INTERACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO (INMUNIENSAYOS)

INTERACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO

Interacciones Antgeno-Anticuerpo Relacin biomolecular No conduce a una

alteracin qumica irreversible en el anticuerpo ni en el antgeno.
Afinidad Fuerza combinada de las interacciones no covalentes entre un sitio de unin
de un antgeno nico en un anticuerpo y un epitopo nico.
Afinidad baja Unen de manera dbil tienden a disociarse con facilidad.
Afinidad alta Unen con ms firmeza Se mantiene por mas tiempo.

DIALISISNDE EQUILIBRIO

Se utiliza para determinar la constante afinidad.

A mayor afinidad se unen ms ligandos.

AFINIDAD Y AVIDEZ

Avidez Fuerza de interacciones mltiples Entre antgeno y anticuerpo

o Medida ms adecuada para cuantificar la capacidad de unin de un anticuerpo
dentro de los sistemas biolgicos
o Una avidez alta compensa afinidad baja

REACTIVIDAD CRUZADA

Reactividad cruzada Dos antgenos diferentes comparten un epitopo idntico o muy

similar
Se observa en antgenos polisacridos Contienen residuos
oligosacridos similares. Ejemplo: Antgenos del grupo sanguneo
ABO son glucolipidos que se expresan en glbulos rojos.
Grupos sanguneos ABO
Grupo Antgenos en Anticuerpos sricos
Sanguneo eritrocitos
A A Anti-B
B B Anti-A
AB AyB Ninguno
O Ninguno Anti-A y Anti-B

RESONANCIA DE PLASMONES SUPERFICIALES

Resonancia de plasmones superficiales Medicin de constantes de afinidad

Rapidez de reacciones antgeno-anticuerpo
Medir concentraciones de anticuerpo.
Determinar si diferentes anticuerpos se unen al
mismo epitopo o Epitopos diferentes
Funciona detectando cambios en las propiedades de reflectancia de la superficie de un detector
recubierto de antgeno cuando se une a anticuerpo.

Angulo de resonancia proporcional al nmero de anticuerpos unidos reaccin

antgeno anticuerpo rapidez de reaccin

REACCIONES DE PRECIIPTACION

El anticuerpo y el antgeno soluble que interactan en una solucin acuosa forman un retculo que
se convierte un precipitado visible.

Precipitinas Anticuerpos que aglomeran antgenos solubles.

Pueden formarse en solucin o matriz de agar (solido).
rea de anillo Proporcional a la concentracin de antgeno
Comparacin del rea de anillo con una curva estndar permite determinar la
concentracin en la muestra de antgeno.

INMUNODIFUSION

1. Preparar agar impregnado con Ac

2. Agregar estndares y muestras
3. Colocar en una cmara hmeda y permitir la difusin
4. Visualizar los anillos de precipitacin. Medir dimetro
5. Realizar curva de trabajo con dimetro de los estndares. Calcular concentracin muestras
problemas.

INMUNOELECTROFORESIS

Detectar la presencia o ausencia de protenas en el suero

Determinar si un paciente produce cantidades anormalmente baja de uno o ms isotopos

(caracterstica de ciertas enfermedades de inmunodeficiencia)

REACCIONES DE AGLUTINACION

Aglutinacin agrupamiento visible de la interaccin entre el anticuerpo y un antgeno

articulado
Aglutinas Anticuerpos que produce la aglutinacin
Dependen del enlace cruzado de antgenos polivalentes.

RADIOINMUNOENSAYO (RIA)

RIA Unin competitiva de antgeno radio marcado y antgeno no marcado.

El RIA de microttulo se utiliza con amplitud para la presencia de virus de hepatitis B.

ELISA

Ensayo de inmunosorbente ligado a enzima (ELISA) Depende de una enzima

Sustrato cromgeno Reaccin a un sustrato incoloro para generar un producto de una enzima
conjugada con un anticuerpo
Por medio de ELISA indirecto puede detectarse un anticuerpo

ELISA indirecto Detectar anticuerpos sricos contra VIH.

WESTERN BLOT

Identificacin de una protena especifica en una mezcla compleja de protenas. Una mezcla de
protenas se separa por medios electroforticos Un gel de SDS- poliacrilamida.

Identificar un anticuerpo especfico en una mezcla

Antgenos conocidos de peso molecular bien definido se separan mediante SDS- PAGE y
transfieren a nitrocelulosa
Prueba de confirmacin de VIH

INMUNOPRECIPITACION

Permitir el aislamiento del antgeno de inters para un anlisis ms amplio.

