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BELM
2014
LIGIANE RIBEIRO LOPES
BELM
2014
___________________________________________________________________________
70 f.: il
___________________________________________________________________________
LIGIANE RIBEIRO LOPES
BANCA EXAMINADORA
______________________________________
Prof. Dra. Dulcidia da Conceio Palheta
Universidade Federal Rural da Amaznia
______________________________________
Prof. Dra. Jamile Andra Rodrigues da Silva
Universidade Federal Rural da Amaznia
______________________________________
Prof. Dr. Paulo Srgio dos Santos Souto
Universidade Federal Rural da Amaznia
A Deus, por ser extremamente paciente e piedoso comigo...
Aos meus pais que foram companheiro em todas as horas...
AGRADECIMENTOS
A Deus, por sempre ter me dado muito mais do que ofereci e por est realizando mais
este sonho.
A minha me: Ligia Elena Ribeiro da Silva, minha fonte de inspirao e exemplo de
dedicao e amor. Ao Meu pai Pedro de Lima Lopes. minha famlia: Liliane, Liviane, Pedro
Jr., Nubia, meus amores: Nicolly, Nicollas e Kau. A minha orientadora, amiga Prof. Dra.
Dulcidia da Conceio Palheta, por todos os ensinamentos e conselhos, por acreditar e
confiar em mim.
Aos meus amigos, por estarem sempre ao meu lado nas horas boas e difceis, em
especial, a amiga Stephani Ferreira da Silva, que caminhou ao meu lado durante esses cinco
anos de universidade.
Aos estagirios e amigos do Laboratrio de Toxicologia Animal- TOXAN, pelo
companheirismo.
A Universidade Federal Rural da Amaznia por possibilitar a realizao deste trabalho.
Aos meus gatos Misy, In, Mel, Perla, Sury e Logan, que amo muito.
A todos os animais que contriburam para o meu aprendizado.
A todos que incentivaram, confiaram e apoiaram o desenvolvimento deste trabalho.
MUITO OBRIGADA!
Quando a ltima rvore for cortada, quando o ltimo rio for poludo, quando o ltimo peixe
for pescado, o homem vai descobrir que o dinheiro no se come.
Greenpeace
RESUMO
A Amaznia est sendo degradada por diversas atividades antrpicas que ocasionam danos
ambientais, sobre tudo, as de minerao, atravs da deposio e disperso de resduos
metlicos provenientes dessas atividades. No presente estudo, utilizaram-se peixes carnvoros
e no carnvoros de gua doce como bioindicadores, com o objetivo, de se avaliar a
bioacumulao de contaminantes ambientais, no caso, os metais alumnio e mercrio. Foram
coletados espcimes de Leporinus elongatus (Piau) provenientes do Rio Parauapebas da
cidade de Cana dos Carajs- Par e da rea de Preservao Ambiental (APA) do Igarap
Gelado e tanque criatrio no municpio de Parauapebas, e Serrasalmus spp (Piranha),
provenientes da referida rea de preservao, nos anos de 2011 e 2013. Os peixes foram
dissecados para posterior obteno de tecido muscular e processados no Laboratrio de
Anlises de Minerais (UFRA), para a determinao dos nveis de alumnio (Al), atravs da
tcnica de Espectrometria de Absoro Atmica (AAS). As anlises de mercrio (Hg) total
foram realizadas no equipamento DMA-80 (Direct Mercury Analyser). Em 2011 as mdias
das concentraes de alumnio e mercrio no tecido de L. elongatus dos tanques criatrios
(APA), os nveis foram respectivamente: Al: 0, 130 0,01 mg/kg e Hg: 0,0990, 034 mg/kg.
