Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Teorii instructive
- n 1930 se nelesese deja c anticorpii sunt proteine globulare
- forma definitiv elaborat de Haurowitz i Breinl: teoria tiparului (template theory)
- antigenul era purtat n organism ctre situsul de formare al proteinelor, unde urma s
serveasc drept model, pe care moleculele nascente vor fi construite (mulate)
- de vreme ce moleculele de anticorp urmau s fie sintetizate pe suprafaa antigenului, a
prut perfect rezonabil propunerea unui mecanism n care structura stereochimic a
situsului antigenic ar determina o secven de aminoacizi distinct, unic a anticorpului,
responsabil pentru complementaritatea perfect dintre anticorp i antigen
- antigenul ar persista n organism pe toat durata procesului de sintez al anticorpului
- Karush: orice template care determin sinteza unei secvene primare de aminoacizi
trebuie s fie liniar
- Linus Pauling: teoria forelor interatomice i intermoleculare (premiul Nobel) / susine
c interaciunea dintre anticorp i hapten se datoreaz interaciunii unor configuraii
tridimensionale a atomilor
- antigenul va servi drept template doar pentru faza final a procesului de sintez a
proteinei, n care are loc rsucirea n spaiu a lanului polipeptidic
- teoria seleciei naturale: raportndu-ne la imunitatea mediat umoral i la anticorpii
naturali, antigenele care intr n circulaie vor interaciona cu anticorpii care au foarte
multe specificiti posibile (anticorpi specifici pentru determinanii antigenici) si care sunt
sintetizai i eliberai n snge n mod normal
- antigenul va lua rolul de carrier selectiv si va transporta anticorpul ctre celulele
specializate capabile s reproduc acest anticorp
IMUNOGENICITATEA.
Definiii 1.1:
- antigenul poate fi orice agent capabil s se lege specific la componente ale sistemului
imun (structur strin recunoscut de organism, capabil s declaneze rspunsuri)
- imunogenul este o structur care, recunoscut ca strin de ctre SI, este capabil s
declaneze reacii imune specifice i s reacioneze cu produii acestor reacii (anticorpi)
- antigenicitatea este mai de graba proprietatea structurilor de a se combina specific cu
receptori i produi finali ai RI, n timp ce imunogenicitatea reprezint att capacitatea
de inducere a RI, ct i aceea de a reaciona cu produii finali ai RI
- un imunogen este automat i un Ag, ns nu orice Ag este neaprat un imunogen
2. Greutatea molecular
Definiii 1.2:
4. Stabilitatea structural
- pentru a fi un bun imunogen, o structur trebuie s aib un anumit grad de rigiditate,
care s i permit meninerea unei anumite configuraii tridimensionale, pe care Ly B s o
poat recunoate
- moleculele foarte flexibile sunt slabe imunogene
5. Degradabilitatea
- moleculele care nu sunt biodegradabile nu sunt imunogenice deoarece nu pot fi
procesate de fagocite (implicit nu pot s expun pe suprafaa lor epitopii pentru a fi
recunoscui de Ly T)
CONDIIILE DE ADMINISTRARE.
GRUP, SPECIE.
Definiii 1.2 / SUBIECTUL 2
Valena antigenului
- numrul epitopilor diferii de la nivelul unui antigen confer unui antigen valena
antigenului
- n general, antigenele, mai ales proteinele, sunt multivalente
- pe msur ce un antigen multivalent interacioneaz cu anticorpii, aceste molecule se
leag ncruciat (cross-linking) la antigen i formeaz o reea 3D care conduce, in vitro, la
apariia unui precipitat
- cnd antigenul este monovalent -: nu poate apare legtur ncruciat
- mrimea complexilio antigen-anticorp depinde de valena antigenului
Reactivitatea ncruciat
- se refer la o reacie imunologic n care anticorpii specifici reacioneaz cu:
* dou Ag diferite, dar care prezint epitopi n comun
* un epitop diferit, dar cu o structur extrem de asemntoare cu a celui care a
stimulat producia anticorpilor
* un antigen heterofil (provenind de la alte specii), care este extrem de asemantor
dpdv. structural (Ac heterofili -: Ag heterofile)
Antigene heterofile
= antigene diferite filogenetic
- se gsesc la organisme aflate la distan n arborele filogenetic
- primul antigen heterofil: Forssman (un glicosfingolipid)
- antigenele heterofile au n comun unul / mai muli epitopi; aceasta st la baza nrudirii
lor antigenice, astfel dau reacii ncruciate (se combin cu acelai anticorp specific din
cauza prezenei epitopilor comuni)
Aplicaii practice
1) Testul pentru diagnosticarea sifilisului: Treponema pallidum are epitopi comuni cu
cardiolipinul
2) Testul screening pentru diagnosticul mononucleozei infecioase: virusul
Epstein-Barr reacioneaz ncruciat cu hematiile de oaie
3) Teste screening pentru tifosul exantematic i febra ptat a Munilor Stncoi:
serul infectat rickettsian aglutineaz unele linii de Proteus vulgaris (reacie Weil-Felix)
4) Variolizare: variola / smallpox <-> variola bovin / cowpox
5) Sistemul ABO
Variaia antigenic
- moleculelor le poate fi modificat antigenicitatea prin alterarea epitopilor
- variaia antigenic este procesul prin care microorganismele ncearc s se sustrag RI
ale gazdei, prin modificri mai mici sau mai importante la nivelul unor molecule de
suprafa (exemple: Tripanosoma, Plasmodium, Giardia, HIV)
- cu ct un virus sufer mai multe variaii antigenice, cu att mai greu este de obinut un
vaccin
- pentru vaccinurile anti-gripale se identific tulpina predominant, timpuriu la debutul
epidemiei, producndu-se vaccinuri pentru aceast tulpin
- nu exista vaccin anti-HIV deoarece mutaiile i seleciile apar la aceeai gazd infectat
FAGOCITOZA.
Calea endocitic
- vezicula tapetat cu clathrin fuzioneaz cu endozomul precoce (pH moderat ->
disocierea receptorilor -> colectai i reciclai)
- macromoleculele rmn n interiorul celulei = endozom tardiv -> fuzioneaz cu alte
componente (ali endozomi + vezicule din aparatul Golgi) -> scdere pH
- degradare complet = endozomi + lizozomi -> endolizozomi (pH ~ 5, enzime litice)
- la sfritul procesului: produii de digestie sunt colectai n vezicule exocitice, care se
desprind din endolizozomi
Calea fagocitic
- internalizare -> depolimerizarea actinei -> fagozom precoce, tardiv i fagolizozom
- toate procesele de fuziune i desprindere cu diverse componente sunt facilitate de
annexin, care se leag de fosfolipidele membranare -> scderea pH-ului la cel puin 5
- dac particula este un microb -> ucidere, apoi digestie (mecanisme de evaziune)
- mecanisme de distructie intracelular = enzime lizozomale (mecanisme
oxigen-independente), oxidarea letal a lipidelor i proteinelor bacteriene (mecanisme
oxigen-dependente) i eliberarea de oxid nitric
1. Mecanisme oxigen-independente
- n esuturi unde presiunea oxigenului este sczut i arderile respiratorii nu pot avea loc
- consumarea ionilor de hidrogen n aceste reacii -> creterea uoara a pH-ului ->
defensine (proteine cationice care au o structur amfipatic asemenea colicinelor, deci
care formeaz canale ionice reglate de voltaj, destabilizatoare pentru bacterie i care au o
selectivitate remarcabil)
- pH neutru: proteinaze neutre (catepsina G) -> aciune asupra membranei bacteriei
(creterea permeabilitii)
- pH sczut: lizozimul i lactoferina
2. Mecanisme oxigen-dependente
- sunt declanate n momentul fagocitozei, cnd se produce o cretere dramatic a
activitii untului hexoz-monofosfailor -> NADPH
Curs p. 9,10
In momentul in care
complexum Ag-Ac se
ataseaza la doua sau mai
multe capete globulare ale
C1q, C1r capata activitate
proteolitica, activeaza si
cealalta molecula de C1r si
ambele cliveaza cele doua
molecule de C1s,
activandu-le.
Carte p. 53
Componentul pivot al
acestei cai este C3.