Prueba sensible para la presencia de un antgeno particular en un tipo de clula o tejido

determinado
Extracto obtenido por rotura de clulas o tejido mezcla con un anticuerpo (contra
antgeno de inters) Formar un complejo antgeno-anticuerpo (se precipitara).

INMUNOFLOURESCENCIA

Se utilizan anticuerpos marcados con molculas fluorescentes (fluorocromos). Pueden

conjugarse con la regin Fc sin afectar la especificidad de este.

CITOMETRIA DE FLUJO

Anlisis y separacin de clulas teidas con anticuerpos fluorescente

Determinar el grupo y el nmero de glbulos blancos en muestras de sangre

SISTEMA DE COMPLEMENTO

FUNCIONES DEL COMPLEMENTO

Lisis
Opsonizacion
Activacin dela reaccin inflamatoria
Depuracin de inmunocomplejos

COMPONENTES Y ACTIVACION DEL COMPLEMENTO

Clulas que producen activacin del complemento

Hepatocitos Principal fuente

Macrfagos
Clulas epiteliales de aparato digestivo y genitourinario.

Constituyen 5% (peso) de la fraccin de globulina srica

Casi todos circulan en el suero en formas funcionales inactivas proenzimas o cimgenos.

Existen tres vas

Va clsica
Va de Lectina
Va alterna

VIA CLASICA

Su activacin es iniciada por inmunocomplejos formados por IgG.

Se inicia con la unin de dos (en el caso de la participacin de IgG) o ms (en el caso de
IgM) molculas de inmunoglobulinas unidas a los antgenos respectivos al producirse
cambios alostricos en el extremo Fc.

VIA ALTERNA

No se necesita el complejo antgeno-anticuerpo

Componente del sistema inmunitario innato
Va mayor de activacin
o C3
o Factor B
o Factor D
o Properdina
Iniciada por constituyentes de superficie celular Extraos al hospedador
o Componentes de la membrana o pared celular

Iniciadores de la va alterna de activacin del complemento

PATOGENOS Y PARTICULAS DE ORIGEN
MICROBIANO
Muchas cepas de bacterias gramnegativas
Lipopolisacarido de bacterias gramnegativas
Muchas cepas de bacterias grampositivas
Paredes de clulas micoticas y levaduras
(zimosan)
Algunos virus y clulas infectadas por virus
Algunas clulas tumorales (Raji)
Parsitos
NO PATOGENOS
IgG, IgA e IgE humanos complejos
IgG de conejo y cobayo en complejos
Factor de veneno de cobra
Eritrocitos heterologos (conejo, ratn, pollo)
Polmeros anionicos (sulfato de dextran)
Carbohidratos puros (agarosa, inulina)

VIA DE LAS LECTINAS

Las lectinas son protenas que reconocen carbohidratos especficos y se unen a ellos.

No depende de anticuerpos
Clulas humanas tienen residuos de cido slico cubren grupos de azcar a
reconocidos por MBL NO SON BLANCOS PARA UNION
MLB similar a C1q Se asemeja en estructura
El complemento activo formado por esta vinculacin escisin y activacin de C4 y C2.
COMPLEJO DE ATAQUE A MEMBRANA (MAC)

Las tres vas convergen en MAC

Resultado final de activacin de la va produccin de una conversata de C5 activa
escinde C5
Secuencia termina de activacin C5b, C6, C7, C8 y C9
o Interacta de manera secuencial Complejo ataque a membrana
Forma un conducto grande que permite la libre difusin de iones y molculas pequeas a
travs de la membrana

ACTIVACION BIOLOGICA DE PRODUCTOS DEL COMPLEMENTO

EFECTO PRODUCTO DEL COMPLEMENTO MEDIADOR

Lisis celular C5b-9, el complejo ataque a membrana (MAC)
Reaccin inflamatoria
Desgranulacion de clulas cebadas y C3a, C4a y C5a (anafilatoxinas)
basfilos
Desgranulacion de eosinofilos C3a, C5a
Extravasacin y quimiotaxis de leucocitos en C3a, C5a, C5b67
el sitio inflamatorio
Agregacin de plaquetas C3a, C5a
Inhibicin de la migracin de Bb
monocitos/macrfagos e induccin de su
diseminacin
Liberacin de neutrfilos de la medula sea C3c
Liberacin de enzimas hidroliticas de C5a
neutrfilos
Incremento de la expresin de receptores C5a
del complemento tipos 1 y 3 (CR1 y CR3) en
neutrfilos
Opsonizacion de antgenos particulados, lo C3b, C4b, iC3b
que incrementa fagocitosis
Neutralizacin vrica C3b, C5b-9 (MAC)
Solubilizacion y depuracin de C3b
inmunocomplejos

