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MICROBIOLOGA

APLICADA

YHR
CURSO 2016-2017
er
1 Parcial (Tema 1-7)

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TEMA 1. Introduccin
1. Perspectiva histrica: Aplicaciones de los microorganismos

Karl Stetter fue el primero que aisl bacterias capaces de crecer a 100 grados centgrados. El 80%
de la historia de la evolucin de la vida en la Tierra, los microorganismos han estado presentes,
por lo que aportan un balance significativo para que el ecosistema funcione ptimamente.
Alrededor 1 de cada diez clulas de nuestro cuerpo son de origen microbiano.

Los microorganismos se encuentran en todo tipo de ambientes con diversas condiciones.


Realizan una serie de funciones entre las que encontramos la descomposicin o la formacin de
ciertos productos.

La vida celular est presente en la Tierra desde hace unos 3800 millones aos. Las cianobacterias
comenzaron la lenta oxigenacin de la Tierra hace unos 3 bya, pero los niveles actuales de O2 en la
atmsfera no se lograron hasta hace 500-800 millones de aos. Los eucariotas son clulas
nucleadas e incluyen tanto microorganismos como organismos multicelulares.

Los tres dominios de organismos celulares son: Bacterias, Archaea y


Eukarya. Los dos ltimos linajes divergen mucho antes de que las clulas
nucleadas con orgnulos aparezcan en el registro fsil. LUCA, ltimo
Ancestro Comn Universal. Desde el punto de vista evolutivo, los
microorganismos representan una parte importante, un 80% de la historia
de la Tierra.

La mayor parte de los microorganismo se encuentran en los subsuelos, marino 66% y terrestre
26%. En el suelo superficial encontramos el 48%. Un 22% se encuentran en los ocanos y el 1%
en otro tipo de hbitats. Los microorganismos cultivables que proceden de la superficie del suelo
solo representan el 1% de todos los existentes.

1.1. El impacto de los microorganismos en humanos

A travs de los aos, los microbilogos han tenido gran xito en: Descubrir cmo funcionan los
microorganismos, y la aplicacin de este conocimiento se ha incrementado en gran medida los
efectos beneficiosos y reducido muchos de sus efectos nocivos.

La microbiologa ha avanzado mucho es:


La salud y bienestar humano
Agricultura y alimentos
Aprovechar las actividades microbianas para la produccin de productos humanos
valiosos
Generacin de energa
Limpieza del medio ambiente, etc.

1.2. Microorganismos como agentes infecciosos


En el siguiente grafico, podemos ver las tasa de mortalidad de las principales causas de muerte en
los Estados Unidos en 1900 y en la actualidad. Las enfermedades infecciosas son las principales
causas de muerte en 1900, mientras que hoy representan un nmero reducido de muertes.

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En el caso de las enfermedades renales, pueden deberse a una infeccin microbiana o fuentes
sistmicas (diabetes, ciertos tipos de cncer, toxicidad, enfermedades metablicas, etc.)

1.3. Microorganismos: comida, energa y medio ambiente


- Los microorganismo realizan funciones importantes en la produccin de alimentos como
es el caso de la fermentacin lctica o alcohlica.
- La produccin de biodiesel (metanol, etanol) es otra de las aplicaciones de los
microorganismos para el inters humano.
- Los microorganismos tambin son usados para limpiar la contaminacin humana, este
proceso se llama biorremediacin microbial.

1.4. Alcance y aplicacin de los microorganismos

Los microorganismos tienen una gran importancia e impacto en los humanos, en muchos aspectos:
obtencin de energa, biorremediacin, comida, compuestos de inters medio o farmacutico, etc.

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2. Microbiologa aplicada y Biotecnologa
Una buena definicin de biotecnologa podra ser el uso de microorganismos (o productos derivados
de microorganismos) para llevar a cabo determinados procesos con aplicacin industrial.

La microbiologa aplicada es una parte importante de la biotecnologa, ya que los


microorganismos tiene un amplio potencial de sntesis y degradacin, el cual es fcilmente
manipulable genticamente, y adems son capaces de crecer rpidamente bajo condiciones
controladas en grandes fermentadores.

El sobrenombre de nueva biotecnologa se refiere generalmente al uso de la tecnologa de ADN


recombinante para la produccin de nuevas cepas.

Existen muchas definiciones de biotecnologa. En 1992 en una conferencia de diversidad biolgica


se defini como cualquier aplicacin tecnolgica que use sistemas biolgicos, organismos vivos o
sus derivados, para producir o modificar productos o procesos para un uso especifico.

Los avances en biologa molecular han aumentado enormemente nuestra comprensin de los
cidos nucleicos. Esto ha dado lugar a aplicaciones en las tecnologas como la ingeniera gentica.

Todos los aspectos de manipulaciones biolgicas tienen ahora dimensiones de biologa molecular y
parece conveniente dividir la biotecnologa en:

- Biotecnologa tradicional
- Biotecnologa de los cidos nucleicos

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La microbiologa industrial se puede definir como el estudio de la produccin a gran escala y con fines
de lucro, de los microorganismos o sus productos para uso directo o como insumos en la produccin de
otros bienes.

Microbiologa industrial es claramente una rama de la biotecnologa e incluye tanto los aspectos
tradicionales como los de los cidos nucleicos.

3. Objetivos e impacto de la Biotecnologa Microbiana

Existen varios tipos de biotecnologa que se diferencian por colores segn sus campos de aplicacin.

El trmino biotecnologa blanca fue propuesto inicialmente por los rganos de la Unin Europea.
"Blanco", tambin se hace referencia a los aspectos ambientales positivos.

Se ha convertido en un principal contribuyente a la llamada "qumica verde", rea, en la que los recursos
renovables, como los azcares o aceites vegetales se transforman en una gran variedad de sustancias
qumicas, tales como productos qumicos finos y grueso, productos farmacuticos, biocolorantes,
disolventes, bioplsticos, vitaminas, aditivos alimentarios, as como los biocombustibles como el bioetanol
y el biodiesel.

a) Qumica sostenible o verde

La industria qumica produce una amplia gama de compuestos: productos qumicos finos, productos
farmacuticos, productos qumicos en masa, plsticos y combustibles, etc. Pero al mismo tiempo un gran
uso de los recursos fsiles y una fuente significativa de residuos.

Qumica sostenible se basa en una serie de tecnologas diferentes, que van desde:

Los procesos qumicos convencionales ms eficiente, el uso de mejores catalizadores, mtodos de


separacin innovadores, el reciclaje y la reutilizacin de la tecnologa, hasta el uso de la biotecnologa
industrial.

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b) Biotecnologa Industrial como una tecnologa multidisciplinaria

Tecnologa multidisciplinar abarca la aplicacin integrada de disciplinas como la bioqumica, bioinformtica,


gentica molecular y tecnologa de proceso para desarrollar procesos y productos, basado en microbianas,
animales, o clulas de plantas, sus orgnulos o enzimas como biocatalizadores tiles. Los microorganismos, en
particular, han recibido mucha atencin como un instrumento biotecnolgico y se utilizan en los denominados
procesos de fermentacin.

c) Uso de los recursos renovables frente a los recursos fsiles

La crisis del petrleo entre 1973 y 1979, cuando la OPEP elev los precios del petrleo a partir del 2 a 30 dlares
EE.UU. por barril, dio lugar a un renovado inters por los
recursos renovables.

En una base de peso, los recursos renovables son


aproximadamente la mitad de caro que los recursos fsiles.

d) Las materias primas renovables para la industria qumica

La produccin total anual de la biomasa en nuestro planeta se estima en 170 millones de toneladas y se
compone de ms o menos de:

- 75% de carbohidratos (azcares)


- 20% ligninas
- 5% de otras sustancias tales como aceites y grasas, protenas, terpenos, alcaloides, etc.

De esta produccin de biomasa, 6 mil millones de toneladas (3,5%) estn siendo utilizados actualmente para las
necesidades humanas, distribuidos. 3,7 millones de toneladas (62%) para el consumo humano, posiblemente a
travs de la cra de animales como un paso intermedio. 2 millones de toneladas de madera (33%) para su uso,
el papel y las necesidades de energa de la construccin. 300 millones de toneladas (5%) para satisfacer las
necesidades humanas de tcnico materiales (no alimentarios) prima (ropa, detergentes, productos qumicos, etc.)

e) Los procesos de fermentacin

La biotecnologa industrial se utiliza para producir una amplia variedad de productos qumicos en masa
(alcohol, a cido lctico, cido ctrico, vitaminas, aminocidos, solventes, antibiticos, biopolmeros,
biopesticidas, biocolorantes, etc.).

Fermentacin industrial es la principal tecnologa, por lo que los microorganismos (bacterias, levaduras y
hongos) que se cultivan convierten de manera eficiente azcares en productos tiles.

Es el "nico mtodo de produccin industrial" para varios de estos productos y algunos se producen en
cantidades muy significativas.

f) Los procesos enzimticos y la tecnologa de enzimas

Las enzimas dirigen la qumica de la vida sin necesidad de las temperaturas extremas, altas presiones, o
condiciones corrosivas que se requieren en los procesos de sntesis qumica (Biocatlisis).

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Las enzimas llevan a cabo reacciones en un solo paso, con gran eficacia, especificidad y velocidad de
reaccin. Tpicamente, las reacciones se llevan a cabo en disolventes "verdes", tales como agua, etanol,
o CO2 supercrtico.

g) Ventajas econmicas y ecolgicas de la Biotecnologa Industrial

Ventajas ecolgicas:

Reduccin considerable de la generacin de residuos


Reduccin de los requerimientos energticos
Disminucin del uso de disolventes
Eliminacin de los productos intermedios peligrosos

Combina tanto el progreso econmico y ecolgico. El aumento de la eficiencia y reduccin de costes de


produccin de este tipo de procesos biotecnolgicos casi siempre da como resultado una gran
disminucin de impacto ecolgico y por lo general conduce a una mayor competitividad.

h) Los cambios esperados en la Sociedad y Tecnologa

Si vamos a superar estos cambios, la base tecnolgica de nuestra sociedad tendr que cambiar
radicalmente.

i) Los cambios en el suministro de materias primas

En trminos de peso, los recursos fsiles son 2-3 veces ms caros que los recursos renovables como el
maz (paja 10 veces ms barato que el petrleo). Por lo tanto, los recursos renovables ofrecen un excelente
potencial como materia prima tanto para nuestras necesidades qumicas como para nuestras necesidades
energticas (biocombustibles), por razones de costo, la autosuficiencia, el desarrollo sostenible y la
conservacin de los recursos naturales.

j) El aumento de la demanda de una poblacin creciente de materias primas y energa

En la actualidad, alrededor del 80% de todas las materias primas disponibles y la energa se utiliza en
aproximadamente un 20% de la poblacin mundial.

Naturalmente, se puede esperar que el otro 80% de la poblacin mundial vaya a hacer todo lo posible por
mejorar sus condiciones de vida y por lo tanto requieren muchas ms materias primas y energa que
antes.

k) El aumento de la demanda de la eficiencia en los sistemas de produccin de sustancias qumicas

Las leyes de la economa de mercado proporcionan fuertes presiones para mejorar continuamente la
eficiencia de todos los sistemas de produccin.

Los mtodos biocatalticos son particularmente eficientes y especficos, con menos residuos, el uso de
materias primas, y el consumo de energa como resultado.

La penetracin de la biotecnologa industrial en la industria qumica est casi siempre motivada por
principios econmicos normales, como ahorro de costes, mayor eficiencia, etc.

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l) Necesidad cada vez mayor para la Sostenibilidad de los Sistemas de Produccin

El mundo se enfrenta al gran reto de desarrollar los procesos de produccin limpios y sostenibles
que respeten el medio ambiente, mejoren nuestra calidad de vida y al mismo tiempo sean
competitivos en el mercado.

Los bioprocesos generalmente producen menos residuos y el uso de productos qumicos txicos
y peligrosos puede a veces ser eliminado por completo mediante el uso de una enzima.

m) Cambiar la percepcin del consumidor y comportamiento

Hay una creciente demanda de los consumidores para obtener informacin sobre los productos
que compran y esto va ms all de la calidad y el precio.

La biotecnologa industrial tiene el potencial de ser percibido como un trabajo en armona con la
naturaleza.

A la gente, en general, le gusta la idea de utilizar la biomasa en lugar de petrleo y los procesos
biolgicos en lugar de sntesis ms convencional.

As que los bioprocesos no slo tienen un precio competitivo y ofrecen beneficios ecolgicos,
tambin tienen una aceptacin pblica sobre los procesos clsicos.

n) Los cambios en el sistema agrcola

El sector de la agricultura tendr que adaptarse continuamente a las nuevas necesidades y


problemas, bajo la presin de los consumidores, gobiernos, etc.

3.1. Obsolescencia en Microbiologa Industrial


Su mayor beneficio es el factor de motivacin en la bsqueda de la microbiologa industrial, un mtodo
microbiolgico puede ser descartado por completo a favor de un mtodo qumico ms barato.
Ej.: etanol.
- Hasta 1930 se obtena por fermentacin.
- Sobre 1930 se obtuvo por mtodos qumicos (petrleo).
- En mitad de la dcada de 1970 el precio del petrleo subi estrepitosamente.
- Se ha convertido otra vez, ms rentable producir etanol por fermentacin (Gasohol: Brasil,
India, EE.UU.).

4. Microorganismos de inters industrial: caractersticas y principales grupos


taxonmicos

Los microorganismos ms importantes para microbiologa aplicada don las bacterias y algunos
eucariotas. Aunque tambin son importantes las arqueobacterias por ser bacterias extremofilas.

Los procesos utilizados en la industria microbiologa y la biotecnologa son dinmicos


(procedimientos obsoletos que se descartan medida que se descubren nuevos procesos y ms
eficientes).

Los microorganismos tienen las siguientes ventajas sobre las plantas o animales como entradas
en la biotecnologa:

Los microorganismos crecen rpidamente en comparacin con las plantas y los


animales. Ej. tiempo de generacin
El espacio necesario para el crecimiento de los microorganismos es pequeo. Ej. El
uso de Fermentador

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Los microorganismos no estn sujetos a los problemas de las vicisitudes del clima. Ej. La
produccin agrcola
Los microorganismos no se ven afectados por las enfermedades de las plantas y los
animales. Ej. Los fagos y contaminantes

1.1 Bacterias

De los 18 filos en las bacterias, la Aquiflex es


evolutivamente el ms primitivo, mientras que la ms
avanzada es la Proteobacteria. El filo bacteriano utilizado
en microbiologa industrial y biotecnologa se encuentran
en las Proteobacteria, las Firmicutes y Actinobacteria.

Las Proteobacterias (G-) se dividen en cinco grupos:


(alfa), (beta), gamma), (delta), (psilon).
Acetobacter y Gluconobacter, (Alphaproteobacteria;
bacterias de cido actico) son los nicos organismos de
actual importancia industrial. Tambin Zymomonas,
(Alphaproteobacteria, produce grandes cantidades de
alcohol) son industrialmente importantes.

Los Firmicutes (G+) contienen muchas bacterias de importancia industrial y se dividen en tres grupos
principales:
- Formadores de esporas. Gnero Bacillus (bioinsectisidas) y Clostridium (patgeno de animales
y humanos).
- No formadores de esporas. Bacterias del cido lctico.
- Sin pared

El Actinobacteria son los Firmicutes con contenido de G+C del 50% o superior. Los miembros
industrialmente importantes de este grupo son:

- Corynebacterium. Son importantes industrialmente como secretores de aminocidos


- Actinomicetos. Son insuperables en su capacidad de producir metabolitos secundarios que son
de importancia industrial, especialmente como productos farmacuticos.

1.2 Eucarya: Fungi

Los hongos se utilizan comnmente en la produccin


industrial y se clasifican tradicionalmente en cuatro grupos:

- Phycomycetes (Zigomicetos). Rhizopus y Mucor se


utilizan para la produccin de diversos enzimas.
- Ascomycetes. Las levaduras se utilizan para la
produccin de etanol y las bebidas alcohlicas.
Claviceps purperea se utiliza para la produccin de los
alcaloides del cornezuelo de centeno.
- Hongos Imprfecti . Aspergillus es importante debido a
que produce la toxina alimentos, aflatoxina, mientras
que Penicillium es bien conocido por el antibitico
penicilina que produce.
- Basidiomycetes. Agaricus produce el cuerpo fructfero
o seta comestible.

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1.3 Caractersticas importantes en los microbios utilizados en
microbiologa industrial y biotecnologa

El organismo debe ser capaz de crecer en un medio simple y preferiblemente no debera


requerir factores de crecimiento.
Esto puede incrementar el costo de la fermentacin y un encarecimiento del producto final.
El organismo debe ser capaz de crecer vigorosamente y rpidamente en el medio en uso.
La baja rapidez de crecimiento los expone a un gran riesgo de contaminacin.
La tasa de recambio de produccin de los materiales requeridos debe es baja en medios de cultivos
lentos, lo cual tiene como consecuencia un descenso e los beneficios.
Debe producir los materiales deseados, ya sean clulas o productos metablicos, en el menor
tiempo posible.
Sus productos finales no deben incluir materiales indeseables txicos y otros indeceables,
sobre todo si estos productos finales son para consumo interno.
El organismo debe tener una estabilidad gentica, y por lo tanto fisiolgica razonable.
Un organismo que muta fcilmente es un riesgo caro, ya que podra producir productos
indeaceables.
El organismo debe prestarse a un mtodo adecuado de la cosecha del producto al final de la
fermentacin.
Si una levadura y una bacteria fueran igual de adecuados para la fabricacin de un determinado
producto, sera mejor utilizar la levadura en caso de que el mtodo de recuperacin fuera la
centrifugacin.
Siempre que sea posible, se deben utilizar los organismos que tienen necesidades fisiolgicas
que los protegen contra la competencia de los contaminantes.
Un organismo con una productividad ptima a alta T, valores de pH bajos o que es capaz de elaborar
agentes inhibidores a los competidores
tiene una gran ventaja sobre otros.
El organismo debe ser
razonablemente resistentes a
depredadores como Bdellovibrio
spp o bacterifagos.
Cuando sea posible, el organismo
no debe ser demasiado
demandante de oxgeno, la
aireacin contribuye alrededor del
20% del coste del producto
acabado.
El organismo debe ser bastante
fcilmente susceptibles de
manipulacin gentica para
permitir el establecimiento de las
cepas con propiedades ms
aceptables.

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5. Bsqueda y seleccin de microorganismos de inters

La primera tarea para un microbilogo industrial es encontrar un microorganismo adecuado


para el uso en el proceso deseado.

Enfoques alternativos estn disponibles que van desde el aislamiento de microorganismos


- del entorno .
- usando tcnicas moleculares sofisticadas para modificar un microorganismo existente.

1.4 Fuentes de microorganismos utilizados en biotecnologa

a) Bsqueda de literatura y suministro de una coleccin de cultura.

Si uno est empezando de cero y no tiene idea de qu organismo produce un material industrial
deseado, puede buscar informacin
- en la web
- en la literatura, incluyendo literatura de patentes, acompaado por el contacto con una
o ms de las colecciones de cultivos establecidos y las oficinas reguladoras.

b) Aislamiento de nuevos organismos productores de metabolitos de importancia econmica

El buen conocimiento de la ubicuidad de los microorganismos implica que la mayora:

- Se pueden encontrar en cualquier sitio ecolgico. agua, aire, hojas troncos de rboles -
pueden proporcionar microorganismos.
- El suelo es la fuente preferida para el aislamiento de los organismos, debido a que es una
gran reserva de diversos organismos (mtodos de deteccin adecuados).
- En los ltimos tiempos, otros "nuevos" hbitats, especialmente el medio ambiente
marino, se han incluido en los hbitats a estudiar en las bsquedas de metabolitos
microbianos bioactivos o "bio-minera".
- Enriquecimiento con el sustrato utilizado por el organismo.
- Enriquecimiento con anlogos txicos del sustrato utilizado.
- Prueba de metabolitos microbianos para la actividad del bioactivo.

I. Prueba para la actividad anti-microbiana


II. Pruebas de inhibicin de la enzima
Primer mtodo: Para medir el producto de la reaccin entre una enzima
y su sustrato
Segundo mtodo: Para determinar la cantidad del sustrato que
no ha reaccionado.
III. Las pruebas para detectar los cambios morfolgicos en test fngicos de los
organismos
IV. La realizacin de las pruebas con animales en los metabolitos microbianos

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1.5 Mejora de la cepa

La capacidad de cualquier organismo para hacer cualquier producto en particular se basa en su


capacidad para la secrecin de un conjunto particular de enzimas (la composicin gentica de los
organismos).

a) La regulacin de la actividad de las enzimas secretadas por los organismos


b) El aumento de la permeabilidad (metabolitos secretados extracelularmente) de modo
que los productos microbianos pueden encontrar estos manera ms fcilmente fuera de
la clula;
c) Seleccin de cepas productoras adecuados a partir de una poblacin natural;
d) La manipulacin del aparato gentico existente en un organismo productor;
e) Introduccin de nuevas propiedades genticas en el organismo por tecnologa de ADN
recombinante o ingeniera gentica.

1.6 Seleccin de variantes naturales

La seleccin de este tipo no slo es lento, pero su curso es en gran parte fuera del control del
biotecnlogo, una condicin intolerable en el mundo altamente competitivo de la industria
moderna.

La manipulacin del genoma de los organismos industriales:

a) Las manipulaciones que NO impliquen ADN extrao

Mutacin natural convencional

Agentes fsicos. Luz ultravioleta o radiaciones ionizantes

Agentes qumicos. Actan sobre el ADN de los organismos de descanso o que no


se dividen, anlogos de ADN que se pueden incorporar en el ADN durante la
replicacin o aquellos que causan mutaciones de desplazamiento del marco.

