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SPINOSA) y el mar HINOJO (Crithmum maritimum) mediante mtodos DIFERENTES
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Nmero especial:Los antioxidantes presentes en los alimentos: contenido, caracterizacin y funciones fisiolgicas
ANNA MIECHOWSKA,
1.
JACEK NAMIENIK,
1.
AGNIESZKA BARTOSZEK
1.
Publicado por primera vez: 21 de de marzo de 2010La historia completa por la publicacin
DOI: 10.1111 / j.1745-4514.2009.00329.x Ver / guardar la citacin
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Abstracto
ABSTRACTO
Col blanca, fresca o fermentada pertenece a los principales ingredientes de la dieta en
Europa Central.Aqu nos concentramos en propiedades antioxidantes de la col ya que se
cree que tales actividades para evitar efectos no deseados en el organismo humano. Estas
propiedades se evaluaron para los zumos en el sistema libre de clulas por la capacidad
antioxidante, en clulas HT29 por la proteccin contra la oxidacin del ADN, y la
estimulacin de las GST y reparacin del ADN. Aunque la col no posee un alto potencial
antioxidante en comparacin con otros alimentos plantborne, puede proporcionar una
barrera antioxidante muy eficaz, especialmente si el procesamiento culinario caus la
liberacin de antioxidantes. Todos los jugos se incrementaron las actividades de GST a
diversos grados, independientemente del origen o la col ao de cultivo y se estimulan las
enzimas de reparacin del ADN. Jugos de col tambin prevenirse daos en el ADN cuando
se aplica a las clulas HT29 de forma concomitante con H 2 O 2 ; sin embargo, ningn
efecto protector fue visto despus de prolongada (24 h) la incubacin con estos jugos
anteriores a la exposicin ROS. Curiosamente, en esta lnea celular tumoral, ambos zumos
de col muestran efecto inhibidor moderado sobre el crecimiento celular y la fragmentacin
del ADN inducida fcilmente detectable por el ensayo de cometa.
APLICACIONES PRCTICAS
La investigacin presentada demostr diferentes actividades antioxidantes de los jugos de
repollo, es decir, el componente real de alimentos, en concentraciones dietticamente
pertinentes, lo que permite sacar conclusiones prcticas. Tecnolgicamente, la capacidad
directa para barrer ROS, especialmente su aumento en el procesamiento de calor, sugiere
que la col puede proteger otros componentes de los alimentos contra cambios oxidativos
indeseables. En otro estudio, se confirm que las grasas animales con bajo contenido de
antioxidantes naturales, por lo tanto muy susceptibles a la descomposicin termo, estn
efectivamente protegidos por fito col. Biolgicamente, la capacidad de inducir en las
clulas humanas de una variedad de mecanismos de proteccin a bajas concentraciones
implica que el consumo de este vegetal debe ser recomendado. Sin embargo, nuestros
resultados tambin demostraron peligros de sobredosis. La exposicin a los jugos de
repollo antes de ROS sensibilizado fuertemente las clulas al estrs oxidativo y en este
contexto, el uso de extractos concentrados de verduras crucferas, ofrecidos por varios
productores como suplementos dietticos, parece requerir una consideracin ms
cuidadosa.
INTRODUCCIN
Especies de oxgeno reactivas (ROS) son ampliamente
cree que estn implicados en la etiologa de muchas
enfermedades, como se indica por los marcadores de
estrs oxidativo en condiciones clnicas tales como
aterosclerosis, diabetes, trastornos neurolgicos
( Moskovitz et al. 2002 ; Ferrari y Torres 2003 ), cncer
( Hussain et al. 2003 ; Valko . et al 2004 ), as como en los
procesos de envejecimiento ( Sohal et al. 2002 ). ROS se
generan en el cuerpo humano por procesos fisiolgicos
normales, la mayora de todos durante el metabolismo
aerbico. Su produccin aumenta considerablemente
durante las respuestas inflamatorias y tambin es
estimulada por xenobiticos se ingieren o inhalan. ROS
son altamente reactivos a las molculas biolgicas y
puede daar el ADN, protenas, hidratos de carbono, as
como los lpidos. Aparte de la reactividad qumica, se
demostr en numerosos estudios que ROS son capaces de
modular la expresin gnica, el crecimiento celular y las
vas de transduccin de seal ( Menon y Goswami
2007 ). Las mutaciones como un efecto secundario de
dao oxidativo del ADN, el deterioro de las vas y la
modificacin de protenas clave relacionados con el
cncer de sealizacin conducen a la desregulacin de la
homeostasis celular y la carcinognesis de
accionamiento; Por lo tanto, la proteccin contra el estrs
oxidativo se ha convertido en un tema clave en la
quimioprevencin del cncer ( Hussain et
al. 2003 ; Valko et al. 2004 ).