Acesta prezinta o
legatura interna de tip
tioester intre reziduu de
cisteina si unul de
glutamina, care permite
reactia formei solubile a
C3 cu apa. Calea
alternativa se afla
continuu intr-o stare de
activare spontana la o
rata foarte scazuta a
hidrolizei C3 de catre
apa. Aceasta reactie duce
la formarea unui
intermediar instabil, C3i
sau C3[H2O].
In prezenta Mg
C3[H2O] se poate cupla
cu un alt component al
complementului, factorul
B.
Factorul D
cliveaza proteolitic
factorul B, eliberand
Ba(fragment mic) si
Bb(fragment mare) care
ramane asociat la C3i.
Complexul C3iBb este
instabil. Acesta este
stabilizat de properdina. Este capabil sa cliveze C3 in C3a si C3b.
C3b este stabilizat prin reactie cu suprafata microbiana. Acesta recruteaza factorul
B, care este clivat de factorul D => Ba si Bb formand C3bBb C3 convertaza caii
alternative. C3 convertaza cliveaza C3 in C3a si C3b, care se ataseaza acesteia formand
C3bBbC3b C5 convertaza caii alternative.
C5 convertaza cliveaza C5 in C5a si C5b. C5b este slab legat de C3b si duce la
atasarea rapida a C6 si C7 la C5b. Complexul C5bC6C7 este slab legat de membrana
bacteriei, dar are afinitate pentru lantul peptidic al C8. Lantul al C8 se insera in
membrana bacteriei si genereaza modificarea conformatiei C9, care este capabila sa se
insere in bistratul lipidic. C9 polimerizeaza si formeaza o structura anulara, MAC, care
permite patrunderea in celula a apei si electrolitilor. Aceasta duce la liza osmotica a
celulei.
Carte p. 48
Curs p. 5
Curs p. 6,7,8
(pag.8, cursul 3)
19.Inflamatia mediata de complement
Curs 2
Deficiente
homozigote
C1q,C1r,
C1s, C4,
C2aceleas
i
simptome-persistenta CI in ser si aparitia LED, glomerulonefrita,vasculite,infectii recurente cu
bacterii piogene.
Deficiente properdina,factor Dinfectii recurente cu Neisseria
C3cele mai severe, infectii recurente
MACinfectii recurente Neisseria
C1 Inhangioedem ereditar
Componente reglatoare DAF,HRF anemie hemolitica cronica si
hemoglobinurie.
22.Domeniile moleculei de Ig
Domenii- unitati homoloage de cca 70-110 aa pe lanturile L si H cu crearea unei bucle(cca 60aa)
cu leg disulfidica.
Secventele de aa ale domeniilor nu sunt identice,dar sunt similare, creaza o forma in spatiu
Lanturile L contin 1 domeniul V si unul C
Lanturile H contin 1 domeniu V si 3-4 domenii C ( in f de clasa Ig)
Domeniile Ig-nelor se pliazastructura compacta din 2 straturi opuse( 2 foi beta-pliate) unite
prin bucle de conexiune cu lungimi diferite.
Foile beta-pliate dintr-un strat sunt stabilizate prin leg de H care leaga NH dintr-o foaie cu
gruparile carbonil din foaia adiacenta.
Foile beta-din aa hidrofobi(orientati spre interior) si hidrofili(spre exterior) alternativi cu catene
laterale dispuse perpendicular pe planul stratului.
Cele 2 straturi opuse stabilizare prin leg hidrofobe, leg disulfidica intralant
Interactiuni necovalente dintre domenii prin fetele alcatuite din foi b-pliate- intre domenii
non-identice VL- VH, CL-CH1 , identice :CH2-CH2 , CH3-CH3.
Structura domeniului globular- permite realizarea unei bucle de conexiune cu lungimi si secvente
variabile-formeaza paratopul.
monomer constituit din doua perechi de lanturi grele si usoare legate prin
punti disulfidice;
IgM este un pentamer , cei 5 monomeri fiind uniti prin intermediul unui lant
de monomer.
PP. BIOLOGICE SI CHIMICE:
Molecula de IgM libera in solutie are forma de stea , dar cand se combina cu
majoritatea antigenelor;
cazul bacteriemie;
fragmentul Fc al lantului ;
parte din IGM este sintetizata local, in tesuturile secetorii. IgM secretorie,
3.IMUNOGLOBULINA A
Exista sub doua forme:
1. SERICA
2. SECRETORIE
1.Ig A serica:
STRUCTURA:
meningococi etc.
2.IgA secretorie
STRUCTURA:
Subclasa
4.IMUNOGLOBULINA D
STRUCTURA:
mediu acid;
si toxina difterica.
5.IMUNOGLOBULINA E
IgE este prezenta in cantitati foarte mici in serul
normal;doar o proportie foarte mica de plasmocite din
organism produc IgE.
STRUCTURA:
la 56 C.
imediata;
paraziti;
26.RECEPTOII Fc
RECEPTORII Fc
Sunt de mai multe tipuri:
1. 1.R. Fc leaga cu mare afinitate IgG.Prezent pe
monocyte si in mai ica masura pe macrofagele
nestimulate. Functioneaza efficient in medierea
uciderii extracelulare a acelulelor tinta acoperite
de Ac. Fc1 regleaza nivelul global de IgG din
corp.
2. R.Fc2 are afinitate mica pentru IgG. Distribuit
pe monocyte, neutrofile, eozinofile, trombocite
sip e lyB.
3. Receptorul Fc3 are afinitate mica pentru IgG,
present pe macrophage, eozinofile,limfocite NK.
Mediaza ADCC-ul realizat de celulele NKsi
clearance-ul complexelor immune din circulatie
de catre macrofage.
27.SUPERFAMILIA IMUNOGLOBULINELOR
28. MECANISME GENETICE CARE CONDUC LA FORMAREA
Fiecare din cele doua lanturi usoare este codat de gene distincte, situate
de la 96-108.
grele.
genic J ales.
JH functionale.
O alta caracteristica ce particularizeaza genele lanturilor grele este
pentru conferirea asa numitelor functii biologice ale Ac, iar conservarea
acestor functii efectorii este realizata prin mentinerea unui nr. limitat de
formata din mai multi introni si exoni, fiecare dintre exoni codand cate
cu un Ag.
Exonul Leader
Un intron scurt
Un alt intron
DIVERSITATII IMUNOGLOBULINELOR
alaturi de mai multe alte gene perfect individualizate. Cel mai bie
aditie.
complet diferite.
maturatie de afinitate.
functiilor biologice ale Ac. Genele pentru regiunile constant sunt mai
lungi decat cele pentru regiunile variabiel, fiind alcatuite dintr-o serie de
intracitoplasmatica.
la nivelul ARNm.
lyB mature, dar naivevor expima simultan pe suprafata atat IgM , cat si
process are loc in timpul vietii adulte a lyB si noi rearanjari genice nu
specificitatea Ig respective.
molecule de suprafata.
transplantare puternice.
STRUCTURA CRISTALOGRAFICA:
8-10 AA.
NON-PEPTIDICE
Moleculele MHC sunt capabile sa prezinte excluziv peptide Ly T .Totusi,este dovedit faptul ca
recunoaste si A g neproteice.Experimente efectuate cu Mycobacterium tuberculosis ne-au ajutat sa
intelegem maniera prin care lipidele si glicolipidele sunt prezentate de catre membrii familiei CD1.
Familia CD1 este formata din molecule care nu sunt codate de gene de la nivelul MHC si formeaza un
system de prezentare a antigenului complet distict fata de MHC-urile clasice de clasa I sau II si chiar
fata de moleculele MHC-like.Pana in present ,sunt descries 5 gene CD1 nepolimorfice la om
(CD1,CD1b ,CD1c,CD1d,CD1e) si doi homologi la rozatoare.Produsii proteici ai acestor gene au fost
clasificati in doua grupe,pe baza structurii si a distributiei tisulare.
Grupul I de proteine CD1 umane (CD1a,b si c) este exprimata din abundenta la nivelul unor APC-uri
profesionale cum sunt celulele Langerhans,celulele dendritice din ganglioni limfatici,celulele B din
zona manta si monocitele activate.Grupul II de proteine CD1(CD1d uman si CD1d1 si CD1d2
murine)este exprimat la nivelele crescute la nivelul epiteliului intestinal.
