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Volumen 34, nmero s1


de marzo de 2010
Pginas 262-285

1. Artculo anterior en cuestin: la capacidad antioxidante de tres especies CUBANOS DEL GNERO Pluchea CASS. (Asteraceae)
2. Siguiente artculo en cuestin: EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE de aceites esenciales de CAPER (CAPPARIS
SPINOSA) y el mar HINOJO (Crithmum maritimum) mediante mtodos DIFERENTES
Ver tema TOC
Nmero especial:Los antioxidantes presentes en los alimentos: contenido, caracterizacin y funciones fisiolgicas

LA propiedades antioxidantes DE BLANCO de col


( Brassica OLERACEA VAR. CAPITATA F. ALBA )
FRESH y se someti a tratamiento culinario
autores
BARBARA Kusznierewicz,
1.
JOANNA LEWANDOWSKA,
1.
AGNIESZKA KRUSZYNA,
1.
ANITA PIASEK,
1.

ANNA MIECHOWSKA,
1.

JACEK NAMIENIK,
1.

AGNIESZKA BARTOSZEK
1.
Publicado por primera vez: 21 de de marzo de 2010La historia completa por la publicacin
DOI: 10.1111 / j.1745-4514.2009.00329.x Ver / guardar la citacin
Citado por (CrossRef): 9 artculosComprobar si hay actualizaciones
herramientas de citacin

TEL: + 48-583471723; FAX: + 48-583472248; CORREO


ELECTRNICO: barbara.kusznierewicz@pg.gda.pl

Abstracto
ABSTRACTO
Col blanca, fresca o fermentada pertenece a los principales ingredientes de la dieta en
Europa Central.Aqu nos concentramos en propiedades antioxidantes de la col ya que se
cree que tales actividades para evitar efectos no deseados en el organismo humano. Estas
propiedades se evaluaron para los zumos en el sistema libre de clulas por la capacidad
antioxidante, en clulas HT29 por la proteccin contra la oxidacin del ADN, y la
estimulacin de las GST y reparacin del ADN. Aunque la col no posee un alto potencial
antioxidante en comparacin con otros alimentos plantborne, puede proporcionar una
barrera antioxidante muy eficaz, especialmente si el procesamiento culinario caus la
liberacin de antioxidantes. Todos los jugos se incrementaron las actividades de GST a
diversos grados, independientemente del origen o la col ao de cultivo y se estimulan las
enzimas de reparacin del ADN. Jugos de col tambin prevenirse daos en el ADN cuando
se aplica a las clulas HT29 de forma concomitante con H 2 O 2 ; sin embargo, ningn
efecto protector fue visto despus de prolongada (24 h) la incubacin con estos jugos
anteriores a la exposicin ROS. Curiosamente, en esta lnea celular tumoral, ambos zumos
de col muestran efecto inhibidor moderado sobre el crecimiento celular y la fragmentacin
del ADN inducida fcilmente detectable por el ensayo de cometa.
APLICACIONES PRCTICAS
La investigacin presentada demostr diferentes actividades antioxidantes de los jugos de
repollo, es decir, el componente real de alimentos, en concentraciones dietticamente
pertinentes, lo que permite sacar conclusiones prcticas. Tecnolgicamente, la capacidad
directa para barrer ROS, especialmente su aumento en el procesamiento de calor, sugiere
que la col puede proteger otros componentes de los alimentos contra cambios oxidativos
indeseables. En otro estudio, se confirm que las grasas animales con bajo contenido de
antioxidantes naturales, por lo tanto muy susceptibles a la descomposicin termo, estn
efectivamente protegidos por fito col. Biolgicamente, la capacidad de inducir en las
clulas humanas de una variedad de mecanismos de proteccin a bajas concentraciones
implica que el consumo de este vegetal debe ser recomendado. Sin embargo, nuestros
resultados tambin demostraron peligros de sobredosis. La exposicin a los jugos de
repollo antes de ROS sensibilizado fuertemente las clulas al estrs oxidativo y en este
contexto, el uso de extractos concentrados de verduras crucferas, ofrecidos por varios
productores como suplementos dietticos, parece requerir una consideracin ms
cuidadosa.

