en una temtica en concreto, adems
de ofrecer multitud de servicios como el
correo electrnico, chats, foros de dis-
cusin, etc.
Portal vertical: Recurso muy parecido
en esencia a un portal horizontal, pero
orientado a una temtica en concreto,
llegando a profundizar de forma signifi-
cativa.
Publicaciones en serie: Aquella que
bajo un ttulo comn se publica en par-
tes sucesivas y para la que en principio
existe la intencin de que contine inde-
finidamente.
Publicaciones peridicas: ver
Publicaciones en serie
Registro: Cada uno de los elementos
individuales, organizados siguiendo una
serie de atributos, que conforman la
totalidad de una base de datos.
Ruido: Conjunto de informacin que se
recupera en un proceso de bsqueda
pero que no se ajusta a nuestras nece-
sidades informativas.
Servicio de alertas: Servicio de infor-
macin parametrizable por el usuario
que le permite recibir de forma peridica
en su correo electrnico toda aquella
informacin que desee de un sistema de
informacin en concreto como una base
de datos.
Silencio: Conjunto de informacin que
no se recupera en un proceso de bs-
FORMACIN CONTINUADA
PARA FARMACUTICOS DE HOSPITAL 3.4
queda y que respondera a nuestras
necesidades informativas.
Valor: Cada una de las unidades infor-
mativas que adquiere un atributo en un
registro de una base de datos.
Vocabulario libre: Tambin llamado
lenguaje natural, es aquel que utiliza el
ser humano en la comunicacin verbal.
Vocabulario controlado: Aqul que ha
recibido un tratamiento previo por parte
de un equipo de profesionales, que
decidirn qu trminos se considerarn
ptimos para la recuperacin de la infor-
macin, y los agruparn para su poste-
rior utilizacin en herramientas como los
tesauros.
ACTUALIZACIN
TERAPUTICA:
TERAPIA GNICA
Dr. Marcos Isamat
Director Cientfico
Fundacin Echevarne
FUNDACION
106
PROMOCION
MEDICA
 SUMARIO
1 Introduccin
1.1 Secuencias de ADN
1.2 El genoma y la identificacin estructural
y funcional de un gen
1.3 Conceptos bsicos de gentica celular

2 Terapia gnica somtica y terapia gnica germinal

3 Terapia gnica In vivo y Ex vivo

4 Transferencia gnica o Gene delivery

4.1 Retrovirus
4.2 Adenovirus
4.3 Virus asociados a los adenovirus
4.4 Liposomas
4.5 DNA desnudo

5 Ingenieria gentica en terapia gnica

5.1 Diseo general
5.2 Terapia gnica para la correcin de la deficiencia
en una protena
5.3 Terapia gnica para la correcin del exceso
de funcin de una protena

6 Conclusin

7 Bibliografa

108 109
1. INTRODUCCIN especies, en otras palabras, la secuencia del ciacin automatizada de genomas, como el
gen era muy parecida entre ambas especies. proyecto genoma humano completado en
La terapia gnica es la correccin de un Los procesos genticos y bioqumicos Casi inevitablemente, estas bsquedas de 2000, la velocidad de identificacin de
defecto gentico causante de enferme- bsicos de la clula, la replicacin del secuencias de ADN anlogas entre por ejem- secuencias funcionales o genes se ha dispa-
dad. Este concepto mdico ya se plan- DNA (cido desoxirribonuclico), activa- plo, la Drosophila y el ser humano, resultaba rado, y con ello la posibilidad de su utilizacin
te a principios de los aos 70, cuando cin de un gen, transcripcin y procesa- en la identificacin de genes equivalentes o en beneficio la salud.
empezaban a identificarse los primeros miento del mRNA (cido ribonuclico similares. El resultado era todava ms segu-
genes en organismos como la bacteria mensajero), traduccin del mRNA en ro si se parta de una secuencia de DNA de 1.2 EL GENOMA Y LA IDENTIFICACIN
Escherichia coli o en la Drosophila protena, degradacin del RNA, trfico una especie ms cercana al hombre, por ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DE UN
melanogaster, la mosca del vinagre. intracelular de protenas, y programa- ejemplo, el ratn. Poniendo en evidencia lo GEN
Ambos modelos de estudio han propor- cin de la divisin y muerte de una clu- que ya se ha dicho antes, que los enzimas o
cionado las bases genticas de la medi- la, son prcticamente idnticos a travs protenas involucrados en las funciones bsi- El genoma est compuesto por una larga
cina actual. Los estudios actuales sobre de toda la escala evolutiva. Con las cas y vitales de una clula son compartidos molcula lineal de ADN, formada por cuatro
genes de organismos ms complejos, bases de la gentica bien asentadas, por todas las especies, y de ah que las bases nitrogenadas o nucletidos A, T, C, G
entre ellos el humano, no son ms que slo falta la adquisicin de los detalles secuencias de los genes que codifican estas (adenina, timina, citosina, guanina) unidas
el resultado y la extensin de todos propios de cada especie para poder protenas sean tan parecidas. Con la ejecu- por un grupo fosfato. Esta larga sucesin de
estos modelos establecidos hace ya abarcar la terapia gnica de un modo cin de los grandes programas de secuen- cuatro bases sobre un hilo de fosfatos se
ms de cuarenta aos. prctico. Estos detalles vienen en forma
de secuencias de ADN de los genes promotor accgctggcc ccagggaaag ccgagcggcc accgagccgg cagagaccca ccgagcggcg 61
gen X: exn 1 especficos de cada especie, y de la gcggagggag cagcgccggg gcgcacgagg gcaccatggc ccagacgccc gccttcgaca 121
promotor gen X: exn 2 agcccaaagt agaactgcat gtccacctag acggatccat caagcctgaa accatcttat 181
identificacin estructural y funcional de exn 1 actatggcag gaggagaggg atcgccctcc cagctaacac agcagagggg ctgctgaacg 241
gen X: exn 3 tcattggcat ggacaagccg ctcacccttc cagacttcct ggccaaattt gactactaca 301
ADN estos genes. tgcctgctat cgcgggctgc cgggaggcta tcaaaaggat cgcctatgag tttgtagaga 361
tgaaggccaa agagggcgtg gtgtatgtgg aggtgcggta cagtccgcac ctgctggcca 421
intrn 1 actccaaagt ggagccaatc ccctggaacc aggctgaagg ggacctcacc ccagacgagg 481
1.1 SECUENCIAS DE ADN tggtggccct agtgggccag ggcctgcagg agggggagcg agacttcggg gtcaaggccc 541
TRANSCRIPCION ggtccatcct gtgctgcatg cgccaccagc ccaactggtc ccccaaggtg gtggagctgt 601
DE DNS A ARN
Desde hace ms de quince aos, las
exn 2
gtaagaacta
caggaagcag
ttcaccgtac
ccagcagcag
cctcttgcct
tgtccacgcc
accgtggtag
ggacatgtcc
ggggaggtgg
ccattgacct
aggcctacca
gctcggccga
ggctggagat
ggaggctgtg
agtagtaaaa
gagaccatcc
aagagcggca
gaggctgtgg
661
721
781
ADN
Splicing de ARN
Corte/Empalme
secuencias de los genes que se obten-
an a travs de tcnicas manuales con el intrn 2
acatactcaa
ataacaggct
gacagagcgg
gcggcaggaa
ctgggacacg
aacatgcact
gctaccacac
tcgagatctg
cctggaagac
cccctggtcc
caggcccttt
agctacctca
841
901
(gen)
ctggtgcctg gaagccggac acggagcatg cagtcattcg gctcaaaaat gaccaggcta 961
consiguiente esfuerzo econmico y tc- exn 3 actactcgct caacacagat gacccgctca tcttcaagtc caccctggac actgattacc 1021
agatgaccaa acgggacatg ggctttactg aagaggagtt taaaaggctg aacatcaatg 1081
nico se han ido gradualmente almace- cggccaaatc tagtttcctc ccagaagatg aaaagaggga gcttctcgac ctgctctata 1141
nando en unas bases de datos aagcctatgg gatgccacct tcagcctctg cagggcagaa cctctgaaga cgccactcct 1201
Ribosoma ccaagccttc accctgtgga gtcaccccaa ctctgtgggg ctgagcaaca tttttacatt 1261
mARN
informticos internacionales accesibles intrn 3 tattccttcc aagaagacca tgatctcaat agtcagttac tgatgctcct gaaccctatg 1321
Pptido a los investigadores. La identificacin de tgtccatttc tgcacacacg tatacctcgg catggccgcg tcacttctct gattatgtgc 1381
naciente TRADUCCIN DE cctggcaggg accagcgccc ttgcacatgg gcatggttga atctgaaacc ctccttctgt 1441
RNA A PROTEINA un gen en la mosca de la fruta o en cual- ggcaacttgt actgaaaatc tggtgctcaa taaagaagcc catggctggt ggcatgc
Protena quier otro organismo, suscitaba la bs-
atggcaggaggagagggatcgccctcccagctaacacagcagaggggctgcccaggcctaccagga
queda de ese mismo gen en el ser ggctgtgaagagcggcattcaccgtactgtccacgccggggaggtgggctcggccgaagtagtcac ARNm
cctggacactgattaccagatgaccaaacgggacatgggctttactga
humano, y esto era posible dado los
Figura 1. Clula transcripcin/traduccin altos niveles de conservacin entre las Figura 2. Clula transcripcin/traduccin