COMPLEJO MAYOR DE HISTOCOMPATIBILIDAD

MHC Y RECEPTOR DE CELULAS T

Los receptres de celula T Reconocen antigeno que ha sido procesado y presentado en el

contexto de molculas codificadas por el complejo mayo de histocompatibilidad.

MHC Complejo gentico que influye en la capacidad de un organismo de aceptar o rechazar

tejido transplantado
ORGANIZACIN GENERAL DE HERENCIA DEL MHC

Los loci constituyen el MHC altamente polimrficos

Haplotipo grupo de alelos
Los alelos se expresan de manera codominante.

CELULAS PRESENTADORAS DE ANTIGENO

Las dentricas son ms eficaces que las clulas presentadoras de antgeno

Los macrfagos deben ser activados por fagocitosis de antgenos
Clulas B expresan molculas MHC clase II
Casi todas las clulas nucleadas expresan molculas MHC clase I
Las clulas blanco:
o Clulas infectadas con virus y microorganismos
Intracelulares
Clulas cancerosas y en envejecimiento
Clulas injerto

PRICESAMIENTO Y PRESENTACION DE ANTIGENOS

Dos vas para eliminar antgenos

Va citosolica Antgenos endgenos Se presentan membrana con molculas MHC clase I

Va endocitocitica Antgenos exgenos Se presentan en membrana con molculas MHC clase

II

RECEPTORES DE CELULAS T

RECEPTOR DE CELULAS T

La organizacin genmica para el receptor de clula T Se asemejan a las cadenas de

receptor de clula B (inmunoglobulinas)
El receptor de clula T se relaciona en la membrana con un complejo traductor de seales
de mltiples componentes

RESTRICCION DEL TCR AL MHC PROPIO

TCR Especfico tanto para el pptido antignico como para una molcula MHC propia.

ESTRUCTURA Y FUNCION DE TCR

El dominio amino terminal variacin de secuencia notable las secuencias del resto de
cada cadena se conservan.
Los dominios TCR (Uno variable V y uno constante C Homlogos en estructura V y C
de las inmunoglobulinas. La molcula de TCR se asemeja a un fragmento Fab
Los dominios variables tres regiones hipervariables equivalen a regiones
determinantes de complementariedad

COMPLEJO TCR-CD3
 La inmunoglobulina unida a la membrana en clulas B se relaciona con el heterodimero
formar el receptor de antgeno de clula B.
El receptor de clula T Se vincula con CD3 Complejo de membrana TCR-CD3
El complejo receptor de clula T puede verse como cuatro dmeros

CORRECEPPTORES DEL TCR

Clulas T pueden subdividirse segn su expresin de molculas de membrana

o CD4 Reconocen antgenos asociados a molculas MHC clase II Clulas
colaboradoras
o CD8 Reconocen antgenos asociados a molculas MHC clase I Clulas
citotoxicas

MADURACION, ACTIVACION Y DIFERENCIACION DE CELULAS T Y B

LINFOCITOS T

En el timo Clulas T en desarrollo timoncitos proliferan y se diferencian

Generan subpoblaciones funcionalmente distintas de clulas T maduras
Seleccin positiva supervivencia de clulas T cuyos TCR son capaces de reconocer
molculas MHC propias
Seleccin negativa Elimina las clulas T que reacciona demasiado intensamente con el
MHC propio o con MHC propio mas pptidos propios
Las clulas que fracasan en la seleccin se eliminan por apoptosis.