INTRODUCCIN
Especies de oxgeno reactivas (ROS) son ampliamente
cree que estn implicados en la etiologa de muchas
enfermedades, como se indica por los marcadores de
estrs oxidativo en condiciones clnicas tales como
aterosclerosis, diabetes, trastornos neurolgicos
( Moskovitz et al. 2002 ; Ferrari y Torres 2003 ), cncer
( Hussain et al. 2003 ; Valko . et al 2004 ), as como en los
procesos de envejecimiento ( Sohal et al. 2002 ). ROS se
generan en el cuerpo humano por procesos fisiolgicos
normales, la mayora de todos durante el metabolismo
aerbico. Su produccin aumenta considerablemente
durante las respuestas inflamatorias y tambin es
estimulada por xenobiticos se ingieren o inhalan. ROS
son altamente reactivos a las molculas biolgicas y
puede daar el ADN, protenas, hidratos de carbono, as
como los lpidos. Aparte de la reactividad qumica, se
demostr en numerosos estudios que ROS son capaces de
modular la expresin gnica, el crecimiento celular y las
vas de transduccin de seal ( Menon y Goswami
2007 ). Las mutaciones como un efecto secundario de
dao oxidativo del ADN, el deterioro de las vas y la
modificacin de protenas clave relacionados con el
cncer de sealizacin conducen a la desregulacin de la
homeostasis celular y la carcinognesis de
accionamiento; Por lo tanto, la proteccin contra el estrs
oxidativo se ha convertido en un tema clave en la
quimioprevencin del cncer ( Hussain et
al. 2003 ; Valko et al. 2004 ).
Sobrecarga ROS puede poner en peligro la funcin
celular, sino que existen mecanismos de defensa que
protegen las clulas de oxidantes y radicales. La barrera
antioxidante endgeno se ve reforzada por antioxidantes
dietticos presentes principalmente en frutas y verduras
( Thompson et al. 2005 ). Estos antioxidantes pueden estar
trabajando directamente como eliminadores de ROS o
indirectamente mediante la quelacin de metales o
impulsar propio sistema de defensa del organismo. Sus
diversas actividades de proteccin subyacen a la gran
inters en la aplicacin de antioxidantes de las plantas en
la profilaxis de cncer ( Ferrari y Torres 2003 ; Finley
2005 ; Seifried et al. 2007 ).
Los estudios sobre la dieta de proteccin contra el estrs
oxidativo por lo general se concentran en las frutas y
verduras que son ricas fuentes de antioxidantes como los
flavonoides o carotenoides. Tomamos perspectiva
diferente y nos concentramos nuestro inters no tanto en
los alimentos plantborne con alto potencial antioxidante,
sino en la col ( Brassica oleracea var. Capitata f. Alba ), un vegetal
cuyo consumo es potencialmente de gran impacto, ya que
se consume en muchas regiones en todo el mundo y
constituye un ingrediente importante de la dieta de
Europa central. La col pertenece a las verduras crucferas
demostrado ser ms fuertemente asociado con el cncer
de proteccin que el consumo de verduras en general
( Finley 2005 ). Las propiedades anticancergenas de
crucferas son los ms frecuentemente atribuidos a
glucosinolatos (GLS) y productos de su descomposicin -
isotiocianatos (ITC) y indoles, mientras que los
mecanismos ms estudiados son la modulacin de fase I y
II enzimas ( Steinkellner et al. 2001 ; Pool-Zobel et
al. 2005 ) y la induccin de la apoptosis de las clulas
tumorales ( Pappa et al. 2006 ; Mas et al. 2007 ). El
potencial antioxidante de estos vegetales ha dibujado
relativamente poca atencin hasta ahora. Sin embargo, las
crucferas, entre ellos la col, tambin contienen
compuestos antioxidantes ( Kusznierewicz et al. 2008 ),
incluyendo flavonoides ( Hertog et al. 1992 ), as como la
vitamina C ( Podsedek 2007 ). GLS ( Barillari et
al. 2005 ) y el CCI ( Fahey y Talalay 1999 ), se mostr a
mostrar cierto potencial antioxidante tambin. Otra,
probablemente muy importante, mecanismo por el cual
ITC puede influir en los resultados de estado redox
celular de la capacidad demostrada de estos compuestos a
reaccionar con el grupo SH de la cistena en GSH
( Zhang y Callaway 2002 ) y probablemente tambin en
protenas, incluyendo la tiorredoxina, que a su vez puede
servir como un disparador de la expresin gnica
mediada por ARE. Entre SON genes inducibles son
aquellos que codifican enzimas protectoras y factores de
transcripcin asociados con la proliferacin celular y la
muerte ( Pool-Zobel et al. 2005 ; Eberhardt y Jeffery
2006 ).
La investigacin descrita aqu estaba dirigido a la
determinacin del potencial antioxidante de blanco
fitocomplejo col en varios niveles: como un eliminador
de ROS, modulador de defensa antioxidante endgeno,
as como inductor de la reparacin del dao del ADN
inducido por oxidante. En contraste con los informes que
demuestran dichas actividades para los compuestos
aislados, nuestros experimentos se llevaron a cabo para
zumos naturales obtenidos a partir de vegetales frescos o
culinarias transformadas y para concentraciones a las que
las clulas del tracto alimentario pueden estar expuestos
despus del consumo de una comida tpica que contiene
col. Mediante este enfoque, tratamos de considerar dos
matrices distintas en paralelo, a saber, la matriz del
alimento en su complejidad natural y la matriz celular que
sirve como modelo de un cuerpo humano despus del
consumo de alimentos.
MATERIALES Y MTODOS
Qumicos y Bioqumicos
Agarosa se adquiri de Promega (Mannheim,
Alemania); GSH, ABTS, DAPI, OPT fueron de Sigma
Chemicals Co. (Taufkirchen, Alemania); 1-cloro-2,4-
dinitrobenceno (CDNB) y reactivo de Folin-Ciocalteu
eran de Fluka (Steinheim, Alemania); bioqumicos de
cultivo de tejidos eran de Gibco BRL (Eggestein,
Alemania). Las placas de vidrio recubiertas con 0,2 mm
de gel de slice 60 F254 se compraron de Merck
(Darmstadt, Alemania). Los portaobjetos utilizados para
el ensayo de cometa fueron CometSlides de Trevigen
(Gaithersburg, MD). Todos los dems reactivos fueron de
grado apropiado.
Preparacin de la col Zumos
Col blanca ( Brassica oleracea var. Capitata f. Alba ) desde el cultivo
convencional se adquiri en una tienda de venta al por
mayor suministro de la zona de Gdansk (Northern
Polonia) en los vegetales, mientras que se obtuvo la col
de cultivo orgnico forma registrada la granja ecolgica
FOHAT. Despus de la eliminacin de hojas exteriores,
cabezas de repollo se cortaron en una trituradora en tiras
gruesas ~ 2 mm y se dividieron en dos partes, una de las
cuales se mezcl con 20 g de NaCl por kg y se someti a
fermentacin espontnea de una manera tradicional por 2
semanas. Las porciones de col fresca y sauerkraut se
guisadas durante 2 horas a 100C bajo cubierta. De todos
los productos de la col, los zumos se obtuvieron de una
manera tal como para asegurar una influencia mnima en
su composicin qumica (baja temperatura, no hay
disolventes orgnicos). Los productos se mezclaron,
jugos exprimidos y centrifugaron (4000 rpm, 30 min, 4C
y 14.000 rpm, 20 min, 4C) para eliminar las
partculas. Para los experimentos de cultivo de tejidos,
zumos chucrut se neutralizaron a pH 7 con NaOH 5M y
se esterilizaron mediante el paso a travs de filtros
Millex-GP (Millipore). Los jugos se mantuvieron
congelados hasta su uso.
Cultivo de clulas
Clulas HT29 tumorales de colon humano se cultivaron
en medio de McCoy (Sigma Chemicals Co.)
suplementado con 10% de suero de ternera fetal y
antibiticos a 37C en 5% de CO 2 atmsfera.
TLC anlisis
El FCJ y SJ Se tomaron alcuotas como porciones 4-mL
en viales de vidrio, sellado para evitar la evaporacin y se
coloca en un TR termoreactor 300 (Merck), establecido
sobre 100C. El calentamiento se lleva a cabo hasta 12
h. Cada 2 h, se recogi una muestra de cada jugo y se
enfriaron a temperatura ambiente. Un mililitro de cada
muestra recogida se liofiliz y se extrajo con metanol (1
ml). Extractos metanlicos de repollo se aplicaron usando
capilar de vidrio sobre placas recubiertas con gel de slice
60 F 254 , de 0,25 mm (Merck). La fase mvil era una
mezcla de cloroformo y metanol (9: 1 v / v). Despus de
desarrollar y secado, las placas de TLC se rociaron con
una solucin de DPPH 0,2% en metanol y se examinaron
30 min despus de la pulverizacin. Compuestos
antioxidantes activos aparecieron como manchas
amarillas contra el fondo prpura ( Cavin et
al. 1998 ; Glvez et al. 2005).