Moleculele din familia CD1 au o structura similara cu cea a MHC I, fiind formate dintr-un lant beta 2
microglobulina asociat cu un lant greu de tip a.Identitatea de structura a moleculelor CD1 cu cele ale
MHC I clasice este scazuta.Astfel,domeniul a3 al CD1 seamna mai degraba cu cel al beta 2
microglobulinei decat cu cel a3 al MHC I.Nu exista practice homologie de secventa la nivelul
domeniului a1 si este extrem de limitata la nivelul domeniuluia2.Desi considera ca o molecula
MHC-like,homologia cu domeniul a3 arata ca CD1 este la fel de indepartata de MHC I ca si de MHC
II.
S-a aratat ca CD1b actioneaza ca un element de restrictive in prezentarea de lipide (acid
micolic),component ale peretelui bacterian al M.tuberculoSis.Alte studii au revelat prezentarea de
catre CD1 de glicolipide (liporabinomanan)derivate din M. leprae.Spre deosebire de peptidele
prezentate de catre moleculele MHC I clasice,prezentarea acestora antigene este indepartata de TAP-1
si TAP-2 si nu e sensibila nici la cloroquina(sugerand ca nu apare nici necesitatea unei acidificari
endosomale),demonstrandu-se ca procesarea antigenelor destinate CD1 este diferita fata de cea
utilizata de MHC I(celulele TAP deficient sunt capabile sa prezinte antigene sociate CD1).In ciuda
localizarii CD1 la nivel endosomal,prezentarea apare independent de HLA-DM.Practic,este vorba de o
a treia astfel de cale ,un system distinct ce prezinta etape intracelulare distincte si necesita molecule
distincte,capabile sa prezinte antigene neproteice Ly T.
CD19 face parte din molecula co-receptor a L B,impreuna cu CD21(receptorul pentru complement 2
sau CR2) si CD81.Rolul fiziologic al CD81 ramane necunoscut inca. CD19 poseda aa de tirozina la
nivelul cozii citoplasmatice,ce vor fi fosforilati ca raspuns la angajarea BCR, eveniment ce determina
si asocierea ln si fn la CD19. Stimularea CD19 se poate realiza si atunci cand CR2 se leaga la un
antigen opsonizat cu fragmente ale complementului. Daca aceste doua procese se produc simultan
(legarea BCR si a CR2), aceasta inseamna ca receptorul pentru Ag si co-receptorul L B sunt
co-legati(cross-linking), ceea ce conduce la o amplificare a semnalului de activare. CD19 ar putea
fi,de asemenea,util si pentru receptionarea ajutorului de la limfocitele Th.
O consecinta a co-legarii va fi exprimarea FcRIIB pe suprafata L B,foarte aproape de BCR; se
genereaza o co-legare ce va transmite un semnal inhibitor celulei(indica faptul ca este prezenta o
cantitate suficienta de anticorpi si nu este nevoie de productia unei cantitati suplimentare-vezi reglarea
RI de catre anticorpi).Mecanismul de supresie se bazeaza pe interactiunea dintre motivele structural
ITIM din coada citoplasmatica a FcRIIB si tirozina SHP-1.(curs9,pagina 9)
SUBIECT NR 43
ORGANE LIMFOIDE PRIMARE ( CURS 7)
Maduva osoasa si timusul sunt org limf primare ,la nivelul carora este desavarsita formarea
limfocitelor pana la stadiul in care acestea sunt mature si functionale, deci exprima si un receptor
pt Ag complet si corect format.
Stroma timica este formata din fibroblaste si celule ep dendritice ce alc. o retea
tridimensionala ,iar printre acestea se gasesc ly t in dezvoltare. Jonctiunea cortico med. este
populata de celule derivate din maduva hematogena , cum sunt macrofagele santinela si cel
dendr interdigitate. In regiunea ext a cortexului se gasesc cel doica , care au capacitatea de a
prelua aprox 50 de timocite impreuna cu care formeaza complexe multicelulare. In medulara
se gasesc corp Hassal. ( continuarea curs pg2)
SUBIECT NR 44 ( SINTEZA ARAB)
ORGANE LIMFOIDE SECUNDARE
Patogenii pot patrunde in organism pe mai multe cai si pot induce infectii; pt o recunoastere
eficienta exista organele limfoide secundare care au rol in activarea ly deoarece aici are loc
contactul cu Ag.
1) Ggl limfatici sunt structuri bine organizate prin care circula limfa si este cuplat cu vasele
limfatice care dreneaza limfa. Ggl ly are: o capsula fibroasa si apoi o arie corticala iar spre
ext o arie medulara; la randul sau corteul are o regiune cortex superficial si spre ext o
arie de cortex profund sau paracortex. Corteul superficial este o zona B dependenta si
contine majoritatea ly b , organizate in foliculi limfatici dar si alte tipuri celulare. Unii
foliculi au o zona centrala in care au loc proliferari intense ale ly b centru
germinal,acesti foliculi se numesc secundari fata de cei care nu au centru germinal si se
numesc primari. Foliculii primari au ly b mature naive
Centrii germinali se formeaza prin proliferare in urma stimularii antigenice a ly b ; sunt
zone de proliferare celulara intensa de selectie a plasmocitelor ce secreta Ac de mare
afinitate si de generare a ly b cu memorie
Aria paracorticala este zona T dependenta cu cel T si celule dendritice interdigitate
-ly t intra in ggl prin ly aferente ce este deschis in sinusul subcapsular ,fie pe la nivelul
venulelor (HEV)
-in medulara se gasesc : plasmocite, macrofage,cel dendritice
2) Splina cu pulpa alba ,pulpa rosie rol in prezentarea Ag circulante, depozit sangvin
3) Tesutul limfatic asociat mucoaselor MALT , BALT, GALT
SUBIECT NR 49
Ly T (pg9 curs 7)
LyB1 (CD5+)
Celulele b1 apar in ontogenie inaintea celulelor b22 ,grupul major de ly b la om si
soarece .Ly b1 apar in cursul dezv. fetale , exprima IgM, aproape deloc IgD si se
remarca prin prezenta pe suprafata a moleculei CD5.Aceasta nu este
indispensabila pt dezv lyb si reprezinta mai degraba un marker al ly Th
Celulele B1 se gasesc in cantitati foarte mici in majoritatea organelor limfoide ,
localizate cu predilectie in cavitatea peritoneala si pleurala
Populatia b1 raspunde destul de prost la Ag proteice ,dar mult mai bine la
CARBOHIDRATI . Prezinta pe suprafata Ig M, dar celulele nu sufera
hipermutatii somatice sau comutari de clasa; ca urmare Ac produsi de aceste
celule sunt de mica afinitate . Repertoriul lor restrans le permite sa faca fata unui
nr restrans de patogeni cu care organismul se intalneste mai frecvent in viata
precoce
LyB Cd5+ nu necesita ajutorul Ly Th si sunt responsabile pt nivelul de IgM din
serul normal ; de asemenea aceste celule sunt responsabile pt producerea "Ac
naturali". Pe de alta parte ,foarte multe din leucemiile limfocitice cronice apar
din acest subset ( pg12 curs 7)
Subiect nr 47 (pg4 curs 9)
Calea de semnaliare intracelulara desclansata de TCR
Rezultatul angajarii unui nr suficient de molecule tcr si a formarii SMAC este reprezentat de
recrutarea de proteine cu rol de transducere a semnalului si activarea unor domenii cu rol de
semnalizare. Multiple cai de semnalizare care sunt declansate prin legarea TCR, cai ce se
vor intrepatrunde cu cele declansate de moleculele co-receptor si co-stimulatorii; la
acestea se adauga si molecule adaptor ,proteine non enzimatice .
Lanturile cd3 nu prezintan proprietati catalitice intrinseci insa contin motive ITAM si astfel
servesc ca substrat pt fosforilarea aa de tirozzina de catre protein kinaze lck si fyn; in conditii de
repaus aceste kinaze sunt mentinute inactive . Activarea celor doua va fi efectuata de cd5,
exprimata pe suprafata tuturor leucocitelor. Lck si fyn activate vor permite in continuarea
recrutarea ZAP 70.