110 111
empaqueta enrollndose sobre si
misma como un ovillo para generar los
cromosomas, visibles microscpica-
mente en el ncleo de una clula en
divisin. Los genes se distribuyen a lo
largo del genoma de forma aparente-
mente indistinguible de las secuencias
que los limitan. Algo parecido a la iden-
tificacin de una palabra en una sopa
de letras lineal. En el caso del pasa-
tiempo la identificacin es posible por-
que conocemos el lenguaje, en el caso
gentico, todava falta acabar de esta-
blecer las reglas sintcticas del cdigo especifico del genoma de un organismo
o lenguaje.
La estructura del gen se compone de
varias zonas. El gen per se, es la
secuencia de DNA que codifica la pro-
tena (exn) y se ve interrumpida por
secuencias no codificantes (intrn) que
no contienen informacin sobre la pro-
tena y sirven de espaciadores.
Adems, antes del gen existe una
secuencia, especfica para cada gen,
que se llama regin promotora o pro-
motor. Esta secuencia regula la expre-
sin del gen que le precede. Es decir,
controla que la fabricacin de la prote-
na que codifica ese gen se haga en la
clula que la necesite y en el momento
que la necesite. De ah, que la identifi-
cacin estructural de un gen no sea
siempre evidente y se deban buscar
motivos especficos de la secuencia
para delimitar el inicio de la transcrip-
cin y las fronteras entre exones e
intrones.
La identificacin funcional de un gen
tampoco es fcil. Muchas veces se ha
identificado la secuencia (o estructura)
de un gen, pero se desconoce la funcin
o el papel fisiolgico que juega la prote-
na que de l se fabrica. Esto es comn
a muchas secuencias que se han identi-
ficado fruto del proyecto genoma huma-
no, y cuyas funciones biolgicas se
desconocen. Existen varias maneras de
averiguar la funcin fisiolgica de un
gen, y a menudo son necesarios varios
enfoques. Se puede desactivar ese gen
como activarlos en la clula que los necesite
vivo, por ejemplo un ratn, generando
un ratn knockout, y despus evaluar
los sntomas que el animal knockout
padece. No obstante, la mayora de las
funciones de genes involucrados en
enfermedades genticas hereditarias se
han descubierto al comparar fragmentos
del genoma de individuos afectos por la
enfermedad y de individuos sanos, y su
funcin se ha inferido por el defecto
fisiolgico que los enfermos padecen.
Sea como fuere, la identificacin de
nuevos genes siempre lleva consigo la
posibilidad de su uso teraputico. El
planteamiento de esta modalidad tera-
putica es conceptualmente sencillo.
Una vez se ha identificado el gen cuya
alteracin provoca enfermedad, se corri-
ge la alteracin por insercin del gen
normal en las clulas que contengan la
versin mutada y se restablece la fun-
cin curando as la enfermedad. No
obstante, la insercin de genes terapu-
112
ticos en clulas conlleva problemas tcnicos
que todava estn siendo investigados: se
vern a continuacin. Antes se expondrn los
rudimentos sobre el funcionamiento de los
genes a modo de recordatorio para los lecto-
res no iniciados.
1.3 CONCEPTOS BSICOS DE GENTICA
CELULAR
Todas las clulas de un organismo tienen el
mismo contenido gentico, todas tienen los
mismos genes, y es tan importante tenerlos
y en el preciso momento en el que surja la
necesidad. No est de ms recordar en este
punto, que los rganos estn formados,
separados y comunicados por tejidos. As,
cada rgano (pulmn, hgado, cerebro, etc.) y
cada tejido (tejido muscular, vascular, nervio-
so, etc.) tiene una estructura diferente y una
funcin propia. Un tejido variar de otro en
funcin del tipo de clula que haya utilizado
para formarse o tejerse. El tipo de clula
(pulmonar, heptica, nerviosa, muscular, san-
gunea, etc.) se definir a partir de sus carac-
tersticas especficas: sus componentes
qumicos y sus propiedades fsicas. En defi-
nitiva, su estructura. Toda clula se separa
de otra o de su entorno por una envoltura, la
membrana celular. A travs de ella entran
nutrientes y se reciben o envan seales qu-
micas que determinan la accin y funcin de
esa misma clula o de cualquier otra de su
entorno. En el interior de la clula, en un
espacio conocido como citoplasma, se
degradan los nutrientes recibidos para fabri-
car componentes estructurales de la clula o
seales de comunicacin, siguiendo la infor-
macin que se encuentra en el ncleo celu-
lar. Esta informacin se encuentra codificada
en genes dentro de los cromosomas del
ncleo de la clula.
Los genes son zonas delimitadas de los
cromosomas, hechos de DNA y residen en el
ncleo de todas las clulas de un organismo.
Al conjunto de los genes de una clula (o de
un organismo, ya que el conjunto de genes
es el mismo en todas sus clulas) se le deno-
mina genoma. La funcin de un gen es:
1) expresar o fabricar la protena para
la cual encierran informacin y
2) perpetuar esa informacin durante la
divisin celular.
De ah que el trmino gentica haga refe-
rencia tanto a la produccin de protenas
como a cuestiones de herencia. Siguiendo la
informacin codificada en un gen, ste fabri-
car un nico tipo de protena, por ejemplo,
un componente estructural de la membrana
celular, una protena para comunicarse con
otras clulas, un componente del metabolis-
mo en el citoplasma, o un replicador de cro-
mosomas del ncleo garantizando, despus
de su divisin, el mismo nmero de genes de
la clula madre en las dos clulas hijas. Todo
gen tiene una funcin especfica en la vida de
la clula y el conjunto de las protenas que
fabrique le conferirn sus caractersticas
especficas. Es decir, el conjunto de los
genes expresados en una clula la definen
como un tipo celular concreto con una estruc-
tura y funcin propias.
113
Lo que hace que un linfocito sea tal y
como debe ser es su contenido en pro-
tenas. Son stas las que le darn su
forma esfrica caracterstica, las que le
proporcionarn sus mecanismos de
movilidad para que pueda salir de las
venas y adentrarse en un tejido infecta-
do, las que le permitirn dividirse si el
organismo tiene necesidad de ms linfo-
citos en su sangre en cualquier momen-
to, etc. En el caso de la neurona,
tambin son las protenas las que hacen
que la neurona obtenga su peculiar
forma piramidal, que pueda transmitir
seales elctricas a travs de sus den-
dritas y comunicarse con otra neurona,
que no pueda reproducirse en el animal
adulto y que pueda establecer conexio-
nes nuevas cuando interese. A este
nivel, lo que diferencia a un linfocito de
una neurona, son las diferentes prote-
nas que tiene cada una de ellas. Es lo
mismo que decir, que las diferencias
entre uno y otro tipo de clula vienen
dadas por los diferentes genes que se
expresan (fabrican protenas) en cada
tipo celular.
Para evitar confusiones de trminos, es
importante reconocer la expresin de
los genes (fabricacin de protenas
especficas por una clula) como la dife-
rencia principal entre dos o ms tipos de
clulas, como lo son un linfocito y una
neurona, ya que ambas tienen exacta-
mente los mismos genes en sus cromo-
somas, los mismos que el resto de las
clulas del organismo. Lo que las dife-
rencia es cuantos y cuales, del total de
sus genes, se estn expresando en una
y otra clula.
2. TERAPIA GNICA SOMTICA
Y TERAPIA GNICA GERMINAL
La terapia gnica hace referencia a dos
tipos de enfoques conceptualmente
diferentes. Todos los ensayos clnicos
de terapias gnicas llevados a cabo en
humanos, tienen como objetivo la
correccin de un defecto gentico en