Recogedor de radicales libres Actividad


Se utilizaron tres radicales libres para determinar la
capacidad de eliminacin de los jugos de
repollo. ABTS + catin radical fue generado por la
interaccin de 7 mmol / L ABTS y 2,45 mmol /
LK 2 S 2 O 8 . Despus de 12 h, la solucin de color verde
oscuro se diluy con metanol hasta que la absorbancia
alcanz 0,7 a 734 nm ( Huang et al. 2005 ). Para las
mediciones, 1 ml de la solucin resultante se mezcl con
10 l de jugos de col no procesados o calentados a
100C. La absorbancia se ley 6 min despus de la
mezcla a 734 nm. En el mtodo DPPH, 3,9 ml de
solucin de radical DPPH (25 mg / L) en metanol se
mezcl con jugos de col (0,1 ml). El progreso de la
reaccin se control a 515 nm hasta que la absorbancia se
hizo estable ( Huang et al. 2005 ). Se utiliz el mtodo
fotoquimioluminescencia (PCL) para determinar barrido
de radicales superxido. El ensayo de luminol PCL se
llev a cabo para los zumos de col de acuerdo con el
procedimiento descrito por Popov y Lewin (1999 ) con el
kit de ACL (Analytikjena, Jena, Alemania). Una porcin
de 2.3 ml de reactivo 1 (metanol), 0,2 mL de reactivo
(solucin tampn) 2, 25 l de reactivo 3
(fotosensibilizador) y 20 l de estndar (solucin Trolox
en el reactivo 1) o muestra (zumo de col con metanol) se
mezclaron y se mide en el aparato de Photochem. Una
curva de emisin de luz se registr ms de 180 s,
utilizando la inhibicin como el parmetro para evaluar el
potencial antioxidante. La capacidad antioxidante se
determin a continuacin mediante el uso de la integral
bajo la curva ( Yen y Duh 1994 ).
En el caso de todos los mtodos, se utilizaron soluciones
de Trolox (0-2 mol / ml) para generar la lnea o la curva
de calibracin estndar. la capacidad de eliminacin de
radicales se expres como Trolox equivalentes de la
capacidad de eliminacin (TEAC) por ml de jugo o por
gramo de materia seca.
Preparacin de fraccin citoslica de clulas
HT29
Clulas HT29 tumorales de colon humano se sembraron
en matraces de cultivo (2,5 x 10 6 clulas por 25
cm 2 matraz) 24 h antes de los experimentos. Cada matraz
se us para preparar una fraccin citoslica separado en
el que se determinaron la actividad de GST y reparar el
ADN y el contenido de GSH. Las clulas se trataron con
los jugos de col a diferentes dosis y varias veces. Despus
del tratamiento, las clulas se enjuagaron con PBS, se
recogieron, se suspendieron en PBS fro y se
centrifugaron. A partir de este momento, todas las
operaciones se llevaron a cabo en hielo. El sedimento
celular final se suspendi en 0,25 ml de agua y se dej
durante 10 min a hincharse. Despus, se aadieron 0,25
ml de tampn de KCl-P (0,1 M KH 2 PO 4 / K 2 HPO 4 ,
EDTA 0,2 mM, 2,3% [w / v] KCl). Las clulas se
homogeneizaron en Dounce homogeneizador y se
centrifugaron para eliminar los restos celulares. Las
fracciones citoslicas se almacenaron a -85C hasta su
uso.
Determinacin de la actividad GST y GSH
contenido
La actividad de GST se determin por el mtodo
de Habig et al. (1974) . La reaccin de conjugacin se
inici mediante la adicin de 50 l de fraccin citoslica
derivados de las clulas HT29 tratadas con jugos de col a
una mezcla que consiste en 940 l de CDNB (CDNB 1
mM, 2% [w / v] EtOH, 0,1 M KH 2 PO 4 / K 2HPO 4 , pH
6,5) y 10 l de mM GSH 100 mantienen a 37C. La
velocidad de formacin del conjugado CDNB con GSH
fue seguida espectrofotomtricamente a 340 nm. Las
actividades GST se calcularon como nmoles del
conjugado formado por minuto por miligramo de protena
citoslica a 37C, usando el coeficiente de extincin de
9,6 mM -1 cm -1 .
Se determin el contenido de GSH fluoromtricamente
con el uso de OPT como se ha descrito previamente
( Hissin y Hilf 1976 ). Una porcin de 0,25 ml de cada
citosol se mezcl con la cantidad igual de TCA al 10%
para precipitar las protenas y centrifug (5 min, 13.000
rpm, 4C). Luego 0,1 ml del sobrenadante se combin con
1,8 ml de fosfato sdico 0,1 M, EDTA 5 mM, pH 8 y
OPT (0,1 ml 1 mg / ml) en MeOH. La reaccin se llev a
cabo a temperatura ambiente durante 25 min antes de las
mediciones de fluorescencia.
Antigenotxica frente al crecimiento efectos de
inhibicin en clulas HT29 expuestas a estrs
oxidativo y / o jugos de col
La influencia de FCJ y SJ en la integridad material
gentico en las clulas expuestas a perxido de hidrgeno
se evalu mediante el ensayo de cometa ( Hertog et
al. 1992 ; Wu et al. 2004 ). Inhibicin del crecimiento
celular se evalu mediante el recuento de clulas con un
contador Coulter. Se usaron dos esquemas de tratamiento:
jugo y perxido de hidrgeno aadido en forma
concomitante o clulas preincubadas con los jugos
despus se trataron con perxido de hidrgeno. Clulas
HT29 tumorales de colon humano se sembraron en placas
de 24 pocillos a la densidad de 2 10 5 clulas por pocillo
para el primer esquema y a 1 x 10 5 clulas por pocillo
para el segundo esquema, 24 h antes de los
experimentos. Las concentraciones utilizadas de zumos se
ajustaron a fin de no alterar el crecimiento celular
considerablemente.
En el primer esquema, se trataron las clulas con 20% (v /
v) o 40% (v / v) jugos y / o 300? M H 2 O 2durante 30
min. Las clulas tripsinizadas se resuspendieron en 2 ml
de medio fresco y 0,5 ml de la suspensin fue tomada
para el recuento de clulas, mientras que 0,75 ml era para
el ensayo de cometa. El restante 0,75 ml se diluy a 2 ml
con medio fresco, que quedan en la misma placa para el
adicional 48 h y luego se determin el nmero de clulas
en cada pocillo. En el segundo esquema, las clulas se
preincubaron con 10% (v / v) jugos durante 24 h, a
continuacin, se sustituy el medio y las clulas
expuestas a 300 M de H 2 O 2 durante 30 min. Despus del
tratamiento, las clulas se tripsinizaron y se
resuspendieron en 2 ml de medio fresco y se dividen
como se describe anteriormente.
Para el ensayo de cometa, las clulas se centrifugaron
(14.000 rpm, 15 min, 4C), se resuspendieron en 1 ml de
PBS fro y se centrifugaron de nuevo. El enjuague con
PBS se repiti tres veces. Finalmente, las clulas se
suspendieron cuidadosamente en 50 l de LMP agarosa
(1% [w / v]) se calent hasta 37 C y 20! L de las
mezclas se pipetearon en Trevigen CometSlides. Las
muestras preparadas se colocaron en hielo y se dejaron
protegidos de la luz hasta LMP agarosa solidificada. Las
clulas se lisaron sumergiendo los portaobjetos en
tampn de lisis (0,1 M EDTA, 2,5 M NaCl, 10 mM Tris-
HCl, pH 10) durante 1 h a 4C. Despus de la lisis, el
tampn se reemplaz con solucin de electroforesis
(NaOH 0,3 M, EDTA 1 mM, pH 13,3) y el ADN se
desenrolla durante 30 min a 4C en un recipiente
protegido de la luz. Los portaobjetos de microscopio se
colocaron en un aparato de electroforesis de ADN
Kucharczyk Kometa y a electroforesis en una nueva
porcin de la solucin de electroforesis en fro a 25 V,
300 mA durante 1 h. Despus de la electroforesis, los
portaobjetos fueron neutralizados por enjuagado tres
veces con tampn de neutralizacin fro (0,4 M Tris-HCl,
pH 7,5) y finalmente con agua fra. Los portaobjetos se
tieron con 20 l de 2 mg / ml DAPI y los ncleos se
analizaron bajo microscopio de fluorescencia BX 60
Olympus. El implicado conteo de anlisis de 100 cometas
consecutivos divide en cinco categoras (0-4) ( Avishai et
al. 2003 ).

