DEL ADN A LA PROTENA:

CMO LEEN LAS CLULAS EL

GENOMA
Daniel Moena
 Que es un Gen?

Un gen es un segmento de ADN que tpicamente codifica para una protena,

pero tambin hay genes que codifican para ARNs. Los genes tienen regiones
de ADN, normalmente ro arriba de la regin codificante, que controla la
expresin del gen. Se considera que estas regiones forman parte del gen.
Transcripcin
Las ARN polimerasas I, II y III llevan a
cabo la transcripcin en eucariotas
Adicin de casquetes (caperuza) en 5
y de la cola de poli(A) en 3
Los espliceosomas eliminan los
intrones del pre-mARN
 Dogma de biologa molecular
(1) Todas las clulas guardan su
informacin gentica en el mismo cdigo
lineal de ADN.

(2) Todas las clulas replican su (3) Todas las clulas (4) Todas las clulas
informacin gentica a partir transcriben parte leen la informacin del
de un molde preexistente. de su ADN en ARN ARN y lo traducen a
protena.
 Transcripcin inversa o
retrotranscripcin
RNA puede funcionar como molde para la
sntesis de DNA.
Este proceso est catalizado por la enzima
transcriptasa reversa (o inversa)
Fue descubierta en virus con genomas de ARN
por Howard Temin y David Baltimore.
Los virus que llevan a cabo la transcripcin
inversa se denominan retrovirus.
 Retrovirus
En la partcula viral hay dos copias del ARN
genmico, encapsuladas por la protena de la
cpsida y rodeadas por una envoltura
membranosa. Cada copia de ARN tiene
asociada una molcula de la transcriptasa
reversa.
 Ciclo reproductivo de un
retrovirus
1.- El virus se une a la superficie de la clula
husped , liberando su contenido en el
citoplasma.
2.- La transcriptasa reversa viral cataliza la
sntesis de una cadena de ADN.
3.- Se cataliza la formacin de una segunda
cadena de ADN.
4.- Este ADN entra en el ncleo y se integra en
el ADN cromosmico
5.- El genoma viral integrado se con el ADN de
la clula huesped.
6.-El ADN proviral produce trnscritos de ARN.
7.- Sirven como molculas de mARN que
dirigen la sntesis de protenas virales
8.- Los nuevos virus brotan de la membrana
plasmtica
Traduccin
Los ribosomas llevan a cabo la sntesis
de polipptidos
Las molculas de RNA de transferencia
llevan los aminocidos al ribosoma
Cdigo genetico
Como se lee un mARN
 Regulacin gnica en procariontes
Los genes que se mantienen siempre activos se
denominan genes constitutivos (ejemplo los
genes que codifican las enzimas de la glucolisis).
Los genes que estn altamente controlados de
forma que la cantidad final de producto del gen
est ajustada a las necesidades de la clula se
llaman genes regulados (codifican enzimas de
procesos metablicos que, a diferencia de la
glucolisis, no se requieren constantemente).
 Las rutas catablicas y anablicas estn
reguladas por induccin y represin de genes
Las enzimas que catalizan estas rutas suelen estar
reguladas coordinadamente; es decir, la sntesis de
todas las enzimas implicadas en una ruta concreta se
activan o desactivan al mismo tiempo.

Por lo tanto veremos:

Rutas catablicas e induccin por sustrato. (pasos de
la ruta catablica que degrada la lactosa en azcares
sencillos)
Rutas anablicas y represin por producto final. (ruta
de sntesis del aminocido triptfano)
 Los genes implicados en el
catabolismo de la lactosa
(1) el gen lacZ, que codifica la -galactosidasa
(la enzima que hidroliza la lactosa y otras -
galactosidasas)
(2) el gen lacY, que codifica la galactsido
permeasa (la protena de membrana que
transporta la lactosa a la clula)
(3) el gen lacA, que codifica una transacetilasa
(que aade un grupo acetilo a la lactosa
cuando es tomada por la clula)
 Estos tres genes pertenecen a una nica
unidad reguladora, llamada opern.
El opern es un grupo de genes con funciones
relacionadas que estn agrupados con
secuencias de ADN que permiten que estos
genes sean activados y desactivados
simultneamente
Opern lac

mARN polisitrnico
Opern lac reprimido
Opern lac activo
 Los genes implicados en la sntesis de
triptfano (trp) estn organizados en
un opern reprimible
los operones que regulan enzimas implicadas
en rutas anablicas son operones reprimibles;
son inactivados normalmente por un efector,
que es el producto final de la ruta.
El opern trp contiene los genes que
codifican las enzimas que catalizan las
reacciones implicadas en la biosntesis de
triptfano y para regular la produccin de
estas enzimas.
Opern trp reprimido
Opern trp activado
 Regulacin de la expresin gnica
Las clulas de un organismo eucariota NO son
todas iguales.

Los distintos tipos celulares transcriben

diferentes conjuntos de genes, lo que le dan la
especificidad.