clulas somticas, es decir, en las clu-
las que no son ni espermatozoides ni
vulos. Esto es la terapia gnica som-
Terapia gnica Terapia gnica
somtica germinal
Vectores con
gen teraputico
Figura 3. Terapia somtica versus germinal.
114
tica, donde la correccin del defecto gentico
no se transmite a los descendientes, ya que
la lnea germinal del paciente tratado no est
manipulada. La insercin de un gen terapu-
tico en vulos, espermatozoides o en un
vulo fecundado, se conoce como terapia
gnica germinal, y dado que sta no se ha
realizado en humanos porque la legislacin
actual lo prohibe, no se tratar este tipo de
terapia gnica en este captulo.
La terapia gnica somtica ha centrado sus
actuaciones sobre enfermedades heredita-
rias bien definidas cuyo defecto gentico
reside en un nico gen, las llamadas enfer-
medades monognicas. Estas podran ser
del tipo de las hemofilias, fenilcetonuria, defi-
ciencia de ADA (adenosina desaminasa),
fibrosis qustica, distrofia muscular, hiperco-
lesterolemia familiar, etc. Enfermedades
hereditarias cuyo defecto gentico es fcil-
mente confirmable en los portadores, y altera
el funcionamiento de un tipo celular concreto
y ms o menos accesible a los genes tera-
puticos externos. Las enfermedades provo-
cadas por la alteracin de ms de un gen, o
por la falta de coordinacin de varios genes,
las llamadas polignicas, son lgicamente
ms complejas de abordar y de momento se
desestima la terapia gnica para su posible
tratamiento.
El cncer es una excepcin, ya que aunque
el cncer engloba ms de doscientas enfer-
medades diferentes, todas tienen en comn
los mismos mecanismos de enfermedad: la
divisin celular incontrolada y/o la ausencia
de muerte celular programada. Ambos meca-
nismos son controlados genticamente y
regulados por ms de un gen. El cncer res-
ponde a la acumulacin de errores o muta-
ciones durante la vida del individuo en ms
de un gen de los que controlan la divisin y la
muerte en una misma clula somtica y sta
acaba generando el tumor. Por ello, el cncer
es estrictamente una enfermedad polignica.
No obstante, la terapia gnica se ha utilizado
en ciertos modelos de tumores con el fin de
activar el suicidio de las clulas cancerosas.
Este tipo de terapia gnica se tratar ms
adelante.
Antes de poder evaluar los ensayos de tera-
pia gnica en humanos, es importante enten-
der cuales son las dificultades tcnicas de la
introduccin de un gen teraputico en una
clula. Para ello se debe primero distinguir
los dos tipos bsicos de la terapia gnica
somtica. La terapia gnica in vivo y la tera-
pia gnica ex vivo.
3. TERAPIA GNICA IN VIVO Y EX VIVO
Esta clasificacin de la terapia gnica res-
ponde al lugar donde se produce la manipu-
lacin gentica de las clulas. La terapia
gnica in vivo aborda la modificacin genti-
ca de la clula en el interior del organismo, o
sea, la introduccin del gen teraputico en el
lugar normal de residencia de la clula en
un organismo. Por ejemplo, la modificacin
de clulas pulmonares o hepticas con una
versin correcta del gen de la alfa-1 antitrip-
sina en pacientes con enfisema pulmonar o
cirrosis fruto de esta deficiencia, o en la intro-
115
duccin del gen de la distrofina en teji-
dos musculares en pacientes de distro-
fia muscular. En el caso de la terapia
gnica ex vivo, la manipulacin gentica
ocurre fuera del organismo, en un tubo
de ensayo. En este caso, se extraen las
clulas del paciente, se cultivan en el
laboratorio, se les introduce el gen tera-
putico y se reinfunden en el paciente.
Este proceso es ms fcil con clulas
del sistema hematolgico. La obtencin
de mdula sea, purificacin de clulas
madre, su manipulacin en el laborato-
rio, y la introduccin de la clula madre
con la versin funcional de un gen de
vuelta en el paciente ha servido por
ex vivo
Vector con gen teraputico
Clula aislada y cultivada
Figura 4. In vivo /ex vivo
ejemplo para el tratamiento de la inmu-
nodeficiencia combinada severa (SCID)
por deficiencia de ADA. La introduccin
del gen ADA funcional en las clulas
progenitoras del sistema inmunolgico
han curado ya a nios con SCID, los
conocidos como nios burbuja, en unos
ensayos clnicos.
Lgicamente, el mtodo de introduccin
de un gen teraputico depender del
tejido diana de la terapia, y del objetivo
de la terapia, pero todos los mtodos de
transferencia conllevan unos problemas
intrnsecos, actualmente en vas de
resolucin.
in vivo
4. TRANSFERENCIA GNICA
o GENE DELIVERY
El problema de cmo hacer llegar un gen
teraputico a una clula diana deficitaria de
esa funcin es el mayor obstculo de la
transferencia gnica, ms conocida por la
expresin inglesa gene delivery. Este proce-
so es particularmente difcil en la terapia
gnica in vivo, ya que los tejidos u rganos cos con virus endmicos latentes en el ser
diana, o los focos tumorales ocultos, no siem-
pre son accesibles.
Para cualquier tipo de gene delivery se nece-
sita un vector de transferencia que transpor-
te, proteja y transfiera el gen teraputico de
forma segura y eficaz y que adems le con-
fiera la especificidad de alcanzar nicamente
a las clulas diana. El vector es la clave del
xito de la terapia gnica. Un virus es algo
ms que un grupo de genes que se autorre-
plican cubiertos de una cobertura con prote-
nas que le dan entrada especfica a un tipo
celular concreto. Por ello, tradicionalmente,
se ha aprovechado el cromosoma de virus
Retrovirus Adenovirus
Vectores de terapia gnica
Figura 5. Vectores de terapia gnica.
116
humanos con especificidad natural para
determinados tejidos, despus de haber
reemplazado algn segmento gnico que le
confiriera virulencia al virus, por el gen tera-
putico. Actualmente tambin se estn desa-
rrollando otro tipo de vectores no basados en
virus. Esto se debe al peligro que encierra el
desconocimiento que tenemos sobre la posi-
bilidad de recombinacin de los vectores vri-
humano, y la posibilidad de generar nuevos
virus con capacidad infecciosa desconocida,
tanto para el paciente tratado como para el
resto de la sociedad. Sobre todo con los
retrovirus, cuya capacidad de insercin en el
cromosoma celular ha sido vista en los lti-
mos aos como una gran ventaja para este
tipo de terapias.
Inicialmente se deseaba que el objetivo de
insercin del gen teraputico en el cromoso-
ma celular fuese el lugar preciso de su ver-
sin defectuosa. Esto es muy difcil de
controlar y ahora sabemos que no es nece-
sario, y que el gen teraputico se puede inte-
Virus asociados Liposomas DNA desnudo
a los adenovirus
117
grar y producir la protena o ejercer su
funcin curativa desde otras localizacio-
nes, ya sean dentro del cromosoma o
de forma extracromosomal, como es el
caso de los episomas o minicromoso-
mas autnomos.
Los principales tipos de vectores son:
Los Retrovirus, los Adenovirus, los
virus asociados a los adenovirus, los
liposomas y el DNA desnudo (o naked
DNA).
4.1 RETROVIRUS
Los Retrovirus introducen sus genes de
forma permanente en el cromosoma de
las clulas que invaden. Una vez el
retrovirus se ha integrado en el cromo-
soma, sus genes se copian y se trans-
fieren a todas las clulas descendientes
de la clula invadida. Esta caracterstica
ha hecho de los retrovirus un candidato
de mucho inters cientfico y utilidad
para la introduccin de genes teraputi-
cos en clulas madre o stem cells. El
problema de este tipo de virus, como ya
se ha comentado, es que son altamente
promiscuos e inseguros, depositan sus