Induccin de las enzimas de reparacin de


ADN
La evaluacin de la induccin de las enzimas de
reparacin del ADN en las clulas HT29 por los jugos de
col se llev a cabo mediante el ensayo de cometa
modificado basado en Collins et al. (2003 ). Las clulas se
trataron durante 20 min con 100? M H 2 O 2 para inducir
dao en el DNA reproducible reflejado por cometas que
pertenecen principalmente a la categora 4
(aproximadamente 90%). Se recogieron las clulas
tratado con perxido de hidrgeno, en combinacin con
LMP agarosa y se coloca sobre CometSlides (Trevigen)
como se describe anteriormente. Se lisaron las clulas
durante 60 min en 0,1 M EDTA, 2,5 M NaCl, 10 mM
Tris-HCl, pH 10. Despus de la lisis, 30 l de fraccin
citoslica derivado de clulas HT29 expuestas a los jugos
de col se coloc sobre una de las posiciones de
diapositivas mientras que 30! l de tampn de KCl-P se
aadi a la otra posicin de referencia. Los portaobjetos
de microscopio se colocaron en un recipiente protegido
de la luz y se transfieren a 37C durante 20 min para
permitir tiempo para la reparacin de dao oxidativo del
ADN inducido por H 2 O 2 . Despus de esta incubacin,
los portaobjetos fueron procesados y analizados por el
procedimiento de ensayo cometa descrito anteriormente.
Anlisis estadstico
Los medios y las desviaciones estndar se calcularon para
tres experimentos independientes; tpicamente llevadas a
cabo tanto por triplicado o duplicado. Un programa
estadstico GraphPad PRISM 4 y Statistica 7 se utilizaron
para anlisis de datos. Dependiendo del tipo de datos
analizados, se aplicaron diferentes pruebas estadsticas
como se indica en las leyendas para las figuras (regresin
lineal, anlisis unidireccional de la varianza con Tukey de
o la prueba de Dunnett, t prueba de Kolmogorov-Smirnov
test y).
RESULTADOS
Las porciones de la col utilizados en este estudio se
obtuvieron de parte norte de Polonia y fueron adquiridos
durante los aos 2003-2006 en la misma tienda al por
mayor, lo ms probable que cooperan con los mismos
productores. tratamiento culinario, es decir, la
fermentacin espontnea y el calentamiento de la col y
sauerkraut se llevaron a cabo de una manera tpica como
en casa.
Dos pruebas estndar se utilizaron para evaluar las
propiedades anti-oxidantes de FCJ y SJ, a saber ABTS
ensayo y el ensayo de DPPH ( Fig. 1 ). FCJ muestra
relativamente baja actividad antioxidante alrededor de 0,5
moles TEAC por ml de jugo. La fermentacin espontnea
aument consistentemente esta actividad tres a cuatro
veces. Los valores medidos fueron comparables (con
significacin de la diferencia en funcin de preparacin
de la muestra) entre los aos con la excepcin de 2005
cultivos para los cuales los valores TEAC fueron
significativamente diferentes de los dems para todos los
ensayos usados ( P <0,001 o P <0,05).
Figura 1.
Abierta en la figura espectador
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La comparacin de componentes antioxidantes de


PROPIEDADES de coles y la correspondiente sauerkrauts
HOMEMADE DERIVADOS DE CULTIVOS EN LA Polonia
Northern en los perodos 2003-2006
actividad antioxidante total se determin mediante el ensayo
ABTS - panel A o de ensayo DPPH - panel B para jugos o
extractos metanlicos obtenidos de col fresca y el chucrut. Los
resultados representan la media desviacin estndar de tres
experimentos independientes. *, ** significativamente diferente
de otras muestras (anlisis de la varianza con la prueba de
comparacin mltiple de Tukey): * P <0,05 y ** P <0,001.
En el caso de FCJ, tambin calentando a 100C aument
linealmente la capacidad de eliminar los
radicales; Curiosamente, este incremento fue mucho ms
evidente hacia DPPH radical (alrededor de siete veces
ms de 12 h de calentamiento) que hacia radical
superxido ( Fig. 2A ). Estas observaciones fueron
confirmadas por las pendientes de las lneas calculados a
partir de la regresin lineal: y = 0.157x + 0,377 ( R 2 =
0,977) y y = 0.039x + 0,2807 ( R 2 = 0,984) para DPPH y
ACL, respectivamente. La linealidad de los cambios fue
confirmado por la prueba ( P <0,001). En contraste, SJ
capacidad de eliminacin de radicales sigui una cintica
similar para los radicales ambos; en las primeras 2 h se
redujo, probablemente un resultado de la descomposicin
de la vitamina C, entonces se mantuvo bsicamente en el
mismo nivel hasta un mximo de 12 h de tratamiento
trmico ( Fig. 2B ).
Figura 2.
Abierta en la figura espectador
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La influencia del tiempo de la calefaccin en la actividad


antioxidante de jugo fresco de col (2006) PANEL A y jugo de
col fermentada (2006) PANEL B AS DETERMINADO POR
ACL y DPPH Ensayos
Los resultados representan las medias expresa como TEAC mol
/ mL de tres experimentos independientes.
La potencia antioxidante creciente durante el
procesamiento trmico sugiri que los cambios en la
composicin qumica de los jugos de repollo. Estos
cambios fueron controlados con el uso de extractos
metanlicos obtenidos a partir de zumos de repollo y
chucrut liofilizadas, se calent a 100C en viales
sellados. Como puede verse en la Fig. 3 , el aumento de la
potencia de eliminacin de radicales de FCJ tras el
calentamiento se reflej por la aparicin de manchas
Migracin rpidas en cromatogramas de TLC de
extractos metanlicos visualizados usando solucin de
DPPH, por lo que representa sustancias con propiedades
antioxidantes. Aunque el tratamiento trmico de SJ
tambin dio lugar a la formacin de nuevos antioxidantes,
la descomposicin de la vitamina C contrarresta
aparentemente su impacto.