ZAP 70 va determina activarea unor molecule adaptor care vor furniza legaturi esentiale
catre molecule intermediare ce transduc semnalul TCR. Una din cele mai imp molecule este
VAV1 ,aceasta are in componenta un domeniu care se leaga la citocheletul de actina. O alta
enzima activata de zap 70 este PLC-care activata va putea hidroliza un lipid membranar
PIP2 in mesagerii secundari IP3 si DAG . IP3 se leaga la un canal de calciu
determinand eliberarea acestuia din depozite, ulterior calciul se va lega de calmodulina
care va activa mai departe calcineurina. Calcineurina va defosforila unii membri ai
familiei NFAT in special NFATc care traverseaza membrane nuclear si formeaza
NF-ATn-nuclear
Calciu actioneaza si asupra DAG care va activa PKC . Fosforilarea ZAP 70 a proteinei
LAT determina recrutarea PI3K. PI3K fosforileaza PIP2 si il converteste in PIP3; tot
PI3K va actiona asupra altor doua cai implicate in activarea ly t : calea de
semnalizaren prin p 38 si calea SAPK/JNK, in final acesta va conduce la activarea
factorului de transcriptie c-jun
Ras este o proteina a carei activitate este controlata de statusul de fosforilare a
nucleotidelor de care este responsabil GEF . Ras-GDP este inactiv si este necesara
interventia GEF .
Fosforilarea LAT de ZAP70 conduce la activare unui GEF si mai departe la activarea
RAS care va declansa o cascada de MAPK-kinaze ce include raf, MEK si ERK.
Aceasta cascada duce la activarea c-myc si c-fos= transcriptia unor noi gene
Legarea cd28 la b7 conduce la recrutarea PI3K care va genera PIP3. CD28 determina
hiperfosforilarea VAV1 , producandu-se agregarea rafturilor membranare in jurul
TCR/CD3, in final are loc activarea c-fos si c-jun care se vor combina pt a forma AP1
SUBIECT 46
a) Semnale co stimulatorii ( curs 9 pg2)
Cea mai importanta pereche de molecule este cea formata de cd28 dp suprafata ly
t si b7 dp suprafata apc-urilor. Legarea cd28 este critica pt activarea ly nave caci
in absenta co stimularii legarea tcr va conduce la apoptoza sau anergie. Odata cu
angajarea tcr ,expresia cd 28 este amplificata ,iar celulele ies din faza g 0 si intra
in ciclul cellular,efectele se vor reflecta in secretia de cytokine. Nu in ultimul rand
cd 28 induce expresia ICOS sau 4-1BB si CTLA4 precum si a molecule
cd40L,foarte imp. pt interactiunea dintre ly t si b
CD28 se leaga cu afinitate moderata la doi liganzi B7-1 si B7-2 care au kinetici
diferite. B7-2 creste rapid si expresia poate dura 96 h in timp ce B7-1 apare doar
dupa 48h si rezista 72h
B7-1 si 2 au functii co stimulatoare a ly t in procesul de proliferare si secretie de
IL2 si IFNgama. B7-2 va determina cresterea secretiei de limfotoxina a, in timp
ce B7-1 favorizeaza secretia de GM-CSF
ICOS nu poate fi legat decat de ICOS, acesta este exprimat doar dupa co
stimularea prin cd28. ICOS va determina cresterea sintezei de IL-10, o
citokina importanta pt diferentierea ly b.
CTLA4 are o homologie de structura de 75% cu CD 28 si prezinta o afinitate de
legare pt moleculele B7 de 10-20x mai mare. El apare pe suprafata ly t dupa
leagarea TCR. CTLA4 poate recruta SHP-2 ,iar aceasta enzima se leaga la un
motiv ITIM (inhibitor) al cozii intracitoplasmatice a CTLA4
CD40L este membru al superfam TNFR.Legarea la mol. cd40 dp suprafata
ap-urilor reprezinta e etapa imp de pregatire a ly nave pt activare.
CD27 este exprimat de majoritatea ly Th si Tc resting din sangele
periferic.Ligandul lui cd27 este cd70, exprimat atat de ly t cat de ly b ca
raspuns la stimularea Ag. Rolul lui cd 27 este important pt generarea de ly t cu
memorie
SUBIECT 48
SUPERANTIGENE curs 11
Sunt proteine care se leaga simultan 1) la nivelul unor situsuri constante,situate in afara
cupei mhc2 ,fara sa fie nevoie de o procesare a Ag si 2) la niv unor CDR2 ale unor
lanturi TCRbeta. SuperAg realizeaza deci o leg intre tcr-ul dp un anumit ly t si molecula
mhc2 dp suprafata unui APC legatura care ignora peptidul prezzentat de mhc.
Denumirea de superAg subliniaza faptul ca un nr mare de ly t sunt activate ne-specific
simultan. Ca urmare RI care rezulta are o amplitudine foarte mare. SuperAg sunt
mitogeni depedenti de mhc2 , acestea pot fi exogene (produsi ai unei bacterii care se
replica) endogene (produsi ai unor virusuri integrate)
Ag T independente (curs 11 pg 3)
Pot fi impartite in doua categorii tip 1 si tip2 ,avand caracteristici diferite. Daca rasp lyb
fata de ag Ti-1 pot apare in conditii de complete absenta a contactului cu Th si a
citokinelor, rasp fata de Ti-2, desi nu necesita contact intercellular, necesita ajutor din
partea unui set de cytokine.
Ag Ti-1 : la concentratii crescute, se comporta ca activatori policlonali ai ly b , sunt
considerate mitogeni ai acestor cellule ,se leaga la aceste cellule altundeva decat la
BCR. Chiar si la cantitati mici de Ag ,activarea ramane complet independent de
ajutorul ly Th. De asemenea aceste Ag pot activa si ly b imature.
Ag Ti-2: sunt adesea molecule liniare cu greutate mol. mica , cu epitopi repetitive. Fiind
greu de procesat, ai tendinta de a persista pe suprafata macrofagelor pt perioade lungi de
timp. Actioneaza ca Ag multivalente ce se leaga cu o aviditate inalta la receptorii pt
Ag dp suprafata unui ly b , realizand fenomenul de legare incrucisata. Se crede ca
prin intermediul acestui fenomen se ajunge la o stimulare prelungita a ly b . De
subliniat este faptul ca ag Ti-2 activeaza ly b intr-o maniera specifica
Alte Ag t-independente like : unele virusuri contin epitopi care nu se incadreaza in nici
una dintre categoriile de ag t independ. mentionate. Exemplu , o glicoproteina de
suprafata a VSV poate genera un RI in absenta complete oricarui contact cellular ,
precum si a citokinelor , comportandu-se ca un Ti-1.
SUBIECT 50
MATURIZAREA CELULELOR B IN MADUVA OSOASA SI PROCESELE DE SELECTIE
(curs 7 pg 9)
Celula pro-b prolifereaza in maduva osoasa , in acest stadiu exprima CD45R si molecula CD44,
ceea ce va promova in continuare interactiunea dintre c-kit si SCF de pe celulele stromale. Stadiul
pro-b poate fi divizat in 2 etape : pro-b precoce si pro-b tardiv. In stadiul pro-b precoce incep
rearanjarile DJ simultan pe ambii CRS 14. In stadiul pro-b tardiv , ca urmare a fenomenului de
excluzie alelica , urmatoarea rearanjare V-DJ are loc doar pe unul din cei doi crs; tot in acest
stadiu ca urmare a interactiunii c-kit si SCF celulele pro-b sunt stimulate sa exprime IL-7R.
Stadiul PRE-B marcheaza asocierea primei gene constante la segmentul genic rezultat din
fuziunea VDJ. Totodata o cantitate redusa de lant u va fi exprimata pe suprafata , asociate cu
un lant L surogat format din doua segmente peptidice, numite V-pre-B si respectiv
Asamblarea a 2 lanturi si a doua lanturi V pre-B/5 conduce la formarea receptorului
celulei pre-b. Acest receptor este asociat cu heterodimerii Iga si impreuna formeaza pre-BCR.In
stadiul pre-b rearanjarile VDJ sunt stopate si din acest moment incep rearajarile pt lanturile
usoare.