genes en muchos tipos celulares y son
intiles para la insercin de genes en
clulas que raramente se dividen, como
las neuronas o las clulas del msculo
esqueltico. Adems, la integracin del
cromosoma viral se produce en lugares
cromosmicos impredecibles, aumen-
tando el riesgo de que la propia integra-
cin altere lugares crticos donde
residan genes de control de la divisin
celular, reparacin del DNA o programa-
cin de la muerte celular, pudiendo ser
potencialmente oncognicos.
La falta de especificidad de diana de los
retrovirus se ha estudiado con retrovirus
quimricos derivados de virus humanos
y virus de otras especies animales. Por
ejemplo, la especificidad de infeccin
reside en las protenas de la cubierta del
virus, y stas son sustituibles en el cro-
mosoma del virus. As, se ha consegui-
do sustituir una protena de la cubierta
del virus de la leucemia del ratn (MLV)
por la del virus de la estomatitis vesicu-
lar humana (HVSV) y cambiar la especi-
ficidad del MLV por clulas humanas. En
la actualidad se estn probando vecto-
res basados en estas quimeras vricas,
sobre la base de que le MLV no produce
enfermedades conocidas en el hombre
y que los niveles de fabricacin de pro-
tena a partir de un gen teraputico
insertado en su genoma pueden ser
regulables y apropiados para su uso en
terapias. Tambin se ha estudiado el
virus de la inmunodeficiencia humana
VIH, retrovirus causante del SIDA, como
un posible vector de transferencia gni-
ca en clulas que no se dividen, como
por ejemplo en el cerebro, pero el peli-
gro de que existan residuos patognicos
del VIH u otros retroviruses est siendo
evaluado con suma cautela por la comu-
nidad cientfica. El potencial infeccioso
de estos virus por mutagnesis, recom-
binacin y replicacin dentro del orga-
118
nismo debe ser cuidadosamente evaluado
antes de llevarlo a la prctica como vector de
terapia gnica.
4.2 ADENOVIRUS
El adenovirus humano presenta un modelo
de vector de transferencia de notable seguri-
dad, con un riesgo de enfermedad asociada
a la terapia de, a lo sumo, un resfriado. Estos
virus infectan clulas humanas con mucha
facilidad, y su potencial para su uso como
vectores de genes es muy alto debido a ello.
Adems el adenovirus puede infectar clulas
independientemente de si estn en divisin o
no y los niveles in vivo de fabricacin de pro-
tena a partir de un gen exgeno son muy
elevados. Los adenovirus raramente se inte-
gran en el cromosoma de las clulas que
invaden, aunque s introducen sus genes en
el ncleo de sta. Esto quiere decir que el
gen teraputico acaba desapareciendo y con
l su funcin teraputica. Por otro lado, esta
aparente desventaja puede ser utilizada para
tratamientos que requieran transitoriedad, y
repercute directamente en la seguridad del
tratamiento. ste puede ser repetido con cier-
ta periodicidad convirtiendo a la enfermedad
en una condicin crnica sintomtica, y aun-
que se escape de lo que es estrictamente
curativo, s puede ser una buena y segura
solucin para muchas enfermedades.
La mayor desventaja del uso de adenovirus
en terapia gnica es que poseen una baja
especificidad celular, lo que complica la infec-
cin selectiva de clulas en procedimientos
in vivo, y la respuesta inmunolgica que sus- celulares e inducir respuestas inmunolgicas.
citan puede llegar a ser lo suficientemente
importante como para provocar la muerte de
las clulas infectadas por el vector. Estos son
dos de los campos en los que se est traba-
jando para evitar estos problemas: la necesi-
dad de derivar nuevos vectores basados en
adenovirus de donde se hayan desechado o
alterado los genes que provocan la respues-
ta inmunolgica.
4.3 VIRUS ASOCIADOS A LOS ADENOVI-
RUS
Los virus asociados al adenovirus no produ-
cen enfermedades conocidas en el humano y
no pueden replicarse en ausencia de un virus
coinfectante, por ejemplo un adenovirus. Son
virus pequeos y con poca capacidad de
albergar grandes genes teraputicos en su
interior, no obstante, pueden integrar sus
genomas en el cromosoma de la clula hus-
ped y no inducen una respuesta inmunitaria.
Tambin poseen la capacidad de infectar
neuronas, ya que su pequeo tamao le per-
mite cruzar la barrera hematoenceflica.
Otros virus como el herpesvirus, el alfavirus o
el poxvirus son candidatos a vectores de
transferencia. Por ejemplo, el virus herpes
simple ha demostrado ser til en el transpor-
te de genes hasta el interior de las neuronas,
y aunque no integre su ADN en el cromoso-
ma de la clula husped, s puede hacerlo
permanecer en forma de episoma en la neu-
rona durante toda la vida de la clula. Como
los adenovirus, los herpesvirus que no han
sido modificados pueden ocasionar lesiones
119
Si bien estos virus son en general muy
prometedores para proporcionar un
vehculo de transferencia para genes
exgenos no se puede desestimar su
capacidad de cambiar a formas nuevas
que induzcan enfermedades. La inge-
niera gentica dedicada a la derivacin
de vectores para terapia gnica a partir
de estos virus debe hacerlo con suma
precaucin para evitar este tipo de cam-
bios genticos a priori imprevisibles.
Para evitar este tipo de problemas, se
han empezado a desarrollar vectores de
gene delivery no derivados de virus.
Estos son los liposomas y el ADN des-
nudo.
4.4 LIPOSOMAS
Para evitar los problemas inherentes a
la toxicidad potencial de virus humanos
se han diseado mltiples agentes sin-
tticos que empaquetan el ADN de
forma que ste pueda ser introducido en
la clula a la vez que lo protegen de su
degradacin tanto fuera como en el inte-
rior de la clula. Los liposomas son per-
las de lpidos que contienen un ADN
plasmdico en el que se encuentra el
gen teraputico con todas las seales
de secuencia necesarias para su expre-
sin en el destino celular de eleccin. La
transferencia a la clula se realiza por
medio de la fusin entre los lpidos del
liposoma y los de la membrana celular.
El mayor problema de esta estrategia es
la especificidad de las clulas diana en
terapias in vivo y la baja eficacia de la
transferencia.
La falta de especificidad est siendo
corregida por la incorporacin de epto-
pos o pequeos polipptidos en el
revestimiento de estas perlas lipdicas,
para fusionarlas slo en las clulas
diana que presenten molculas recepto-
ras especficas para estos polipptidos.
4.5 ADN DESNUDO
Esta estrategia supone la inyeccin
directa de ADN sin ningn revestimiento
lipdico o proteico en el interior de la
clula. La especificidad en protocolos in
vivo sigue resultando un problema aun-
que esta variante teraputica ha sido
utilizada con cierto xito en la inmuniza-
cin contra enfermedades o contra cier-
tos tipos de cncer. El ADN desnudo
posee la cantidad mnima de ADN para
evitar su degradacin y prdida durante
la divisin celular, quedando protegido
en el interior de la clula por elementos
que permiten su replicacin en cada
divisin celular como si fuese un mini-
cromosoma artificial.
5. INGENIERIA GENTICA
EN TERAPIA GNICA
5.1 DISEO GENERAL
Para poder remplazar la funcin de un
gen, o sea, volver a fabricar la protena
120
que ste codifica en su contexto celular ade-
cuado, normalmente se utiliza una copia en
ADN del mARN (llamada cADN) de esta pro-
tena clonado en el contexto de un vector de
expresin. Este es un minicromosoma cir-
cular cuyas caractersticas ms importantes
son que es capaz de reconducir la fabrica-
cin de la protena que nos interesa dentro