Eleccin del mutgeno

Es importante la buena eleccin del mutgeno, ya que no todos los agentes mutagnicos
son igual de eficaces en todos los organismos.

Otros factores que hay que tener en cuenta, adems de la eficacia son:
La seguridad del mutgeno: muchos carcingenos son mutgenos
La simplicidad de la tcnica
fcil disponibilidad de los equipos y los productos qumicos necesarios.

Hay tres etapas antes de que un mutante pueda entrar en uso: la exposicin
de los organismos al mutgeno, la seleccin de mutantes y el screening.

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b) Las manipulaciones que involucren ADN EXTRAO
1. Transduccin
2. Transformacin
3. Conjugacin
4. Recombinacin para sexual. rara forma
de reproduccin sexual que acurre en
algunos hongos)
5. Fusin del protoplasto
6. Mutacin dirigida. Mutacin causada in
vitro, cambio dirigido a un sitio
especifico de la molcula de ADN.
7. Ingeniera metablica. Disea o
redisea vas metablicas a travs de la
manipulacin de genes para maximizar la produccin.
8. Ingeniera gentica

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TEMA 2. Bioingeniera de los procesos industriales

1. Medios de cultivo y nutricin de microorganismos industriales.


Todos los medios microbiolgicos, ya sea para uso industrial o para fines de laboratorio deben
satisfacer las necesidades del organismo en trminos de carbono, nitrgeno, minerales, factores
de crecimiento, y agua.

A gran escala, un medio se reunir el mayor nmero posible de los siguientes criterios:
1. Producir el rendimiento mximo de producto o biomasa por gramo de sustrato
utilizado.
2. Producir la concentracin mxima de producto o biomasa.
3. Permitir que la tasa mxima de formacin de producto.
4. Habr el rendimiento mnimo de productos no deseados.
5. Ser de una calidad consistente y estar disponible durante todo el ao.
6. Causar problemas mnimos durante la elaboracin y la esterilizacin de
los medios.
7. Causar un mnimo de problemas en otros aspectos, en particular de aireacin y
agitacin, extraccin, purificacin y tratamiento de residuos.

Se debe recordar que el medio seleccionado afectar


el diseo de fermentador para ser utilizado.

1.1 Criterios para la eleccin de materias primas utilizadas en los


medios industriales

Costo del material


Disponibilidad inmediata de la materia prima
Costos de transporte
Facilidad de eliminacin de los desechos resultantes
Uniformidad en la calidad de la materia prima
Composicin qumica adecuada del medio
Presencia de precursores pertinentes
Satisfaccin del crecimiento y la produccin

Existen algunas materias primas que se utilizan para agravar los medios industriales, como es el
licor de maz fermentado, molasas, harina de soja, etc.

Los factores de crecimiento son materiales que no son sintetizados por el organismo y por lo
tanto deben ser aadidos al medio. Por lo general, funcionan como cofactores de enzimas y
pueden ser vitaminas, nucletidos, etc.

El agua, a pesar de su importancia que a menudo es pasada por alto, garantiza la constancia de la
calidad del producto, debe ser analizada peridicamente en busca de minerales, color, pH, etc y
ajustarse segn sea necesaria.
1.2 Fuentes potenciales de los componentes de los medios
industriales

Hay algunas fuentes de las que podemos obtener los componentes necesarios para los medios
industriales.

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Como fuente de carbohidratos encontramos por ejemplo, el arroz, la papa, el ame Como
fuente de protenas tenemos la harina de pescado, la harina de sangre, etc.

1.3 El uso de los residuos de planta en medios de microbiologa


Industrial: sacarificacin de polisacridos

No solo son abundantes, sino que en comparacin con el petrleo, son una fuente importantes
de productos qumicos y adems son renovables. Sin embargo, contienen grandes cantidades de
polisacridos que no son inmediatamente utilizables por microorganismos industriales y tienen
que ser hidrolizados o sacarificados para proporcionar ms azucares disponibles.

Almidn
El almidn es una mezcla de dos polmeros de glucosa: la amilosa, un
polisacrido lineal (1-4) -D-glucano.
La Amilopectina, un polisacrido ramificado (1-4)/(1-6) -D-glucano.

Sacarificacin de almidn
Los grnulos cristalinos son altamente resistentes a la accin de la
enzima (se calientan a aproximadamente 55-82C, gelatinizan, se
disuelven en agua y pueden ser atacados por la enzima).

Uso de cidos. El material a ser hidrolizado se muele y se mezcla con cido clorhdrico diluido,
cido sulfrico o incluso cido sulfuroso.

Uso de enzimas. Las enzimas son llamadas colectivamente diastasas. Las

ventajas sobre el uso de cido:

- Puesto que el pH para la hidrlisis enzimtica es aproximadamente neutro, no hay


ninguna necesidad de buques especiales que deben soportar la alta T, P, y la corrosin.
- Las enzimas son ms especficos y por lo tanto hay menos reacciones secundarias
- La hidrlisis cida a menudo produce sales que pueden tener que ser eliminado
- Es posible utilizar concentraciones ms altas de los sustratos con las enzimas

1.4 Celulosa, hemicelulosas y lignina en el material vegetal

La celulosa, hemicelulosa y lignina se


encuentran en diferentes proporciones
en las plantas.

Las molculas de celulosa se componen


por unidades de glucosa, en cambio, las
molculas de hemicelulosa, en concreto
la pectina, se compone de cido
galacturnico y cido galacturnico
metilado.

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Por el contrario, la molcula de lignina es muy compleja, y por lo tanto muy difcil de degradar.

Existe un tratamiento previo a la sacarificacin, para los materiales que contienen celulosa.

El xito que tendr la biomasa como material ser crucial para la biotecnologa.

a) El precio relativo de las materias primas bsicas


b) La calidad, la variabilidad, la regularidad del suministro y la seguridad de las materias
primas
c) Los costos relativos de conversin de material de base qumica en comparacin con la
conversin de productos agrcolas
d) La prima concedida por el mercado "natural" como en comparacin con los productos
sintticos y la creciente exigencia de los productos son biodegradables

2. Crecimiento de microorganismos en diferentes ambientes: Definidos y


complejos.

Componentes de los medios y sus funciones

Son medios definidos o sintticos, los que estn hechos con reactivos conocidos. La adicion de
componentes qumicos es distinta. Tiene una relacin de composicin 2:1:1 de C:NH4SO4:K2PO4,
en 10 ml de una solucin de sal y 990ml de agua destilada.

Cuando el 0.05-0.5% de un extracto o preparacin vegetal o de carne se aade, se obtiene un


medio semidefinido.

Cuando se aaden pequeos extractos de levaduras, carne o peptonas de soja, extracto de


malta, hidrolizados de casena o licor de maceracin de maz, se obtiene un medio complejo.

Los medios de cultivo requieren ---> Energa y Otros componentes (necesarios para el creciemiento)

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Una fermentacin microbiana se caracteriza por fases distintas de crecimiento

Obvimente en la industria microbiolgica:

Ha desarrollado medios econmicos para


determinados procesos de bioreactores que
requieren una experiementacin de prueba-error.

Se han seleccionado, descubierto y/o


desarrollado organismos que son capaces de
utilizar gran cantidad de componentes (del medio),
y en consecuencia optimizan las condiciones del
cultivo (pH, temperatura, y/o tasa de xigeno
necesaria).

Las tasas medias se muestran representan productividades. Entre el punto A, el fermentador es


inoculado y en los puntos B o C, la fermentacin se detiene.

La mayor productividad coincide con la mayor pendiente.

Estas productividades son ms altas que las medidas en el contexto del proceso econmico,
donde el tiempo necesario para llevar a cabo una fermentacin incluye el tiempo de la propia
fermentacin ms el tiempo de respuesta.

Factores operacionales involucrados de la facturacin de un tanque incluyen

- Limpieza
- Esterilizacin
- Relleno
- Inoculacin
- El crecimiento celular
- Vaciar el recipiente

Expresiones para la tasa de crecimiento celular basada en el tiempo de duplicacin.

La generacin de clulas o masa de clulas X, est dada por X=X02n

El objetivo de una fermentacin prctica es


Maximizar la cantidad de producto obtenido por
unidad de volumen del recipiente de fermentacin.

La correlacin de la poblacin de clulas a la cantidad de producto formado requiere que los


coeficientes de rendimiento definido, tiene la siguiente forma general:

Los productos de cultivo microbiano se clasifican de acuerdo a su metabolismo de energa.

Hay tres tipos de patrones de fermentacin: Tipo I, II, o III. Que ayudan a correlacionar el
rendimiento de la tasa de acumulacin de masa celular. Diferentes proporciones de la glucosa se

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asimilaron a la masa de clulas, producto extracelular, la energa del crecimiento (calor) y energa
de mantenimiento.

Representacin esquemtica de las fermentaciones Tipos I (el producto principal es un


coproducto del metabolismo de la energa primaria) y fermentaciones Tipo II (producto es una
consecuencia indirecta del metabolismo energtico. El producto no se obtiene directamente de
la oxidacin de la fuente de carbono).

Ejemplos de Tipo III a (el metabolismo de la energa se maximiza con prcticamente ninguna
acumulacin de producto deseado, en la segunda fase de metabolismo oxidativo es
prcticamente terminado y la acumulacin de producto es mxima), tipo III b (dos fases de
crecimiento, con la segunda fase resulta en la formacin de los el producto).

Ejemplo de fermentacin Tipo III c (la propagacin del microorganismo se lleva a cabo para
maximizar la masa de clulas, y entonces la produccin de la protena es iniciada por un cambio en
la composicin en el caldo o la adicin de un inductor).

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3. Rutas metablicas para la biosntesis de productos microbianos:
metabolismo primario y metabolismo secundario.

1.1 Vas metablicas de la naturaleza

Para manipular microorganismos para producir el mximo de material de importancia econmica,


pero con costes mnimos, es importante que la fisiologa del organismo se conozca los mximo
posible.

- Anabolismo. Cuando las reacciones conducen a la formacin de una sustancia ms


compleja. Necesita ATP.
- Catabolismo. Cuando las reacciones conducen a compuestos menos complejos. Libera
ATP.

Los procesos metablicos


ocurren a menudo como una
serie de reacciones qumicas
secuenciales que convierten
compuestos de partida en
intermedios y, a continuacin, en
ltima instancia, en los
productos finales. Una va
metablica puede ser (a) lineal,
(b) ramificada, o (c) cclica.

Fuentes de carbono para el


catabolismo

Como principales fuentes de


carbono tenemos: el almidn, la
celulosa y la pectina.

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Esquema de Metabolismo (a) gluclisis, (b)
la va de las pentosas fosfato, (c) la etapa
de transicin, y (d) el ciclo del cido
tricarboxlico (TCA ciclo) se utilizan para
oxidar la glucosa gradualmente
completamente a CO2. En conjunto, estas
vas producen ATP, lo que reduce el
poder, y los intermediarios que actan
como metabolitos precursores
(representado como barras grises). (E) La
respiracin utiliza el poder reductor para
generar ATP por la fosforilacin oxidativa,
que emplea una molcula inorgnica
como un aceptor terminal de electrones.
(F) La fermentacin se detiene antes de
oxidar la glucosa completamente, y en su
lugar utiliza piruvato o un derivado como
aceptor de electrones.

El catabolismo de compuestos orgnicos


distintos de la glucosa. Las subunidades
de las macromolculas se degradan para
formar los metabolitos precursores
apropiados. Estos metabolitos pueden ser
oxidados a continuacin, ya sea en una de
las rutas metablicas centrales o ser
utilizados en el anabolismo.

El uso de precursores en la biosntesis de


metabolitos. El tamao de las flechas
indica la cantidad relativa de cada
precursor metabolito necesaria para
producir un peso dado de clulas de E.
coli.

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1.2 Los orgenes de metabolitos microbianos primarios y
secundarios cosechados por los procesos industriales.

A partir de estudios sobre el Penicillium urticae, se introdujeron los trminos


trophophase (griego, Tropho = nutriente) y idiophase (Idio = Peculiar) para distinguir
las dos fases en el crecimiento de organismos productores de metabolitos secundarios.

La sntesis secundaria se produce en la fase logartmica, y en la fase estacionaria. Se ha sugerido


que los metabolitos secundarios pueden describir como " idiolites" para distinguirlos de los
metabolitos primarios.
1.3 Produccin celular de metabolitos primarios.

Metabolitos primarios son los que se producen durante el crecimiento activo. En general es una
consecuencia del metabolismo energtico y necesaria para el continuo crecimiento de los
microorganismos.

Metabolitos secundarios se sintetizan despus de que la fase de crecimiento llega a su fin. Es el


resultado de complejas reacciones que se producen durante las ltimas etapas de crecimiento
primario.

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1.4 Productos microbiolgicos industriales como metabolitos
primarios y secundarios.

Productos del metabolismo primario

El metabolismo primario es el grupo reacciones interrelacionadas dentro de un microorganismo


que se asocian con el crecimiento y el mantenimiento de la vida.

Productos del metabolismo secundario

a) No tiene funcin aparente en el organismo . El organismo sigue existiendo si el


metabolismo secundario est bloqueado por un medio bioqumicos adecuados .
b) Se producen en respuesta a una restriccin en nutrientes. Por lo tanto, se producen
despus de la fase de crecimiento , al final de la fase logartmica de crecimiento y en la
fase estacionaria ( en un cultivo por lotes ).
c) Parece estar restringido a algunas especies de plantas y microorganismos (y en algunos
casos a los animales ). Los productos del metabolismo secundario tambin parecen ser
caractersticos de la especie.
d) Por lo general, tienen estructuras qumicas ' extraas ' e inusuales y varios
metabolitos estrechamente relacionados pueden ser producidos por el mismo
organismo en las cepas de tipo salvaje.
e) La capacidad de producir un metabolito secundario en particular, especialmente en
cepas industrialmente importantes, se pierde fcilmente . Este fenmeno se conoce
como la degeneracin cepa
f) La prdida de la capacidad de sintetizar metabolitos secundarios, particularmente
cuando se trata con colorantes de acridina (u otros tratamientos conocidos para inducir
la prdida de plsmido), sugiere que es controlada por plsmidos (por lo menos en
algunos casos) en lugar de por los cromosomas del organismo .
g) Los factores que activan el metabolismo secundario, los inductores, tambin provocan
cambios morfolgicos (morfognesis) en el organismo.

1.5 Papel de la metabolitos secundarios en fisiologa de los


organismos que los producen

Las hiptesis previas indicaron que son materiales de almacenamiento de alimentos

1. La hiptesis de la competencia. Los metabolitos secundarios ( antibiticos) permitir que


el organismo productor de soportar la competencia por la comida de otros organismos
del suelo.
2. La hiptesis de mantenimiento. Metabolismo secundario por lo general ocurre con el
agotamiento de un nutriente vital, como la glucosa.
3. La hiptesis de un crecimiento desequilibrado. Los mecanismos de control en algunos
organismos son demasiado dbiles para prevenir la excesiva sntesis de algunos
metabolitos primarios .
4. La hiptesis de desintoxicacin. Las molculas acumuladas en la clula se destoxifican
para producir antibiticos ( cido penicilnico es ms txico para Penicillium
chrysogenum que bencil penicilina : Sin embargo no se han observado muchos
precursores txicos de antibiticos )

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5. La hiptesis reguladora. Produccin de metabolitos secundarios se sabe que est
asociada con la diferenciacin morfolgica en la produccin de organismos.
6. La hiptesis del metabolismo secundario, como la expresin de las reacciones evolutivas.
Zahner ha presentado un papel ms emocionante para el metabolismo secundario. Las
propiedades antibiticas de algunos metabolitos secundarios son incidentales y no un
diseo para proteger a los microorganismos.

1.6 Rutas de sntesis de metabolitos primarios y secundarios de


importancia industrial

La principal fuente de carbono y energa en los medios industriales son los hidratos de carbono.
El catabolismo de estos compuestos suministrar los esqueletos de carbono para la sntesis de
primarios, as como para los metabolitos secundarios.

Catabolismo de hidratos de carbono


Las vas catablicas (bacterias, actinomicetos y hongos):

- Embden-Meyerhof-Parma ED
- Va de las Pentosas fosfato PPS
- Entner Duodoroff ED
- Fosfocetolasa

Catabolismo de los hidrocarburos


Aunque el precio del crudo sigue aumentando, junto con otros hidrocarburos siguen utilizndose
en algunas fermentaciones como fuentes esqueleto de energa y carbono.

Alcanos: Los alcanos son hidrocarburos que tienen la frmula general C2Hn +2 saturados. Cuando
se utilizan los alcanos, el grupo metilo terminal generalmente se oxida al correspondiente
alcohol primario por lo tanto:

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Alquenos: Los alquenos son hidrocarburos insaturados y
contienen muchos enlaces dobles, puede ser oxidado en el
grupo metilo terminal como los alcanos o ser oxidado en el doble
enlace en el extremo opuesto de la molcula por el oxgeno
molecular dado lugar a un diol.

1.7 Vas de carbono para la formacin de algunos productos


industriales derivados de metabolismo primario

La formacin de los productos industriales resultantes del metabolismo primario puede ser
examinada en dos categoras:

Productos catablicos resultante de la fermentacin de cido pirvico. A travs de


la EMP, PP, o ED va

Productos anablicos. Incluyen aminocidos, enzimas, cido ctrico, y cidos nucleicos.


Las vas de carbono se analiza para cada producto.

Las vas de fermentacin. Caminos alternativos a partir de piruvato a productos finales, muchos
de los cuales se utilizan para la alimentacin o la industria. Las diferentes especies llevan a cabo
diferentes porciones de las vas que se muestran.

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Los sustratos para la biosntesis. Los sustratos para la biosntesis de lpidos y aminocidos se
derivan de las vas anfiblica de la gluclisis y el ciclo del TCA. Acetil-CoA une estas dos vas y
sirve como un sustrato para la biosntesis de muchos productos.

Las caractersticas comunes de la sntesis de metabolitos secundarios

1. La conversin de un sustrato normal, en importantes compuestos intermedios de


metabolismo general
2. El conjunto de estos productos intermedios de una manera inusual, por medio de una
combinacin de mecanismos generales estndar a partir de un nmero relativamente
pequeo de mecanismo especial
3. Estos mecanismos especiales de la metabolismo secundario no estn relacionados con el
mecanismo general o primaria
4. La actividad sinttica de metabolismo secundario aparece en respuesta a las condiciones
favorables para la multiplicacin celular

Los metabolitos secundarios pueden entonces ser clasificados de acuerdo a los siguientes seis vas
metablicas.

Los productos secundarios derivados del esqueleto de la glucosa intacta


Los productos secundarios relacionados con nuclesidos
Los productos secundarios derivados a travs de la Va shikimato-corismato
La va de polictido
Los terpenos y esteroides
Los compuestos derivados de aminocidos

4. Superproduccin de metabolitos por microorganismos.

1.1 Mecanismos que permiten a los microorganismos evitar la


sobreproduccin de productos metablicos primarios mediante la
regulacin enzimtica.

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1. Induccin por substrato. Las enzimas producen slo cuando el sustrato sobre el que actan
est disponible en la medio. Base molecular para la induccin de una enzima.
El Modelo Jacob-Monod del control (negativo) de la sntesis de protenas.

1.2 Desarreglo o anulacin de los mecanismos reguladores de la


sobreproduccin de metabolitos primarios

Los mecanismos de los microorganismos regulan su metabolismo asegurando que no haya una
sobreproduccin de metabolitos y por lo tanto evitan el desperdicio de bloques de energa.

Los mtodos utilizados para el trastorno del control metablico de los metabolitos primarios
sern discutidos en los siguientes epgrafes:

a) El control metablico
regulacin de la retroalimentacin
la restriccin de la actividad enzimtica
b) Control de la permeabilidad.

1.3 Regulacin de la sobreproduccin de metabolitos secundarios

La base fisiolgica de la produccin de metabolitos secundarios est mucho menos estudiada y


comprendida que la de los metabolismos primarios. Sin embargo, tambin existen evidencias
crecientes de que los controles son similares a los discutidos anteriormente para los metabolitos
primarios.

i. Induccin
ii. Regulacin catablica
1. regulacin catablica por carbono
2. regulacin catablica por nitrgeno
iii. Regulacin por Feedback
1. auto-inhibicin por metabolitos secundarios

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1.4 Mtodos empricos utilizados para desorganizar
mecanismos regulatorios en la produccin de metabolitos
secundarios

Mutaciones: las variantes de origen natural de los organismos que han mostrado
evidencia de buena productividad son sometidos a mutaciones

Efecto estimulante de los precursores: Ej. Metionina a la sntesis de aflatoxinas


por Aspergillus parasiticus L-citurullin, a la formacin de mitomicina por
Streptomyces verticillatus

Compuestos inorgnicos: Fosfato y manganeso (estimula la trophophase e


idiophase, respectivamente)

Temperatura: Rango de temperatura que permite un buen crecimiento (en el


trophophase) se extiende por aproximadamente 25 C entre los microorganismos.
(Metabolitos secundarios en el orden de slo 5 a 10 C).77

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TEMA 3. Fermentadores y tipos de fermentaciones
Un fermentador es un recipiente para el crecimiento de microorganismos que, aunque no
permite la contaminacin, permite la provisin de las condiciones necesarias para la produccin
mxima de los productos deseados.

En la industria qumica, los buques en los que tienen lugar las reacciones se denominan
reactores. Fermentadores por lo tanto tambin se conocen como biorreactores.

Los fermentadores pueden ser agrupados de varias maneras.

