAJE:1

1. Infeccin y agentes infecciosos.

2. Virus de la inmunodeficiencia humana.

3. Principio de las pruebas de deteccin de anti -VIH.

1. Infeccin y agentes infecciosos.

Agentes infecciosos:

Existen cuatro tipos principales:

- Virus

- Bacterias.

- Protozoarios.

- Hongos. (micosis)

Para que un agente infeccioso pueda transmitirse por va transfusional, debe estar
presente en la sangre donada.

Existen 3 condiciones bsicas que determinan la posibilidad de transmisin de un

agente infeccioso:

El agente debe ser capaz de utilizar el torrente sanguneo para ingresar en el husped,
el paciente.

El donante infectado no debe exhibir signos o sntomas de enfermedad.

El agente debe persistir en forma natural durante cierto lapso, libre en el plasma o en
un componente celular del torrente sanguneo del donante infectado.

Las sustancias extraas que ingresan en el organismo e inducen respuestas inmunes se

denominan Antigenos.
Una reaccin posible es la produccin de protenas llamadas Anticuerpos.
Otra es la activacin de clulas que destruyen las clulas infectadas por contacto
directo.

Respuesta inmune:

- Los anticuerpos son molculas constituidas por protenas e hidratos de carbono.

- Se producen en las clulas linfoides, en respuesta a una estimulacin antignica.
- Son especficos y se fijan a los antigenos para que el organismo pueda eliminarlos.
- Pertenecen a un grupo de protenas sricas humanas, las gammaglobulinas y se
denominan inmunoglobulinas.
 Existen 5 tipos de inmunoglobulinas: IgG, IgM, IgA, IgD e IgE.

- El 73% de las inmunoglobulinas totales corresponden a la IgG. Es el principal

anticuerpo de la respuesta inmune. Persiste mucho tiempo. Posee una sola unidad
bsica.

- El 8% corresponde a la IgM, que es el primer anticuerpo producido en la respuesta

inmune y persiste hasta que el nivel de IgG aumenta. Posee cinco unidades bsicas
ligadas a travs de los extremos de las cadenas pesadas.

- El 18% corresponde a la IgA. Esta predomina en las secreciones y mucosas, protege la

superficie corporal. Posee dos unidades bsicas.

- El 1% corresponde a la IgD e IgE.

La IgD, se encuentra en la superficie de los linfocitos, acta como receptor.

La IgE, se asocia con las reacciones alrgicas, se localiza en la superficie de los mastocitos y
basfilos y libera histamina.

Respuesta celular:

- Es otro componente del sistema inmune que tiene lugar en presencia de los mismos
antigenos que inducen la produccin de anticuerpos.

- Ocurre en forma simultanea con la respuesta de anticuerpos o humoral. Involucra dos

grupos de linfocitos:

- Linfocitos T.

- Linfocitos granulares grandes.

La finalidad de los estudios de deteccin es garantizar que la sangre suministrada est

libre de agentes infecciosos, reconocindolos antes de la transfusin.

La transfusin de sangre es una va ideal de transmisin de ciertos agentes infecciosos

del donante al receptor.

Se puede reducir el riesgo:

Seleccin cuidadosa de los donantes para no recolectar sangre de portadores de
agentes infecciosos.
Investigacin directa de la sangre para identificar la presencia de agentes infecciosos.
Remocin de componentes especficos de la sangre que podran albergar agentes
infecciosos, ejemplo: filtracin de la sangre para retirar los leucocitos.
Inactivacin fsica de contaminantes potenciales, ejemplo: tratamiento con calor de los
concentrados de factor VIII.

Marcadores de infeccin:
Son los signos detectables que aparecen en el torrente sanguneo durante o despus
de la infeccin.
Se reconocen por la presencia de los patgenos en si o de los anticuerpos especficos.
 El tamizaje obliga a conocer los marcadores producidos por los agentes infecciosos.

2. Virus de la inmunodeficiencia humana.

No se conoce con certeza el mecanismo por el cual la infeccin VIH lleva SIDA, se sabe
que deteriora parte del sistema inmune.