LINFOCITOS B

La produccin de clulas B plasmticas y de memoria puede dividirse en tres amplias

etapas
o Maduracin Generacin de clulas B maduras inmunocompetente
o Activacin Clulas B maduras cuando interactan con antgeno
o Diferenciacin Clulas B activadas en plasmticas y de memoria
Clula B madura sale de la medula sea expresa inmunoglobulina unida a membrana
Clulas B vrgenes no tienen contacto con el antgeno circulan en la sangre y linfa
Clula B activada por interaccin con un antgeno reconocido por su anticuerpo
unido a membrana Prolifera diferencia para crear una poblacin de clulas
plasmticas secretoras de anticuerpo y otra de clula B de memoria

Durante la reaccin humoral primaria se secreta IgM Proporcin creciente de IgG

Clulas B de memoria Se forman durante una respuesta primaria Dejan de dividirse

e ingresan en fase G0 del ciclo celular

La capacidad de desarrollar una reaccin humoral secundaria depende de clulas B y T

CITOCINAS

CITOCINAS Protenas reguladoras de peso molecular bajo o Glucoproteinas secretadas por

glbulos blancos y varias otras clulas en el cuerpo en respuesta a diversos estmulos.
ANTAGONISTAS DE CITOCINAS

Varias protenas que inhiben la actividad biolgica de Citocinas

Actan de dos formas:
o Unin directa a un receptor de citosina sin activar la clula
o Unin directa a una citosina Supresin de su actividad

Algunos virus han desarrollado estrategias para impedir la actividad de las citosinas

CHOQUE SEPTICO BACTERIANO

Bacterias gramnegativas E. coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa,

Enterobacter aerogenes y Neisseria meningitidis.
Sntomas del choque sptico bacteriano a menudo es letal descenso de la presin
areterial, fiebre, diarrea y coagulacin sangunea diseminada en varios rganos.
Se presenta las endotoxinas de la pared de la clula bacteriana estimulan la produccin
excesiva de IL-1 y TNF- por macrfagos en concentraciones que provocan choque
sptico
Tratamiento anticuerpos contra TNF- y el antagonista del receptor de IL-1
recombinante
Citocinas que pueden ser criticas IL-6, MIF e IL-8.

MIELOMA MULTIPLE

En las clulas la IL-6 opera en forma autocrina estimular la proliferacin celular

Cuando se aaden anticuerpos monoclonales contra IL-6 a cultivos de clulas de mieloma
in vitro se inhibe su crecimiento

ENFERMEDAD DE CHAGAS

Agente causal Protozoario Trypanosoma cruzi Supresin inmunitaria grave

Inhibe la activacin de clulas T

CITOTOXICIDAD MEDIADA POR CELULAS

CITOTOXICIDAD MEDIADA POR CELULAS

Detectar y eliminar clulas que alojan patgenas intracelulares

Reconocer y eliminar clulas clulas tumorales que sufrieron modificaciones genticas

expresan antigenios no son caractersticas de las clulas normales

Las clulas espeificas e inespecficas de antigeno pueden contribuir a la reaccion inmunitaria

mediada por clulas Linfocitos T citotoxicos CD8 y clulas TH CD4 que secretan citocina y
median la hipersensibilidad tardia.

MOLECULAS EFECTORAS DE CELULAS T

Las clulas T efectoras expresan ciertas molculas efectoras tanto de membrana como solubles
El ligando Fas, las perforinas y las granzimas Median la destruccin de celula blanco por el
linfocito T citotoxico

CITOTOXICIDAD DE CELULAS NK

Participan en defensas inmunitarias contra virus y tumores

Acciones notorias en la regulacin inmunitaria influyen en la inmunidad innata y
adaptativa
La produccin de IFN- por clulas NK en particular puede afectar la participacin de
macrfagos en la inmunidad innata.
Las clulas NK participan en la reaccin temprana a la infeccin por cierto virus y bacterias
intracelulares
Las clulas NK son la primera lnea de defensa contra una infeccin vrica.
Destruyen clulas tumorales e infectadas por virus procesos similares a los que ejercen
los linfocitos T citotoxicos
Llevan FasL en su superficie Inducen con facilidad la muerte en clulas blanco que
poseen Fas
El citoplasma contiene mltiples grnulos Perforina y granzimas
Requieren activarse antes de la aparicin de grnulos son citotoxicas de manera
constitutiva grnulos grandes en su citoplasma

ADCC

Citotoxicidad mediada por clulas dependiente de anticuerpo (ADCC)

No son especficos de antgeno La especialidad del anticuerpo las dirige a clulas blanco
especificas
Las destruccin de clulas blanco por ADCC Varios mecanismos citotoxicos diferentes
Sin lisis mediada por complemento

Las clulas se unen al receptor Fc Ms activas desde el punto de vista metablico Aumentan
las enzimas lticas en sus lisosomas o grnulos citoplasmticos.