En relacin con la forma o configuracin: En relacin con el oxgeno:

- Estado slido, tambin conocido - Aireado


como superficie (SSF) - Anaerbico
- Estado lquido, tambin
conocido como sumergido (SF)

En relacin con el proceso: En relacin con los microorganismos:

- Discontinua - Monosptico o monocultivo


- Fed-batch - Varias especies o cultivos mixtos
- Continua

Tipos de fermentaciones

En fermentaciones de estado slido, los microorganismos crecen en un slido hmedo, con poco
o nada de agua "libre", aunque el agua capilar puede estar presente. Ej. La fabricacin de queso,
pan, caf, estircol.

En fermentaciones sumergidas, pueden utilizar un sustrato disuelto (por ejemplo, solucin de


azcar) o un sustrato slido en suspensin en una gran cantidad de agua para formar una
suspensin. Ej. La produccin de la penicilina, la insulina recombinante, cerveza, y muchos otros
productos.

Fermentaciones de estado slido y sumergida pueden ser:

Procesos aerbicos que requieren oxgeno Ej. Produccin de compost


SSF Procesos anaerbicos en la ausencia de oxgeno Ej. Productos crnicos
fermentados como el pepperoni y salami
Procesos aerbicos que requieren oxgeno Ej. La produccin de penicilina por
SF Penicillium chrysogenum
Procesos anaerobios en ausencia de oxgeno Ej. Produccin de yogur

Para cada proceso de la biotecnologa, el sistema de contencin adecuado se disea para dar
ambiente correcta para optimizar el crecimiento y la actividad metablica de los
biocatalizadores.

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1. Diseo de fermentadores

Funcin principal: Proporcionar un entorno adecuado en el que un organismo pueda producir


eficientemente un producto de destino.

La mayora estn diseados para mantener altas concentraciones de biomasa, esenciales para
muchos procesos de fermentacin, mientras que las estrategias de control dependen en gran
medida del proceso concreto y sus objetivos especficos.

La realizacin de cualquier fermentador depende de muchos factores, pero los parmetros


fsicos y qumicos fundamentales que deben ser controlados son: la velocidad de agitacin, la
transferencia de oxgeno, el pH, la temperatura y la produccin de espuma.

Las fermentaciones de laboratorio pueden llevarse a cabo en botellas o frascos cnicos que
pueden ser sacudidas para proporcionar aireacin cuando sea necesario.

Los procesos industriales, los fermentadores (hasta varios cientos de miles de litros) son en su
mayora propsito-construido y diseado para un proceso especfico, aunque puede ser
necesario cierto grado de flexibilidad en ciertos casos.

Su diseo, la calidad de la construccin, el funcionamiento y el nivel de sofisticacin depende en


gran medida de:
a. El organismo de produccin
b. Las condiciones ptimas de operacin necesarios para la formacin del
producto deseado
c. El valor del producto
d. La escala de la produccin

1.1 Directrices para lograr la optimizacin del sistema de


biorreactor

1. El biorreactor debe ser diseado para excluir la entrada de microorganismos


contaminantes, as como conteniendo los organismos deseados.
2. El volumen de cultivo debe permanecer constante, es decir, no hay fugas o evaporacin.
3. El nivel de oxgeno disuelto se debe mantener por encima de los niveles crticos de
aireacin y agitacin para el cultivo de organismos aerbicos.
4. Los parmetros ambientales, tales como temperatura, pH, etc, deben ser controlados
y el volumen de cultivo deben estar bien mezclados.

Los dos aspectos ms relevantes son el rendimiento y la productividad. El rendimiento


representa la cantidad de producto obtenido a partir del sustrato. La productividad especifica la
tasa de formacin de producto.

Para comprender y controlar un proceso de fermentacin es necesario conocer el estado del


proceso en un pequeo incremento de tiempo para saber cmo el organismo responde a un
conjunto de condiciones ambientales mensurables.

La optimizacin de procesos requiere un control de


retroalimentacin precisa y rpida (ordenador sensores)

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Las configuraciones de biorreactores han cambiado considerablemente en las ltimas dcadas.
La mayora de los fermentadores utilizados en la industria son del tipo sumergido, porque ahorra
espacio y es ms susceptible de control de ingeniera y diseo.

Las partes ms
importantes son: La
carcasa exterior (de Es necesario utilizar
acero inoxidable) y la diferentes tipos de
carcasa suele estar aspas, ya que el
rodeada por una camisa proceso mejora el
de refrigeracin. Sensor proceso final.
de pH: Aade cido o
base, para mantener el
pH. Tambin hay
sensores de espuma, Esta enorme
que en ese caso aaden versatilidad
un antiespumante. Las tambin ocurre
aspas, que cambian en con los
funcin del fermentadores.
microorganismo que
exista. Debe existir una
buena condicin de
cizallamiento.

1.2 Tipos de productos de bioreaciones

a) Procesos en los que el producto se produce por las clulas es ya sea


extracelulares, por ejemplo, alcoholes o cidos crtico, o intracelular,
por ejemplo, un metabolito o enzima. Estos productos celulares se
dividen en dos tipos, metabolitos primarios o metabolitos
secundarios.
b) Los procesos que producen una masa de clulas. Levaduras para
panificacin, se utiliza en la industria y una sola clula de protenas
de coccin para las fuentes de alimentos, son dos ejemplos.
c) Los procesos que modifican un compuesto que se aade al proceso
de fermentacin se conocen como biotransformaciones.

2. Fermentadores aerbicos
Las decisiones tomadas en el diseo del biorreactor pueden tener un impacto significativo en el
El biorreactor es el rendimiento general del proceso. Tambin se requieren conocimientos de cintica de la reaccin,
corazn de la masa y balances de energa, mezcla, transferencia de masa y la transferencia de calor.
cualquier proceso
qumico, ya que la
etapa bilgica, el El biorreactor es el corazn de cualquier proceso bioqumico.
bio, en perfecto
funcionamiento, El rendimiento de cualquier biorreactor depende de muchas funciones, tales como:
no sirve.

La concentracin de biomasa Eliminacin del producto


Condiciones estriles Inhibicin del producto
Agitaciones eficaces La aireacin
La eliminacin de calor Metabolismos / actividades
Condiciones de corte correctos microbianas
Suministro de nutrientes

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Hay tres grupos de biorreactores actualmente en uso para la produccin industrial:

1. No se agitado, el sistema no aireado: alrededor del 70% de los biorreactores estn en


esta categora.
2. No agitado, sistema aireado: alrededor del 10% de los biorreactores.
3. Agitado y aireado sistemas: alrededor del 20% de los biorreactores en la operacin
industrial.

Los biorreactores aerobios se clasifican en funcin de cmo se distribuye el gas (de aireacin).

Reactor de tanque agitado


Biorreactor ciclo de presin del puente areo
Biorreactor Loop (lazo)
Sistema de inmovilizado
Lecho fluidizado (fluidificado) Los de la izquierda agitacin mecnica
con todas sus variantes, y los otros, de
Trickle bed (Lecho de goteo) agitacin neumtica.
Fed-batch reactor mixto.
El diseo del reactor permite que el
Lote reactor de mezcla: mezclado se realice de manera correcta.
por lotes
lote alimentado
continua

Biorreactor de tanque agitado utiliza El diseo simple de un biorreactor proyecto-


deflectores y un agitador para la mezcla tubo concntrico con resultados de flujo
ptima, y recicla biomasa. descendente de lquido anulares en menos
mantenimiento.

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Un reactor de bucle externo puente areo Un lecho por goteo donde el percolador
induce a la circulacin que dirige el aire / adherido emplea, enzimas inmovilizadas
lquido a travs del recipiente. para llevar a cabo una reaccin.

(A) la fermentacin por lotes (Sist. Cerrado); (b) cultivo por lote alimentado, (c) de flujo continuo
bien mezclado fermentacin (lo mismo que se aade sale); (d) tapn de fermentacin continua
de flujo con y sin reciclado, (e) de fermentacin continua bien mezclada con reciclado de
biomasa concentrada (las depuradoras, etapa 2aria, todos los microorg estn metb activo, en
el tanque de sedimentacin se acumula el lodo 1ario, una parte circula y otra es reciclada.

Tpicamente, un cultivo iniciador puro (o semilla) se utiliza para inocular placas de Petri estriles
o medio lquido en matraces de agitacin. Despus de un crecimiento suficiente, el precultivo se
utiliz para inocular el fermentador de "semilla".

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1.1 Ventajas y desventajas de los sistemas de biorreaccin en
lotes (Sistema cerrado)

Reduccin del riesgo de contaminacin o mutacin de las clulas, debido a un perodo


relativamente breve de crecimiento.
La inversin de capital menor en comparacin con los procesos de continuos para el
mismo volumen del biorreactor.
Mayor flexibilidad con diferentes productos / sistemas biolgicos.
Los niveles de conversin de materias primas ms altas, como resultado de un perodo
de crecimiento controlado.

Los niveles de productividad ms bajos debido a el tiempo de llenado, calefaccin,


esterilizacin, vaciado, limpieza del reactor.
Mayor atencin a la instrumentacin debido a la esterilizacin frecuente.
Mayor gasto incurrido en la preparacin de varias subculturas para la inoculacin.
Los mayores costos de mano de obra y / o control de procesos para que este proceso no
estacionario.
Higiene industrial ms grande corre riesgo debido al contacto potencial con
microorganismos o toxinas patgenas.

Aplicaciones de biorreactores incluyen

- Productos que deben ser producidos con un riesgo mnimo de contaminacin o


mutacin organismo.
- Operaciones en las que se producen slo pequeas cantidades de producto.
- Los procesos que utilizan un reactor para hacer varios productos.
- Procesos por lotes o semicontinuo, en los que la separacin del producto es adecuada.

Los mtodos de cultivos continuos


Turbidostato
Un volumen constante de un cultivo microbiano se mantiene a la densidad o la turbidez
constante.
Todos los nutrientes estn presentes en exceso
La densidad o la turbidez es controlado por una clula fotoelctrica que reduce o aumenta la tasa
de produccin de entrada y el caldo de medio, segn sea necesario.

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Quimiostato

Una poblacin se mantiene constante en un volumen constante por el uso de cantidades sub-
mximos de nutriente (s)

1.2 Ventajas y desventajas de los sistemas continuos por lotes

Aumento del potencial para la automatizacin del proceso.


Reduccin del costo de trabajo a la hora de preparar el fermentador, debido a la
automatizacin.
El tiempo no productivo gasta menos en el vaciado, llenado y esterilizacin del reactor.
La calidad constante del producto, debido a los parmetros de funcionamiento
invariables.
Disminucin de los riesgos de toxicidad para el personal, debido a la automatizacin.
Reduccin de la tensin (estrs) en los instrumentos debido a la esterilizacin (los
materiales deben esterilizarse una vez se reinicia cada esterilizacin en los cerrados).

Flexibilidad mnima (de algunos parmetros), ya que son posibles (la composicin del
medio, O2, y T) slo ligeras variaciones en el proceso.
Obligatorio uniformidad de la calidad de la materia prima es necesaria para
garantizar que el proceso sea continuo (Existe una homog, en el producto).
Mayores costos de inversin en equipos de control y automatizacin y la esterilizacin
continua.
Mayores costos de procesamiento con la reposicin continua de sustratos no solubles,
slidos, tales como paja.
Mayor riesgo de contaminacin y mutacin de las clulas, debido al relativamente breve
perodo de cultivo. La frecuencia de divisin
tambin aumenta la posibilidad
de mutacin, no cualquier micr.
Aplicaciones de lotes continuos incluyen sirve para cualquier proceso, se
debe saber cmo se regula la
- Los procesos con alto volumen de produccin; actividad y como se regula a lo
largo del tiempo, si es
- Los procesos que utilizan gas, lquido o sustratos slidos solubles; codificada por plsmidos o no.
- Procesos que involucran microorganismos con alta estabilidad de mutacin.
- Productos finales tpicos incluyen vinagre, levadura de panadero y aguas residuales
tratadas

1.3 Ventajas y desventajas de los sistemas semicontnuos

Mayor rendimiento, como resultado de un perodo de cultivo bien definido en el que se


aaden o eliminan sin clulas.
Aumento de la oportunidad para la optimizacin de las condiciones ambientales de los
microorganismos en lo que se refiere a la fase de crecimiento o la produccin y la edad
de la cultura.
Operacin casi estacionaria, importante con microorganismos con pocas mutaciones y
aquellos en riesgo de contaminacin.

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Los niveles de productividad son ms bajos debido a procedimientos que requieren
mucho tiempo de llenado, calefaccin, esterilizacin, refrigeracin, vaciado y limpieza
del reactor.
Mayores gastos en mano de obra y / o el control dinmico de proceso para el proceso.

Aplicaciones de lotes semicontinuos incluyen

- Cuando los mtodos continuos no son factibles (ligera mutacin o la contaminacin del
microorganismo se produce).
- Cuando los mtodos de proceso por lotes no ofrecen los niveles de productividad
deseados.

1.4 Fermentacin sumergida

Equipo de fermentacin sumergida est diseado comnmente para cultivos monospticos y es


capaz de ser esterilizado por vapor bajo presin.

(a) fermentador de tanque agitado, (b) de columna de burbujas, (c) fermentador de transporte
areo de bucle interno, (d) fermentador de transporte areo de bucle externo, (e) fermentador
de lecho fluidizado, (f) fermentador de lecho de goteo.

1.5 Fermentacin en estado slido

Los dispositivos de la fermentacin en estado slido varan mucho en la sofisticacin tcnica.

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a) Fermentador en bandeja (hongos microscpicos). Un recipiente con diferentes bandejas, que deben cumplir una serie de caractersticas. Se
deben mantener las condiciones de pH, humedad, aireacin y temperatura. Los nutrientes estn en la bandeja, la bandeja se regula con
nutrientes. Y la temperatura suele ser mantenida por una adecuada aireacin y un adecuado proceso de mezclado. Tras un tiempo x, se recoge
la bandeja y se retira el producto.

Deben tener agua (humedad,


temp, aireacin y pH
controlados).
Se puede llevar a cabo en
diferentes fermentadores.

La estrategia en todos es la
misma, lo nico que cambia es
las caractersticas del
fermentador.
b) Fermentador en lecho esttico,
una lmina que est perforada,
por la parte inferior metemos aire
c) Fermentador en tnel cmara
a presin, el aire sube y va
mucho ms alargada e inclinada,
oxigenando esa biomasa vegetal,
para recoger el drenaje que pueda
los procesos se minimizan,
provenir. La lamina es porosa para
manteniendo la temperatura
que, entre el aire, presenta un
estable. El aire sale por la parte
motor (rueda), cuyo objetivo es
superior.
provocar un proceso de mezclado
con una cierta frecuencia. Hay
agua adherida, est hidratado.

d) Fermentador de disco
rotatorio, con dos pisos. Hay un
e) Fermentador con tanque
tornillo sin fin, que lleva el
agitado, hay un tubo que gira en
material (biomasa vegetal),
torno al sustrato, aqu el sustrato
rompiendo el mat. Vegetal y
es de tipo lechoso.
arrastrndolo al mezclador:
continua su transformacin y el
otro tornillo sin fin va eliminando
el producto.

g) Fermentador en tornillo
continuo, un solo tornillo con una
f) Fermentador con bidn
frecuencia, desde que entra hasta
rotatorio, una serie de lminas
que cae, es el tiempo necesario
que mezclan el producto, se va
hasta que los microorganismos
aireando tambin y finalmente se
llegan al punto de madurez o
recoge el fermentado para tener
producen el producto.
el producto final.

1.6 ventajas y desventajas del sustrato solido comparado con la


fermentacin lquida

Suelen ser sustratos naturales, ms Suele estar limitado a hongos


baratos que los procesados. porque crecen mejor.

El menor contenido en humedad El calor metablico crea


facilita la economa del sistema, problemas, por eso una
existe una menor contaminacin, y adecuada aireacin previene el
en muchos casos no necesita aumento de temperatura
esterilizacin del sustrato inicial. Si
acaso enriquecer. El reactor no est bien
desarrollado.
Los requerimientos de oxigenacin,
Existen limitaciones en el
Rendimiento del producto alto. producto.

Existe una menor tasa de


crecimiento de los
microorganismos, (los hongos
por naturaleza)

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3. Fermentadores (Biorreactores) anaerbicos

"Algunos procesos" no requieren los altos niveles de O2 (fermentaciones anaerbicas), aunque


en trminos estrictos algunos pueden ser microaeroflicos (PO2 baja).
no son de uso comn en la industria.
Sin embargo
han sido utilizados de manera continua / semicontinua.

- Para tratar las aguas residuales orgnicas a partir de (sistemas aerbicos / anaerbicos)
domsticos e industriales
- Para convertir material orgnico biodegradable para el metano, dixido de carbono y
nueva biomasa microbiana.

1.1 Construccin y operacin

1. Aireacin vigorosa a travs de burbujeo de aire est ausente


2. La agitacin, para lograr una distribucin uniforme de los organismos, los nutrientes y la
temperatura
3. El medio se introduce en el fermentador mientras est caliente para evitar la absorcin
de los gases dentro del tanque de fermentacin.
4. El fermentador se llena en s tanto como sea posible, con el fin de evitar un espacio
areo que introducir oxgeno.
5. Si es deseable anaerobiosis estricta, a continuacin, un gas inerte (N2) tal como
nitrgeno puede ser soplado a travs de la fermentacin, as se podrn expulsar los
restos de oxgeno.
6. Algunos compuestos redox bajo, como la cistena, se puede introducir en el medio

Ejemplos de..
fermentaciones
anaerbicas.

Los procesos anaerobios


suelen operar a una
temperatura de 35 C. A
fin de mantener esta
temperatura, el gas
metano generado en el
proceso se usa para
calentar el reactor.

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Los reactores anaerbicos (tratamiento de aguas residuales anaerobia). (a) Es similar a un filtro
de goteo en el que se genera una biopelcula en los medios. La cama est totalmente sumergida y
puede ser operada ya sea flujo ascendente o descendente. (b) Puede ser considerado como un
lodo activado anaerbico porque el lodo se recicla a partir de un clarificador o separador al
reactor. (c) El reactor consiste en una capa de arena sobre la que se cultiva la biomasa. (d) En
condiciones adecuadas el lodo anaerbico se desarrollar en forma de grnulos de alta densidad.
Estos formarn un manto de lodo en el reactor.

4. Escalado de las fermentaciones industriales: de las factoras


microbianas a las factoras industriales

1.1 Desde las fbricas microbianas a fbricas industriales

Fermentaciones industriales se inician con clulas


microbianas que actan como fbricas de vivir.
(Muchos procesos de fermentacin comercial se han
elaborado en primero a pequea escala en un laboratorio y
luego a gran escala)

Los fermentadores estn hechos de materiales que puede


soportar la presin y son a prueba de herrumbre, no txico,
y prueba de fugas (sistemas de 5 galones utilizados en los
laboratorios de investigacin de mayor, 5,000 a 100,000
galones en algunas industrias, a los tanques de 250 hasta
500 millones de galones).

Para un rendimiento ptimo, un fermentador debe


duplicar las acciones que ocurren en un volumen pequeo
(tubo de ensayo) en una escala masiva.

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"SCALE-UP persigue la fabricacin de grandes cantidades de productos, si es posible, con un
aumento simultneo o por lo menos en la consistencia de los rendimientos especficos y la
calidad del producto"

- Scale-up es importante porque los procesos industriales rara vez se comportan de la


misma manera en fermentadores a gran escala como en el equipo de laboratorio a
pequea escala
- Muchos de los retos de escalados surgen de problemas con aireacin y mezcla (medios
de cultivo ricos utilizados en las fermentaciones industriales soportan altas densidades
de clulas, y esto conduce a la alta demanda de oxgeno).

1.2 Desarrollo de un proceso industrial

1. Todo comienza en el matraz de laboratorio.


2. A partir de aqu, se escala hasta el fermentador de laboratorio, un pequeo
recipiente, generalmente hechos de vidrio y de 1 a 10 litros de tamao. En el
fermentador de laboratorio es posible probar las variaciones en los medios de
cultivo, temperatura, pH, y otros parmetros, de forma rpida y econmica.
3. Cuando estas pruebas tienen xito, el proceso se escala hasta la fase de planta
piloto (escala piloto para ver si hay alguna variacin), por lo general en
fermentadores de 300 - a la capacidad de 3.000 litros. Aqu las condiciones se
aproximan ms a las del fermentador comercial real, pero el costo no es un
problema.
4. Finalmente, el proceso se mueve al mismo fermentador comercial, 10,000-500,000
litros de volumen.

1.3 Scale-up problemas


Reduccin de la calidad de mezcla y una mayor exposicin al estrs:
- Las distancias ms largas para ser cubiertas conducen a un sustrato m grande y
zonas de agotamiento de oxgeno.
- Los mayores volmenes de caldo de cultivo son agitados y con ello ya los tiempos
de mezcla, pues se debe insuflar el aire con ms presin.
- Fuertes gradientes de presin hidrulica que influyen en la tasa de transferencia de
oxgeno.
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Cambios metablicos
Segn los conocimientos actuales
el estrs provocado por cambios en la gluclisis, ciclo de citrato y de los involucrados en la
anaerobia y la fermentacin cido mixta, se conduce cambios en las rutas biosintticas de
aminocidos acoplados.

Entre las posibles medidas para mejorar la precisin de los procesos metablicos

- Reduccin del tiempo de generacin y los nmeros de generacin en todo el proceso.


- Deceleracin de la velocidad metablica, por ejemplo, a travs de la reduccin de
la temperatura.
- Desarrollo ms cepas microbianas resistentes al estrs (ms estables).