El VIH, se aisl por primera vez en 1983, en las clulas de un paciente infectado (VIH1).

En 1986, en ciertas reas de frica Occidental se descubri otro virus, el VIH2.

El VIH 2 parece provocar las mismas enfermedades que el VIH1, pero es menos
patgeno.

INGRESO DEL VIH EN LAS CELULAS:

- Ingresa en las clulas fijndose a un receptor (la protena CD4).

- Los receptores CD4 se localizan en la superficie de diversas clulas del sistema inmune:
clulas T que participan en la estimulacin de la respuesta inmune, clulas T
colaboradoras y los macrfagos.
- Despus de la fusin del virin con la membrana celular, la capside pasa al citoplasma.
- En el citoplasma, la transcriptasa reversa convierte el ARN en ADN de doble helicoide.
- El ADN viral accede al ncleo de la clula y se integra al ADN de sta, a partir de este
momento permanece latente.
- El estadio final de infeccin comienza cuando los virus comienzan a replicarse.
- Se producen gran cantidad de virus (viriones), salen de las clulas, se rodean de
membrana celular y se transforman en partculas virales completas.
- Estos viriones se liberan y pueden infectar otras clulas.
- En sntesis, el VIH es un retrovirus y se integra al genoma de la clula del husped,
consiste en varias protenas estructurales, pero las ms inmunognicas y por lo tanto
las mas importantes desde el punto de vista serolgico, son las p24 y gp41.
- El VIH invade y destruye las clulas del sistema inmune por infeccin de las CD4
positivas.

En los pacientes con SIDA, la enfermedad se debe sobre todo a infecciones

oportunistas:

- Neumona por Pneumocystis carinii.

- Tuberculosis por Mycobacterium tuberculosis.
- Criptosporidiosis crnica.
- Toxoplasmosis.
- Virosis, ejemplo citomegalovirus.
- Carcinomas secundarios como: sarcoma de Kaposi y el linfoma no Hodgkin.

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DE LA INFECCION VIH:

- La presencia de anti -VIH en un individuo asintomtico, significa que estuvo expuesto
al virus.
- Los anticuerpos aparecen a los 14 das de la infeccin, otros dicen que a los 28 das o
ms.
- Los anticuerpos estn dirigidos contra las protenas del core y la envoltura.
- Los mas importantes son los anti- p24 (core) y anti- gp41 (cubierta)
 Entre la infeccin inicial y la sntesis de anticuerpos existe un periodo ventana de
duracin variable.
Despus de cierto lapso se detectan antgenos virales (p24, gp41) esta es muy breve,
no mas de 1 a 2 semanas. Poco reactivo para detectar antgenos y no son muy
sensibles.

TRANSMISION DE LA INFECCION VIH:

Existen 3 mecanismos principales de transmisin de la infeccin VIH:

1. Contacto homo o heterosexual no protegido, con una persona infectada.

2. Inoculacin de sangre infectada a travs de transfusin o por el uso de agujas, jeringas,

elementos punzantes contaminados empleados en inyeccin de drogas,
escarificaciones rituales o tatuajes.

3. Contagio de una madre infectada a su hijo, durante su vida intrauterina, parto o

lactancia.

Existen otras vas que no estn involucradas con el contagio del VIH:
- Contactos sociales o domsticos no sexuales. El VIH no es muy estable y las
condiciones del ambiente lo destruyen con facilidad.
- Los insectos no diseminan la infeccin. El VIH no se replica en los artrpodos.
- En los profesionales de la salud, el peligro no es mayor que en otros sujetos. La
manipulacin de material patolgico y las prcticas de laboratorio se deben realizar
con procedimientos de seguridad correctos.

PREVENCION DE LA DISEMINACION DE LA INFECCION VIH:

- Educacin para que la gente pueda evitar las situaciones de riesgo.
- Control fsico de la infeccin.
- Dar educacin en lo que se refiere a: transmisin sexual, transmisin por uso de
drogas inyectables, transmisin por va transfusional y la infeccin peditrica.