Sobrecarga ROS puede poner en peligro la funcin
celular, sino que existen mecanismos de defensa que
protegen las clulas de oxidantes y radicales. La barrera
antioxidante endgeno se ve reforzada por antioxidantes
dietticos presentes principalmente en frutas y verduras
( Thompson et al. 2005 ). Estos antioxidantes pueden estar
trabajando directamente como eliminadores de ROS o
indirectamente mediante la quelacin de metales o
impulsar propio sistema de defensa del organismo. Sus
diversas actividades de proteccin subyacen a la gran
inters en la aplicacin de antioxidantes de las plantas en
la profilaxis de cncer ( Ferrari y Torres 2003 ; Finley
2005 ; Seifried et al. 2007 ).
Los estudios sobre la dieta de proteccin contra el estrs
oxidativo por lo general se concentran en las frutas y
verduras que son ricas fuentes de antioxidantes como los
flavonoides o carotenoides. Tomamos perspectiva
diferente y nos concentramos nuestro inters no tanto en
los alimentos plantborne con alto potencial antioxidante,
sino en la col ( Brassica oleracea var. Capitata f. Alba ), un vegetal
cuyo consumo es potencialmente de gran impacto, ya que
se consume en muchas regiones en todo el mundo y
constituye un ingrediente importante de la dieta de
Europa central. La col pertenece a las verduras crucferas
demostrado ser ms fuertemente asociado con el cncer
de proteccin que el consumo de verduras en general
( Finley 2005 ). Las propiedades anticancergenas de
crucferas son los ms frecuentemente atribuidos a
glucosinolatos (GLS) y productos de su descomposicin -
isotiocianatos (ITC) y indoles, mientras que los
mecanismos ms estudiados son la modulacin de fase I y
II enzimas ( Steinkellner et al. 2001 ; Pool-Zobel et
al. 2005 ) y la induccin de la apoptosis de las clulas
tumorales ( Pappa et al. 2006 ; Mas et al. 2007 ). El
potencial antioxidante de estos vegetales ha dibujado
relativamente poca atencin hasta ahora. Sin embargo, las
crucferas, entre ellos la col, tambin contienen
compuestos antioxidantes ( Kusznierewicz et al. 2008 ),
incluyendo flavonoides ( Hertog et al. 1992 ), as como la
vitamina C ( Podsedek 2007 ). GLS ( Barillari et
al. 2005 ) y el CCI ( Fahey y Talalay 1999 ), se mostr a
mostrar cierto potencial antioxidante tambin. Otra,
probablemente muy importante, mecanismo por el cual
ITC puede influir en los resultados de estado redox
celular de la capacidad demostrada de estos compuestos a
reaccionar con el grupo SH de la cistena en GSH
( Zhang y Callaway 2002 ) y probablemente tambin en
protenas, incluyendo la tiorredoxina, que a su vez puede
servir como un disparador de la expresin gnica
mediada por ARE. Entre SON genes inducibles son
aquellos que codifican enzimas protectoras y factores de
transcripcin asociados con la proliferacin celular y la
muerte ( Pool-Zobel et al. 2005 ; Eberhardt y Jeffery
2006 ).