de un contexto celular correcto y que se
puede cultivar fcilmente en el laboratorio
para producir cantidades suficientes para su
utilizacin en ensayos o terapias especficas.
Los vectores de expresin por lo general
incluyen material gentico procedente de
plsmidos (molculas de ADN extracromoso-
males de ciertas bacterias) y material genti-
co procedente de virus eucariotas como el
virus vaccinia, el citomegalovirus, o ms
recientemente algn retrovirus. El minigen de
inters se posiciona tras un promotor activo
en la clula diana y a partir de la cual se
comienza la transcripcin a RNA y posterior-
mente a protena. Los promotores funcionan
(empiezan a transcribir) por la accin de los
factores de transcripcin propios de la clula
sin los cuales el minigen no podra expresar-
se. As podemos hablar de la utilizacin casi
secuestrada de los mecanismos naturales de
una clula para producir la protena deseada,
algo que se debe tener en cuenta para dise-
ar vectores de expresin que fabriquen la
protena codificada por el minigen en el tipo
celular diana, y no en otros tejidos celulares
donde la expresin de la misma protena
pudiese causar problemas. Para ello es
importante delimitar la especificidad tisular de
la regin promotora que se incluye en el vec-
tor de expresin, es decir, comprobar que
responda a los factores de transcripcin
especficos del tejido diana en el cual se
debe expresar la protena.
La medicina clsica ha abordado las enfer-
medades hereditarias tratando las conse-
cuencias biolgicas de una mutacin; el
objetivo de la terapia gnica es corregir esa
mutacin y prevenir as sus consecuencias
biolgicas. La mutacin de un gen puede
tener varios desenlaces:
1) la protena deja de fabricarse,
2) la protena se fabrica pero su funcin
es nula o escasa,
3) la protena se fabrica pero su funcin
es excesiva.
Cualquiera de estas alteraciones puede
resultar en un mal funcionamiento de una
clula y consecuentemente del tejido que uti-
lizan el producto gnico normal, causando
enfermedad. El mtodo de transferencia del
gen teraputico depender de los objetivos
teraputicos.
El enfoque teraputico de los casos 1) y 2)
citados, cuando la protena en un tejido espe-
cfico deja de fabricarse, o se fabrica pero su
funcin es deficiente, comparten en cierto
modo el diseo bsico de reinsercin de un
gen para el aporte continuo de su protena en
un tejido especfico, o correccin de la defi-
ciencia de la protena correspondiente. Esta
es la estrategia preferida para la terapia gni-
ca de enfermedades hereditarias monogni-
cas del tipo de la hemofilia, fenilcetonuria o la
deficiencia de ADA (adenosin-desaminasa),
121
todas ella provocadas por la falta de una
protena debida a la mutacin heredada
de su gen correspondiente.
En el caso 3), cuando la funcin de la
protena es excesiva, el enfoque tera-
putico cambia, y el inters se centra en
el silenciamiento de una protena fabri-
cada desde un gen endgeno de la clu-
la. En este caso la estrategia se dirigir
a evitar la produccin de una protena
celular, o a provocar la muerte celular
especfica de la clula que contenga el
gen mutado. Esta categora se puede
ilustrar con las terapias gnicas experi-
mentales para el tratamiento de enfer-
medades polignicas, no hereditarias,
como algunos tipos de cncer o enfer-
medades infecciosas como el SIDA.
5.2 TERAPIA GNICA PARA LA
CORRECCIN DE LA DEFICIENCIA
EN UNA PROTENA
Situacin fisiolgica normal
Figura 6. Correccin de dficit de protena.
En el tipo de enfermedades causadas
por la herencia de un nico defecto
gentico, las conocidas como enferme-
dades monognicas, se necesitar la
introduccin de un gen teraputico nor-
mal que provea al tejido afectado de un
aporte continuo del producto de este
gen. Para ello, los vectores ms indica-
dos son los que integran su DNA, que
incluye el promotor y el gen teraputico,
en el cromosoma de la clula. Estos
vectores son los derivados de retrovirus
o de virus asociados a adenovirus. No
obstante se han realizado ensayos con
vectores cuya aportacin del producto
gnico en la clula afectada es transito-
ria, y basta con repetir la administracin
del gen teraputico de forma regular
para obtener un efecto paliativo a largo
plazo.
La inmunodeficiencia severa combinada
(SCID) se debe a la falta de la enzima
Situacin patolgica Correccin del defecto por
Defecto de una protena introduccin de un gen teraputico
122
adenosina-desaminasa por la mutacin en su cardiaco y esqueltico de ratones knock-out,
gen. Esta condicin afecta la funcin de los a los que se les haba mutado previamente
linfocitos B y T provocando un descenso en su gen endgeno de la distrofina. Estos estu-
la produccin de anticuerpos y una deficien- dios en animales se realizaron mediante la
cia inmunolgica. La SCID puede debutar a inyeccin intravenosa de adenovirus recom-
partir de los dos primeros aos de vida, con- binantes que contenan una versin corregi-
dicin que se conoce como nios burbuja da del gen de la distrofina, sugiriendo que
incapaces de desarrollar una respuesta este tipo de protocolo puede llegar a ser apli-
inmunitaria adecuada. Los ensayos de tera- cable en humanos.
pia gnica con ADA comenzaron en 1993 y
han resultado tener bastante xito. La estra- 5.3 TERAPIA GNICA PARA LA CORREC-
tegia incluye la insercin ex vivo del gen ADA CIN DEL EXCESO DE FUNCIN DE UNA
en mdula sea y la reimplantacin de la PROTENA
mdula sea en estos pacientes. El trata-
miento de trastornos hematolgicos es con- La mayora de las patologas que nos afectan
ceptualmente ms fcil ya que el gen estn debidas a la accin de ms de un gen,
teraputico se puede insertar en linfocitos o empezando por las enfermedades infeccio-
mdula sea de forma relativamente sencilla, sas y acabando por las enfermedades neo-
y el tejido diana se puede cultivar y selec- plsicas. En particular estas ltimas, el
cionar en el laboratorio antes de su reimplan- cncer, es un modelo de enfermedad polig-
tacin. La insercin del gen del Factor VIII en nica de gran inters y que est siendo
clulas sanguneas de pacientes con hemofi- ampliamente investigado desde el punto de
lia tambin se ha llevado a cabo con cierto vista molecular desde hace ms de una
xito por la misma razn de facilidad de dcada. El cncer es consecuencia de daos
manipulacin del rgano diana. Esto no es genticos acumulados desde el nacimiento
as en el caso de otros tejidos, que no pue- que provoca el crecimiento descontrolado de
den tratarse ex vivo, y por ello el gene deli- una clula. Este crecimiento o divisin incon-
very supone uno de los mayores obstculos trolada puede ser debida al fallo de tres
para la terapia gnica. mecanismos bsicos. Un fallo en la divisin
celular, un fallo en la regulacin de la muerte
Se han realizado varios ensayos para la rein- celular programada o apoptosis, y un fallo en
sercin del gen de la distrofina en clulas los sistemas propios de la reparacin de erro-
musculares. La ausencia o el mal funciona- res o mutaciones de la clula.
miento de la distrofina provoca la distrofia
muscular progresiva pseudohipertrfica de El primer caso lleva a una clula a perder el
los tipos Duchenne y Becker. En este caso, control de su divisin, regulada por un cente-
se ha demostrado que el gen teraputico de nar de genes y da lugar a un foco tumoral en
la distrofina se puede insertar en el msculo cualquiera de los tejidos donde se produjo la
123
 ADN celular