PRINCIPIOS DE LAS PRUEBASDE DETECCION DE ANTI-VIH

Es preciso tener en cuenta:

1. Si no se investiga la sangre antes de transfundirla, existe peligro de transmisin del
VIH.
2. Los donantes de alto riesgo tambin podran ser portadores de otras infecciones.
3. Recolectar sangre de un donante VIH positivo implica perdida de tiempo y dinero.
4. Si hay muchas donaciones VIH positivas los gastos aumentan.

PRINCIPIOS DE LAS PRUEBAS:

Se dispone de tres grandes categoras de mtodos de tamizaje de anti VIH:

1. Pruebas inmunosorbentes ligadas a las enzimas ( ELISA)

2. Pruebas de aglutinacin de partculas.

 3. Pruebas rpidas especializadas.

Al elegir una tcnica, se debe considerar varias caractersticas:

- Principio cientfico.
- Complejidad.
- Lapso de reaccin.
- Sensibilidad.
- Especificidad.
- Versatibilidad.
- Disponibilidad.
- Costo.

Los tres tipos de pruebas se basan en un mismo principio biolgico y se dan en 2

pasos:
- Presencia de antigenos o anticuerpos especficos, se da una reaccin inmunolgica
estndar formando complejos antigenos/anticuerpos, con uno de sus componentes
unido a una superficie fija.
- Los complejos inmunes se identifican mediante un sistema indicador.

Terminologa:
positivo/negativo
reactivo/no reactivo
equivoco o indeterminado.
Los resultados no corroborados deben consignarse como reactivos o no reactivos.
Segn la OMS, el resultado que no es claramente positivo o negativo usualmente alrededor del
valor de corte se incluye en la categora de equivoco (indeterminado)

ELISA:
La prueba es un poco compleja, involucra los mismos principios que la aglutinacin de
partculas y las pruebas rpidas.
Puede detectar antigenos y anticuerpos.
Se basan en el empleo de antigenos virales inmovilizados que capturan los anti- VIH
presentes en las muestras.
Hay pruebas de primera, segunda y tercera generacin, eso se refiere a la fuente
antignica.

Los de primera generacin, utilizan virus nativos purificados o no purificados

preparados a partir de cultivos.
Los de segunda generacin, son antigenos recombinantes obtenidos por clonacin de
fragmentos de cidos nucleicos virales en levaduras, cultivo y purificacin de las
protenas virales.
Los de tercera generacin, son polipptidos virales producidos por sntesis qumica.

Hay 3 tipos de ELISA:

1. Antiglobulnico: mas sencillo. Los ac presentes en la muestra se fijan a los ag virales

inmovilizados y se identifican mediante ac marcados con enzimas.
2. Competitivo: mas complejo. Los ac presentes en la muestra compiten con los
marcados con enzimas por los puntos de fijacin de los ag virales inmovilizados.
3. Sndwich: muy especifico. Los ac presentes en la muestra se fijan a los ag virales
inmovilizados y luego se detectan mediante ag libres marcados con enzimas.

PRUEBAS DE AGLUTINACION DE PARTICULAS:

 Detectan la presencia de anticuerpos por la aglutinacin de partculas recubiertas de
ag.
El procedimiento es similar al de hemaglutinacin, se reemplaza los glbulos rojos por
partculas de gelatina o ltex.
No hay varios pasos, no necesita lavado y la lectura es visual.

PRUEBAS RAPIDAS ESPECIALIZADAS:

Combinan la simplicidad de las de aglutinacin de partculas con la tecnologa del
ELISA.
Detectan anticuerpos.
Consiste en ag inmovilizados en una membrana porosa o semiporosa o una tira, se
agrega la muestra y un reactivo que generalmente es para diluir la muestra.
La lectura es visual, no requiere controles y no se efectan clculos.
Son muy sensibles, sencillas, poco tiempo y los kits incluyen todo el material necesario.