La investigacin descrita aqu estaba dirigido a la
determinacin del potencial antioxidante de blanco
fitocomplejo col en varios niveles: como un eliminador
de ROS, modulador de defensa antioxidante endgeno,
as como inductor de la reparacin del dao del ADN
inducido por oxidante. En contraste con los informes que
demuestran dichas actividades para los compuestos
aislados, nuestros experimentos se llevaron a cabo para
zumos naturales obtenidos a partir de vegetales frescos o
culinarias transformadas y para concentraciones a las que
las clulas del tracto alimentario pueden estar expuestos
despus del consumo de una comida tpica que contiene
col. Mediante este enfoque, tratamos de considerar dos
matrices distintas en paralelo, a saber, la matriz del
alimento en su complejidad natural y la matriz celular que
sirve como modelo de un cuerpo humano despus del
consumo de alimentos.
MATERIALES Y MTODOS
Qumicos y Bioqumicos
Agarosa se adquiri de Promega (Mannheim,
Alemania); GSH, ABTS, DAPI, OPT fueron de Sigma
Chemicals Co. (Taufkirchen, Alemania); 1-cloro-2,4-
dinitrobenceno (CDNB) y reactivo de Folin-Ciocalteu
eran de Fluka (Steinheim, Alemania); bioqumicos de
cultivo de tejidos eran de Gibco BRL (Eggestein,
Alemania). Las placas de vidrio recubiertas con 0,2 mm
de gel de slice 60 F254 se compraron de Merck
(Darmstadt, Alemania). Los portaobjetos utilizados para
el ensayo de cometa fueron CometSlides de Trevigen
(Gaithersburg, MD). Todos los dems reactivos fueron de
grado apropiado.
Preparacin de la col Zumos
Col blanca ( Brassica oleracea var. Capitata f. Alba ) desde el cultivo
convencional se adquiri en una tienda de venta al por
mayor suministro de la zona de Gdansk (Northern
Polonia) en los vegetales, mientras que se obtuvo la col
de cultivo orgnico forma registrada la granja ecolgica
FOHAT. Despus de la eliminacin de hojas exteriores,
cabezas de repollo se cortaron en una trituradora en tiras
gruesas ~ 2 mm y se dividieron en dos partes, una de las
cuales se mezcl con 20 g de NaCl por kg y se someti a
fermentacin espontnea de una manera tradicional por 2
semanas. Las porciones de col fresca y sauerkraut se
guisadas durante 2 horas a 100C bajo cubierta. De todos
los productos de la col, los zumos se obtuvieron de una
manera tal como para asegurar una influencia mnima en
su composicin qumica (baja temperatura, no hay
disolventes orgnicos). Los productos se mezclaron,
jugos exprimidos y centrifugaron (4000 rpm, 30 min, 4C
y 14.000 rpm, 20 min, 4C) para eliminar las
partculas. Para los experimentos de cultivo de tejidos,
zumos chucrut se neutralizaron a pH 7 con NaOH 5M y
se esterilizaron mediante el paso a travs de filtros
Millex-GP (Millipore). Los jugos se mantuvieron
congelados hasta su uso.
Cultivo de clulas
Clulas HT29 tumorales de colon humano se cultivaron
en medio de McCoy (Sigma Chemicals Co.)
suplementado con 10% de suero de ternera fetal y
antibiticos a 37C en 5% de CO 2 atmsfera.
TLC anlisis
El FCJ y SJ Se tomaron alcuotas como porciones 4-mL
en viales de vidrio, sellado para evitar la evaporacin y se
coloca en un TR termoreactor 300 (Merck), establecido
sobre 100C. El calentamiento se lleva a cabo hasta 12
h. Cada 2 h, se recogi una muestra de cada jugo y se
enfriaron a temperatura ambiente. Un mililitro de cada
muestra recogida se liofiliz y se extrajo con metanol (1
ml). Extractos metanlicos de repollo se aplicaron usando
capilar de vidrio sobre placas recubiertas con gel de slice
60 F 254 , de 0,25 mm (Merck). La fase mvil era una
mezcla de cloroformo y metanol (9: 1 v / v). Despus de
desarrollar y secado, las placas de TLC se rociaron con
una solucin de DPPH 0,2% en metanol y se examinaron
30 min despus de la pulverizacin. Compuestos
antioxidantes activos aparecieron como manchas
amarillas contra el fondo prpura ( Cavin et
al. 1998 ; Glvez et al. 2005).
Figura 3.
Abierta en la figura espectador
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Figura 4.
Abierta en la figura espectador
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