Celulele B imature : o serie de eperimente au aratat ca cel ly b imature pot recunoaste si lega
Ag dar aceasta legare conduce la o inactivare de lunga durata si nu la expansiune si diferentiere.
Ly b imature interactioneaza cu moleculele self din maduva osoasa , aceasta particularitate este
foarte imp. pt dezv tolerantei la self. Daca ly b imatur este expus la o molecula self ,acesta va
muri prin apoptoza-deletie insa daca leaga Ag solubile ,celulele sunt inactivate ,nu deletate
( sunt anergizate) Inactivarea ly b imature autoreactive se numeste selectie negativa
Celulele B mature : acest stadiu apare predominant in maduva osoasa dar poate sa se produca si
in organe limf secundare. Caracsteristica acestei etape este co-epresia de IgM si IgD. Multi
factori transcriptionali actioneaza in timpu dezv celulelor hematopoietice ,ex : E2A, EBF,
BSAP,Sox-4
59. Th1- secreta IL-2, IFN , SI limfotoxina -> raspunsuri mediate celular si patogeni
intracelulari
Th1 determina macrofagele sa secrete citokine in plus, sa fie
fagocite mai potente, cresc productia de NO, le determina sa fie capabile de ADCC( citotoxicitate
dependenta de Ac). Th1 determina II si a moleculelor TAP. Activarea Ly Tcitotoxice sustintuta prin
IL-2, IFN si contactului CD40-CD40L amplificarea expresiei MHC.
Th2-secreta IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13->sustin Ri umorale ptr eliminarea patogenilor
extracel.
Th2 are rolul de a stabili contactul cu LyB prin CD40-CD40L. IL-4 SI 5
determina comutarea de clasa catre Ig A, E, G4 ( nu determina activare de complement sau ADCC=>
neutralizare in absenta inflamatiei). IL-5 importanta ptr diferentierea si cresterea eosinofilelor.
IL-3,4,10 activeaza mastocitele, care pot da reactii alergice. IL-10 inhiba functia macrofagelor si
secretiua de IL-12, inhiba MHC IIsi B7 de pe DC ( cel.dendritice),dar le amplifica pe LyB
Th17 - secreta citokine din fam IL-17 (in special IL-17a SI IL-17f), IL-22.Acestea sunt citokine
pro-inflamatorii, actionand in special la niv. Situsurilor imune. Hipersecretia acestor citokine se
intalnesc intr-o serie de boliautoimune ( artrita reumatoida, scleroza multipla, psoriazis si
IBD-INFLAMMATORY BOWEL disease).
IL-17 stimuleaza multe celule ale apararii nespecifice ( mai ales PMN neutrofile) dar si epiteliale,
endoteliale, determinand sinteza de IL-1, IL-6, si TNF, care conduc la inflamatie.
IL-22 determina celulele mucoasei sa sintetizeze produsi antibacterieni, care apara suprafata
mucoaselor.
ASTFEL, subseturile de CD4+ nu se suprapun in generarea raspunsurilor imune, fiecare luptand cu
patogeni diferiti, moduland RI in mod diferit.
60. Defectele retelei reglatorii care controleaza expresia citokinelor conduc la afectiuni.
Infectii cu bacterii Gram ( E.coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenees,
Neisserii) Raspunsul imun este directionat la liza bact6eriilor, cu elimnare de endotoxina
care derermina soc endotoxic caracterizat prin scaderea TA, febra, diaree, coagulare
vasculara diseminata. Rezolvare: prin Ac monoclonali care blocheaza Receptorii ptr
cytokine ( IL-1 SI TNF) sau inhibitor de IL-1(IL-1Ra). Unele microorgsm secreta
toxine( superAg) recunoascute doar de V al TCR, deci de multe Ly Th, asadar un Super
Ag activeaza pana la 25% din Ly Th( De ex Tsts-toxina socului toxic stafilococic)
Neoplazii( limfoide, mieloide, dar si a unor organe solide). De ex in mixomul cardiac,
secretie crescuta de IL-6, cu effect de stimulare autocrine.
Inhibarea clonarii Ly, de ex Trypanosoma cruzii(protozoar), urmata si de o scadere de 90% a
CD25 ( IL-2R).
Lepra evolueaza in functie de tipul de aparare, astfel ca daca se activeaza Th1, vorbim de
forma tuberculoida, mai usoara, iar in cazul activarii Th2, raspunsul este predominant
umoral, bacteriile sunt disseminate in macrophage, hipergammaglobulinemie=> infectie
diseminata a oaselor, cartilajelor si nervilor.
Virusul ebstein-Barr secreta vIL-10, care semana cu IL-10, inhiband activarea Th1.
Terapiile bazate pe cytokine incearca sa resolve o serie de patologii care au substrat molecular.
De exemplu:
o Artrita reumatoida se poate trata cu Ac monoclonali contra TNF receptor
o ( Interferon ) se pot rezolva boli precum hepatita B,C,Sarcom Kaposi, melanomul.
o Interferon in sclerozele multiple
o G-CSF, care stimuleaza sinteza de granulocite(neutrofile), ajutand orgs in lupta cu
cancerul
o GM-CSF-producerea celulelor liniei mieloide
o IL-11 creste sinteza placheteleor, dupa transplantul medular
o Eritropoietina, creste sinteza de eritrocite
61. Efectorii RI- impartiti in 2 categorii:
1) Celule efector cu efect citotoxic direct- elimina intrusul prin moartea directa a celulei.
Acestea sunt Ly T AG specific (CTL) si NK+ macrophage.
2) Celule CD4 + - rol in reactiile de tip intarziat.
Celulele efector se diferentiaza de cele nave: de ex. Nu au nevoie de semnal co-stimulator, isoforma
CD45RO de pe celulele cu memorie se asociaza mai bine cu complexul TCR si co-R sai decat
CD45RA de pe nave.=> Activare mai usoara, chiar in lipsa lui B-7, chiar si pe APC neprofesionist.
62. CTL sunt generate ca urmare a activarii LyT CD8+. Rol important in eliminarea selfului
alterat( cel. Infectate viral, celule tumorale) si respingerea grefelor; sunt MHC I restrictate( toate
celulele nuclate au MHC I => recunosc selful alterat de pe aproape toate celulele orgs.
Raspuns CTL in 2 etape: 1. Ly Tc nave si se diferentiaza in CTL
2. CTL efectorii se cupleaza la MHC I de pe
celula afectat si o ucide.
CTL+ celula tinta=conjugat. In cateva minute, etapa energofaga, Ca dependenta, care duce la apoptoza
celulei( in ore), intre timp CTL detasandu-se de celula tinta.
CTL prezinta electrono-dense- contine perforine si granzime. Precurosorii CTL nu au. Perforinele
(monomeri) in contact cu M celulei tinta formeaza polimeri- gauresc Membrana( cam ca C9 de la S.
complement). Intrarea granzimelor in celula determina fragmentarea nucleului ( prin atasare la R
manoza 6 fosfat). Determina si fragmentea AND viral din cel.respectiva. Unele CTL nu au aceste
enzime, dar ucid prin intermediul FAS- proteina semnal. Ambele cai determina moarte celulara prin
CASPAZE (cistein-aspratat-proteaze) .
FasL se gasteste pe CTL, Fas pe celula tinta !
NK ucid celulele tumorale si infectate viral in mod asemanator CTL. Daca CTL necesita activare,
NK este o celula citotoxica innascuta, prezentand mereu granulatii mari in citoplasma. Ucide la fel.
Diferentele fata de CTL : NK nu exprima R ptr Ag, nici CD3, recunoastreea tintelor nu este MHC
restrictata, celuleleNK nu genereaza memorie imunologica.
Nk recunoaste celulele alterate prin modificarea balantei de semnale activatoarea si inhibitoare, celula
avand Receptori pentru ambele tipuri de semnale. Exista semnale activatoarea solubile (IL-12, IL-15,
IFN , si TNF). Receptorii au cozi intracitoplasmatice cu motive ITAM ( ca la CD3) sau
ITIM( inhibitorii).