Estabilidad del plsmido

La estabilidad del plsmido (gentica) se ve influida por las propiedades de plsmidos,


incluyendo:
Tamao y la secuencia de nucletidos.
Los antecedentes genticos del husped.
Los parmetros del proceso: T, tasas de crecimiento y [S]
Un concepto para representar la estabilidad del plsmido y tasas de expresin es la aplicacin de
plsmidos fugitivos, replicar independientemente de las clulas microbianas (elevada cantidad de
copias y de productividad).

1.4 Biocatlisis
El uso de un biocatalizador para promover la transformacin qumica de un sustrato dado en un
producto, de una manera chemo-/regio-/stereo-selective (los productos pueden ser obtenidos
mediante transformacin qumica, pero se necesita mucha inversin y no siempre se
garantiza, pero aqu s est garantizado), bajo condiciones suaves, controladas.

El biocatalizador puede ser o bien una enzima aislada o una clula entera que contiene la enzima
requerida (s).

De acuerdo con la naturaleza del biocatalizador, la transformacin se etiqueta generalmente


como biocatlisis o biotransformacin (amplio trmino "bioconversin").

1.5 El diseo del sistema bioconversin


Biocatalizador
Seleccin de varias caractersticas tienen que ser tomadas en consideracin. Estos incluyen la
actividad, selectividad, y estabilidad a trabajar en las condiciones operativas requeridas (pH, T,
composicin del medio, el sustrato, la concentracin de producto).

Enfoques en la eleccin del biocatalizador:


- El uso de biocatalizadores existente
- La modificacin gentica de los biocatalizadores existentes
- La deteccin de nuevos biocatalizadores

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Clulas o Enzimas aisladas?

- Se recomienda el uso de una enzima aislada de la catlisis de una reaccin de un solo


paso, a condicin de que el aislamiento es sencillo y barato y la enzima resultante es
estable en un medio libre de clulas.

- En comparacin con enzimas aisladas, los biocatalizadores de clulas completas son


generalmente ms rpido y ms barato, y probablemente ms estable a largo plazo.

- Las bioconversiones de clulas enteras tienden a mostrar tasas de transformacin


ms bajas que las enzimas libres, ms o menos por un factor de uno o dos rdenes de
magnitud, debido a las limitaciones de transferencia de masa causadas por las
paredes celulares y las membranas celulares.

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1.6 Ventajas y desventajas de la inmovilizacin de
biocatalizadores

VENTAJAS DESVENTAJAS

Clasificacin de los mtodos de inmovilizacin

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Las representaciones esquemticas de las enzimas inmovilizadas: (a) la enzima inmovilizada
covalentemente sobre un soporte slido; (b) enzima adsorbido en la superficie de partculas
slidas a travs de intercambio inico; (c) enzima atrapado dentro de la clula microbiana que se
ha matado a travs de tratamiento trmico, manteniendo al mismo tiempo enzimtica actividad,
as como la permeabilidad de la membrana de la clula a menor - molecular - sustratos de peso y
productos; (d) la enzima retenida dentro del reactor de membrana.

Efecto de la inmovilizacin sobre la cintica y las propiedades de biocatalizador:


Efectos conformacionales. Los cambios en la estructura terciaria de las
enzimas en la unin a un soporte slido.
Efectos estricos. Obstculos tridimensionales que limitan el evaluar del sustrato.
Efectos de la particin. Cuando el vehculo est cargado o tiene una naturaleza
hidrfila
/ hidrfoba.
Efectos de transferencia de masa. El sustrato debe migrar de la solucin para el
sitio activo del biocatalizador. Resistencia a la difusin se lleva a cabo a lo largo de la
reaccin, por tanto, la reaccin global velocidad de reaccin global depende de la
concentracin
de sustrato.
Varios efectos. Los cambios en la especificidad, cintica, trmica, ... en
comparacin con la forma libre.

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TEMA 4. Bioingeniera de los procesos industriales
Produccin de Sustancias
Los pasos generales en la produccin en masa de sustancias orgnicas en un fermentador son:
1. Introduccin de microbios y medios estriles en la cmara de reaccin
2. Fermentacin
3. La elaboracin secundaria (recuperacin, purificacin y envasado de productos)
4. La eliminacin de los residuos.

Todas las fases de produccin deben ser llevadas a cabo aspticamente y monitoreados (por lo
general por ordenador) para la tasa de flujo (velocidad) y la calidad del producto.

1. Esterilidad en microbiologa industrial


La disposicin general de una planta de fermentacin para la produccin industrial de frmacos,
enzimas, combustibles, vitaminas y aminocidos.

Debe
desarrollarse
por un lado el
microorganis
mo, y por otro
los materiales
y sistemas
requeridos
para la
fermentacin.

Los requisitos bsicos en la consideracin de desinfeccin y esterilizacin de los procesos o


productos

Debe matar todo lo que Debe ser:


no nos interesa. - Seguro
- Compatible
- Y mostrar eficacia microbiana

El orden ascendente de la resistencia microbiana a los desinfectantes y esterilizantes (puede variar


enormemente dependiendo de la desinfeccin o esterilizacin utilizado. Resistencia Prion, por
ejemplo, sigue siendo objeto de debate).

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1.1 Esterilizacin de aire y medio de fermentacin

- El aire es, invariablemente, se esteriliza por filtros de membrana (en fermentadores slidos, ni
importa la contaminacin).
- El medio de cultivo puede ser esterilizado junto con el fermentador, o por separado.
Por calentamiento a 121 C, durante 20 - 30 min.
Medios sensibles al calor se esterilizan por filtracin.
Algunas fermentaciones, una parte del medio por el calor y componentes
sensible por filtracin.
- Las soluciones de agua y de sal se esterilizan por microfiltracin.

Para esterilizar un gran volumen de medio es mucho tiempo con los procesos de
calentamiento y enfriamiento son lentos.

Para evitar esto, se utiliza a menudo una operacin de esterilizacin continua.

El medio crudo se precalienta de temperatura ambiente


a una temperatura algo superior.

1.2 La esterilizacin continua de medio de fermentacin

El medio crudo se precalienta desde la temperatura


ambiente a una temperatura algo ms alta. El medio
precalentado a continuacin, fluye a travs de un
calentador que eleva an ms la temperatura a alrededor
de 150 C. El medio caliente se mueve a travs de una
"bobina de explotacin" que se asegura de que el medio se
mantiene a 150 C durante unos segundos (2-4 s). El medio
caliente se enfra ms a la temperatura de fermentacin y
desemboca directamente en el fermentador que se ha
preesterilizadas vaca.

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Las prdidas debidas a la contaminacin pueden ser explicados por:

a) El contaminante puede utilizar los componentes del medio para producir productos no
deseados
b) El contaminante puede alterar las condiciones ambientales tales como el pH o el
potencial redox
c) La contaminacin por organismos lticos (fagos o Bdellovibrio) podra destruir el
organismo productor.
d) Los contaminantes podran incluso, si no reducen el rendimiento en un producto,
producir subproductos no extrables en el proceso de extraccin.

1.3 Mtodos fsicos

a) Asepsia: implica limpieza general observado habitualmente en muchas industrias


b) Filtracin: usado para fluidos libres (gases y lquidos), el polvo y otras
partculas y microorganismos.
Filtros absolutos. Sus poros no son lo suficientemente grandes
como para admitir un microorganismo y, por tanto, deberan
ser tericamente muy eficientes.
Filtros fibrosos. Est hecho de fibras de lana, algodn, vidrio o
escorias de mineral, cuyos dimetros son del orden de 0,5 a 15
um.

c) Calor: se puede aplicar como


Calor seco, para esterilizar material de vidrio en una pequea escala en la
industria de los laboratorios asociados (algunos tipos de filtros de aire).
Principalmente, se utiliza para la esterilizacin de aire por compresin.
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Calor hmedo, se puede emplear en la industria para matar los
microorganismos durante la ebullicin, tindalizacin, autoclave, etc.
Tindalizacin. consiste en ebullicin el material para una media hora en
tres das consecutivos. Ej. Medios donde la filtracin no es posible por
alguna razn, incluyendo que el medio es demasiado viscoso para la
filtracin
Pasteurizacin. consiste en exponer el alimento o material a una
temperatura durante un perodo suficientemente largo para destruir los
organismos patgenos o de descomposicin. Se puede utilizar ya sea ser
por lotes (LTLT) o continua (HTST). Ej. Ampliamente utilizado en la
industria alimentaria. Se utiliza para el tratamiento de la cerveza y el
vino
Vapor bajo presin. es til por las siguientes razones:
a) El contenido calrico alto y por lo tanto una alta
capacidad de esterilizacin.
b) El vapor libera su calor a una temperatura fcilmente
controlada y constante.
c) Puede ser producido y distribuido con bastante facilidad.
d) No hay productos de desecho desagradables son el resultado
de su uso y es limpio, inodoro e inspido.
Desventajas: no es adecuado para la esterilizacin de los suelos anhidras,
grasas, polvos, y su eficacia, puede ser limitado en la presencia de aire.

Hmedo. Vapor en el que falta el calor suficiente para mantener a


todo el vapor en la fase de vapor gaseoso.
Saturado. Todo el vapor de agua est en la fase de vapor; hay un
equilibrio entre ella y el agua a cualquier temperatura y presin.
Sobrecalentado. Sin agua lquida est presente y la temperatura es
ms alta que la del vapor saturado a la misma presin.

d) Radiaciones: Las longitudes de onda ms poderosas son las de rayos gamma, mientras que
los menos poderosas son las ondas de radio.
Radiaciones ionizantes. Son ondas electromagnticas extremadamente alta
frecuencia (rayos X y rayos gamma) .. Ej. para esterilizar jeringas de plstico,
guantes de goma, etc
La luz ultravioleta (UV). Oscila entre 100 y 400 nm. El "rango germinacin cidal"
es de aproximadamente 200 a 300 nm (254 nm). Ej. Principalmente en la
superficie.

1.4 Mtodos qumicos

a) Quimio-Esterilizantes: Mata a ambas clulas vegetativas y esporas.

1. Debe ser eficaz a bajas concentraciones.


2. Los componentes del medio no deberan verse afectadas, cuando se utiliza para
los medios.

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3. Cualquier subproducto resultante de la utilizacin debe ser eliminado o ser inocuo.
4. Debe ser eficaz en condiciones ambientales.
5. Hay que actuar con rapidez, ser de bajo costo y ser de fcil acceso.
6. Debe ser no inflamable, no explosivo, y no txico.

Gases esterilizantes: oxido de etileno, oxido de propileno,


formaldehido, dixido de sulfuro, metilobromido, -propiolactona.

Otros esterilizantes

Cloro: ampliamente utilizado en la industria como soluciones de


hipoclorito. Se utiliza para las tuberas de lavado en las cerveceras y
otros establecimientos y en la industria lctea para la esterilizacin de
los utensilios.
Fenol: Y los derivados son ampliamente utilizados como.

Ozono, perxido de hidrogeno y compuestos de amonio


cuaternarios.

b) Desinfectantes: Puedeno matar las esporas, incluso tampoco a algunas clulas


vegetativas, pero por lo menos mata a los organismos no deseados.

1.5 Aspectos de la esterilizacin en la industria

a) La esterilizacin del fermentador y sus accesorios

El vapor es el mtodo ms prctico para la esterilizacin fermentador pero a veces, el medio


puede ser esterilizado por separado. Las sondas tambin deben ser esterilizadas (O2, CO2, pH,
espuma, ...).

b) La esterilizacin de medios

Los productos de degradacin pueden ser resultado de la calefaccin. El pH suele caer con la
esterilizacin. La mayora de los medios habran sido esterilizados a una temperatura de 120-125
C durante 15-20 minutos. Aceites (antiespumantes) son ms difciles de esterilizar. El orden y el
nmero de la adicin de los diversos componentes del medio pueden ser importantes.

Esterilizacin de medianas termolbil. Los


medios termolbiles pueden esterilizarse por
tindalizacin.
Por lotes vs esterilizacin continua. Consigue
en la esterilizacin continua en perodos
mucho ms cortos que con la esterilizacin por
lotes.

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Temperature-time Relationships in
Continuous and Batch Sterilization

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La inyeccin directa de vapor de agua en el medio. // La esterilizacin del medio travs de placas
climatizadas, el vapor no se inyecta directamente en el medio. Tenga en cuenta que en ambos
mtodos se mantiene el medio en una seccin de retencin durante un periodo de tiempo

1.6 Virus (fagos) en microbiologa industrial

Los virus son importantes en la microbiologa industrial por al menos dos razones:

1. Los que son patgenas para el hombre y los animales se utilizan para fabricar vacunas
contra la enfermedad causada por los virus.
2. Los virus pueden causar prdidas econmicas por la destruccin de los microorganismos
utilizados en unas fermentaciones.

Most phages attacking


industrial organisms
are to be found in
groups A, B, C. Groups
D, E, and F attack
industrial organisms
less frequently if at all.

Lisis de los Ejrcitos por fagos


La perturbacin en la fermentacin industrial depende de
Los tipos de fagos.
El tiempo y el perodo de infectar fago.
La composicin del medio.
Las condiciones fsicas y qumicas generales del fermentador

Prevencin de la contaminacin de fagos

Los fagos son ubicuos y estn presentes en el aire, agua, suelo, etc. La primera regla de oro para
evitar la contaminacin del fago, por tanto, es la limpieza general de la rutina y la asepsia

El uso de fagos mutantes resistentes

Los fagos pueden ser introducidos como contaminantes directos o ser lisognicos en el
organismo que se utiliza en la fermentacin.
Los mutantes son tan productivos como el parental original, pero resistentes a varios fagos
contaminantes.

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La inhibicin de la multiplicacin del fago con productos qumicos

El uso de agentes quelantes (0,2-0,3% de tripolifosfato; 0,1 0,2% de citrato) inhiben la


adsorcin del fago a su anfitrin.
Detergentes no inicos, polietileno glicol monoster tambin inhiben la adsorcin.
La adicin de Fe2+ suprime la lisis celular por fagos.
Se pueden aadir antibiticos para prevenir el crecimiento de fagos (Ej. Chloramphe- Nicol
inhibe la replicacin de la protena en las clulas infectadas por fagos).

El uso de adecuadas condiciones de medios y otras prcticas

Condiciones y prcticas que afectan negativamente a los fagos:


Medios desfavorable (pH alto, bajo Ca2 +, citratos, sales con cationes reaccionar con
grupos-SH).
La pasteurizacin final de la cerveza y la alta temperatura de incubacin consistente con
la produccin se debe utilizar.

2. Aireacin y agitacin
1.1 Aireacin

Algunos fermentaciones operan en condiciones anaerobias, pero la mayora son aerbicas y


requieren grandes cantidades de aire oxgeno normalmente estril.

La aireacin tambin es til para purgar productos metablicos voltiles no deseados del medio.

El aire comprimido que entra un fermentador (a travs de un sistema de rociador) por lo general
se despoja de la humedad y los vapores de aceite que pueden originarse en el compresor.

Solubilidad y transferencia est influenciada por:

1. Las condiciones fsicas que prevalecen; T, P y rea de superficie de las burbujas de aire
/ oxgeno
2. El composicin qumica del medio
3. El volumen de gas introducido / V Tiempo de reactor / unidad
4. El tipo de sistema de rociado, utilizado para introducir aire en el fermentador
5. La velocidad de agitacin
6. Una combinacin de estos factores

1.2 Balance de masa de oxgeno


La velocidad a la que el oxgeno se puede entregar al sistema biolgico (tasa de transferencia de
oxgeno, OTR). La velocidad a la que se utiliza por los microorganismos (demanda de oxgeno
crtico).

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Elevar la presin,
Para subir OTR Enriquece la entrada de aire con oxgeno
Aumentar las tasas de agitacin y flujo de
aire.
La OTR se determina por la fuerza motriz, el gradiente de oxgeno, y la resistencia a la
transferencia de oxgeno.

C * = concentracin de oxgeno disuelto saturado (mmol/dm3);


CL = concentracin de oxgeno en el momento t (mmol/dm3);
KL = coeficiente de transferencia de masa (cm / h), es decir, la suma de los recprocos de las
residencias de la transferencia de oxgeno de la gaseosa a la fase lquida;
a = rea de interfase gas-lquido por volumen de lquido (cm2/cm3).

Cabe sealar que tanto KL y a son difciles de medir por separado y


por lo general estn unidos entre s como Kla, el coeficiente de
transferencia de masa volumtrica (por hora).

Para transferir oxgeno de la fase gaseosa a una clula o sitio de


reaccin individual, debe pasar a travs de varios puntos de
resistencia.

1.3 Agitacin

1. Se realiza con el fin de mezclar las tres fases:

La fase lquida contiene nutrientes y metabolitos disueltos


La fase gaseosa es predominantemente de oxgeno y dixido de carbono
La fase slida se compone de las clulas y los sustratos slidos que pueden estar
presentes.

2. Una mezcla eficiente debe producir condiciones homogneas y promover la transferencia


de nutrientes, gas y calor.

3. Prolonga la retencin de burbujas de aire en suspensin, reduce el tamao de burbuja para


aumentar el rea de superficie para la transferencia de oxgeno, impide la coalescencia de
burbujas y disminuye el espesor de la pelcula en la interfase gas-lquido.

4. El mantenimiento de condiciones de cizallamiento adecuados ...

... ciertos sistemas de agitacin desarrollan alto cizallamiento que pueden daar las
clulas sensibles al cizallamiento.
porque
... sistemas de baja cizalladura pueden conducir a la floculacin o el crecimiento celular no
deseado en las superficies.

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1.4 Mecanismos de agitacin del fermentador

a) Reactores de tanque agitado (STR)

Los deflectores, generalmente placas verticales planas, con


un ancho de aproximadamente la dcima parte del
dimetro de los vasos (para mezclar, la transferencia de
masa aumentando la turbulencia, lo que impide la
formacin de torbellinos y la eliminacin de "espacios
muertos".

Eficacia de la agitacin depende del diseo de las palas del


impulsor, la velocidad de agitacin y la profundidad de
lquido (La mayora de los RTS tienen h / d proporciones de
3:1 o 4:01).

b) Los sistemas neumticos

Ej. fermentadores de transporte areo


No tienen partes mviles y el uso de la expansin del gas
comprimido para producir la mezcla.
Menos necesidad de energa
Crear menor cizalladura de STRs
Lquido movimiento es iniciado por la inyeccin de aire
comprimido en la parte inferior de la columna de la
canalizacin vertical interno o externo
Las burbujas de aire se expanden en el tubo ascendente
causando el movimiento ascendente del lquido y el inicio de su
ciclo dentro del fermentador.

c) Mecanismos hidrodinmicos

Ej. fermentadores de profundidad de chorro

Utilizar la energa cintica lquida para mezclar los contenidos del


fermentador (usando una bomba de lquido para uso externo para
la circulacin externa y reinyeccin.

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La mezcla de nutrientes y el intercambio gaseoso dentro de cualquier fermentador est
influenciada por:
Densidad del medio y reologa
El tamao y la geometra de la embarcacin
Cantidad de energa utilizada en el sistema

3. Tcnicas para el control de parmetros: manuales y automticos

Sistemas de fermentacin deben ser controlados de manera eficiente con el fin de optimizar la
productividad y el rendimiento del producto, y asegurar la reproducibilidad.

Los parmetros fsicos y qumicos clave que participan en gran medida dependendel
biorreactor, de su modo de operacin y del microorganismo.

Son principalmente:
Aireacin
Mezclar
Temperatura
pH
Control de la espuma

Control y de mantenimiento a niveles ptimos el interior del reactor est mediado por los
sensores (electrodos):

1. Sensores que penetran en el interior del fermentador. (por ejemplo, electrodos de


pH, electrodos de oxgeno disuelto)

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2. Sensores que operan sobre muestras que se extrae continuamente del fermentador
(por ejemplo, analizadores de gases de escape)

3. Los sensores que no estn en contacto con el caldo de fermentacin o de los gases
(por ejemplo, tacmetros, clulas de carga)

En relacin con su solicitud de control de procesos

Sensor in-line. Es una parte integrada del equipo de fermentacin y el valor medido
obtenido a partir de que se utiliza directamente para el control del proceso.
Sensor on-line. Es una parte integral del equipo de fermentacin, el valor medido no se
puede utilizar directamente para el control. Un operador debe introducir los valores
medidos en el sistema de control.
Sensor off-line. No es parte del equipamiento de fermentacin. El valor medido no se
puede utilizar directamente para el control de proceso. Se necesita un operador para la
medicin real (por ejemplo, anlisis medio o peso de la muestra seca).

1.1 Control de la temperatura en un fermentador

El calor debe ser eliminado para mantener la Temperatura y una ptima productividad.

En pequeos fermentadores de laboratorio, sumergiendo el tanque


en un bao de agua.
En las fermentadores medianos, por una camisa de agua fra que
circula fuera del tanque o simplemente bandose cilindro sin forrar
con agua.
En grandes fermentadores, haciendo circular agua refrigerada en
tuberas dentro del fermentador y, a veces fuera de l tambin.

1.2 Medicin y control del pH

El control del pH se puede lograr mediante tampones naturales presentes en el medio o


mediante sondas de pH esterilizables.

Tampones naturales presentes en el medio. Ej. Fosfatos y carbonato de calcio (temporal)


El caldo deben por lo tanto ser muestreados y el pH se ajust con cido o base (laboriosa)
Sondas de pH esterilizables. Estos electrodos monitorear los cambios de pH y
automticamente inducir la introduccin en el medio de cido o alcalino. Medicin de
dixido de carbono

1.3 Medicin de Dixido de Carbono

Su medicin ayuda a determinar el curso de la fermentacin. Los equipos actuales emplean tres principios

- Depende de la capacidad para absorber infrarrojos. Un sensor traduce esta absorcin


a un rcord
- El gas efluente que sale de la caldo se burbujeo (solucin diluida, de NaOH con rojo de
fenol). El cambio de color es spectrofotometrically registradas y la cantidad de CO2 se
pueden calcular a partir de una curva patrn.
- Depende de las conductividades trmicas de los diferentes gases en una mezcla.