Figura 3.
Abierta en la figura espectador
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TLC cromatogramas de TERMICAMENTE TRATADOS


JUGO FRESCO de col (2006) (A) y jugo de col fermentada
(2006) (B) visualizaron por 0,2% de solucin de DPPH en
metanol
Los nmeros en la parte inferior (0-12) se refieren a las horas de
calentamiento.
En las clulas expuestas a insulto oxidativo, de manera
similar como en los sistemas libres de clulas, las
propiedades antioxidantes de los fitoqumicos de plantas
pueden proporcionar una proteccin por barrido de
ROS. Sin embargo, en el sistema celular tambin, otros
mecanismos que son capaces de neutralizar los oxidantes
o desintoxicar productos txicos de su reaccin con
pueden producirse componentes celulares. Los
glucosinolatos se encuentran en los vegetales crucferos,
ms precisamente los productos de su descomposicin,
son conocidos por su capacidad para modular la
expresin gnica; por lo tanto, la proteccin basndose en
el aumento de las defensas endgenas pareca una ruta
muy probable de prevenir el estrs oxidativo tambin por
fito col. En la serie de experimentos que se describen a
continuacin, tratamos de responder a varias
preguntas. En primer lugar, se la induccin de sistema
desintoxicante importante que consiste en GST y GSH
demostr por ITC aislado ser perceptible para el
componente de alimentos naturales tales como FCJ o SJ a
dosis dietticamente relevantes? Si es as, cmo esta
induccin se ve afectada por el tratamiento culinario de la
col? Las concentraciones de los jugos de la col utilizados
en los experimentos que implican clulas cultivadas se
eligen, teniendo en cuenta dos factores. La comida que
contenga col tpico puede incluir de 10 a 80% v / v de
este vegetal, por lo tanto las clulas que recubren el tracto
alimentario podran estar expuestos a las dosis
correspondientes. Adems, sobre la base de las
determinaciones de la inhibicin del crecimiento celular
por FCJ y SJ, llevan a cabo para cada lote de la col por
MTT (conocido tambin como ensayo de MTS), las
concentraciones de zumos estaban restringidos a los que
no estn causando ms de 50% de muerte de clulas para
un tiempo dado del tratamiento (datos no mostrados).
La Figura 4 presenta los resultados de las mediciones de
las GST totales y los niveles de GSH en fracciones
citoslicas de clulas HT29 expuestas a diferentes zumos
de col (cosecha de 2002) durante 3 h. Los datos se
presentan como porcentaje de los valores obtenidos para
la fraccin citoslica de las clulas no tratadas tomadas
como 100%. Como puede verse, 20 y 40% v / v FCJ fue
muy eficaz en el aumento de los niveles de ambas GST y
GSH. Sin embargo, la concentracin de 10% [v / v] no
parece ser suficiente para asegurar la capacidad
consistente de induccin GST; en relacin a las clulas no
tratadas, no se observaron cambios estadsticamente
significativos en las clulas tratadas con los jugos de col
(datos no mostrados). SJ prima no mostr dicha
capacidad; sin embargo, despus de calentar durante 2 h a
100C, SJ tambin se convirti en un inductor muy eficaz
de las actividades analizadas. En cuanto a las mediciones
de GSH, las cantidades determinadas variada fuertemente
entre experimentos replicados y esto se refleja en la falta
de significacin estadstica de la diferencia en
comparacin con citosoles de control. Procesos de
superposicin de induccin sntesis de GSH y la reaccin
de ITC con GSH pueden causar esta variabilidad, pero un
examen ms detallado de estos fenmenos fue ms all
del alcance del estudio.

Figura 4.
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LA ACTIVIDAD GST y el contenido de GSH en las fracciones


citoslicas obtenido de las clulas HT29 tratadas por 3 H con
zumos COL indicado (cosecha de 2002)
Los resultados son medias desviacin estndar de las
mediciones de actividad por triplicado llevados a cabo por tres
incubaciones de clulas independientes. La significacin
estadstica de las diferencias entre el control frente a las
muestras tratadas se determin mediante anlisis unidireccional
de la varianza con la prueba de comparacin mltiple de
Dunnett: * P <0,05 y ** P <0,001.
La siguiente serie de experimentos fue diseado para
investigar la capacidad de FCJ y SJ para evitar daos en
el ADN en clulas HT29 expuestas a insulto oxidativo
(300? M H 2 O 2 ). El esquema experimental combina la
evaluacin de efectos citotxicos y genotxicos por dos
esquemas de tratamiento. En el primero, las clulas se
trataron con H 2 O 2 concomitantemente con jugos de
repollo; por lo tanto, la neutralizacin directa de ROS
podra ser considerado principalmente como un
mecanismo de proteccin. Nuestros estudios anteriores
mostraron que SJ disminuye la degradacin del ADN en
las clulas humanas de leucemia HL-60 expuestas a
H 2 O 2 ( Bartoszek et al. 2002 ). El otro sistema implica la
incubacin de las clulas HT29 con FCJ o SJ durante 24
h antes de la agresin oxidativa, para aumentar las
defensas antioxidantes de las clulas.
En ambos esquemas, el efecto genotxico se determin
mediante el ensayo de cometa, mientras que la inhibicin
del crecimiento se determin por el nmero de clulas
como se describe en Materiales y Mtodos. Clulas HT29
result ser inesperadamente sensible al procedimiento de
ensayo cometa y aproximadamente el 50% de las clulas
de control mostraron cierto grado de dao en el DNA
( Fig. 5A ). Sin embargo, la aplicacin de H 2 O 2 aument
el grado de fragmentacin del ADN con suficiente fuerza
para hacer la evaluacin de proteccin posible. Para
nuestra sorpresa, result que tanto FCJ y SJ en
concentraciones utilizadas (20 y 40% v / v) y el tiempo de
incubacin corto que asciende a 30 min en el primer
esquema, provocado el nivel sustancial de la
fragmentacin del ADN ( Fig. 5A ) . La diferencia
estadsticamente significativa entre el control y las clulas
de jugo tratado fue confirmado por la prueba de
Kolmogorov-Smirnov ( P <0,001). Esto se refleja en la
disminucin de recuento de clulas inmediatamente
despus del tratamiento ( t -test, P <0,05), que era, sin
embargo, ya no se ve despus de 48 h de incubacin en
medio fresco ( Fig. 5B ) (no estadsticamente diferente de
control) . El tratamiento combinado, zumo de col y
H 2 O 2 , causada ni mayor nivel de dao del ADN ni la
mejora de la inhibicin del crecimiento en comparacin
con FCJ o SJ aplican solos (sin diferencia
estadsticamente significativa en comparacin con los
valores obtenidos para los cultivos no tratados con
H 2 O 2 ) . El tratamiento con H 2 O 2 crecimiento celular
solo inhibi en un 20% como se evalu despus de 48 h
de incubacin en medio fresco, pero la combinacin de
H 2 O 2 y col jugo muestran ninguna citotoxicidad despus
del mismo periodo de postincubation (no
estadsticamente diferente de control). En realidad,
pareca que FCJ y SJ habilitadas mecanismos por los
cuales las clulas hicieron rpidamente las prdidas
causadas por el insulto oxidativo.
Figura 5.
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Efecto genotxico (panel A) y el crecimiento celular inducida