MAcrofagele impreuna cu monocitele formeaza sistemul fagocitelor mononuclare. Sunt capabile de
migrare, citoplasma este bogata in lozozomi, ucid prin digestie lizozomala; sunt APC profesioniste,
prezinta Ag in cupa MHC II, activand Ly T ( APC mai sunt : LyB, cel dendritice)
Ly T helper
Th1- secreta IL-2, IFN , SI limfotoxina -> raspunsuri mediate celular si patogeni intracelulari
Th2-secreta IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13->sustin Ri umorale ptr eliminarea patogenilor
extracel.
Diferentierea intre cele 2 subtipuri: data de micromediu, deci de APC
Stimulare cu IFN SI IL-12, IL-27 => Th1
Costimularea cu CD28-B7-1
Stimularea cu IL-4 => Th2
Costimularea cu B7-2
Odata realizata activarea, clasele nu se mai pot schimba. Activarea de la TH0 spre dureaza 48-72
ore
o Th1 determina macrofagele sa secrete citokine in plus, sa fie fagocite mai potente, cresc
productia de NO, le determina sa fie capabile de ADCC( citotoxicitate dependenta de Ac).
Th1 determina II si a moleculelor TAP. Activarea Ly Tcitotoxice sustintuta prin IL-2, IFN si
contactului CD40-CD40L amplificarea expresiei MHC.
o Th2 are rolul de a stabili contactul cu LyB prin CD40-CD40L. IL-4 SI 5 determina comutarea
de clasa catre Ig A, E, G4 ( nu determina activare de complement sau ADCC=> neutralizare
in absenta inflamatiei). IL-5 importanta ptr diferentierea si cresterea eosinofilelor.
IL-3,4,10 activeaza mastocitele, care pot da reactii alergice. IL-10 inhiba functia macrofagelor
si secretiua de IL-12, inhiba MHC IIsi B7 de pe DC ( cel.dendritice),dar le amplifica pe LyB.
63. Tc naiv nu e capabil de ucidere= precursor CTL. Generarea de CTL functionale necesita 3 pasi
1) Semnal specific prin TCR ( ca urmare a recunoasterii complexului MHC
PROLIFERARE SI
I/Ag )
DIFERENTIERE
2) Co-stimulare, prin CD28, care se leaga la B7 de pe APC
SPRE CTL
3) Semnak indus de IL-2 asupra receptorului de mare afinitate ptr IL-2(CD-25)
MAjoritatea CTL necesita IL-2 suplimentar, deobicei secretat de Th1( desi cele 2 celule nu
interactioneaza in mod direct, activarea amn2rora este modulata de IL-2)
-dupa raspunsul imun celulele efector sunt eliminate prin interactiunea Fas-FasL
-celulele T activate exprima atat Fas cat si FasL,ceea ce inseamna ca Ly folosesc
aceeasi interactiune ucigandu-se reciproc odata ce Ag a fost inlaturat
-celulele care supravietuiesc sunt sau vor da nastere Ly cu memorie ce
supravietuiesc dupe terminarea RI si se for stabili in tesuturi
NK-natural killers
-au fost in trecut asemanate cu niste limfocite mari,granulate cu activitate
citotoxica impotriva unei game variate de celule tumorale
-importante impotriva unor celule tumorale si impotriva celulelor infectate
cu virusuri
-constituie 5-10 % din nr total de limfocite din sangele periferic
-nu prezinta pe suprafata membranei molecule sau receptori care
diferentiaza Ly T DE Ly B
-pot recunoaste o potentiala tinta in 2 modalitati (prezinta receptori proprii
care pot distinge celulele afectate cu ajutorul celulei MHC I / prezinta receptori
CD16 capabili sa recunoasca portiunea Fc a moleculei de Ig G ; a cesta
reprezinta un examplu de citotoxicitate mediate cellular dependent de Ag
Raspunsul inflamator acut poate fi insotit de un raspuns sistemic ;factori precum IL-1 ,IL-6 si
TNF-
Inflamatia cronica este, cel mai adesea, expresia incapacitatii sistemului imun de a
elimina antigenul.
Situatiile in care antigenul poate sa persiste sunt diverse: microorganisme care au
dezvoltat mecanisme de evaziune, autoimunitati in care antigenul self stimuleaza
permanent limfocitele, celule neoplazice care prolifereaza. Semnul distinctiv al acestui tip
de inflamatie este reprezentat de activarea si acumularea macrofagelor care, la randul lor,
stimuleaza proliferarea fibroblastelor si productia de colagen, ajungandu-se la un un
proces de cicatrizare invalidanta, denumit fibroza.
Inflamatia cronica poate conduce la formarea granulomului, care consta dintr-o masa
centrala de macrofage activate, unele fuzionate, inconjurate de macrofage cu
aspect de celula epiteliala (epitelioide); la periferia acestei acumulari de macrofage cu
aspect tumorale se gasesc lirnfocite activate.
In zonele extralimfoide tertiare unde se desfasoara un proces inflamator se observa
aparitia de celule endoteliale cu un aspect asemanator celui din HEV. Aceste regiuni
HEV-like prezinta molecule de adeziune mucin-like (Gly-CAM-l, MadCAM-l, CD34) si
reprezinta locul pe unde se va putea produce extravazarea lirnfocitelor in tesutul inflamat.
Astfel de regiuni-HEV -like au putut fi observate in afectiuni precum artrita reumatoida,
boala Crohn, colita ulcerativa, boala Graves, tiroidita Hashimoto, diabetul zaharat.
Aceasta observatie a condus la ideea ca tratamentul unor astfel de
afectiuni inflamatorii cronice ar trebui sa tinteasca dezvoltarea regiunilor HEV-like.
comensalizare, persistenta
La unii indivizi starea de persistenta poate progresa la nivel de boala. Boala este o stare
particular a organismului condiionat de aciunea nociv a diveri factori determinani
din mediu i, caracterizat printr-un complex de modificri morfologice i funcionale -
locale i generale, cu caracter reactiv i lezional, ce tulbur regalarea i activitatea la
diferite niveluri funcionale.
B. Aparare nespecifica
B.l Sistemul complement
Activarea complementului, pe oricare cale, pana la formarea MAC, ar trebui sa conduca
la distrugerea bacteriilor. Calea alternativa este activata de catre peptidoglicani (G+) sau
LPS (G-), bacteriile G- fiind mai sensibile la actiunea complementului. 0 mentiune
speciala trebuie facuta insa pentru Neisserii, bacterii fata de care, desi sunt Gramnegative,
actiunea complementului este esentiala. Se cunoaste din patologie ca pacientii
deficienti in componente ale caii post-C3 a complementului pot supravietui unei varietati
mari de bacterii extracelulare, dar nu si infectiilor cu Neisseria.
B.2 Mastocite
Joaca un rol preponderent impotriva bacteriilor care exprima molecula de adeziune FimH
(enterobacterii). Mastocitele din MALT pot chiar sa si fagociteze, dar, in primul rand,
elibereaza mediatori ai inflamatiei (histamina, IL-6, TNFa, LTP4). In plus, IL-8 si LTp4
sunt factori chemotactici puternici pentru neutrofile, iar TNF amplifica potentialul
microbicid al acestora.
Sub 75 Mecanisme de evaziune ale bacteriilor
extracelulare
Limfocite:
Limfocite Tc: Daca bacteriile se replica in citosol, atunci vor urma calea de procesare
care conduce la prezentarea de peptide asociate cu moleculele MHC I si vor fi
recunoscute de catre limfocitele Tc. Uciderea tintelor nu pare sa depinda de
perforine sau sistemul Fas-FasL, ci mai degraba prin secretia de granulolizina
(molecula cu efect anti-bacterian direct) si citokine pro-inflamatorii cum ar fi IFNy si
TNF-a. Acesti factori solubili atrag celule efectorii , dar au si un efect anti-bacterian
direct.
Ce1ulele NK: Acestea secreta IFNy, care determina hiperactivarea
macrofagelor si diferentierea Thl.
Limfocite Th: sunt limfocitele esentiale pentru activarea celorlalti efectori celulari.