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1.4 Determinacin y control de oxgeno

Los mtodos qumicos:

Winkler, que se utiliza de manera rutinaria para determinar la DBO del agua. Se basa en la
valoracin por retroceso, con el yodo y el almidn, de la sal de manganeso oxidada aadida al
lquido a analizar (las sustancias que interfieren estn normalmente presentes en los caldos de
fermentacin).

Sondas modernas de oxgeno disuelto son esterilizables en autoclave y se basan en uno o el otro de
dos principios:

Polarogrfica

Un aspecto negativo de corriente elctrica 0.6-0.8 en el voltaje pasa a travs de un electrodo


(ctodo: platino u oro) inmerso en un electrolito hecho de cloruro de potasio neutral (nodo:
calomelanos o Ag / Ag CI)

Galvnico

No se aplica ninguna fuente externa de electricidad. En lugar de la electricidad generada entre


un nodo de metal de base (zinc, plomo, cadmio o) y el ctodo de metal noble (plata u oro) es
suficiente para causar la reduccin de oxgeno en el ctodo.

Estructura de los electrodos de oxgeno: (a) polarogrfica (b) galvnico

La corriente que se mide despus de que ha pasado a travs del electrolito es proporcional a la
reaccin de oxgeno disuelto en el ctodo. Una membrana de plstico permeable a los gases pero
no iones separa el ctodo, nodo, y el electrolito desde el lquido a ser estudiado. El oxgeno
disuelto se difunde a travs de la membrana y su reaccin en el ctodo se mide en el medidor de
corriente. El electrolito pronto se agota por la sustitucin constante de Cl-por-OH (vanse las
ecuaciones de arriba) y el electrolito tiene que ser reemplazado.

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1.5 Produccin y control de espuma

Las dispersiones de gas en lquido como resultado de la agitacin / aireacin, con consecuencias
indeseables

a) Para dar cabida a las espumas se pierde un espacio considerable (35-45%), la


aireacin mxima y agitacin no se pueden introducir.
b) Si la espuma se escapa, la contaminacin se puede introducir.
c) Los nutrientes pueden ser retirados del medio de flotacin por espuma ...
d) El producto de fermentacin se puede retirar en caso de que sea susceptible de
flotacin de espuma
e) La prdida de los microorganismos tambin podra ocurrir fcilmente por flotacin
lo que conduce tambin a una disminucin del rendimiento.

La formacin de espuma y desaparicin durante el curso de la


fermentacin depende de la composicin del medio, as como de
la naturaleza y la actividad de los microorganismos que toman
parte en la fermentacin.

Para el control de la espuma se utilizan los siguientes mtodos:

a) Modificacin de la composicin del medio


b) los interruptores de espuma mecnico
c) La adicin de antiespumantes qumicos.

Antiespumantes mecnicos.
En general, actan dispersando fsicamente las espumas por el rpido rompindolos.

Los controles qumicos de las espumas se han clasificado en:


- Antiespumantes, para evitar la formacin de espuma.
- Antiespumantes, para derribar espumas formadas.

Adiciones automticas antiespumantes

Depende de una sonda que se activa cuando las espumas se elevan


y hacen contacto con la sonda. Ej. antiespumante Wick. La espuma
dibuj algunos antiespumante teniendo contacto con una mecha.
(Mtodos modernos son sistemas elctricamente activados).

Propiedades de antiespumantes

El antiespumante debe ser miscible con el lquido de formacin de


espuma, y ...

a) No ser txico para los microorganismos y animales superiores


b) No tiener ningn efecto en el sabor ni el olor (en las propiedades organolpticas de
los productos terminados).
c) Ser autoclavable.

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d) No ser metabolizado por los microorganismos.
e) No perjudicar la transferencia de oxgeno.
f) Activo en concentraciones pequeas, baratas y persistente.

1.6 Control por ordenador

Ventajas esperadas de la informatizacin:

1) Reducir el trabajo al eliminar la intervencin manual.


2) El trabajo del operador ms fcil, reducir el error humano, para hacer cambios mientras
est en la fermentacin.
3) til para cumplir con todos los requisitos reglamentarios y mejorar las operaciones de
fermentacin.
4) Mucho ms fcil de estudiar el efecto de la alteracin de las variables, ... de oxgeno
disuelto, temperatura, pH, flujo de aire, nutrientes
5) El control de calidad debe ser ms fcil de realizar.
6) En caso de fallo de alimentacin, el sistema debe ser capaz de callarse y reiniciar y poco
a poco al nivel original.

4. Extraccin de productos de la fermentacin

1.1 Extraccin y purificacin de productos de fermentacin

Puede ser difcil y costoso. Lo ideal es que uno trate de obtener un producto de alta calidad, tan
pronto como sea posible, a una tasa de recuperacin eficiente y usando la mnima inversin de
plantas a un coste mnimo.

El proceso seleccionado (su costo relativo) depender del producto especfico. Ej. 15% para el
etanol industrial, 20-30% para mayor penicilina G y hasta el 70% para las enzimas.

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1.2 Factores a tener en cuenta el mtodo de extraccin

El valor del producto final


El grado de pureza requerido para hacer el producto final aceptable (potencial
de ingresos rendimiento)
Las propiedades fsicas qumicas / del producto
La ubicacin del producto en la mezcla (es libre dentro del medio, o es unido de clulas)
La ubicacin y las propiedades de las impurezas
La relacin coste-eficacia o el atractivo econmica de los procedimientos de
aislamiento alternativos disponibles

1.3 Extraccin de slidos

a) Filtracin

- El filtro de vaco rotatorio


Un cilindro rotatorio hueco dividido en cuatro particiones y cubierto con
un metal o gasa tela.
- Filtros de tipo de timbre y de alambre
Constan de un revestimiento de tierra de diatomeas en un alambre de
malla soportada por un bastidor de barras de metal.

b) Centrifugacin

No se usa mucho para la separacin primaria de slidos (muchas industrias han operado
con xito con filtros)

c) Coagulacin y floculacin

La primera es inducida por los electrolitos y la ltima por polielectrolitos, de alto peso
molecular, compuestos solubles en agua que se pueden obtener en formas inicas,
aninicas o catinicos.

Seccin transversal del filtro de vaco rotatorio

1.4 Aislamiento de productos primarios

Despus de la separacin en fracciones solubles e insolubles, el siguiente proceso depende de


la ubicacin del producto deseado:

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Las clulas propias como en las levaduras pueden ser el producto deseado. Estn secas
o refrigeradas y el lquido descartado.
El producto requerido se puede unir a los micelios o a las clulas bacterianas, las clulas
a continuacin, tienen que ser interrumpidas con cualquiera de las disferentes maneras
disponibles (calor, mecnicamente, ..)
Cuando el material est disponible extracelularmente, o si se ha obtenido por lixiviacin
con o sin disrupcin celular luego puede ser tratada por extraccin de lquido, extraccin
de la disociacin, sorcin, precipitacin ...
1.5 Interrupcin de la clula

Mtodos mecnicos
Homogenizadores ... muy alta presin (hasta 1.500 bar)
Molinos de bolas ... molino de bolas con pequeas partculas abrasivas
Disrupcin ultrasnica ... sonido de alta frecuencia

Mtodos no mecnicos
Permeabilizacin qumica ... con disolventes orgnicos
Permeabilizacin mecnica ... como choque osmtico
Permeabilizacin enzimtica... limitado a la liberacin de enzimas periplsmicas o
superficiales

Extraccin de lquido

Se utiliza para transferir un soluto de un disolvente en otra en la que es ms soluble (tambin se


utiliza para separar los slidos solubles)

Extraccin de disociacin

Cuando los productos son o bases dbiles o cidos, se extraen en


condiciones de pH alto o condiciones de pH bajo, respectivamente.

Adsorcin de intercambio inico

Caldos de fermentacin pueden ser purificados y concentrados


utilizando resinas de intercambio inico compactas.

Precipitacin

La insolubilidad de muchas sales se utiliza en el aislamiento selectivo de algunos productos


industriales, en particular de impurezas proteinceas o en el aislamiento de enzimas.
1.6 Purificacin

1. Cromatografa
Cromatografa de adsorcin ... variaciones en las fuerzas dbiles solutos
vinculantes

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Cromatografa de particin ... columna que contiene una fase lquida
inmovilizada
Cromatografa de intercambio inico ... diferir en la fuerza de la unin qumica
La filtracin del gel ... capacidad de las molculas de diferentes tamaos /
formas de permear
2. Decoloracin de Carbono. Algunos slidos son capaces de adsorber y concentrar ciertas
sustancias.
3. Cristalizacin. Se concentra por calentamiento y evaporacin a presin atmosfrica.

1.7 Aislamiento de productos

a) Elaboracin de productos cristalinos.

Productos cristalinos son libres de filtrado y no compresible. Los cristales se lavan, se secan, o an
ms la eliminacin del disolvente.

b) El secado de los productos directamente de la solucin.

El secado depender de la naturaleza fsica del producto acabado. Se


puede considerar bajo dos aspectos:
Eliminacin de la humedad en fase lquida.
Eliminacin de la humedad en fase slida.

Eliminacin de la humedad en fase lquida


El secado se realiza calentando el material y la eliminacin del vapor
de agua resultante.

Secadores de bandeja: Consiste simplemente en estantes calentados


en un solo gabinete que puede ser evacuado al vaco.

Tambor secador: El caldo o suspensin se aplica a la periferia de un


tambor giratorio climatizado. Alta temperatura se aplica aunque por un
breve periodo de tiempo.

El secado por aspersin: La introduccin de una fina pulverizacin del


lquido a secar contra una contracorriente de aire caliente (secado de
materiales sensibles al calor, tales como las drogas, el plasma y la
leche).

Eliminacin de la humedad en fase slida (liofilizacin)


En esencia, el mismo descrito anteriormente. La principal diferencia es
que el material se congela primero. En este estado, los evapora tarifas
de agua directamente desde el material (materiales termolbiles tales
como enzimas, bacterias, y antibiticos)

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TEMA 5. Compuestos qumicos de inters
industrial.

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MICROBIOLOGA INDUSTRIAL OBJETIVOS PARA EL XITO COMERCIAL

Un producto microbiano o aparato pueden surgir de un laboratorio industrial, o


puede ser concebido por un cientfico de investigacin con el objetivo de
satisfacer una necesidad imperiosa en la sociedad.
Ej. Una empresa sin fines de lucro para el
desarrollo de vacunas ; Una empresa con fines de
lucro desarrolla medicamentos y dispositivos.

El objetivo clave es el xito en el mercado.

Las ventas del producto deben cubrir los costos de


las materias primas y la produccin y generar un beneficio para los
accionistas.

El xito requiere ...

1.Identificar un producto til


Los productos incluyen pequeas molculas, como los antibiticos; protenas humanas, etc.

2.Aislamiento de un microbio para producir el producto


Un producto novedoso, generalmente se descubri en un microbio de origen natural.

3. Produccin a gran escala


La cepa debe ser cultivado en una escala industrial, y el producto aislado / purificado.

4.Desarrollo de un plan de negocios


Obtener socios cualificados en la gestin industrial, finanzas y marketing.

5.Seguridad y pruebas de eficacia


Exigir a muchos niveles de la prueba clnica para su aprobacin (agencias gubernamentales).

6. Marketing eficaz
Para convencer a los clientes de su superioridad con respecto a los productos o procesos actuales.

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1. Produccin de cidos orgnicos: cidos ctrico, actico, etc.

Compuestos orgnicos simples

Compuestos orgnicos simples tales como disolventes y cidos orgnicos se pueden fabricar con
la ayuda de microorganismos.

- Solventes: Etanol(alcohol etlico), butanol, acetona y glicerol.


- cidos: actico. Lctico, y ctrico.

Un gran nmero de cidos orgnicos con usos reales o potenciales son producidas por
microorganismos:

lctico mevalnico
ctrico giberlico
saliclico itacnico
actico diaminopimlico
mlico cidos propinicos
tartrico glucnico

(algunos de los cidos cuya produccin microbiana han sido patentados).

1.1 cido ctrico

Algunos usos:

Usos en la industria alimentaria. El acidulante principal que se utiliza en jaleas,


mermeladas, dulces, refrescos .Para condimento artificial en diversos alimentos, como
los refrescos.
Usos en la medicina y la farmacia. El citrato de sodio; transfusin de sangre, para prevenir
la coagulacin de la sangre. Como poderes efervescentes (CO2 a partir de cido ctrico y
NaCO3H).
Usos en la industria cosmtica. En lociones astringentes, como para despus del afeitado,
ya que su bajo pH. En enjuagues de pelo y fluidos de pelo y de ajuste de la peluca.
Diversos usos en la industria. En la galvanoplastia, el curtido de pieles y en la eliminacin
de hierro la obstruccin de los poros de la arena en los pozos de petrleo de edad.
Forma la base de fabricacin de detergentes en lugar de fosfatos, ya que ste da lugar a
la eutrofizacin.

El uso de la melaza y varias cepas de (J.N. Currie, 1917) Aspergillus niger


y (C. Whemer, 1893) Penicillium, baja productividad.

A partir de azcar... En los ltimos tiempos las levaduras, especialmente Candida


spp. (incluyendo C. guilliermondii)

Las parafinas (1970) (Japn)

Arthrobacter paraffineus, Candida lipolytica


Corynebacteria Bacteria + Levadura
Oleiphila Candida.

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a) Fermentacin de superficie

El uso de Aspergillus niger en el salvado de arroz, Japn: cepas especiales de Asp. niger, en
solucin lquida en plancas de aluminio o sartenes de acero inoxidable.

b) Fermentacin sumergida

- Son necesarios materiales cido-resistentes al fermentados como el acero inoxidable


- Las fuentes de carbono son melaza descationizadas por intercambio inico sacarosa o
glucosa.
- MgSO4(1%) y KH2PO4 (0,05-2%) (en la restriccin de la fermentacin sumergida de
fosfato no es necesario).
- El pH no se permite mayor que 3,5.
- Cu de hasta 500 ppm antagonista de la enzima aconitasa (que requiere Fe)
- La adicin de 1-5% de metanol, isopranol o etanol para la fermentacin (con materiales
no purificados) aumentar el rendimiento.

c) Fermentacin en sustrato-solido

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El cido ctrico puede ser acumulado por uno de los mtodos siguientes:

a) Por mutacin
- Organismos mutantes que slo pueden utilizar parte de una ruta metablica

- Mutantes reguladores; mutantes que carecen de una enzima del ciclo

b) Por inhibicin
Inhibir el libre flujo del ciclo al alterar las condiciones ambientales:
- Temperatura
- pH
- Composicin del medio
(especialmente la eliminacin de los iones y cofactores esenciales para las enzimas
particulares).

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Estrategias para alterar las condiciones ambientales:

1. Para limitar las concentraciones de Fe, Mn, Mg, Zn, y PO4


(usando resinas de intercambio de iones de ferrocianuro o, para eliminar los
iones)
2. Anaerobiosis inhibir deshidrogenasas (ISOC-DH)

3. bajo pH y la presencia de cido ctrico inhibe el TCA.


(Para esto, evitar la precipitacin del cido ctrico formado)

4. Muchas de las enzimas de la TCA puede ser inhibida por varios


compuestos (DH isoctrico por ferrocianuro y cido ctrico; aconitasa por DH
fluorocitrato y succnico por malonato)

Mecanismo de Recuperacin del cido Ctrico (En los dos procesos de fermentacin):

1. Precipitacin
- La mezcla se filtrahasta transparencia: es liquada + Ca (OH)2; Ratio 2:1; 50C, 20
min. 100% Ppdo.
o El caldo se filtra y es lavado (con agua deionizada)
- Se trata con sulfrico: (Ca SO4) + lquido que contiene el cido ctrico
- Se trata con: carbn activado + cationes y aniones exgenos.
- Se concentra (20-25C) CITRIC ACID-H2O; (>36,5C) CITRIC ACID.

2. Extraccin
- Se usa..
o Trideculamina o triisononilamina con ..
o Ester insoluble en agua, ketona o alcohol.

3. Absordcin
- Se usa una mezcla de
o N-octyl alcohol,
o Synthetic isoparaffin petroleum hydrocarbons -Tridodecylamine

1. El caldo se filtra hasta transparencia.


Citrato calcio se precipita por la adicin de magnesio-libre Ca(OH)2
Citrato de calcio se filtra y la torta de filtro se trata con cido sulfrico para precipitar el
calcio.
El solucin con cido ctrico se purifica con carbn activado y pasando a travs de lechos
de intercambio de hierro.
2. El cido diluido se evapora para producir cristales de citrato.
3. Promover la purificacin puede ser necesario (aplicaciones farmacuticas).

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1.2 cido actico

Tipos de vinagre:

1. El vinagre de sidra, el vinagre de manzana.


2. Vinagre de vino, vinagre de uva.
3. Vinagre de malta.
4. Azcar, glucosa, frutos secos.
5. Vinagre de alcohol.
6. Algunos vinagres de especialidad.
a) Vinagres de hierbas: EJ. El ajo, la albahaca, el estragn, la canela, el clavo de olor,
nuez moscada
b) Vinagres de frutas: EJ. Frambuesa; vinagre con un sabor agridulce.
c) Vinagre balsmico: De blanco / azcar uvas Trebbiano (fruta tarda). Uva cocido
'debe' (jugo) madurado por una fermentacin larga y lenta.
d) Vinagre de vino rojo frambuesa: sabor a frambuesa natural proporcionan un color
rojo oscuro caracterstico y un sabor picante de frambuesa, pero delicada.
e) Otros vinagres: de coco y caa de vinagres (India, Filipinas, Indonesia); vinagre fecha
(Oriente Medio)

Producto de dos fermentaciones:

- LEVADURA ... fermentacin alcohlica


- BACTERIAS ... del alcohol

Sustrato:
La fermentacin alcohlica vara entre localidades
Europa Continental ... vinagre de vino (a partir de uvas)
Reino Unido ... vinagre de malta
Estados Unidos ... utiliza tanto malta y vinos vinagres

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Lejano Oriente, Japn y China ... usa vinagre de arroz
Malasia ... usar la pia
Los pases tropicales ... vino de palma (de aceite de palma o rafia)

Composicin y especificaciones

Definida por los reglamentos establecidos por los gobiernos. Ej. EE.UU.: El cido actico, no
inferior a 4,0% (w/v). Contenido en 14C de origen biolgico. Metanol no ms de 0,5% (v/v).
cidez Total Espaa: Mnimo 50 g / L . Alcohol residual Mximo 1,5 por 100V/V

Produccin industrial de cido actico


Como un producto qumico industrial se produce en la actualidad a partir de combustibles fsiles
y productos qumicos por tres procesos:

- Oxidacin de acetaldehdo
- Oxidacin de hidrocarburos
- Carbonilacin del metanol

Tambin puede ser producido por rutas biolgicas utilizando una ruta ...
- aerbico
- anaerbico

d) Proceso aerbico
1. Produccin de etanol a partir de una fuente de carbohidratos. 30-32C Anaerbico.

Saccharomyces cerevisiae

2. Oxidacin de etanol a cido actico. 27-37C Aerbico.

Acetobacter aceti
(Rendimiento del 76%)

El control estricto de la concentracin de oxgeno.

Fermentacin sumergida sustituye fermentacin superficie (Produccin de cido actico a


concentraciones de hasta 10% (w / w) en cultivo continuo a pH 4,5 en 35).

e) Procesos anaerbico
En la dcada de 1980, surgi otro proceso utilizando Clostridia.
Estos organismos pueden convertir glucosa, xilosa, otros

Y Clostridium thermoaceticum
Para reducir los costos de sustrato, una variedad de sustratos, se han
utilizado (fructosa, xilosa, lactato, formiato, y piruvato).

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thermoaceticum no tiene ningn requisito de
aminocidos especfica; cido nicotnico es la
nica vitamina esencial. El sulfato de amonio,
podra reemplazar parcialmente extracto de
levadura sin resultar en la formacin de subproductos tales como fructosa. Coste medio podra
reducirse an ms mediante la sustitucin de licor de maz fermentado de extracto de levadura.

Fabricacin de Vinagre
Mtodo Orleans
Mtodo de goteo
Fermentacin sumergida

A. El mtodo Orleans (o lento)


El mtodo dejar solo, el vino que queda en cubas abiertas convirti convertido a vinagre por las
bacterias del cido actico que entran desde la atmsfera. Posteriormente el vino fue puesto en
barriles de madera (200 L) y se deja en el campo abierto en el "proceso de fildeo"
- Una gruesa capa de bacterias del cido actico convertir el vino al vinagre unas
cinco semanas

- 10-20% del vinagre se extrajo (de abajo: la pelcula no debe ser


perturbado) semanalmente, y se reemplaza con vino nuevo.

Desventajas de Mtodo Orleans

Lento en comparacin con los mtodos posteriores, tomando cinco semanas a


veces, frente a das (tambin conocido como el mtodo lento)

Era ineficiente, produciendo 75 a 85% de la cantidad terica.

La "madre de vinagre" por lo general llena gradualmente la barrica y efectivamente


mat el proceso.

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B. Mtodo generador de goteo (rpido o alemn)
Sin modificar durante poco ms de un siglo, cuando varias modificaciones fueron introducidas en
el mtodo Frings, que incluye:

a) aireacin forzada
b) control de temperatura
c) operacin semicontinua

El generador de vinagre moderno consiste en un tanque construido generalmente de madera


preferentemente de ciprs y ocasionalmente de acero inoxidable.