por la inhibicin (panel B) de H 2O 2 APLICADO A clulas
HT29 durante 30 min en combinacin con zumo de col fresca
(FCJ 2005) OR jugo de col fermentada (SJ 2005) a las
concentraciones indicadas
Despus del tratamiento , las clulas se cosecharon por
tripsinizacin, se contaron para determinar el nmero de clulas,
a continuacin, sometido a ensayo de cometa o 48-h
postincubation en medio fresco. Determinaciones de inhibicin
del crecimiento se dan como% del control (Panel B) suponiendo
que el nmero de cualquiera de las clulas no tratadas o
H 2 O 2 tratado con clulas como 100%. Todos los resultados
presentados son medias desviacin estndar de tres
experimentos independientes realizados por duplicado. El
anlisis estadstico de las evaluaciones de genotoxicidad (Panel
A) se realiz mediante la prueba de Kolmogorov-
Smirnov: un estadsticamente diferentes de las clulas de control
( P <0,001); b estadsticamente diferente de H 2 O 2 clulas
tratadas ( P <0,001). *, ** significativamente diferente de los
cultivos de control no tratados ( t -test: * P <0,05, ** P <0,01).
En el esquema experimental que implica la preincubacin
de las clulas HT29 con zumos de col seguido de
tratamiento con H 2 O 2 ( Fig. 6 ), esperbamos que las
clulas toleran mejor la exposicin a ROS debido a la
induccin de defensa antioxidante endgeno. Result que
simplemente contrariamente a nuestras expectativas, 24 h
de tratamiento previo con tanto FCJ y SJ utilizado a
concentraciones no txicas (1 [no mostrado], 5 o 10% v /
v) ms sensibles a H clulas
prestados 2 O 2tratamiento. Adems, la exposicin a los
jugos col aqu aument el dao del ADN
significativamente ( Fig. 6A ) en comparacin con las
clulas no tratadas ( P <0,001). Sin embargo, en contraste
con el esquema corto de incubacin, el tratamiento
combinado, es decir, zumo de col seguido por H 2 O 2 ,
causada significativamente ms alto nivel de
fragmentacin del ADN de H 2 O 2 aplicado a las clulas
no tratadas ( P <0,001). Estos efectos genotxicos se
tradujeron en un aumento de la inhibicin del crecimiento
( Fig. 6B ), donde el nmero de clulas inmediatamente
despus de tratamiento y 48 h ms tarde
significativamente se disminuy en comparacin con el
crecimiento del control ( P <0,0001), as como en
comparacin con las clulas expuestas a H 2 O 2 solo ( P =
0,002 y P = 0,009 justo despus del tratamiento y 48 h
ms tarde, respectivamente). Por lo tanto, el aumento de
la sensibilidad hacia ROS se observ a nivel de dao del
ADN, adems de ser reflejado por la inhibicin del
crecimiento celular ms fuerte ( Fig. 6A, B ,
respectivamente).
La Figura 6.
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Efecto genotxico (panel A) y el crecimiento celular inducida


por la inhibicin (panel B) de H 2O 2 APPLIED durante 30 min
para HT29 clulas pretratadas durante 24 h, ya sea con zumo de
col fresca (FCJ 2005) OR jugo de col fermentada (SJ 2005) a las
concentraciones indicadas
despus del tratamiento con h 2 o 2 , las clulas se cosecharon por
tripsinizacin, se contaron para determinar el nmero de clulas,
a continuacin, sometidos a ensayo de cometa o 48-h
postincubation en medio fresco. Todos los resultados
presentados son medias desviacin estndar de tres
experimentos independientes realizados por
duplicado. Determinaciones de inhibicin del crecimiento se dan
como% del control (Panel B) suponiendo que el nmero de
cualquiera de las clulas no tratadas o H 2 O 2 tratado con clulas
como 100%. La inhibicin de crecimiento celular fue
estadsticamente significativa en comparacin con clulas de
control independientemente del tratamiento ( t -
test, P <0,0001). El anlisis estadstico de las evaluaciones de
genotoxicidad (Panel A) se realiz mediante la prueba de
Kolmogorov-Smirnov: un estadsticamente diferentes de las
clulas de control ( P <0,001); b estadsticamente diferente de
H 2 O 2 clulas tratadas ( P <0,025).
Finalmente, se investig si fitocomplejo col puede influir
en la eficiencia de la reparacin del dao del ADN
inducido por ROS, lo que podra explicar la recuperacin
observada de FCJ- o clulas SJ-tratada despus de insulto
oxidativo en el protocolo de incubacin corto. La
estimulacin de los mecanismos responsables de la
reparacin del ADN se determin mediante el ensayo de
cometa modificado segn el esquema experimental se
representa en la Fig. 7 . Para estos experimentos, se
utilizaron dos poblaciones de clulas HT29. Uno fue
tratado con H 2 O 2 para inducir alto nivel de dao del
ADN (~ 90% de los cometas de la clase 4), mientras que
la otra poblacin de clulas se expuso a 10% v / v FCJ o
SJ para diferentes perodos de tiempo (3 , 6 o 24 h). El
H 2 O 2 tratado con clulas se inmovilizaron en agarosa
LMP y se coloca en CometSlides, despus se incubaron
durante 25 min con las fracciones citoslicas a partir de
clulas de control o clulas expuestas a los jugos de
repollo para permitir la reparacin del dao del ADN; a
las diapositivas de referencia, se aadi tampn lugar. Se
supuso que si jugos col muestran la capacidad de
desencadenar la expresin de las enzimas de reparacin
de ADN, tal novo enzimas sintetizadas apareceran
inicialmente en fraccin citoslica antes de llegar a su
destino objetivo, es decir, el ncleo. La capacidad de
reparacin del ADN de las fracciones citoslicas se midi
como la reversin de H 2 O 2 dao del ADN inducida, es
decir, el acortamiento de colas de los cometas despus de
ensayo cometa en las muestras se incubaron con
fracciones citoslicas a partir de clulas o bien no
expuestas o expuestas a FCJ o SJ en comparacin con las
clulas de control incubadas con el mismo volumen de
tampn. La significacin estadstica de la distribucin de
los ncleos entre las diferentes categoras de cometas se
analiz mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov.
La Figura 7.
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El esquema Y DE LAS MUESTRAS resultados experimentales