Prin intermediul IL-2 sustin diferentierea limfocitelor Tc si duc la hiperactivarea
macrofagelor. Activarea Th se face de catre APC-uri care preiau antigene bacteriene
(secretate de catre bacterii sau eliberate din celulele infectate necrotice). Celulele NK
activate precoce secreta IFNy, care stimuleaza diferentierea in Thl. La randullor, Thl
secreta IFNy si INF, care conduc la hiperactivarea macrofagelor, eventualla aparitia
de granuloame. Macrofagele activate secreta IL-12 si IL-18, care actioneaza sinergic
pentru a sustine raspunsul eficient al Thl impotriva bacteriilor intracelulare. IL-27
este necesar pentru initierea (dar nu si sustinerea) raspunsurilor Thl.
Formarea de granuloame
In cazul patogenilor care nu pot fi ucisi si indepartati se incearca izolarea lor.
Macrofagele
hiperactivate fuzioneaza si formeaza celule gig ant. Printre acestea, la interior, se gasesc
limfocite T CD4+, in timp ce la nivelul stratului extern se gasesc limfocite CD8+. Uneori,
stratul extern al granulomului poate deveni fibrotic, sau chiar se po ate calcifica, in timp
ce
celulele din interior pot muri prin necroza, ceea ce poate antrena si moartea patogenilor.
AHeori, patogenii pot supravietui in stare dormanta.
Persistenta granulomului atesta cronicizarea infectiei. Daca peretii acestei formatiuni sunt
distrusi, este posibila eliberarea patogenilor dormanti, care pot ajunge inclusiv in torentul
sanguin, pentru ca astfel sa infecteze noi organe, unde isi vor relua ciclul de replicare.
Raspunsul imun umoral
Exista situatii in care anticorpii pot bloca accesul bacteriilor intracelulare la receptorii de
pe
suprafata celulelor tinta, sau pot fi opsonizate, pentm ca astfel sa devina tinta atacului
sistemului complement.
Virusurile sunt patogeni intracelulari, care se pot reproduce doar in celulele pe care Ie
infecteaza. Unele virusuri sunt citopatice . Alte virusuri sunt ne-citopatice .. In mod aparent paradoxal,
virusurile mai putin virulente, care nu isi ucid gazda, nu sunt mai usor de indepartat din organism.
Genomul viral (care poate fi format din ADN sau ARN) este mult mai mic decat al altor clase
de patogeni.
Virusurile sunt recunoscute ca fiind microorganismele care au dezvoltat cele mai sofisticate
mecanisme de evaziune a raspunsului imun, infectare celulara si replicare. eu cat un virus este mai
mare si cu cat astfel replicarea este mai lenta, cu atat mecanismele de blocare a raspunsului imun (care
sa ofere timp
suficient pentru replicare) sunt mai complexe.
Virusurile pot persista 0 perioada indelungata in organism in stare latenta, cu alte cuvinte nu
sunt replicate. In conditiile alterarii imunocompetentei gazdei, ele se se pot reactiva si pot
genera infectia, manifestata printr-o simptomatalogie caracteristica acesteia. 0 categorie
speciala de virusuri latente sunt oncovirusurile: HPV - human papillomavirus, EBV -
Epstein-Barr virus, HepB - hepatita B, din categoria virusurilor ADN; HTLV - human T
leukemia virus - din categoria virusurilor ARN. HIV - human immunodeficiency virus, este
de asemenea un virus ARN care poate conduce la malignitati, dar in mod indirect, prin
afectarea limfocite1or Th si astfel a raspunsului imun.
Rolul pro eminent revine insa limfocitelor Tc si celulelor NK.
Apararea gazdei vizeaza, in primul rand, incetinirea replicarii virale si apoi eradicarea
infectiei.
Un element precoce al mecanismelor de aparare este reprezentat de interferoni (IFN), in
primul rand de interferonii de tip a (produsi in special de leucocite) si b (produsi de 0 gama
larga de celule) si apoi de tip y (produsi de limfocite T si Nk), al caror efect antiviral este
unul indirect. Interferonii sunt proteine produse ca raspuns la infectia viral a si care interfera
cu replicarea virala in celulele invecinate celei infectate, atat la nivelul procesului de
transcriptie cat si la nivelul procesului de translatie. IFNa si IFNb induc sinteza enzimei
PKR. De asemenea, interferonii amplifica expresia moleculelor MHC I si a celor care compun
proteazomul imun, ceea ce conduce la cresterea capacitatii de procesare si prezentare a
peptidelor virale catre limfocite.
IFNa si IFNb joaca un rol in stimularea celulelor NK.
Celulele NK sunt capabile sa ucida celule infectate viral (cu anumite virusuri) si celule
tumorale (anumite celule tumorale) fara 0 sensibilizare prealabila. In situatia cand patogenul
este opsonizat cu Ac, eliminarea acestuia se poate realiza prin fenomenul ADCC -
citotoxicitate dependenta de Ac. La randul lor, celulele NK pot secreta IFNy, care actioneaza
asupra macrofagelor si limfocitelor T, stimulandu-Ie.
In apararea anti-virala intervin de asemenea celule care exprima receptori ai apararii nespecifice,
in special de tipul TLR.
Celule precum macrofagele si celulele dendritice, stimulate prin
intermediul receptorilor ILR secreta IFNa, IL-6, IL-12 si TNF, citokine care stimuleaza
capacitatea de a lupta impotriva acestor microorganisme.
Imunitatea umorala joaca un rol relativ redus. Unii Ac sunt denumiti "neutralizanti", deoarece
odata ce se leaga la virusuri Ie impiedica sa penetreze in celulele tinta, sau pot lega si bloca
enzime virale. Prin legarea Ac-ilor se po ate ajunge la aglutinarea particulelor virale si apoi la
activarea complementului .
Diferitele tipuri de virusuri vor induce formarea unor isotipuri diferite de anticorpi
Raspunsurile imune umorale nu sunt insa capabile sa eradicheze infectia virala, deoarece
acesti patogeni penetreaza inauntrul celulelor, acolo unde nu vor mai fi accesibili anticorpilor.
Singurele raspunsuri imune specifice antivirale sunt cele celulare, cu implicarea limfocitelor
Th si Tc. Uciderea efectiva a celulelor infectate cu un virus este realizata de catre limfocitele
T CD8+, diferentiate in stadiul de efectori (CTL - cytotoxic T lymphocytes
Latenta
Aceasta stare ii permite virusului sa supravietuiasca si sa scape atacului imun, in asteptarea
unui moment prielnic, cum ar fi stare a de imunodeficienta indusa de boala, varsta sau
medicamente. Latenta se realizeaza prin inactivarea transcriptiei genelor virale si expresia de
LAT (latency-associated transcripts).
Variatia antigenica
Modificarile rapide, aleatorii si de mica amploare sunt cunoscute sub numele de "drift"
antigenic. In cazul virusului gripal, se realizeaza prin mutatii cu 0 frecventa de 1 din 106
virioni, care afecteaza hemaglutinina si neuraminidaza, deci molecule proteice de suprafata,
care reprezinta tint a Ac-ilor neutralizanti.
Modificarile de mai mare anvergura sunt cunoscute sub numele de "shift" antigenic.
Frecventa cu care apar acestea sunt mult mai mici, dar, tocmai prin amploare, sunt mult mai
radicale. In cazul virusului gripal, exista 8 segmente distincte de ARN monocatenar. Fiecare
dintre acestea fiind implicat in codarea unor proteine cu functii distincte. Cand 0 anumita
celula ajunge sa fie infectata de doua specii diferite de virus gripal, acestea pot suferi un
fenomen de "reasortare".
Interferenta eu prezentarea in eupa MHC I
Unele virusuri infecteaza celule care exprima cantitati foarte scazute de MHC I (de ex., CMV
infecteaza celule mezenchimale), astfel incat 0 cantitate foarte mica si 0 varietate foarte
redusa de antigene virale ajunge sa fie prezentata.
Evaziunea ataeului eelulelor NK
CMV, poxvirusurile si herpesvirusurile sintetizeaza structuri MHC-I like, care se leaga la
receptorii inhibitori ai celulei NK. De asemenea, faptul ca expresia moleculelor HLA-E si
HLA-F nu este afectata de proteina Nef a HIV face ca acestea HLA-uri sa se poata lega la
receptorii inhibitori ai NK..