C. Fermentacin discontinua (En sistema cerrado


sumergida) (Frings Acetator)
- Tanque de acero inoxidable
- Mezclador de alta velocidad (para proporcionar un entorno favorable)
- Las pequeas burbujas de aire se introducen en la parte inferior
- La espuma se retira por un destructor de espuma en la parte superior del tanque
- El tanque es operado a 30 C
- Instrumento electrnico monitoriza el contenido de etanol. Si el nivel de alcohol
disminuye a 0,2% / V, 1/3 del producto acabado es VED-Remo; se aaden nutrientes
frescos y etanol (35h para hacer vinagre 12%).
- El acetator es un sistema ms eficiente que el generador de
goteo (el ms eficiente de los 3 sistemas).
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Ventajas

Eficiencia: Velocidad de produccin 10 veces mayor. (94% vs 85% del terico).


Calidad: ms uniforme.
Un espacio mucho ms pequeo est ocupado (aproximadamente 1/6).
Fcil y barato para cambiar entre los tipos de vinagre.
La produccin continua y automatizacin ms fcilmente.

Desventajas

Riesgo de paralizacin total despus de la muerte de las bacterias de fallo de


alimentacin, incluso por un corto tiempo.
Tiene un alto ndice de consumo de energa. En trminos de energa consumida por cada
galn de cido actico producido, el Acetator es menos consumidor de energa.

2. Produccin de aminocidos: cido Glutmico y L i s i n a .

Los aminocidos son un importante producto industrial con una produccin anual mundial de
ms de 2.000.000 toneladas.

El aminocido ms importante producido es el cido glutmico (50% del total) y lisina es


segundo en volumen (40%). Entre ambos cubren el 90% de la produccin mundial de
aminocidos.

1.1 Algunos usos del cido amino

Suplementacin nutricional humana y animal


8 Aas son esenciales y la dieta debe contenerlos.
La mayora de los cereales son especialmente bajos en lisina (DL-metionina), como el maz.

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Utilizacin industrial
Agentes de superficie-activa Produciendo grupos
lipoflicos de cadena larga o agente de limpieza (pasta de
Sabor y mejora el sabor de los alimentos
Potenciadores del sabor: glutamato monosdico dientes o shampoo)
Edulcorantes (Aspartame) Produccin de polmeros Para la elaboracin de pieles
El sabor del queso deriva de Glu + Val + Leu + Met. sintticas y resistentes al fuego
Cosmticos Detergentes menos irritantes
Usos mdicos
Transfusin (consumo oral cuando la comida no es posible)
Cicloserina (antibitico): se utiliza para el tratamiento de la tuberculosis
Metildopa: utilizado como antihipertensivo; Dopa, en el tratamiento de Parkinson

1.2 Produccin de Aminocidos

1908, Kikunae Ikeda identificado y aislado el glutamato monosdico (MSG), ('kombu', un agente
de condimento tradicional utilizado en Japn, a partir de algas marinas).

a) Hidrlisis de protenas

Mtodo original de la fabricacin amino.


El cabello, queratina, harina de sangre, se hidroliza (cido) para extraer el aminocido. Cys
(protena de la queratina en el cabello); Pro (hidrolizados de gelatina)

b) Sntesis qumica

Gly, L-Ala, y DL-Met (formas D-L racmico). Aminoacilasa para L-forma.


Met tiene el mismo efecto que un aditivo para la alimentacin animal, en L o en D, forma L.

c) Mtodos microbiolgicos 1. Obtener el aa mediante una


fermentacin in vivo. Se aade un
1. Semi-fermentacin. precursor para que se produzca el aa
2. Uso de enzimas microbianas o clulas inmovilizadas.
Simplemente es un proceso de
3. Fermentacin directa.
fermentacin lo ms corto posible.

2. Hacer pasar una


disolucin donde hay
clulas que llevan a
cabo un proceso de
bioconversin.

Se aade un
determinado sustrato
para conseguir el aa

1.3 Produccin de aminocidos por fermentacin

Descubrimiento de Corynebacterium glutamincum y de su crecimiento natura que acumulaba


cido L-glutmico
Otros microorganismos bacterias (son las ms significativas), hongos y levaduras tambin se
intentaron. Moldes de levaduras.
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Las cuatro bacterias ms ampliamente reportadas pertenecen a los siguientes cuatro gneros ...
- Corynebacterium spp. (C. glutamicum; C. Lilum)
- Brevibacterium spp. (B. divericartum: B. alanicum)
- Microbacterium spp. (M. flavum var. Glutamicum)
- Arthrobacter spp. (A. globiformis; A. aminofaciens)

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Produccin de cido glutmico por Corynebacterium glutamicum. Flujos de carbono ms
importantes se observaron mediante flechas en negrita. (a) El crecimiento con el uso de la
derivacin del glioxilato para proporcionar productos intermedios crticos en el ciclo de Krebs. (b)
Despus de que se complete el crecimiento, la mayor parte del carbono sustrato se procesa para
glutamato. Las lneas de trazos indican las reacciones que se utilizan en menor medida.

Model for the induction of l-glutamate production in C. glutamicum. Treatments triggering l-glutamate
overproduction alter membrane tension. The change in tension induces a structural transformation in
NCgl1221, which enables it to secrete l-glutamate. OdhI is phosphorylated and dephosphorylated by
PknG, B, and Ppp, respectively. The nonphosphorylated form of OdhI inhibits ODHC activity, which
shifts the metabolic flow of 2-oxoglutarate (2-OG) from succinylCoA to l-glutamate.
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La produccin industrial de la lisina utilizando Corynebacterium glutamicum. Va bioqumica que
conduce de aspartato a la lisina; lisina puede inhibir la actividad de retroalimentacin del
aspartoquinasa enzima, lo que lleva a la cesacin de la produccin de lisina.

OJO

Mutantes resistentes a AEC sobreproducen lisina porque la retroalimentacincin


inhibicin ya no se produce.

El mutante es resistente a una molcula que


se parece a la lisina, de tal manera que al
producirse el feedback negativo, no ocurre
inhibicin

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3. Produccin de enzimas: amilasas, proteasas, lipasas, renina, etc.

1.1 Enzimas y sus aplicaciones industriales

Most industrial enzymes are obtainable from microorganisms. The advantages of using microorganisms
are numerous, in contrast with their production from plants (e.g. malt diastase) and animals (e.g. pepsin)
and are as follows:

o Plants and animals grow slowly in comparison with microorganisms;

o Enzymes form only small portions of the total plant or animal and large tracts of land as well as
huge numbers of animals would be necessary for substantial productions. These limitations
make plant and animal enzymes expensive. Microbial enzymes on the other hand are not
subject to the above constraints and may be produced at will in any desired amount.

o By far the greatest attraction for the production of microbial enzymes, however, is the great
diversity of enzymes which reflects the diversity of microbial types in nature. Thus largely, though
not entirely, because of the widely varying environmental conditions in nature, microbial
enzymes have been isolated which operate under extreme environmental conditions. For
example microorganisms produce amylases functioning at temperatures as high as 110C and
proteases operating at pH values as high as 11 or as low as 3.

o Finally, following from greater understanding of the genetic basis for the control of physiological
function in micro-organisms it is now possible to manipulate microorganisms to produce
virtually any desired metabolic product, including enzymes

1.2 Aplicaciones de las enzimas microbiolgicas


Hay ms de 500 productos con 50 aplicaciones.
Categorias:
- Enzimas tcnicas
La aplicacin de enzimas en detergentes, textil, almidn, pulpa y papel, industria de
cuidado personal.
- Enzimas de comida
Enzimas en fbricas de comida que empiezan en la industria del queso. Chymosina
Hidrlisis del almidn, primera aplicacin en 1960s. alfa-amilasas y glucoamilasas.
- Enzimas de alimentacin
La primera enzima usada comercialmente: beta-glucanasa en dietas de alimentacin
basadas en cebada
80
81

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1.3 Algunos usos de las enzimas en la industria

Cabe destacar la produccin de edulcorantes nutritivos a partir del almidnEnzimas proteolticas

en la industria de detergentes Accin enzimtica de Naringinasa en Naringina

- Cuajos microbianos
- La lactasa
- La industria textil
- Las pectinasas para su uso en el zumo de fruta y la
produccin de vino
- Naringinasa
- Las enzimas en la industria de la panificacin
- Las enzimas en la industria de las bebidas alcohlicas
- Cebo de cuero
- Algunos de los usos mdicos de las enzimas
microbianas

Slo alrededor de 200 de unas 2.000 enzimas conocidas ahora se producen comercialmente.

Extremoenzimas: Las enzimas con estabilidad inusual

Hipertermfilos: Los organismos pueden crecer en las


temperaturas altas, (macromolculas termoestables: enzimas;
extremoenzimas) Ej. Taq y Pfu ADN-polimerasas proteasas, amilasas,
celulasas, pululanasas, xilanasas ...
Fra activa: desde psicrfilas
Alta salinidad: desde halfilos
Alto o bajo pH: de alcalfilos y acidfilos.

1.4 Produccin de enzimas

La produccin microbiolgica de la amilasa se considera que es la primera patente de


biotecnologa emitida en los Estados Unidos, que era para el cientfico japons Jokichi Takamine.
Todas las enzimas utilizadas en los procesos industriales son
- Sintetizados por los organismos vivos (salvo contadas excepciones, papana de la papaya)
- Extrado de microorganismos en lugar de elaborarse en el laboratorio (sntesis es
demasiado complicado para ser prctico).

Mtodos de uso industrial para producir enzimas incluyen


Deteccin de mutantes: Producir grandes cantidades de una enzima.
Manipulacin gentica
- Ha sido un poco menos eficaz.
- Desde rutas sintticas tienen un menor nmero de genes implicados (antibiticos),
- la manipulacin gentica muestra una gran promesa para aumentar el rendimiento.

82 74

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1.5 Produccin de enzimas por fermentacin

La mayora de la produccin de enzimas se lleva a cabo en fermentacin sumergida profunda;


algunos se producen mejor en los medios "semi-slidos".

a) Medio "semislido"
"Koji" o "Mohoso salvado" mtodo de la SSF

El medio de:
Hmedo (8%) de trigo o salvado de arroz estril se acidific con HCl
Sales minerales: minerales
Un inductor tambin se suele aadir;
10% de almidn para la amilasa,
Gelatina y pectina de protenas y pectinasa, respectivamente.
Los organismos utilizados son los hongos (Aspergillus oryzae)
Temperatura, 30 C
Perodo: 30/40 horas - 7 das
Enzimas: amilasa, Glucoamylose y proteasa

b) Produccin sumergida
Requerir menos mano de obra y por lo tanto es ms barato
Presente un menor riesgo de infeccin
En general, ms facilidad de control de la temperatura, el pH, ..

El medio debe contener todos los requisitos


Fuentes adecuadas (C, N, Metales, etc)
Inductores (Para enzimas inducibles: productos para las enzimas pcticas pectinolticas)
Represin catablica (por algunos componentes fcilmente metabolizables)
Inhibicin producto-final (Aas por proteasas)
Requisitos de temperatura y pH (para cada organismo)
La necesidad de oxgeno (por lo general alta)

83 75

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4. Produccin de acetona y biocombustibles. 20

1.1 Cmo los microbios contribuyan al esfuerzo Primera Guerra


Mundial?

Acetona
Impacto histrico durante la Primera Guerra Mundial
(Industria Allied: Acetona para fabricar plvora explosiva)

La produccin tradicional: destilar bosque, haya, abedul, arce (Cerca del 1% del volumen
de la madera produce acetona)
Producido por la fermentacin por Clostridium acetobutylicum. (De origen ruso
Judio, Chaim Weitzman)

Tambin Ejrcito Alemn: Se utiliza microbios para hacer los productos qumicos (glicerol)
necesarios para la produccin de explosivos (nitroglicerina).
Carl Neuberg, descubri que S. cerevisiae aumentar su produccin de glicerol en condiciones de
cultivo determided.
Ms tarde, se descubri que el alga halfila Dunaliella salina produce grandes cantidades de
glicerol para actuar como un estabilizador osmtico.

a) Un renovado inters en los biocombustibles

- Una opcin prometedora para reducir la dependencia del petrleo


- Puede ayudar a reducir las emisiones de CO2 (cambio climtico global).
- Experiencia positiva en Brasil, EE.UU., y en menor medida en Europa
- Los altos precios del petrleo crudo tambin hacen los biocombustibles ms competitivo

Objetivos de desarrollo ambiciosos ... EE.UU. y la Unin Europea tienen previsto llevar la
produccin de biocombustibles del 1% actual de los combustibles del motor hasta el
10%.
76
84
La pregunta es saber ...
Si los recursos de biomasa suficientes estn disponibles
Si la tecnologa est lista para una progresin tan rpida
Ser posible para garantizar que tales niveles de produccin sean sostenibles?

Produccin de
Biofuel a partir
de Biomasa
Lignocelulsica

Concepto:
Biorefinera

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Diferentes tipos de deshechos de biomasa

Composicin media de los diferentes residuos de lignocelulosa

Estructura de los materiales lignocelulsicos y las rutas para su biotransformaciones

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Diferentes pretratamientos para la hidrolisis de la
biomasa lignocelulsica

Variedades de Biofuel

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Produccin de Biodiesel

Produccin de Biodiesel: Lipasas microbiales

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1.2 Etanol vs Biodiesel

El etanol es el biocombustible ms utilizado en la actualidad.


Produccin mundial:. 27 Mtn (2005), casi el doble de 2000
Europa: 750.000 tn (2005) (Espaa, Suecia, Alemania, Francia). Importado 200.000 tn
Dnde: Brasil y EE.UU.. En el ao 2005

El biodiesel es producido por la transesterificacin de aceites vegetales.


Produccin mundial: 4 millones de toneladas (2005)
Europa: Cerca del 90% (alta proporcin de los motores diesel)
Dnde: Alemania, Francia e Italia

Otros combustibles para el transporte se producen en la actualidad con un volumen bajo de


mercado (biogs en Suecia o aceite vegetal puro en Alemania).

1.3 Produccin de etanol

Proceso qumico: hidratacin cataltica del etileno (slo una pequea fraccin del etanol
producido en el mundo de hoy).

Proceso biolgico: La fermentacin de los azcares por los organismos.

Conversin de lignocelulosa en etanol implica:

1. El tratamiento previo para eliminar la barrera de lignina y exponer polisacridos de la


pared celular de plantas,
2. La sacarificacin enzimtica de azcares con un (hemi) cctel de enzimas celulolticas,
3. La fermentacin de los azcares con microorganismos etanolognicos.

La lignocelulosa es un material complejo que contiene principalmente la pared celular estructural


de polmeros de celulosa, hemicelulosa, pectina, y lignina. La celulosa, hemicelulosa,

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y pectina son polmeros de carbohidratos que pueden ser utilizados por biocatalizadores
microbianas para la produccin de etanol despus de un tratamiento adecuado.

Las vas metablicas perteneciente a la etanolognesis. PDH, que contiene mutaciones


esenciales para la produccin homoetanol por Escherichia coli SE2378, se indica con una lnea
discontinua. Se muestran los valores de Km para las reacciones de piruvato-utilizacin. ADH,
alcohol deshidrogenasa; LDH, lactato deshidrogenasa; PDC, piruvato descarboxilasa; PDH,
piruvato deshidrogenasa; PFL, liasa piruvato-formiato.

Saccharomyces y Z. mobilis nativa expresan


La va homoetanol,
pero no metaboliza azcares pentosa, que son abundantes en la hemicelulosa.

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E. Coli (No hay va homoetanol) tiene algunas ventajas:
- Sustratos: Hexosa, pentosas, cido urnico (pectina)
- Amplio conocimiento de su fisiologa y el metabolismo
- Facilidad de manipulacin gentica.

KO11: Verstil Microbiana Biocatalizador de conversin de biomasa a etanol

Clonacin de los genes (Z. mobilis) que codifica PDC y ADH (va
homoetanol, opern de PET) en un
plsmido y se expresa a partir del
promotor PFL en E. coli.

En los 20 aos desde el etano-logenico l


a cepa de E. coli KO11 fue descrita, se
ha usado para catalizar la conversin de
muchos tipos de biomateriales a etanol.

1.4 Tipos de biocombustibles


(biofuels)

Biocombustibles slidos
Distintas formas de BIOMASA usadas directamente o pretratadas para producir calor o
electricidad. Actualmente, la combustin representa el volumen mayor de conversin de
biomasa a energa.

Produccin de METANO

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Biotecnologa Marina
Los microorganismos marinos como fuentes de energa:
- Produccin de hidrocarburos a partir de Biomasa
- Generacin de Hidrgeno por cultivos de microorganismos

Hidrocarburos Isoprenoides
Botryococcus braunii (Alga verde; 86% Lpidos: combustibles)

Glicerol
Dunaliella (Alga verde; 85% peso seco: Etanol y n-Butanol

CH4
A partir de carbohidratos de micro y macroalgas

Hidrocarburos gaseosos
Emiliania huxleyi: Pirlisis en vaco de biomasa
H2
1. Fermentacin de sustratos orgnicos por Clostridium
2. Actividad fotosinttica de bacteria marina Rhodovulum
3. Hidrlisis del agua por cianobacterias y algas verdes

Diagrama esquemtico de los usos potenciales de microorganismos marinos en la produccin de


energa y mitigacin de dixido de carbono.

(a) Extremadamente alta productividad de las algas para la produccin de biocombustibles, en


comparacin con otras fuentes.
(b) las gotitas de aceite de reales (biocombustibles) que se producen por las algas.

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?

Qu es a Microbial Fuel Cell?

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5. Biotransformaciones.

En el curso de la qumica mdica fue el descubrimiento de que los microorganismos


pueden hidroxilar eficazmente el ncleo esteroide sin cambios adversos.

La actividad anti-inflamatoria de un compuesto


esteroide depende de la presencia de un
oxgeno o hidroxilo en la posicin 11.
La hidroxilacin de los esteroides -. Posiciones en las que seleccionan los microorganismos
pueden hidroxi-late el ncleo esterol. Dos estereoismeros son posibles para la hidroxilacin en
muchas de las posiciones, designado y .

Un resumen de los pasos involucrados en la sntesis de esteroles biolgicamente activos. El


material de partida, la diosgenina, es de un ame crecido en Mxico.

96 83
Un ejemplo de biotransformacin por microorganismos en la produccin industrial de las
hormonas esteroides. Hormonas deseados como la cortisona y la progesterona pueden requerir
de muchos pasos y microbios, y rara vez puede un solo microbio llevar a cabo todos los pasos de
sntesis necesarios. (a) A partir de compuesto de partida 4-pregnen-3,20-diona, (b) dos especies
de moho pueden producir 11-dehidrocortisona en tres pasos. (c) Otras dos especies de moho
pueden convertir este compuesto de partida a la cortisona en dos pasos, y (d) dos especies de
moho pueden producir 15-hidroxiprogesterona en un solo paso.

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TEMA 6. Presencia de microorganismos en los
alimentos.
1. Crecimiento de microorganismos en alimentos: factores intrnsecos y
extrnsecos.

1.1 Efectos de los microorganismos en los alimentos

a) Efectos beneficiosos

La comida se fermenta por la adicin de microbios o productos microbianos para alterar o mejorar
el sabor, el gusto, o la textura.

b) Efectos perjudiciales

La intoxicacin alimentaria o enfermedad transmitida por los alimentos


infeccin
intoxicacin
Deterioro de los alimentos
El crecimiento microbiano hace que los alimentos no aptos para el consumo: sabores
indeseables y olor; destruye valor alimenticio

c) Efectos neutral

La presencia o el crecimiento de microbios que no causan enfermedad o cambiar la naturaleza


de la comida.

Los microbios encuentran su camino en los alimentos desde ...

Suelo en el que crecen


Almacenamiento
Cultivo
Manejo
Empaquetado

Los procesos que causan el deterioro son ...


Los mismos que participan en la fermentacin de los alimentos.
Un alimento considerado por una poblacin a ser fermentado, se puede considerar mimado por
otro. Ej. Leche agria y pan mohoso

El crecimiento de los patgenos


C. botulinum, S. aureus, Salmonella, E. coliO157: H7 ..... pueden dar lugar a enfermedades
transmitidas por alimentos (infeccin o intoxicacin).

Por lo tanto, ... limitar el crecimiento microbiano puede preservar la calidad de los
alimentos y prevenir enfermedades transmitidas por los alimentos
(enlatados, pasteurizados, irradiados, almacenamiento fro, conservantes).
85
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Las caractersticas fsicas y qumicas de la comida determinar su grado de susceptibilidad a la
actividad microbiana.

1.2 Factores que influyen en el crecimiento de microorganismos


en alimentos

Factores intrnsecos
Depender de las caractersticas inherentes de ese alimento.
Disponibilidad de Agua
pH
Nutrientes
Potencial Redox
Barreras biolgicas
Productos qumicos antimicrobianos

Factores extrnsecos
No sustrato dependiente: propiedades del entorno de almacenamiento.

Temperatura de almacenamiento
Humedad relativa del ambiente
Presencia y concentracin de gases de presencia y las actividades de
otros microorganismos

1.3 Factores intrnsecos

a) Disponibilidad de Agua
La mayora de los alimentos frescos tienen una aw por encima de 0.98
0.91 jamn, mermelada de 0,85, 0,70 y algunos pasteles. (Bacterias aw por encima de 0.90 y hongos 0,80)

Esto explica por qu:


Alimentos frescos estropean ms rpidamente de lo que secos, con azcar ..
Pan, queso y alimentos secos a menudo se convierten en moho.