Esto genera la diferenciacin celular

Niveles de regulacin transcriptional
 Para la transcripcin de un gen
eucariota se requiere:
Una secuencia regulatoria promotora o promotor:
secuencias de nucletidos necesarias para la fijacin de
la ARN polimerasa y factores de transcripcin.

Secuencias reguladoras: existen dos tipos

Intensificadoras (del ingls, enhancers): secuencias que
estimulan la transcripcin y cuya localizacin puede ser a
miles de nucletidos de distancia "ro arriba o abajo" del
promotor.
Silenciadoras (del ingls silencers): secuencias que inhiben
la transcripcin. Tambin pueden hallarse muy distantes
del promotor.
 Para la transcripcin de un gen
eucariota se requiere:
Factores basales de transcripcin: complejo
proteico que interacciona con el sitio promotor.
Son esenciales para la transcripcin pero no
pueden aumentar o disminuir su ritmo.

Factores especficos de la transcripcin:

complejo de protenas reguladoras que pueden
ser activadoras o represoras.
Protenas activadoras : interaccionan con las
secuencias intensificadoras del gen.
Protenas represoras: interactan con las secuencias
silenciadoras del gen.
Factores basales de transcripcin
Factores especficos de la transcripcin
 Actuacin conjunta de los elementos
de control del ADN y de los factores de
transcripcin
 CONTROL A NIVEL DEL
PROCESAMIENTO DEL ARNm
El mecanismo por el cual puede obtenerse de
un mismo gen dos protenas relacionadas se
denomina empalme alternativo. Este proceso
consiste en unir covalentemente diferentes
combinaciones de exones del pre-ARNm
obtenindose dos ARNm maduros con distinta
informacin y por lo tanto dos productos
proteicos que difieren en uno o ms tramos
de su secuencia aminoacdica
 CONTROL A NIVEL DEL
PROCESAMIENTO DEL ARNm

Empalme alternativo
 Mecanismos de control a nivel de la
traduccin
Control de la estabilidad del ARNm. La integridad
de la cola poli A es determinante para la
supervivencia del mensaje. El acortamiento
gradual de la cadena de adeninas por accin de
nucleasas, reduce en algunos casos la vida media
del ARNm.
Unin de micro ARN. Se asocian a la regin
3 UTR de los ARNm blanco. Un ARNm puede
estar regulado por diferentes miRNA.
Unin de protena represora al ARNm
 Mecanismos de control a nivel de la
traduccin
Control de la estabilidad del ARNm.
La integridad de la cola poli A es
determinante para la supervivencia
del mensaje. El acortamiento
gradual de la cadena de adeninas
por accin de nucleasas, reduce en
algunos casos la vida media del
ARNm.

Unin de micro ARN. Se asocian a

la regin 3 UTR de los ARNm
blanco. Un ARNm puede estar
regulado por diferentes miRNA.
 Tasa de traduccin del ARNm que
codifica para la protena ferritina
Cuando la concentracin
intracelular de hierro es baja,
la protena aconitasa se une a
una secuencia nucleotdica
especfica en el ARNm,
llamada elemento de
respuesta al hierro
(ERH), provocando un
plegamiento del mensaje a
modo de bucle, que bloquea
la traduccin.
 Mecanismos de control despus de la
traduccin
Dos factores son determinantes de la vida media
de una protena citoslica:
Su correcto plegamiento
Su secuencia aminoacdica de su extremo
aminoterminal.

Respecto del extremo aminoterminal, existen

secuencias aminoacdicas estabilizadoras, que
aseguraran una vida media prolongada y otras
desestabilizadoras, las cuales favoreceran la
marcacin de las protenas en dicho extremo.
 Niveles de regulacin proteica
Si una protena adquiere un plegamiento
anmalo, o se ha desnaturalizado pasa a
un proceso de ubiquitinizacin. La
ubiquitinizacin consiste en la adicin de varias
molculas de ubiquitina.
Las protenas desnaturalizadas son conducidas
por chaperonas moleculares hasta una
chaperona. stas pueden recuperar el
plegamiento nativo de la protena, en tanto se
unan a ella en una etapa previa o temprana de la
ubiquitinizacin
 Tcnicas de ADN recombinante
Son herramientas de la biologa molecular o
ingeniera gentica.
Se basa en la posibilidad de manipular los genes,
es decir:
A) tenerlos aislados
B) amplificarlos, en el sentido de tener muchas
copias de la misma secuencia
C) conocer la secuencia exacta
D) una vez aislado poderlo expresar fuera de su
localizacin natural
 Enzimas de restriccin
Familia de
enzimas aisladas
de bacterias, que
cortan las
molculas de ADN
exgenos en
secuencias
especficas de
reconocimiento
Figure 8-31 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
 Genoteca o biblioteca genmica
El genoma cortado en pedazos por enzimas de
restriccin puede ser clonado (cada pedazo inserto en
un vector) para posteriormente estudiarlo.
 Plasmidios recombinantes

Figure 8-39 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

La reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR)
Amplificacin mediante PCR
PCR: Reaccin en cadena de la polimerasa
Amplificacin mediante PCR
PCR: Reaccin en cadena de la polimerasa
 Sntesis de cDNA

Figure 8-43 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)