Alte mecanisme: Interferenta cu prezentarea in cupa MHC II, Interferenta cu celulele dendritice,
Evitarea Ac-i1or, Evitarea sistemului complement, Contracararea statusului antiviral
Influentarea apoptozei celulelor gazda
Pentru un virus e important ca celula gazda sa nu moara prin apoptoza inainte sa se poata
replica complet.
Manipularea ciclului eelular
Proteina p53 duce la stoparea progresiei in cielul celular si apoptoza. Proteina Rb blocheaza
diviziunea celulelor cu anormalitati genetice. Aceste doua proteine sunt tinte ale atacului
viral. Proteina EIA a adenovirusului se leaga atat la p53, cat si la proteina Rb si determina
apoptoza. Proteina E2 a HPV determina insa oprirea in cielul celular nu si apoptoza.
RIA radio immuno assay : o cantitate cunoscuta de Ag radiomarcat este incubata cu o cantitate de Ac.
Ag nelegat este indepartat si se masoara doar radioactivitatea complexelor.
RIST- radio immuno sorbent test : detectia si cuantificarea Ac IgE. competitia dintre o cantitate
cunoscuta de IgE radiomarcat si o cantitate necunoscuta de IgE din serul pacientului
RAST radio allergo sorbent test : determina specificitatea Ac IgE- test screening allergenic. Suportul
de celuloza incarcat cu Ag este tratat cu serul pacientului dupa care se detecteaza complexul cu
ajutorul Ac anti-IgE radiomarcati.
ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) reactie AgAc asemanatoare cu RIA, doar ca se
bazeaza pe o reactie colorimetrica produsa de o enzima: peroxidaza din hrean, fosfataza alcalina care
determina formarea unui substat cromogen.
- ELISA indirecta : sensibilitate crescuta. Ag imobilizate la suprafata solida
vor fi legate de Ac nemarcati. Legarea acestora va fi evidentiata prin
adaugarea de Ac secundari cuplati cu o enzima si apoi a unui substrat
cromogen care va genera o reactie de culoare, intensitatea careia va fi
masurata de un spectrofotometru si astfel se obtin info cantitative.
- ELISA sandwich : Ag vizat este legat intre doua straturi de Ac
ELISA competitiva : o solutie AgAc solubila care contine si Ac liberi este turnata in godeuri tapetate
cu Ag imobilizate la placa. Solutia solubila se spala si complexul ramas in godeuri este tratat cu Ac
secundari care va da o reactie de culoare.
Tehnica imunohistochimica este deticata identificarii Ag proteice de la nivel celular sau tisular.
Principiul se bazeaza pe abilitatea Ac de a interactiona cu epitopi sau Ag. Tesuturile destinate
investifarii sunt fixate si apoi incluse in parafina. Cei mai populari fixatori contin formalina.
Exista situatii cand localizarea Ag face imposibila detectarea prin aplicarea directa a Ac specifici.
Astfel reactivul pivot este molecula de Ac (monoclonali sau policlonali) carora li se aplica toate
metodele de cuplare cunoscute. Unii monoclonali isi pierd activitatea dupa cuplarea cu biotina sau
fluoresceina. La nivelul Ac policlonali acest fenomen este mascat datorita heterogenitatii lor.
Ac mai pot fi clasati in primari si secundari. Primari: sunt cuplati cu Ag de interes. Secundari: au ca
specificitate epitopo de la nivelul Ac primari si sunt conjugati cu biotina sau alti agenti fluorescenti.
Metodele de colorare se bazeaza pe reactiile dintre enzime si substraturile lor, cromogenii incolori care
se coloreaza in produsi finali detectabili. Cel mai frecvent: peroxidaza, fosfataza alcalina,
glucozoxidaza, beta-galactozidaza.
Alegerea unei enzime se bazeaza:
- enzima trebuie sa fie inalt purificata si relativ ieftina
- conjugarea cu Ac nu trebuie sa afecteze activitatea enzimatica
- enzima legata sa fie stabila in solutii
- activitatea enzimelor endogene sa interfere minim cu coloratia specifica Ag
- produsii reactiilor enzimatice sa fie usor detectabili si stabili
Peroxidaza (glicoproteina extrasa din hrean) avantaje:
- greutate moleculara redusa
- se obtine usor in forma pura
- este stabila si nu`si modifica proprietatile in timpul obtinerii, utilizarii
- poate fi atasata altor proteine cum sunt Ac, avidina sau biotina
Fosfataza alcalina (din intestin de vitel, sau din culturi de E.coli) se utilizeaza atunci cand
identificarea Ag nu poate fi realizata prin tehnici ce folosesc peroxidaza.
Metode de colorare
Directa : In aceasa varianta , Ac primar este marcat cu enzima iar aplicarea ulterioara acestei reactii a
substratului cromogen evidentiaza formarea complexelor specifice Ag-Ac printr`o reactie de culoare.
Indirecta cu 2 pasi: Metoda preuspune folosirea unui Ac primar neconjugat pentru reactia Ag specifica.
Un al doilea Ac , secundar, conjugat cu enzima recunoaste si interactioneaza cu Ac primar, iar
substratul cromogen vizualizeaza reactia. Este mai sensibil decat metoda directa, deoarece mai multi
Ac secundari se vor lega la epitopo diferiti de la nivelul celui primar, atasandu`se mai multe molecule
de enzima la situsul Ag , ceea ce creste intensitatea semnalului de colorare.
Indirecta cu 3 pasi : acelasi principia ca precedentul , dar presupune in plus adaugarea Ac tertiar ,
marcat enzimatic, ca si cel secundar.
Controale : pentru validarea rezultatelor cu reactivi de control disponibili comercial
Colorare de fond (nespecifica) : colorarea difuza a tuturor sau majoritatii elementelor tisulare ceea ce
face imposibila interpretarea rezultatelor sau stabilirea unor rezultate fals negative, determinata de o
multitudine de cauze :
- interactiunea hidrofoba (exista proteine diferite de Ag de interes care se
cupleaza cu Ac primari)
- interactiunile ionice (intre proteine cu sarcini opuse)
- activitate enzimatica endogena (activitatea peroxidazica endogena a
hemoproteinelor)
- anticorpii naturali si anticorpi contaminati
- difuzia Ag
- reactii incrucisate
- leziuni fizice ale tesutului
- deparafinare incompleta
- splare necorespozatoare a lamelor
- incubari incorecte
- folosirea incorecta a dilutiilor Ac etc.
Contracolorarea : detalii despre arhitectura tesuturilor si despre morfologia elementelor celulare. Ea
favorizeaza vizualizarea exacta a loocalizarii Ag identificate prin coloratie specifica.
Imunofluorescenta
Substantele fluorescente/fluorocromii au capacitatea ca odata stimulate cu o lumina cu o anumita
lungime de unda sa emita o lumina cu alta lungime de unda caracteristic acelui tip de fluorocrom. Ac
pot fi cuplati cu fluoricrom la fragmentul Fc, pt identificarea unor variate Ag localizate la nivelul unor
celule sau tesuturi imunofluorescenta.
Cei mai utilizati fluorocromi : fluoresceina (FITC isothicianat de fluoresceina), phycoerthrina (PE)
Metoda este utilizata pentru identificarea : autoanticorpi, componentelor sistemului complement,
hormoni, citokine, bacterii.
Imunofluorescenta directa : Ac primari sunt cuplati cu fluorocromi si sunt aplicati direct peste
produsul de analizat. Legarea specifica este analizata la un microscop cu fluorescenta. Ac pot proveni
de la alte specii sau pot fi si Ac umani.
Se pot folosi mai multi fluorocromi simultan pt a se identifica mai multe molecule diferite.
Imunofluorescenta indirecta : Se utilizeaza Ac secundari, de obicei, policlonali (deci mai usor de
produs) cuplati cu substraturi fluorescente, ceea ce face ca un astfel de reactiv sa poata fi folosit pentru
o multitudine de Ac primari. Astfel se creste sensibilitatea si amplificarea semnalului. Un al treilea
strat ar putea fi adaugat si ar conduce la o crestere impresionanta a semnalului.