de determinaciones de reparar el dao oxidativo del ADN POR
citoslica fracciones derivadas de las clulas HT29 tratadas
previamente con los jugos COL
Como se muestra en la Fig. 8 , ambos zumos de col
estimul la actividad de las enzimas implicadas en la
reparacin del dao del ADN inducido por ROS bastante
eficaz, aunque la cintica fue diferente para FCJ y SJ. La
adicin de control de fraccin citoslica, es decir, a partir
de clulas HT29 no expuesto a los jugos de col, a
H 2 O 2 tratados con clulas no caus ningn cambio en el
nivel de dao en el ADN para todos los puntos de tiempo
indicados ( P > 0,1). En el caso de citosoles derivados de
las clulas expuestas a 10% v / v FCJ para 3 o 6 h, la
disminucin estadsticamente significativa de la
fragmentacin del ADN fue visto en comparacin con
citosoles de control ( P <0,005 y P <0,001,
respectivamente). Sin embargo, despus de 24 h, se
observ la disminucin de la actividad de las enzimas de
reparacin, en el caso de FCJ incluso por debajo de la de
las clulas de control ( P > 0,1). Adems, 10% v / v SJ
exhibi la capacidad de estimular los mecanismos
implicados en la reparacin del ADN, que, sin embargo,
requiere tiempos de exposicin ms largos: 6 y 24 h. La
reparacin de las lesiones del ADN en H 2 O 2 tratado con
clulas incubadas con citosoles de clulas HT29
expuestas a 10% v / v SJ trajo cambio sobre
estadsticamente significativa en la distribucin de los
ncleos entre las categoras de cometas ( P <0,001
y P <0,05, para 6 - y de 24 h de exposicin,
respectivamente).
Figura 8.
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La induccin de la reparacin del dao de DNA en clulas HT29