Especies de Staphylococcus (piel), pueden crecer a aw 0,86;


Estas especies compiten bien en productos salados (jamn y otros embutidos: se manejan
incorrectamente, es un vehculo comn para S. aureus intoxicacin alimentaria).

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b) pH
pH cido inhibe muchas bacterias (la mayora de los patgenos) y no puede crecer a un
pH por debajo de 4,5.
Las bacterias del cido lctico son una excepcin (3,5 pH)

Los hongos pueden crecer a un pH ms bajo, lo que lleva a algunos alimentos, como las
frutas, llegando a ser mohoso. Ej. Limn (pH 2,2) inhibe el crecimiento de bacterias, (incluyendo
LAB): algunos hongos pueden crecer.

El pH de un producto alimenticio puede determinar si las toxinas pueden ser


producidos. Ej. Clostridium botulinum, no crece ni produce la toxina pH <4,5, (no peligrosos en
los alimentos muy cidos)

c) Potencial de oxidacin-reduccin
Aerobios requiere valores de Eh positivos (oxidados) anaerobios requieren valores de Eh
negativos (reducidos).

Las sustancias en los alimentos que ayudan a mantener la reduccin de las


condiciones: grupos SH (carnes), ascrbico, azcares reductores (frutas, verduras).

El potencial de O/R (redox) de un alimento se determina por la ...

1. Caractersticas potencial de O/R del alimento original.


2. Capacidad de equilibrio: resistencia al cambio en el potencial de la comida.
3. Tensin de oxgeno de la atmsfera sobre la comida.
4. El acceso que la atmsfera tiene a la comida.

d) Nutrientes
Determinar los tipos de organismos que pueden crecer en ella.
Un organismo que requiere una vitamina no puede crecer en una comida deficiente que la
vitamina.
Pseudomonas puede sintetizar nutrientes esenciales.

e) Barreras biolgicas
Cortezas, conchas, etc, la ayuda en la proteccin de algunos alimentos Ej. Huevos, conservan
su calidad mucho ms tiempo con las cscaras intactas.
Algunos microorganismos pueden degradar los materiales de proteccin

f) Productos qumicos antimicrobianos


Lisozima, en clara de huevo
El cido benzoico, en los arndanos
La alicina en el ajo
Antibacteriano sistema de peroxidasa, (fagocitos), se encuentra en la leche cruda.

87
100
1.4 Factores extrnsecos

a) Temperatura de almacenamiento
Por debajo del punto de congelacin, el agua es inaccesible detener el crecimiento
microbiano.
A bajas temperaturas, las reacciones enzimticas son o muy lento / inexistente
Los microorganismos en los alimentos refrigerados (psicrfilos; Pseudomonas)

b) Presencia y concentracin de gases


El dixido de carbono (CO2)se utiliza para el control de microorganismos en los alimentos
(MAP)
El ozono (O3)ha sido probado como agente para extender la vida til de ciertos alimentos
(oxidante fuerte)
Ej. Pseudomonas (obligar a los aerobios) vs Clostridium botulinum (anaerobio)

c) Humedad relativa del ambiente


Importante como aw dentro de los alimentos y el crecimiento microbiano en las superficies.
Si aw es de 0,60, la comida se almacenar en RH que no permiten recoger la humedad del aire

d) Presencia / actividades de otros microorganismos


Produccin de sustancias antimicrobianas: antibiticos, las bacteriocinas, perxido de hidrgeno,
y cidos orgnicos.

2. Control del deterioro de los alimentos producidos por microorganismo:


tcnicas basadas en la temperatura, presin, etc.
1.1 Medidas de prevencin para la intoxicacin alimentaria y el
deterioro
Anlisis de Peligros y Puntos Crticos de Control, o HACCP, (1970) se centr en
la identificacin, evaluacin, control y prevencin de riesgos en todo el proceso
de produccin de alimentos.
1998, HACCP para la carne y las plantas de procesamiento de aves de corral (USDA) para
las plantas de mariscos y jugo (FDA).

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2005, algunas enfermedades transmitidas por los alimentos han comenzado a bajar, debido
en parte a la aplicacin de los procedimientos HACCP.

Para las infecciones alimentarias, una dosis infecciosa (clulas suficientes para iniciar
la infeccin) debe estar presente.
Intoxicacin de alimentos, suficientes clulas para producir la toxina debe estar presente.

Por lo tanto, la intoxicacin alimentaria o descomposicin pueden prevenirse


mediante el manejo adecuado de alimentos, la preparacin y el almacenamiento.

Intoxicacin alimentaria. La
toxina es liberada por los microbios que
crecen en la comida. Despus se ingiere la
toxina, que acta sobre su tejido diana y
provoca sntomas.

Infeccin alimentaria. El agente


infeccioso proviene de los alimentos o se
introduce en l a travs de mal
procesamiento y almacenamiento de
alimentos. Despus de que las clulas son
ingeridos, invaden los sntomas intestinales
y la causa de la gastroenteritis.

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El crecimiento de bacterias en la carne molida. La tasa de crecimiento de bacterias aerobias
totales en la carne molida disminuye a temperaturas de almacenamiento ms bajas.

1.2 Decapado y Acidez


Los alimentos varan un poco en el pH, pero la mayora son neutros o cidos.
Los microorganismos difieren en su capacidad de crecer a pH cido (pH 5 inhibir el
crecimiento de la mayora de los organismos de descomposicin)
Los cidos dbiles (vinagre) a menudo se utilizan para la conservacin de alimentos, un
proceso llamado decapado.

Los mtodos de decapado suelen mezclar el vinagre con grandes cantidades de sal o de azcar
para disminuir la disponibilidad de agua y adems inhibir el crecimiento microbiano.
Encurtidos comunes incluyen pepinos
(encurtidos dulces, agrias, y eneldo), pimientos, carnes, pescados y frutas.

1.3 Secado y deshidratacin (aw)

En general, las bacterias son pobres competidores por el agua que queda libre, pero los
hongos son buenos competidores.
En la prctica: una alta concentracin de solutos tales (azcares, sales), normalmente
inhiben el crecimiento bacteriano.

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Ej. Las bacterias se inhiben en el 7,5% de NaCl (aw 0,957) Moldes compiten bien; crecer en
alimentos ricos en azcar como jarabes.
El secado se utiliza para conservar los alimentos altamente perecederos tales como
carne, pescado, leche, verduras, frutas y huevos.
Mtodo fsico para secar los alimentos: de liofilizacin (secado por congelacin).
El secado por pulverizacin es el proceso de pulverizacin, atomizacin o, lquidos tales
como leche en una atmsfera calentada (leche en polvo).

1.4 Calefaccin
Se utiliza para reducir la carga bacteriana o incluso esterilizar un alimento
til para la preservacin de los lquidos y los alimentos hmedos.
La pasteurizacin no esterilizar lquidos (reduce la carga bacteriana de organismos de
putrefaccin y patgenos, que se extiende significativamente la vida til): lquidos
perecederos, como leche, jugos de frutas, y cerveza.
LTLT: a los 63 C (145 F) durante 30 segundos
HTST: a los 71 C (160 F) durante 15 segundos.
UHT: a 138 C (238 F) durante 2-4 segundos (UHT) (leche en Europa)
Este tratamiento mata todos los microorganismos, se extiende la vida til de lquidos como la leche
a 6 meses o ms, sin la necesidad de refrigeracin.

A modern flash Spray dryer.


pasteurizer, a Industrial spray
system used in dryers are used
dairies for high- to dry or
temperature concentrate
short-time large volumes
(HTST) of high-value
pasteurization. liquid foods.

1.5 Envasado
"La comida est sellada en un envase (frasco puede / vidrio) y luego se calienta"

El T/t para el enlatado depende: tipo de alimentos, pH, contenedor tamao y la


consistencia o densidad de los alimentos.
Los alimentos cidos: calentando justo a ebullicin 100 C
Alimentos no cidos: se deben calentar para autoclave (121 C).
Los tiempos de calentamiento demasiado tiempo podra hacer que la mayora de los
alimentos de sabor desagradable y tambin podran reducir el valor nutritivo.
Si microorganismos vivos permanecen en una lata, se puede producir
- El medio ambiente en el interior de una lata es anxico (Clostridium).
- Deterioro termfilo: la lata no se hincha el deterioro agria plana
(Geobacillus stearothermophilus).
- Si se produce gas, acumular presin (protuberancias o explosin).
"Esterilizacin comercial" por vapor bajo presin en un gran retorta.
La intencin de destruir las endosporas de C. botulinum no es tan rigurosa como la
esterilizacin completa.
Suficiente calor se aplica para el tratamiento 12D (reducciones I2-decimal o cocinero botulnica)
91
104
1.6 Procesado asptico de alimentos

Proceso de uso:
Flash de calentamiento (ciclo de calentamiento rpido y corto)
La esterilizacin por medio de la coccin.
Los alimentos se envasan en envases aspticos (cajas de cartn forradas con papel de
aluminio y plstico).
El proceso puede requerir la "sala limpia" ( quirfano). EE.UU.: los jugos de frutas (cajas
de jugo) y sustitutos de la leche, en Europa (muchos pases): productos lcteos, el flash
se calienta a 133 C

"Aumenta la vida til del producto y elimina la necesidad de refrigeracin. Sin


embargo, las plantas de procesamiento son caras "

1.7 Procesamiento de Alta Presin (HPP)

HPP (100.000 lb/pulg2) para matar los agentes patgenos y


organismos indeseables
Aplicaciones: Frutas y hortalizas: Productos de aguacate,
salsas, cebollas picadas, salsa de manzana, listos para comer
carnes, jugos.
Los alimentos envasados se cargan en un recipiente que se
llena de agua y se coloca bajo presin (no mata endosporas,
pero la vida til se incrementa de das a meses).
1.8 Preservacin qumica

Ms de 3.000 compuestos diferentes se utilizan como aditivos alimentarios.


(Clasificado por la FDA como "generalmente reconocido como seguro", GRAS)

Un nmero de estos compuestos se utilizan como inhibidores de la Na-propionato de


metilo y benzoato de etilo (utilizado durante muchos aos; ninguna toxicidad) Nitritos
(un precursor carcingeno) de etileno y xidos de propileno (mutgenos) (ms
controvertidos; puede afectar negativamente a la salud humana).

Deterioro de retardo de aditivos, se extiende significativamente la vida til de


almacenamiento de los alimentos terminados.

Aditivos alimentarios-qumicos contribuyen de manera significativa a


aumentar en cantidad y en la calidad percibida de los alimentos disponibles.
92
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1.9 Irradiacin

rayos: 60Co o 136Cs, aceleradores lineales (de alta energa de correo)


rayos: Can de electrones
Rayos X: Los haces de electrones enfocado en lmina de metal
Productos alimenticios irradiados reciben una dosis de radiacin controlada.
44 kilograys (kGy) para esterilizar productos crnicos (NASA)
4.5 kGy para el control de patgenos en la carne picada
Las carnes frescas y los peces pueden ser irradiados para limitar la contaminacin a
travs de:
Escherichia coliO157: H7 (carne molida)
Campylobacter jejuni (aves de corral)
Vibrio spp. (pescados y mariscos)
(2008) se aprob para controlar los patgenos en la lechuga iceberg y la espinaca
(Tambin, especias, pescados, mariscos, verduras, cereales, patatas, comidas
esterilizadas, y las carnes son irradiados en muchos pases).

Acelerador de haz de electrones. Estas mquinas generan una corriente de electrones que se
acelera por un tubo largo por electroimanes de la carga opuesta. En el dibujo, el haz de
electrones se dobla por un "imn de flexin" Esto sirve para filtrar los electrones de los niveles
de energa no deseados. Proporcionar un haz de energa uniforme. El haz vertical es barrido
hacia atrs y adelante por encima del objetivo, ya que se mueve ms all de la . haz el poder de
penetracin del haz es limitado: si la sustancia diana se expresa como un espesor equivalente de

106 93

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agua, el mximo es de alrededor de 3,9 cm (1,5 pulg.) Por el contrario, los rayos X se penetrar
unos 23 cm (9 pulg. ).
1.10 Inhibicin microbiana del producto base

Bacteriocinas: protenas bactericidas activas que actan estrechamente


contra con las bacterias relacionadas.
Afectar la integridad de la membrana celular (poros hidroflicos).
Bacteriocina aadida a queso cheddar puede reducir 2-3 veces L. monocytogenes en los
quesos de 180 das de edad.
La nisina, producida por cepas de Streptococcus lactis,

protena hidrfoba pequea, no txico a los seres humanos

Afecta principalmente a las bacterias gram-positivas, especialmente E. faecalis

Se usa en alimentos de baja acidez a la inactivacin de C. botulinum durante
el proceso de enlatado.
Compuestos similares tambin se producen en los eucariotas.

3. Enfermedades transmitidas por alimentos: deteccin de patgenos.


1.1 Enfermedades Transmitidas por los Alimentos

Si un alimento no se descontamina o conservados, los patgenos pueden crecer en ella y


causar enfermedades transmitidas por los alimentos con una morbilidad y mortalidad
significativas.

Ej. (2010, Iowa EE.UU.), 1.500 afectados por salmonelosis (alimento para pollos) Cada ao
(EE.UU.) estima que los brotes de enfermedades transmitidas por los alimentos 25000. (76
millones, 13 millones de enfermedades adquieren afectadas, 325.000 hospitalizados y 5.000
personas mueren).
Los brotes se deben:
Manipulacin de alimentos inadecuada y preparacin (por lo general en el hogar).
La ruptura de manipulacin segura de alimentos y preparacin (fbrica).
La mayora de las enfermedades se denuncian (alimentos y la enfermedad no result).

Enfermedades transmitidas por alimentos se puede prevenir; con un seguimiento


adecuado de las fuentes de alimentos y brotes de enfermedades.

Enfermedades transmitidas por los alimentos se clasifican como: envenenamientos


alimentarios (FP) o infecciones de alimentos (FI); algunas enfermedades se clasifican en
las dos categoras.

1.2 Intoxicacin Alimentaria


Puede ser causada por varias bacterias (Staphylococcus, Clostridium) y hongos.

Staphylococcus - Prevencin
Intoxicacin estafiloccica se puede prevenir mediante el saneamiento y
la higiene en
la produccin de alimentos, preparacin de alimentos y el almacenamiento de
alimentos.
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Clostridium - Prevencin
prevencin de la contaminacin de los alimentos
La prevencin requiere la
crudos y cocidos y calefaccin adecuada de todos los alimentos durante la coccin y el
enlatado.

Los alimentos cocidos deben refrigerarse tan pronto como sea posible a las
temperaturas ms bajas rpidamente e inhiben el crecimiento de C. perfringens.

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a) Otros Envenenamientos
El moho crece rpidamente en los granos y maz bajo condiciones de humedad.
Claviceps purpura (ergotismo).
Alcaloides alucingenos (comportamiento alterado, aborto, muerte).

Hongos carcingenos derivados incluyen:


a) Aflatoxinas

Producido ms en los granos hmedos y productos de frutos secos.


Se intercalan con los cidos nucleicos y actuar como mutgenos marco turno y
carcingenos.
Se produce principalmente en el hgado (derivados inestables).
b) Fumonisinas

Fusarium moniliforme (leucoencefalomalacia, caballos, edema pulmonar, cerdos, el


cncer de esfago en los seres humanos.
Funcin mediante la interrupcin de la sntesis / metabolismo de esfingolpidos (variedad
de funciones celulares).

Aflatoxinas. Cuando Aspergillus flavus y hongos


relacionados crecen en los alimentos, se pueden
formar las aflatoxinas cancergenas. Estos tienen
cuatro estructuras bsicas. (a) Las designaciones
de letras se refieren a que el color de los
compuestos bajo luz ultravioleta despus de la
extraccin del grano y la separacin por
cromatografa. El B1 y B2 compuestos
fluorescentes con un color azul, y el G1 y G2
aparecen verdes. (b) Los dos aflatoxinas tipo M
se encuentran en la leche de animales lactantes
que han ingerido aflatoxinas tipo B.

Estructura de fumonisinas. La
estructura bsica de las fumonisinas FB1
y FB2 producida por Fusarium
moniliforme, un contaminante fngico
que puede crecer en maz almacenado
incorrectamente. Un total de al menos
diez fumonisinas diferentes han sido
aislados. Estos son compuestos
fuertemente polares que causan
enfermedades en los animales
domsticos, y tambin en los seres humanos. FB1, ROH; FB2, RH.

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b) Otros microorganismos eucariticos

Toxinas de algas: contaminar los peces, crustceos y peces de aleta.


La mayora de las toxinas son producidas por dinoflagelados, algunas diatomeas.

Enfermedades humanas: amnsicos, diarreicas y de intoxicacin neurotxica por


mariscos.

Toxinas de algas complejos, la mayora de temperatura estable, son conocidos por


causar efectos perifricos sistema neurolgico, a menudo en menos de una hora despus de la
ingestin.

Algas marinas toxinas. Estructuras de toxinas de algas marinas que pueden afectar
a los seres humanos a travs de los marinos y de agua: (a) la saxitoxina, (b) brevitoxin, (c) la
ciguatoxina, (d) el cido okadaico, (e) el cido domoico.

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Deteccin de Patgenos Transmitidos por Alimentos

Un problema importante: la necesidad de detectar rpidamente microorganismos.

Las tcnicas de cultivo estndar pueden requerir das o semanas.


(bajo nmero de agentes patgenos contra fondo microflora) (variados qumica / composicin fsica
hacer aislamiento difcil).

Anticuerpo fluorescente, inmunoensayos ligados a enzimas


(ELISA), y tcnicas de radioinmunoensayo han demostrado ser de valor. (puede
detectar pequeas cantidades de antgenos de patgenos especficos)

Las tcnicas moleculares se utilizan cada vez ms en la


identificacin de estos mtodos son valiosos para tres propsitos:
para detectar la presencia de un solo, patgeno especfico;
para detectar virus que no pueden cultivarse convenientemente;
identificar de crecimiento lento o patgenos culturalizado.

Los patgenos pueden ser identificados ...

Mediante la deteccin de ADN o ARN de base secuencias especficas


con las sondas. Estos por lo general son de 14 a 40 bases de longitud (por endonucleasas
de restriccin o por medio de sntesis qumica directa).

Las sondas se marcaron mediante su vinculacin a una variedad de


enzimtica, isotpico, cromognico o luminiscentes/marcadores
fluorescentes. (gran ventaja: la velocidad de la deteccin).

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4. Microorganismos como alimentos y complementos alimenticios. 12

1.1 Microorganismos como los alimentos y la produccin de


alimentos. Las algas, hongos y bacterias como la alimentacin.

Protena unicelular
- Puede ser utilizado como una fuente de alimento humano o animal.
- Podra ser til que las condiciones climticas hacen que los cultivos agrcolas a
fallar, donde la tierra cultivable es escasa.
- Cuando las poblaciones estn en peligro de morir de hambre.

Los microorganismos son fuentes de alimentos atractivos para un nmero de razones:

El rpido crecimiento
El crecimiento en gran parte no afectada por el clima
Bajo requerimiento de tierras
Sustratos de bajo costo para el crecimiento

Microorganismos como comida y produccin de comida


La poblacin mundial: se espera que se duplique en 40 aos. La poblacin mundial
aumenta: 156 personas por minuto;. 225.000 por da; 9 million/40 da.

25.000 personas en los pases en desarrollo mueren de


Incluso ahora,
hambre cada da, y muchos sufren de desnutricin.
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Las levaduras muestran una gran capcidad de incrementar nuetras reservas de comida.
- son una buena fuente de protenas y vitaminas,
- pueden ser cultivadas en una variedad de materiales de desecho.

Cada kilogramo de levadura puede producir 100 kg de protena:


1000 Veces que obtienen a partir de 1 kg de soja y 100.000 veces la obtenida a partir de 1 kg de
carne de vacuno.

El microorganismo en s mismo puede servir como alimento,


La mayora son empleados como agentes de convertir los alimentos bsicos
Para sintetizar agentes saborizantes ni potenciadores del sabor

1.2 Algas
Se utiliza como ingredientes de diversos alimentos, helados (o como paales y cosmticos).

El uso de algas como alimento humano acorta la cadena alimentaria. Aprox. Se requieren
100.000 kg de algas para hacer 1 kg de pescado

Cada hectrea de estanque puede producir 40 toneladas de alga seca (40 veces la de la protena
de la soja, 160 veces mayor que el de la carne de vacuno)

Cultivo de algas es otra va prometedora para aumentar el suministro de alimentos humanos


(Scenedesmus y Chlorella).

La gente acepta productos de algas como alimento, (peligro potencial para la salud)

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c) Algas comestibles:

Porphyra, (alga roja) forma grandes hojas multicelulares cultivadas de nori (envolver el arroz, el
pescado y las verduras para formar el sushi).
Laminaria, (algas pardas) se cultivan para la alimentacin o para extraer los aditivos alimentarios.
Como fuente de sabor aditivo glutamato monosdico.
Macrocystis, (kelp gigante), se cultiva en la costa de California para la produccin del polmero de
alginato, un espesante comn para helados, aderezos para ensaladas, y pinturas.

1.3 Bacteria

En Inglaterra, un alimento para animales llamado pruteen es producido por la


cultura de masas de la bacteria Methylophilus methylotrophus.

La cianobacteria Spirulina (lagos alcalinos, frica, Mxico, y por los Incas


en el Per).
Las cianobacterias son cosechadas, secadas al sol, se lava para eliminar
la arena, y se convierte en pasteles para el consumo humano.
Secado con Spirulina es rica en protenas (65%), vitamina B12 y minerales.