PROMOTOR agtcagtgatacgataacgetcattccctgcgccaccgtttgtactcgtagcacgtgacgttccgcctatt

cacgtgatacgataacgctcattccctgcgccacgtttgtactcgtagcacg
...........................................................
atgctattgcgagtaagggacgcggtgcaaacatgag NO PROTENA

PROMOTOR atgctattgcgagtaagggacgcggtgcaaacatgag

VECTOR DE EXPRESIN
EN TERAPIA ANTISENTIDO

Bloqueo de la sntesis de protena Figura 8. Terapia antisentido

Situacin fisiolgica normal
Exceso de funcin de una protena
Figura 7. Correccin del exceso de funcin de una protena
primera mutacin y a partir de la cual se
genera la neoplasia. En el segundo
caso, lo que falla es la muerte de la clu-
la. Toda clula tiene un programa de
vida, y es tan malo dividirse en exceso
como no morirse. El resultado es la pro-
duccin de una estirpe celular inmortal.
La muerte celular programada, conocida
como apoptosis est tambin controlada
por un centenar de genes; un fallo en
uno de ellos puede dar lugar a la forma-
cin de un tumor.
Por ltimo, cualquier mutacin que afec-
te a los sistemas de reparacin del
ADN, har que se incorporen ms erro-
res en el cromosoma de la clula, y a la
larga afectar a las vas de transforma-
Situacin patolgica Correccin del defecto por
introduccin de un gen teraputico
(terapia gnica antisentido)
cin neoplsica citadas anteriormente.
El fallo en los mecanismos de repara-
cin del ADN genera unas clulas con
alta capacidad de mutacin que con el
tiempo repercute en la distorsin del
control de la divisin celular y de la
apoptosis.
En el caso de la mutacin que afecta la
divisin celular, se puede poner por
ejemplo la mutacin en tres posiciones
concretas de la molcula ras. El ras es
un transmisor de seal que dice al
ncleo celular cuando debe comenzar la
divisin. La mutacin del gen ras produ-
ce una seal errnea que indica al
ncleo celular que se divida, indepen-
dientemente de la necesidad de la clu-
la de dividirse. Es como si un interruptor se
quedara atascado en la posicin de encendi-
do y siempre enviara la seal de divisin al
ncleo (ver esquema en la figura 7). En estos
casos, la terapia gnica consiste en interrum-
pir esa seal, y para ello, una diana de actua-
cin clara es la de evitar que el mensaje del
gen mutado llegue a traducirse a protena.
Para ello, el gen teraputico ser una copia
complementaria del mensaje mutado que
produce el gen endgeno de la clula, y que
hibridar con ste para neutralizarlo, o des-
naturalizarlo si se utilizan ribozimas, lo que
se conoce como estrategia antisentido (anti-
sense). Desgraciadamente, estos ensayos
de terapia gnica slo son efectivos con clu-
las en cultivo. En terapias in vivo, parece ms
econmico hacer llegar un gen letal a unas
clulas especficas, en este caso un grupo de
clulas neoplsicas, para solucionar el pro-
blema. Se estn actualmente evaluando
varias propuestas de terapias gnicas en las
que la clula cancerosa produzca sustancias
txicas para ella misma, un aumento de la
respuesta inmunolgica, o inhiban el suminis-
tro de sangre a los tumores (ver Carreras y
cols. Vol. 1 de esta publicacin).
La fabricacin de anticuerpos intracelulares
que bloquean la protena anmala o prote-
nas antagnicas que inhiban especficamen-
te la interaccin de una protena mutada son
tambin estrategias interesantes para la inhi-
bicin de un exceso de funcin de una prote-
na endgena tal y como se ilustra en la
figura 9.
Los obstculos que supone la terapia gnica
en estos casos son los propios de la regula-
cin precisa de la expresin en la clula de
un gen forneo. El gen endgeno tiene un
control muy preciso de su expresin. Las
clulas deben producir la protena en canti-
dad justa en el momento adecuado, lo cual