POR col fresca o la chucrut JUICE 2006
Las clulas HT29 fueron tratados con H 2 O 2 , se lisaron en
portaobjetos de microscopio y postincubated durante 25 min con
las fracciones citoslicas derivados de clulas de control HT29 o
expuestos a 10% v / v jugos para los tiempos indicados. El
diseo experimental es as como la forma explicada en la
Fig. 7 . Los resultados son medias desviacin estndar de
determinaciones por triplicado llevados a cabo para tres
experimentos independientes. El anlisis estadstico se llev a
cabo mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov: a) P > 0,1,
no es diferente de H 2 O 2 tratado con clulas (columna
H 2 O 2 ); b) P <0,05, estadsticamente diferentes de
H 2 O 2 tratado con clulas postincubated con citosoles aisladas
de las clulas de control (columna H 2 O 2 + citosoles de
control).
DISCUSIN
Compuestos de la dieta antioxidantes son importantes
para limitar las reacciones oxidativas perjudiciales en las
clulas, que pueden predisponer al desarrollo de las
principales condiciones clnicas tales como enfermedades
del corazn y el cncer. Las verduras que pertenecen
a Brassicae no son fuente especialmente rica de sustancias
con actividad antioxidante o antirradical; por lo tanto, son
ms bien no se consideran alimentos antioxidantes. Sin
embargo, al considerar la capacidad de un alimento en
particular para prevenir el dao oxidativo, an ms
importante que la cantidad de antioxidantes pueden ser
consumidos otras actividades biolgicas de fitoqumicos
que influyen en el impacto de la exposicin a
oxidantes. Estas actividades biolgicas abarcan la
modulacin de la actividad / expresin de las enzimas
desintoxicantes ROS (por ejemplo, catalasa) o productos
de dao oxidante inducida (por ejemplo, GST / GSH
conjugacin de los productos de peroxidacin de lpidos)
o reparacin de daos incurridos (por ejemplo, DNA las
enzimas de reparacin). En este estudio, hemos
demostrado que el fitocomplejo natural de col blanca,
tanto frescos y elaborados, a dosis pertinentes en relacin
con el consumo de la dieta normal, pareca mejorar la
barrera antioxidante en todos estos niveles.
Col blanca, el objeto de este estudio, ha sido clasificado
como 18 (14-24 dependiendo del ensayo) entre 33
vegetales evaluados ( Pellegrini et al. 2003 ) con el
contenido de quercetina y kaempferol, los flavonoides
ms comunes, por debajo del nivel de deteccin
( Hertog et al. 1992 ). Sin embargo, debido a que es una
amplia ingrediente diettico, cuando recalculado como
mmoles TEAC por porcin, que se clasific de manera
similar como zanahoria o tomate ( Wu et al. 2004 ). Por
otra parte, hemos demostrado que las propiedades
antioxidantes de col fresca aumentan gradualmente al
calentarse durante muchas horas, es decir, durante el
procedimiento de coccin tpico utilizado mientras que la
preparacin de comidas, especialmente comidas de carne,
que contiene este vegetal. Es una observacin muy
importante ya que sugiere que repollo cocido con otros
componentes de los alimentos particularmente
susceptibles a la oxidacin tales como grasas, puede
impedir su deterioro. En el caso de las grasas, esto
disminuira la formacin de radicales de lpidos y
genotoxinas derivados de lpidos, mejorando as la
calidad de los productos alimenticios procesados por
calor. La capacidad muy sustancial de componentes de
jugo de col para evitar cambios termo de aceite de colza y
la manteca de cerdo, los dos tipos de grasas que son ms
a menudo cocinados con este vegetal, ha sido
recientemente demostrada por nuestro equipo ( Tynek et
al. 2008 ). Por lo tanto, de origen natural fitocomplejo col
puede limitar los procesos oxidativos indeseables por
barrido directo ROS tambin despus de tratamiento
culinario como la fermentacin o de calefaccin.
Como se mencion antes, una de las acciones
antioxidantes ms importantes indirectos de
fitoqumicos col sera la estimulacin de la expresin de
genes implicados en la mejora de los efectos indeseables
de ROS. La induccin de enzimas de fase II de los
compuestos aislados, extractos o plantas ingeridas
de Brassicae gnero ha sido bien documentado in vitro , in vivo ,
as como en humanos (revisado extensamente en IARC
Handbooks de Prevencin del Cncer 2004 ), por lo
tanto, podra esperarse tambin para la col . Nuestra
investigacin se concentr en GST que constituyen una
familia de enzimas de fase II involucradas en la
detoxificacin de xenobiticos as como metabolitos
txicos formados endgenamente y GSH que es un
importante antioxidante celular, sino tambin la molcula
aceptora de sustancias txicas activados, incluyendo los
formados como una resultado de ROS ataque a las
biomolculas celulares, en la reaccin de conjugacin,
catalizada por GST.
Se observaron las ciertos niveles de estimulacin de la
actividad de GST por FCJ y SJ ya despus de la
exposicin de 3 h de clulas HT29 a estos zumos de col
( Fig. 4 ). Las concentraciones ms altas (40% v / v)
bajaron la actividad GST en clulas tratadas con FCJ as
como SJ SJ prima o calentado. FCJ y SJ tambin
modulados nivel GSH, pero fue difcil obtener resultados
reproducibles en condiciones experimentales aplicadas
(probablemente debido a que se ejecuta en reaccin
paralela entre GSH y el CCI cambiando la concentracin
de la primera).
Estos resultados confirmaron que los fitoqumicos de col
en su composicin natural y a dosis que se esperan
durante el consumo diario normal puede prevenir el dao
a las biomolculas mediante la eliminacin de ROS, y
compuestos presumiblemente txicos generados por
ellos, de entorno celular a travs de la estimulacin de la
propia defensa de la clula. La siguiente pregunta que
hicimos fue, sin embargo, si se ha producido el dao
oxidativo, y se aumentara su reparacin debido a la
exposicin de las clulas a los jugos de repollo. Nuestros
experimentos tambin dieron respuesta positiva a esta
pregunta, al menos en cuanto al dao del ADN inducido
por ROS. Las fracciones citoslicas de clulas HT29
expuestas a FCJ o SJ exhiben una mayor capacidad para
reparar el dao del ADN inducido por H 2O 2 en
comparacin con los de los cultivos de control. La
reparacin mejorada de dao de ADN determinada para
citosoles derivados de las clulas expuestas a los jugos
col, especialmente FCJ, podra haber resultado de de
novo sntesis de enzimas de reparacin de ADN ya que
residen en el ncleo, pero sin las mediciones de nivel de
ARNm, slo queda una hiptesis atractiva . En general, el
aumento de las actividades mencionadas impiden insulto
oxidativo producido en diferentes grados para zumos FCJ
y SJ y sigui una cintica diferente, que no es
sorprendente, ya que fresco y col fermentada varan en la
composicin qumica y esto debe reflejarse por sus
propiedades biolgicas.
La capacidad de inducir la GST y para aumentar el nivel
de GSH en las clulas podran ser anticipados en base a
datos que se encuentran en la literatura. Estas habilidades
se demostraron para sulforafano, el ITC aislado de
brcoli pero encuentra tambin en la col ( Fahey y
Talalay 1999 ). Sin embargo, para nuestro mejor
conocimiento, la modulacin de la actividad de las
enzimas responsables de la reparacin del dao del ADN
inducido por ROS por componente de alimentos naturales
se ha informado antes slo para el kiwi y la mejora fue
atribuido a un aumento de la estabilidad de la protena
OGG1 ( Collins et al . 2003 ).
El barrido de capacidad ROS de FCJ y SJ Tambin se
investig en el sistema celular. Las clulas HT29
expuestas a H 2 O 2 de forma concomitante con estos
jugos mostraron mucho menor grado de la degradacin
del ADN en comparacin con las clulas tratadas con
H 2 O 2 en su propia. La evaluacin de la inhibicin del
crecimiento de tratamiento combinado sugiri que las
clulas HT29 parecan recuperarse de forma ms eficiente
del estrs oxidativo debido a la acelerada tasa de
proliferacin. Slo en los cultivos celulares tratados con
los jugos de la col, la disminucin del nmero de clulas
medido inmediatamente despus del tratamiento ya no se
observa despus de 48 h postincubation en medio
fresco. El tratamiento de las clulas HT29 con jugos de
repollo trajo ms sorpresas. En primer lugar, tanto FCJ y
SJ resultaron causar la fragmentacin del ADN sustancial
en las clulas como se demuestra por el ensayo de
cometa. Sin embargo, la extensin del dao de ADN fue
fcilmente tolerado por las clulas y no se observ la
inhibicin de su crecimiento despus de 48 h de
postincubation en medio fresco. En segundo lugar, la
preincubacin con los jugos de col, en un amplio
intervalo de concentraciones no txicas de 1 a 10% v / v
no inmunes las clulas contra ROS ataque como se
poda esperar, teniendo en cuenta la presencia de
antioxidantes, as como la induccin de enzimas
implicadas en la proteccin contra el estrs oxidativo. Por
el contrario, la exposicin de las clulas HT29 durante 24
h a FCJ y SJ antes de H 2 O 2 tratamiento aument el
efecto genotxico de este ltimo, as como la
citotoxicidad general de tal tratamiento combinado.
Dichas observaciones hacen que sea obvio que
fitocomplejo col acta a travs de diferente ruta (s) de los
previstos en el caso de compactacin directa de ROS o
productos de su reaccin con biomolculas. Es difcil
decidir lo que caus la mejora de H 2 O 2 citotoxicidad se
muestra en el caso de las clulas pretratadas con los jugos
de la col por 24 h. Es an ms difcil de explicar la
aparicin de cometas en el caso de cultivos celulares
expuestos a FCJ y SJ durante 30 min, aunque esta
observacin est de acuerdo con informes anteriores que
describen tales efectos genotxicos como la induccin de
aberraciones cromosmicas y intercambios de cromtidas
hermanas por jugos de col en clulas de mamfero
despus de un tratamiento de 60 min ( Kassie et
al. 1996 ). La falta de correlacin entre el efecto
genotxico y la inhibicin del crecimiento despus de 48
h postincubation en medio fresco, procedimiento tpico
en ensayos de inhibicin del crecimiento celular, es
extremadamente desconcertante y no podemos explicar
estos resultados en el momento. Es tentador especular que
la capacidad de las TIC para reaccionar con grupos
sulfhidrilo y amino podra alterar la funcin del genoma
de muchas maneras. Puede causar el agotamiento
transitorio ya postulado de GSH alterar el estado redox
celular y por lo tanto modular la expresin de dependen,
as como genes sensibles a redox ( Loo 2003 ; Eberhardt
y Jeffery 2006 ). Sin embargo, tambin es posible que las
TIC pueden participar en modificaciones qumicas de los
componentes de la cromatina y con ello influir en la
estructura de la cromatina con consecuencias difciles de
predecir. El agotamiento de GSH podra ser responsable
de la sensibilizacin a H 2 O 2 exposicin observada por
nosotros tras 24 h de pretratamiento de las clulas HT29
con zumos de col. La modificacin de la cromatina
podra explicar la genotoxicidad de fitoqumicos de col y
requieren claramente un examen ms detallado en lo que
respecta riesgo / beneficio para al menos clulas que
recubren el tracto alimentario, tanto normal, as como los
que entran en la va de la transformacin cancergena.
Para concluir, las investigaciones presentados han
demostrado que las actividades biolgicas demostradas
hasta ahora principalmente para compuestos bioactivos
puros aislados de las verduras crucferas son vistos para
el artculo de comida en su forma natural o despus del
procesamiento tpico culinaria en concentraciones que se
puede esperar en el tracto digestivo despus de la col
consumo.
NOMENCLATURA
ABTS, 2,2'-azino-bis (3-etil-benzotiazolina-6-sulfnico)
diamnico sal; SON, elemento de respuesta
antioxidante; DAPI, 4 ', 6-diamino-2-fenilindol; DPPH,
1,1-difenil-2-picrilhidrazil; FCJ, zumo de col
fresca; GLS, glucosinolatos; GST, glutatin-S-
transferasas; GSH, glutatin; ITC, isotiocianato; agarosa
LMP, agarosa de bajo punto de fusin; PBS, solucin
salina tamponada con fosfato; OPT, o-
phthalaldehyd; ROS, especies reactivas de oxgeno; SJ,
jugo de chucrut, TEAC, Trolox equivalente capacidad
anti-oxidante; TLC, cromatografa de capa fina.