Un acre de la acuicultura Spirulina podra producir: "tanta protena de 100 veces


que a medida que el mismo acre plantado en el trigo, o 1.000 veces ms que la
carne de vacuno hacinados en un acre.
Los antiguos aztecas en Mxico comian Spirulina.

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1.4 Hongos Comestibles: De la supervivencia a la alimentacin
Gourmet

Cuerpos fructferos-hongos, son comnmente conocidos como setas (Agaricus bisporus y Lentinus
edulus son dos de varias setas cultivadas comercialmente en EE.UU. y por lo general se venden en
las tiendas de comestibles).

Setas ofrecen una fuente sabrosa de


protena y minerales. El contenido de protena
(25% peso en seco);
toda la leche (y AAS).

Menos del 1% de las setas son venenosas


(Amanita, que produce toxinas, la ARN polimerasa
inhibidor de la alfa- amanitina.

Trufa odorantes incluyen feromonas sexuales


como androstenol, encontrados en el sudor humano.

Otro hongo, Fusarium forma la base de


QuornTM, un micoprotena procesada que ha
sido utilizado como un sustituto de la carne durante
algunos aos en el Reino Unido.

La produccin comercial de Agaricus


bisporus. Diagrama de flujo para la produccin
comercial de Agaricus bisporus. Despus de que los
hongos se cosechan, el compost est pasteurizada y
algunos de ellos reciclado.

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5. Microbiologa de los alimentos fermentados.

1.1 Los alimentos fermentados: Una visin general

Los efectos de la fermentacin de los alimentos incluyen:

Para conservar los alimentos.


Lactobacilos, metabolizar una estrecha gama de nutrientes antes de que sus productos de
desecho se acumulan e inhiben an ms el crecimiento. (cidos carboxlicos, amonaco (alcalina),
o alcohol: mejora la estabilidad de los productos)

Para mejorar la digestibilidad.


La accin microbiana descompone macromolculas fibrosos y ablanda el producto, por lo que es
ms fcil para los seres humanos de digerir. (Carne y productos vegetales)

Para agregar nutrientes y sabores.


Metabolismo microbiano genera vitaminas, molculas de sabor, ...

Numerosos productos fermentados son caseros por mtodos


tradicionales miles de aos (tradicionales alimentos fermentados).

La naturaleza de los alimentos fermentados depende de la calidad del sustrato


fermentado, especies microbianas y bioqumica.
Indgenas flora, los microbios que se encuentran naturalmente en los alimentos.
Cultivos iniciadores-, derivados de una fermentacin anterior.
En resumen:
fermentacin de los alimentos mejora la conservacin, la digestibilidad, contenido de
nutrientes, y el sabor.
fermentaciones cidas conducen a cido orgnico tal como lactato y propionato.
fermentaciones alcalinas producen amoniaco y descomponer las protenas a pptidos.
fermentacin etanlica produce etanol y CO2.

Los lpidos son estables bajo condiciones anaerbicas de la fermentacin.
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TEMA 7. Produccin de alimentos y bebidas
mediante fermentacin alcohlica.
Fermentacin etanlica: Pan y el Vino
Algunos alimentos significativos y culturalmente importantes
comidas, se derivan de la fermentacin etanlica por hongos de la levadura.

C3H4O3 CH3CH2OH + CO2


La levadura ms prominente utilizada es Saccharomyces cerevisiae,
conocida como la levadura de panadero o levadura de cerveza.

La elaboracin del pan depende de CO2 para generar espacios de aire que
la levadura de la masa, por lo que su contenido ms fcil de masticar y digerir.

Para las bebidas alcohlicas, sin embargo, el etanol es el producto clave, acompaada
de burbujas de dixido de carbono para "fizz", conocido como carbonatacin.

1. Produccin de vino: fermentacin alcohlica.

El vino es el producto de la fermentacin alcohlica de los azcares naturales de los

zumos de fruta, ms comnmente uvas.

Una increble variedad de transformaciones microbianas se produce tanto durante la


fermentacin y crianza de los vinos, dando lugar a sabores y aromas complejos.

Las enzimas de la levadura y otros microorganismos


- Catalizar la conversin de azcares, cidos orgnicos, aminocidos, pigmentos, y muchos
otros componentes de la fruta en numerosas sustancias diferentes, incluyendo el alcohol.

Una de las variables ms importantes en la calidad del vino es la variedad y la calidad de la


uva utilizadas:
Las condiciones de crecimiento y maduracin.
Contenido de azcar, cidos, y diversos compuestos orgnicos.
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1.1 Variedades de vino

Hay una gran variedad de vinos, y su calidad y carcter varan considerablemente.

Vinos tintos: el azcar estn casi completamente fermentados

Vino dulce: una parte del azcar se queda o azcar adicional se aade despus
de la fermentacin

Vino generoso: brandy o algn espritu alcohlico se aade despus de la


fermentacin (jerez y oporto)

Vino espumoso: considerable CO2 est presente, que surge de una fermentacin
final (levadura) en la botella sellada.

Lder pases: Italia, Espaa (ambos, 60%), Francia, Portugal, Estados Unidos, Australia, Sudfrica y
Argentina.

La mejor zona para vias productoras de vino est entre 30 y 50 N o 30 y 40 de latitud sur del
ecuador.
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1.2 Produccin de vino

Empieza con la cosecha, aplastado; el mosto, se exprime.

Las variedades tpicas de la uva (Glu-Fructosa, 12-25%) a los vinos:

Blanco: Chablis, vino del Rin, sauterne y chardonnay;


Rojo: burdeos, Chianti, Claret, zinfandel, cabernet, merlot.

Las levaduras que fermentan el vino son de dos tipos:

Levaduras salvajes (Kloeckera, Hanseniaspora) presentes en las uvas


(menos, etanol alcohol tolerante 3,5-4%; pueden producir compuestos
indeseables)
Saccharomyces ellipsoideus, (etanol 12-15%) que se aade al jugo para
comenzar la fermentacin (20-24 C).

En la prctica, la mayora de las bodegas para matar las levaduras salvajes presentes en el
mosto mediante la adicin de metabisulfito de sodio (Na2S2O5, 50-100 mg / l).

S. ellipsoideus (resistente al sulfito) se aaden al mosto como un cultivo iniciador crecido en


el jugo de uva esterilizado.

1.3 Vinos rojos y blancos


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Vino blanco: a partir de uvas blancas o uvas rojas sin pieles.
Vino tinto:
Racks pieles, semillas, trozos de tallo, permanecen en la fermentacin

Tanino un color: despus de 5 das de fermentacin


El vino puede extraerse para su posterior fermentacin (1-2 semanas)

Racks: el vino se separa del sedimento, y ...

Edad: almacenamiento a temperatura inferior (cambios qumicos incluyen la reduccin de los


componentes amargos, sabor, olor o aroma)

Aclaracin: con agentes (casena, tanino, arcilla bentonita) filtrados por, tierra de diatomeas,
amianto, o membrana multar.

El vino tinto es tpicamente envejecido durante meses a varios aos. No vino blanco.

Grado alcohlico: vara (8-16%): el contenido de azcar de las uvas, la duracin de la


fermentacin, y la cepa de levadura de vino utilizado.

Vino tinto: las uvas se fermentan con las pieles a una temperatura que aumenta la
extraccin de color y taninos.

Vino blanco: las pieles se quitan antes de la adicin de iniciador de levadura, y la


temperatura se mantiene baja para retener sabores voltiles.

Ambos tipos de vino por lo general se someten a fermentacin malolctica Oenococcus


oeni por las bacterias del cido lctico especiales que consumen cido mlico.

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La fermentacin alcohlica de la cerveza y el vino. La fermentacin con levadura genera etanol
en cantidades sustanciales. La biosntesis de los aminocidos genera subproductos que
contribuyen ambos sabores deseables (alcoholes de cadena larga) y sabores (acetaldehdo y
diacetilo).

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2. Fermentacin malolctica. Crianza biolgica.

1.1 La fermentacin malolctica

Muchos vinos tintos secos de alta calidad y unos vinos blancos, como los Chardonnay se
someten a una segunda fermentacin.

Variedades de uva (vinos secos), contenido de una alta concentracin de [cido mlico]
(un cido fuerte y bastante amargo, que vara a nivel local debido a las condiciones climticas y
del suelo.

Durante la fermentacin malolctica, cido mlico es fermentada a cido lctico, un cido


suave, ms suave, y esto hace que el vino menos cido y afrutado, pero ms complejo y
agradable al paladar.

Muchos otros componentes se producen durante la fermentacin malolctica,


incluyendo diacetilo (2,3-butanodiona), un importante ingrediente saborizante en la
mantequilla; Esto tambin ayuda a impartir un carcter suave, lisa para el vino.

La fermentacin malolctica es
Catalizada por especies de bacterias del cido lctico incluyendo Lactobacillus, Pediococcus, y
Oenococcus (cidotolerante y llevar a cabo la fermentacin de pH 3.5)

Bodegas comerciales

- tpicamente utilizan cultivos iniciadores de organismos de fermentacin malolctica


seleccionados.
- Para almacenar el vino en barriles especialmente para este propsito.
- Los inculos para las futuras rondas de la fermentacin malolctica provienen de
lactobacilos que se adhieren a la parte interior de la barrica.

La fermentacin malolctica puede tomar varias semanas, pero es por lo general vale la
pena la esperar:
el producto final es a menudo mucho ms suave y muy
superior a la del material de partida ms fuerte sabor amargo

3. Produccin de cerveza: tipos de fermentaciones


La evidencia ms temprana (sumerios y babilonios, 6.000 aC)

Los ingredientes de partida para las versiones antiguas y actuales de la cerveza, ale, stout,
porter, y otras variaciones son: agua, malta (cebada en grano), el lpulo, y las cepas de
levaduras especiales.

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Industria Brewing tambin emplea levadura para catalizar la fermentacin, pero la
cantidad de alcohol es ms bajo que el vino, y los niveles de CO2 son mucho ms altas.

As, los dos productos son muy diferentes bebidas fermentadas, y cada uno tiene sus propias
propiedades caractersticas.

Y, como el vino, el
producto final elaborado cerveza puede verse muy
influenciada por las diferencias regionales y culturales

Los pasos de elaboracin de la cerveza son el malteado, maceracin, aadiendo saltos,


fermentacin, envejecimiento y acabado.

malteado
maceracin
aadiendo saltos
fermentacin
envejecimiento
acabado

1.1 Malteado de la cebada

Los granos de cebada son pura malta, o sumergidas en agua, para


fomentar la germinacin.

Durante la germinacin:
- el endospermo (alimentos almacenados) del grano
segrega giberelina, una hormona que Estimula a el
crecimiento de las raicillas y el vstago emergente.
- Giberelina induce la aleurona (revestimiento del
endosperma) para producir hidrolasas, enzimas que
descomponen:
o el almidn en maltosa
o protenas a aminocidos para el uso de la planta en
crecimiento.
- Las hidrolasas en realidad se activan durante la segunda
etapa, llamada de maceracin, cuando los granos se
trituran y se agit en grandes cubas de agua.

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1.2 Maceracin

Mientras el grano se tritura, se eleva la temperatura en pasos,


(cada uno optimiza la actividad de una hidrolasa diferente).

A 52 C se activan las hidrolasas de protenas. A continuacin, a 68 C, las hidrolasas de


almidn convertir los azcares de cadena larga a la maltosa disacrido, que puede apoyar
fermentacin de la levadura.
La temperatura final (77 C) inactiva todas las enzimas.

La masa se enfra, se pulsa, y se filtr. El filtrado lquido del pur se llama

mosto.

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1.3 Ebullicin del mosto

Complementado con lpulo (una hierba tradicional


utilizada durante siglos en Europa) para aportar un sabor
caracterstico de la cerveza.
Despus de hervir con el lpulo, el mosto se
filtra de nuevo.

1.4 Fermentacin

- El mosto se inocula con una cepa especial de S. cerevisiae (levadura


de cerveza)

- La levadura lleva a cabo la fermentacin etanlica en la maltosa


a partir de almidn hidrolizado.

- Al mismo tiempo, m enor subproductos, tales como alcoholes de cadena


larga, impartir buenas sabores.

- El tiempo de fermentacin es un factor clave en la calidad de la cerveza.

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1.5 Tratamiento post-fermentacin

- Filtrado del mosto para eliminar la mayor parte de


la levadura.

- El producto (cerveza), todava contiene niveles


indeseables de acetaldehdo y diacetilo
generados por oxidacin parcial.

- Estos oxidado subproductos pueden ser reducidas por las pocas clulas de
levadura restantes durante un periodo de fermentacin secundaria.

Durante la fermentacin secundaria, el oxgeno est completamente excluida y la


temperatura se disminuy a 15 C o inferior.

Las mejores cervezas alemanas tienen edades


comprendidas entre 2 C durante varios meses.

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4. Produccin de pan y derivados

1.1 Pasta de pan leudado por microorganismos CO2

Hecho en muchas formas diferentes, harina, ...


Panes ms tempranos, papilla de cereales contaminados
(Pinturas del antiguo Egipto. Una panadera en el Giza
Pirmide: ao 2575 aC. Las muestras de pan de 2100B.C. estn
en exhibicin en el Museo Britnico.
Ms tarde, incluir la levadura como un cultivo iniciador .

1.2 Produccin de pan de levadura.

Los microorganismos logran tres funciones en la elaboracin del pan:

1. Levadura la masa a base de harina,


2. Impartir sabor y olor, y
3. Acondicionamiento de la masa para hacer que viable.

Levadura : Gas producir producto poroso y esponjoso. ( Sin levadura , masa de pan sigue siendo
densa y plana , y duro ) varios microbios y agentes de fermentacin pueden ser utilizados ,

Saccharomyces cerevisiae .
Otros microorganismos formadores de gas (coliformes , Clostridium , LAB
heterofermentativo , levaduras salvajes).

Metabolismo requiere azcar fermentable como maltosa o glucosa .

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Respira levadura aerbicamente y los principales productos de la fermentacin de maltosa son CO2
y H2O en lugar de alcohol (el principal producto en la cerveza y el vino) .

Las contribuciones a la textura del pan provienen de ...

Amasado : que incorpora aire en la masa, y las enzimas microbianas : rompe las protenas de la
harina ( gluten ) y dar la elasticidad de la masa .

Fermentacin: genera cidos y alcoholes que imparten sabores y aromas delicados orgnicos
voltiles.

Especialmente desarrollado en el pan horneado en casa ; levadura ms lento que


comercial Las levaduras y las bacterias tambin pueden impartir sabores nicos .

Sabor picante del pan de centeno , proceden en parte de los cultivos iniciadores de LAB como el
L. plantarum , L. brevis , L. bulgaricus , Leuconostoc mesenteroides , y Streptococcus
thermophilus.

Pan de masa fermentada consigue su nico sabor de Lactobacillus sanfrancisco .

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1.3 La injera: fermentacin extendido.

Fermentacin prolongada, en el pan etope llamado injera


El alto contenido microbiano proporciona fuente de vitaminas

Injera est hecho de teff (sin gluten, pan plano) un grano con granos pequeos y redondos que
crece en Etiopa a gran altura.
La masa se extendi a una amplia panqueque, se deja fermentar (3 das), sobre la base de los
organismos presentes en el grano y el aire.

La fermentacin incluye una sucesin de especies (Candida). La


fermentacin genera gama de subproductos (sabores)
La injera es la base de una
comida etope entero,
servido con otros alimentos
que se le plantean como un
mantel comestible.

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5. Produccin de aditivos alimentarios: vitaminas, polisacridos,
nuclesidos.

1.1 Vitaminas

Utilizado como suplementos para la alimentacin de los alimentos y de los animales humanos

La produccin est en segundo lugar solamente a la de los antibiticos

en las ventas totales

- La mayora de las vitaminas se hacen comercialmente por sntesis qumica.

- Sin embargo, algunos son demasiado complicados para ser sintetizado a bajo costo, pero
se pueden realizar en cantidades suficientes con relativa facilidad
mediante procesos microbianos.

La vitamina B12 y riboflavina son los ms importantes de estas


vitaminas.

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Vitamina B12

Produccin: 10.000 toneladas por ao

La vitamina B12 (sintetizado exclusivamente por microbios) Requerido


como un factor de crecimiento por todos los animales.
Como coenzima, juega un papel importante en las transferencias de metilo Deficiencia
(En los seres humanos) producen anemia perniciosa

Produccin industrial

Las cepas microbianas


seleccionadas por sus altos
rendimientos
Las especies de
Propionibacterium y
Pseudomonas son la
(especialmente
Propionibacterium
freudenreichii)
Los rendimientos comerciales se
incrementan en gran medida
mediante la adicin de pequeas
cantidades de cobalto al medio
de cultivo.

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Rivoflavina

Produccin: cerca de 1.000 toneladas por ao. Riboflavina:

sintetizada por bacterias, levaduras, y hongos


Presente en la leche, los huevos, la carne y otros alimentos.
Aadido como un suplemento para el pan, la leche, (calidad nutricional)
Es el compuesto original de la FAD y FMN flavinas, (un papel importante en las enzimas de las
reacciones redox)

Produccin industrial

Ashbya gossypii (hongo)


produce naturalmente varios
gramos por litro de riboflavina
(7 g / L) A pesar de este buen
rendimiento, hay
competencia econmica
significativa entre el proceso
microbiolgico y sntesis
estrictamente qumico.

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Vitamina C

Produccin: supera 35.000 toneladas por ao. Vitamina C (Tambin se usa como un antioxidante)

Produccin industrial

Mediante una combinacin de sntesis qumica y microbiolgica.


El sustrato de partida, D-glucosa, se reduce qumicamente a D-sorbitol, y una etapa de oxidacin
microbiana conduce a partir de D-sorbitol a L-sorbosa, que se convierte qumicamente al cido
ascrbico
La deshidrogenacin producida por Acetobacter suboxydans.

1.2

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1.3 Nucletidos

Durante siglos (Japn) han utilizado las algas secas, bonito seco, u otro pescado seco como
aromatizantes.

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Dos de los principales ingredientes de estos productos secos que mejoran el sabor son:

glutamato monosdico (MSG)


sal de histidina de cido inosnico (un nucletido)

Como potenciadores del sabor, el orden decreciente de eficacia entre los nucletidos es cido
guanlico, cido inosnico y cido xantlico.
Estos nucletidos se aaden para mejorar el sabor de sopas y salsas y son eficaces a
concentraciones muy bajas (0.005% a 0.01%).

Produccin

5 'IMP y 5' GMP es de aproximadamente 4.000 toneladas / ao.


Originalmente, por hidrlisis enzimtica de ARN de levadura (C. utilis).
Ahora, un medio de produccin comercial es por fermentacin. 5 'IMP: por fermentacin
directa o a travs de la produccin microbiana de inosina (puede ser qumicamente
fosforilada) Brevibacterium ammoniagenes, auxtrofos (adenina y guanina) producen
alrededor de 30 g / l de inosina.
Algunos microorganismos producir 5 'IMP por fermentacin directa, pero deben tener
una permeabilidad de membrana alterada (27 g / L). 5 'GMP: combinacin de la
fermentacin y sntesis qumica.
Bacillus megaterium, auxtrofo (purina) se acumula un aminoimidazol carboxamida ribosa
(AICAR).
Produce 16 g / L de AICAR (transformada qumicamente a 5 'GMP)
Guanosina excretando mutantes tambin se emplean en la produccin comercial de 5 'GMP.

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1.4 Polisacridos microbianos: algunas funciones Protectores:
Como una barrera fsica general impedir el acceso de sustancias nocivas, la deshidratacin, la
fagocitosis (por microorganismos / clulas del sistema inmune)
Como una forma de unin y neutralizacin de bacterifago.

Los polisacridos capsulares son a menudo altamente inmunognica

pueden haber evolucionado su diversidad inusual como una forma de evitar las respuestas de
anticuerpos (ventaja de esta caracterstica se puede tomar en el desarrollo de vacunas)

Papel en la adhesin y la penetracin del husped. En las plantas: la interaccin con el


polisacrido de la pared celular (lectinas) (tambin, en la defensa general de las plantas: la
infeccin bacteriana)

Algunos polisacridos pueden estar implicados en la patogenicidad (P. aeruginosa) (alginato:


obstruccin en las vas respiratorias, y el floema de las plantas)

Polisacridos s mismos presentan problemas de toxicidad


prcticamente no conocidos y muchos son cosechable a bajo coste
en grandes cantidades, lo que hace atractivo para su uso
biotecnolgico.

Se utilizan en alimentos, farmacutica, y aplicaciones


mdicas Diversidad en las propiedades estructurales y
funcionales
Sin embargo, se construyen con bloques muy similares: piranosa / furanose

Molculas con forma de varilla esquizofilano (esquizofilano commue,


hongos) escleroglucano (Sclerotium rolfsii, hongos)
Estructuras de tipo espiral aleatoria lineales pululano (Aureobasidium pullulans,
hongos) Estructuras intermedias alginatos (Azotobacter vinelandii)
Altamente electronegativo o molculas "polianinicas 'xantana
(Xanthomonas campestris)
Polisacridos neutros Dextranos (Leuconostoc mesenteroides).

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Extraccin y Produccin de:

crestas de gallo
fermentacin microbiana (Streptococcus

zooepidemicus) El medio de fermentacin:

incluye la levadura, glutamina, sales minerales (cloruro de sodio, fosfato de hidrgeno de


potasio, y sulfato de magnesio), y glucosa.

Usos

Viscociruga: ciruga oftalmolgica. La viscosuplementacin: Reemplazo de


lquido sinovial en la artritis.
Viscoaugmentation: La ciruga esttica para llenar espacios tisulares.
Viscoseparation: Despus de una lesin o ciruga
Entrega de la droga: Las microesferas de liberacin controlada de frmacos.

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