124 125

Situacin fisiolgica normal
expresin/funcin de una protena
Figura 9. Terapia inhibicin especfica de unin ligando receptor
no es siempre fcil. Bien los genes no
llegan en los pacientes a un numero
suficiente de clulas adecuadas, o fun-
cionan mal, y a veces se opta por la acti-
vidad gnica transitoria, la estimulacin
de sistema inmune contra clulas can-
cerosas o agentes infecciosos. Para
ello, los vehculos no integrativos del
tipo adenovirus, liposomas o ADN des-
nudo pueden ser de gran utilidad.
6. CONCLUSIN
La terapia gnica debe considerar cada
estrategia y adaptarla al tipo celular que
debe ser modificado. No existe una
estrategia universal para todos los tipos
celulares y todas las condiciones. Es
Bloqueo de la respuesta biolgica
por sntesis de antagonista libre,
por ejemplo Anticuerpo especfico
Situacin patolgica Correccin del exceso por
Exceso de funcin de introduccin de un gen teraputico
(terapia gnica inhibidora de unin
especfica)
muy importante regular la actividad pre-
cisa del gen en el contexto tisular y
momento necesario. En el caso de pro-
ducir molculas nuevas desde un vector
de expresin, ya sean stas las prote-
nas teraputicas o cualquier otra fabri-
cada a partir del mismo vector, es
importante evitar las defensas celulares
de inactivacion de protenas extraas y
finalmente, cuando ya se entra en proto-
colos de terapia gnica de condiciones
que afectan a la especie humana, man-
tener siempre y estrictamente el rigor y
protocolo de los ensayos clnicos.
126
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dysfunction: status and prospects.
Mol Urol 2001; 5(2).67-70.
127
CUESTIONARIO: Slo una respuesta es vlida
PREGUNTAS:
1- De todas estas caractersticas, cual es la
ms importante que debe tener un prospecto?
a) Que sea muy extenso.
b) Que sea muy complejo.
c) Que sea legible.
d) Que tenga preguntas y respuestas.
e) Que tenga un carcter muy cientfico.
2- Dentro de la estructura de un prospecto,
cual es el epgrafe que no va dirigido al
paciente?
a) El apartado de reacciones adversas.
b) Ninguno.
c) El apartado de posologia.
d) El apartado de instrucciones para
el profesional sanitario.
e) El apartado de conservacin.
3- El prospecto de una especialidad farmacutica:
a) Es slo obligatorio para especialidades muy
conocidas.
b) Acompaa siempre de forma obligatoria a
todas las especialidades.
c) El laboratorio es quien determina qu espe-
cialidades deben tener prospecto y cules no.
d) Es de tipo obligatorio slo para especialidades
que se dispensen en Oficinas de farmacia.
e) La Administracin determina qu especialida-
des tienen que llevar prospecto y cules no.
4- Desde cuando se incluye en Espaa un
prospecto en el embalaje de las especialida-
des farmacuticas?
a) 1982.
b) 1989.
c) 1990.
d) 1992.
e) Otra fecha.
5- Cada especialidad farmacutica debe estar
identificada obligatoriamente por un nmero
o nmeros. Qu tipo de registro exige que
en el embalaje exterior figuren dos nmeros
de identificacin?
a) El procedimiento Centralizado.
b) El procedimiento nacional en especialidades
con receta mdica.
c) El procedimiento nacional en especialidades
publicitarias.
d) El procedimiento nacional en especialidades
genricas.
e) El procedimiento nacional en los envases clnicos.
6- El embalaje exterior presente actualmente
en las especialidadesfarmacuticas en
Espaa, sigue la normativa comunitaria?,
en qu casos?
a) En todos.
b) En los nuevos registros.
c) En las especialidades genricas.
d) En las especialidades de uso hospitalario.
e) En las especialidades publicitarias.
7- Qu siglas tienen que llevar las
especialidades farmacuticas publicitarias
en el embalaje exterior?:
a) EFG.
b) ECM.
c) EFP.
d) TLD.
e) Ninguna.
8- Los excipientes podrn expresarse
solamente con el nmero E ?:
a) En la Ficha tcnica
b) En el Prospecto.
c) En el embalaje exterior.
d) En el acondicionamiento primario.
e) La c) y d) son correctas.
9- La indicacin de uso tiene que aparecer
en el embalaje exterior de:
a) Todos los medicamentos.
b) Las especialidades de especial control
mdico.
c) Las especialidades genricas.
d) Las especialidades farmacuticas
publicitarias.
e) Ninguna.
10. Qu tipo de liberacin puede
considerarse idntica a la retardada?
a) Activada.
b) Repetida.
c) Prolongada.
d) Diferida.
e) Sostenida.
11. Para cules comprimdos matriciales se
utilizan principalmente los derivados de
celulosa?
a) Inertes.
b) De hinchamiento controlado.
c) De hinchamiento ilimitado.
d) Lipdicos.
e) Multicapa.
128
12. El recubrimiento de una forma farmacutica no
permite uno de los siguientes objetivos. Cul?
a) Enmascarar un olor o sabor desagradable.
b) Mejorar la estabilidad del frmaco.
c) Proteger el organismo de la accin del frmaco.
d) Disminuir la inestabilidad del frmaco.
e) Incrementar la eficacia del frmaco.
13. Cul es el mecanismo de liberacin de principio
activo en un comprimido Oros
a) Diferencia de pH.
b) Gradiente osmtico.
c) Solubilidad.
d) Concentracin.
e) Carga inica.
14. Cul de los siguientes factores de formulacin
no afecta a la liberacin de principio activo en un
sistema basado en resinas intercambiadoras de
iones?
a) Tamao de partcula.
b) pKa del grupo funcional implicado en el
intercambio inico.
c) Grado de reticulacin elevado.
d) Concentracin de principio activo.
e) Grado de reticulacin bajo.
15. Cul de las siguientes ventajas, de un sistema
transdrmico no es verdadera?
a) Reducir el efecto de primer paso.
b) Disminuir la toxicidad del frmaco.
c) Mejorar el cumplimiento de la posologa
d) Cmoda administracin.
e) Utilizable para frmacos de vida media muy corta.
16. Cul de las siguientes matrices no corresponde
a un parche transdrmico matricial?
a) Hidrogel.
b) Membrana polimrica impregnada.
c) Lipdica.
d) Adhesiva.
e) Elastomrica.
17. Cul de las siguientes caractersticas no corres-
ponde a un polmero utilizable en un implante
slido subcutneo?
a) Compatible con las mucosas.
b) Posible liberacin del frmaco acorde con las exi-
gencias farmacocinticas del mismo.
c) Incremento de la accin del frmaco.
d) Compatibilidad con los tejidos receptores.
e) Resistencia mecnica adecuada.
18. Cul de las siguientes especificaciones de
tamao es correcta?
a) Cpsulas de 1 a 5 mm.
b) Microcpsulas de 1 a 5 micrometros.
c) Microesferas de 10 micrometros a 10 mm.
d) Nanocpsulas de 10 a 1000 nanometros.
e) Grnulos de 10 a 20 mm.
19. Cul es la prioridad, segn los usuarios de
Internet sanitario, a la hora de consultar informa-
cin biomdica?
a) Sitios mdicos profesionales.
b) Bibliotecas mdicas.
c) Publicaciones peridicas.
d) Bases de datos de medicina como Medline.
e) Catlogos de bibliotecas.
20. Qu recursos de inters son los ms consulta-
dos?
a) Grupos de soporte.
b) Descripcin de enfermedades.
c) Ensayos clnicos.
d) Literatura biomdica.
e) Frums profesionales.
21. Qu requisito es imprescindible para llevar a
cabo un proceso de obtencin de informacin?
a) Conocer en profundidad las necesidades infor-
mativas y requisitos respecto a nuestra demanda.
b) Disponer de una gran cantidad de fuentes de
informacin de calidad.
c) Conocer las fuentes de informacin en profundi-
dad.
d) Tener una estrategia de interrogacin preparada
para hacer la bsqueda.
e) Disponer de acceso a Internet.
22. Qu es una estrategia de bsqueda?
a) El nmero de documentos recuperados tras
consultar una fuente de Informacin en Internet.
b) El nmero de pasos que se deben llevar a cabo
para obtener un resultado ptimo en una sesin
de bsqueda.
c) Conjunto de interrogaciones que se Introducen en
una base de datos para obtener un resultado
relevante.
d) Conjunto de acciones encaminadas a concebir la
obtencin de un conjunto de informacin de cali-
dad de acuerdo a unos requerimientos especfi-
cos.
e) Conjunto de pasos que deben seguirse en la con-
sulta de una base de datos.
23. Qu es una base de datos?
a) Recurso de Internet que tienen como misin agru-
par en un solo sitio todos lo servicios y recursos
interesantes de cara a un colectivo de usuarios.
129
b) Conjunto de informacin organizada en
registros que definen una realidad con
atributos y valores.
c) Servicio de Informacin o parametrizable
por el usuario que permite la bsqueda
de contenidos.
d) Conjunto de reglas que tiene como objetivo
hacer ms respetuoso el intercambio de
informacin por Internet.
e) Conjunto de informacin ligeramente estruc-
turada que permite el acceso a documentos
de una temtica concreta.
24. Si se quisiera evaluar la calidad en la pro-
visin de servicios mdicos y atencin al
paciente, qu instrumento de evaluacin
se utilizara?
a) Hon Code.
b) Mitretek.
c) Discern.
d) Sello Activo.
e) Ninguno de los anteriores.
25. La relacin correcta entre DNA, gen y cro-
mosoma es:
a) Los cromosomas de la clula residen en los
genes formados por DNA.
b) Los genes de la clula residen en el DNA
formado por cromosomas.
c) El DNA de la clula reside en los genes
formados por cromosomas.
d) Los genes de la clula residen en los
cromosomas formados por DNA.
e) El DNA de la clula reside en los
cromosomas formados por genes.
26. La diferencia entre la terapia gnica in vivo
y ex vivo es:
a) La terapia gnica in vivo contempla la mani-
pulacin gentica de clulas vivas y la tera-
pia gnica ex vivo lo hace en clulas
apoptticas.
b) La terapia gnica in vivo contempla la mani-
pulacin gentica de clulas en divisin y la
terapia gnica ex vivo lo hace en clulas
quiescentes.
c) La terapia gnica in vivo contempla la mani-
pulacin gentica de clulas dentro del
organismo y la terapia gnica ex vivo lo
hace en clulas aisladas del organismo.
d) La terapia gnica in vivo contempla la mani-
pulacin gentica de organismos y la tera-
pia gnica ex vivo lo hace slo en clulas.
e) La terapia gnica in vivo contempla la mani-
pulacin gentica de clulas somticas y la
terapia gnica ex vivo lo hace slo en clu-
las germinales
27. Un gen consste en una regin promotora y
un nmero variable de exones e intrones.
La funcin del promotor es:
a) Controlar que el gen se exprese slo en los
tejidos donde sea necesaria la protena
codificada por el gen.
b) Limitar el inicio de la secuencia de un gen.
c) Controlar que el gen se exprese slo en el
momento preciso cuando sea necesaria la
protena codificada por el gen.
d) Regular la frecuencia de posibles mutacio-
nes en un mismo gen.
e) Controlar que el gen se exprese slo en el
momento preciso y slo en los tejidos
donde sea necesaria la protena codificada
por el gen.
28. Un gen consiste en una regin promotora y
un nmero variable de exones e intrones.
Cuando el gen se transcribe a mRNA
sucede que:
a) Las regiones codificantes (exones) se unen
entre s, en el orden establecido en el gen,
para generar el mRNA y traducirlo por
accin de los ribosomas en protena.
b) Las regiones no codificantes (intrones) se
unen entre s, en el orden establecido en el
gen, para generar el mRNA y traducirlo por
accin de los ribosomas en protena.
c) Las regiones codificantes (exones) se unen
entre s, aleatoriamente, para generar el
mRNA y traducirlo por accin de los riboso-
mas en protena.
d) Las regiones no codificantes (intrones) se
unen entre s, aleatoriamente, para generar
el mRNA y traducirlo por accin de los ribo-
somas en protena.
e) Las regiones codificantes (exones) se unen
con las regiones no codificantes (intrones)
para generar el mRNA y traducirlo por
accin de los ribosomas en protena.
29. Una mutacin en la regin codificante
(exn) de un gen puede tener los siguien-
tes efectos:
a) El gen desaparece.
b) La proteina se sintetiza pero su funcin es
nula, escasa, normal o excesiva.
c) El mRNA deja de transcribirse.
d) El mRNA se transcribe otra vez en DNA.
e) La protena siempre deja de sintetizarse.
130
30. Una mutacin en la regin promotora de un gen
puede tener los siguientes efectos:
a) Se altera la disyuncin de los cromosomas duran-
te la divisin celular.
b) Se altera la regulacin temporal y tisular de la
expresin del gen.
c) Se transcriben todos los genes de la clula a la vez.
d) Se inhibe la transcripcin de todos los genes de
la clula.
e) Se sintetiza la protena en ausencia del mRNA.
31. Para generar un vector de transferencia con utili-
dad en terapia gnica, ste deber incluir los
siguientes elementos bsicos de secuencia.
a) Regin promotora, gen teraputico, secuencias de
retrovirus infecciosos.
b) Regin promotora, gen teraputico, secuencias de
adenovirus y virus derivados de adenovirus.
c) Regin promotora, gen teraputico, secuencias
derivadas de plsmidos.
d) Regin promotora, gen teraputico, partculas
liposomales.
e) Regin promotora, gen teraputico, secuencias
reguladoras de la replicacin y seleccin del
vector en el laboratorio.
32. Las enfermedades cuyo tratamiento es aborda-
ble con estrategias de terapia gnica incluyen:
a) Slo enfermedades monognicas de carcter
hereditario.
b) Slo enfermedades cuya causa reside en un defec-
to gentico descrito o en las que se puede activar
la muerte selectiva de las clulas afectadas.
c) Slo enfermedades cuya causa gentica es con-
Hoja de respuestas del Mdulo 3
Nombre y apellidos:
Domicilio completo:
C.P.: Poblacin:
Provincia:
Puntuacin obtenida
Puntuacin general
respecto al grupo
NOTA MUY IMPORTANTE: No sern tenidas en cuenta aquellas hojas respuesta que no estn cumplimentadas
de forma legible (letra de imprenta o mecanografiada) y con todos los datos solicitados.
firmable en sujetos portadores asintomticos
d) Slo enfermedades polignicas causadas por virus.
e) Slo enfermedades no tratables con terapias con-
vencionales.
33. La terapia gnica antisentido consiste en:
a) Cambiar el sentido de la transcripcin de un gen.
b) Bloquear la transcripcin de un gen mutado.
c) Prevenir la interaccin especfica entre dos prote-
nas celulares.
d) Insertar el vector de transferencia en el cromoso-
ma celular, y activar constitutivamente la expre-
sin del gen teraputico.
e) Dirigir la sntesis de RNA complementario a un
mRNA celular mutado para impedir su traduccin
a protena.
34. Para lograr la expresin de un gen teraputico
en el tejido diana se debern considerar muy cuida-
dosamente los siguiente aspectos.
a) Que el vector pueda acceder e introducirse en las
clulas diana y que el promotor del gen teraputi-
co sea reconocible por los factores de transcrip-
cin especficos de esas clulas
b) Que el vector se cultive con facilidad en lneas
celulares en el laboratorio y los costes de su
produccin sean viables.
c) Que el vector pueda acceder e introducirse en las
clulas diana y que el gen teraputico se pueda
insertar en el cromosoma y sustituir al gen
mutado.
d) Que el vector no sea demasiado grande.
e) Que el vector se pueda replicar en el interior de la
clula.
N D.N.I.:
Telfono/Fax contacto
131
 35. Los problemas en el diseo de estrategias
en terapia gnica incluyen:
a) La accesibilidad del tejido u rgano defec-
tuoso en el paciente.
b) Especificidad de infeccin de las clulas
dianas.
c) Obtencin de los niveles deseados del pro-
ducto del gen teraputico en el interior de la
clula.
d) Posibilidad de recombinacin del vector con
virus endgenos latentes en las clulas del
husped.
e) Todos los anteriores.
36. La mayora de la investigacin y ensayos
clnicos de terapia gnica se han centrado
en:
a) Gripe y otras enfermedades infecciosas de
importancia sociosanitaria.
b) Enfermedades raras intratables por otros
mtodos.
c) Enfermedades monognicas hereditarias y
polignicas como cncer y SIDA.
d) Reproduccin asistida.
e) Medicina preventiva.

Preguntas del Mdulo 3

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