Nos peixes da mesma espcie do Rio Parauapebas e Igarap Gelado as concentraes de
alumnio mostram-se abaixo do Limite de deteco (<LD) do mtodo empregado. As mdias
das concentraes de Hg encontradas na musculatura de L. elengatus no Rio Parauapebas e
Igarap Gelado foram respectivamente: 0, 083 0, 002 mg/kg e 0,114 0,01. Para
Serrasalmus sp os nveis encontrados foram respectivamente: Al: (<LD); Hg: 0,827
0,002mg/kg. No ano de 2013 no se obteve anlise de alumnio e mercrio para L. elongatus
nos tanques criatrios da (APA) e no Igarap Gelado; no Rio Parauapebas a mdia obtida foi
de: Al: 9,007 0,002; Hg: 0,078 0,0088. As concentraes de alumnio e mercrio para
Serrasalmus sp, as mdias obtidas no Igarap Gelado foram respectivamente: Al: 19,37 0,01
e Hg: 0,09 0,002. Os resultados analticos para mercrio encontrados na espcie Serrasalmus
sp em 2011 encontrou-se acima do limite de risco sade pblica, que situa-se at de 0,5
mg/kg preconizado pela Organizao mundial de Sade. Os teores de alumnio mais elevados
foram encontrados em Serrasalmus sp do Igarap Gelado e L. elongatus do Rio Parauapebas
em 2013. O maior fatores de bioacumulao foram obtidos em L. elongatus, para Al (57, 350
mg/kg/L) em 2013 , e em Serrasalmus sp. para Hg ( 8.270 mg/kg/L) em 2011. As curvas de
bioacumulao obtidas mostraram uma forte correlao de concentrao em relao ao
tamanho dos peixes, e na anlise intra grupo uma forte correlao de concentrao entre os
espcimes.
The Amazon is being degraded by various human activities that cause environmental damage,
especially, mining, through deposition and dispersion of metal waste from such activities. In
the present study, we used non carnivorous carnivorous fish and fresh water as biomarkers for
the purpose of evaluating the bioaccumulation of environmental contaminants, in this case the
metals aluminum and mercury. We collected specimens of Leporinus elongatus (Piau) from
the Rio Parauapebas city of Canaan Carajs- of Par and the Environmental Protection Area
(APA) of Igarap Ice Cream and breeding tank in the municipality of Parauapebas and
Serrasalmus spp. (Piranha), from that preservation area in the years 2011 and 2013. The fish
were dissected to subsequently obtain muscle tissue and processed in Mineral Analysis
Laboratory (UFRA), for the determination of levels of aluminum (Al) by Spectrometry
Atomic Absorption (AAS). Mercury tests (Hg) Total were held in the DMA-80 equipment
(Direct Mercury Analyser). In 2011, the averages of aluminum and mercury concentrations in
tissue of L. elongatus tank farms (APA), the levels were: Al: 0.130 0.01 mg-kg and Hg:
0.099 0.034 mg-kg. In fish of the same species of Parauapebas River an Igarap Ice Frosty
the aluminum concentrations, are shown below the detection limit (<LD) of the method. The
mean Hg concentrations found in L. elongatus of muscle in Rio Parauapebas an Igarap
Cream were respectively: 0.083 0.002 mg-kg and 0.0114 0.01. To Serrasalmus spp. the
levels foend were: Al (<LD); Hg: 0.8270,002 mg-kg. The year 2013 was not obtained
aluminum and mercury analysis for L. elongatus, in farms tanks (APA) and Igarap Cream;
Rio Parauapebas the mean was : Al: 9.007 0.002; Hg; 0.078 0.0088. The aluminum and
mercury concentrations to Serrasalmus spp species in 2011 found above the risk limit to
public health, which is located up to 0.5 mg/kg recommended by the World Health
Organization. The higher aluminum levels were found in Serrasalmus spp. Igarap Ice an L.
elongatus Parauapebas River in 2013. The largest bioaccumulation factors were obtained in L.
elongatus, to Al (57, 350 mg/kg/L) in 2013 and Serrasalmus spp. For Hg (8.270 mg/kg/L) in
2011. The curves of Bioacumulation obtained showed a strong correlation of concentrations
of fish size, and analyzing intra group a strong correlation between the concentration
specimens.
1. INTRODUO ............................................................................................................................... 15
2. JUSTIFICATIVA............................................................................................................................ 16
3. OBJETIVOS ................................................................................................................................... 18
3.1. GERAL ......................................................................................................................................... 18
3.2. ESPECFICOS .............................................................................................................................. 18
4. REVISO DE LITERATURA ...................................................................................................... 18
4.1. CARACTERIZAO DA REA DE ESTUDO ......................................................................... 18
4.2. DESCRIO DOS ESPCIMES DA PESQUISA ...................................................................... 22
4.3. METAIS ........................................................................................................................................ 24
4.3.1. Metais em Sistemas Aquticos ................................................................................................ 24
4.3.2. Metais em Peixes....................................................................................................................... 26
4.4. BIOINDICADORES ..................................................................................................................... 26
4.5. ECOTOXICOLOGIA DE METAIS ...............................................................................................27
4.6. MERCRIO ...................................................................................................................................27
4.6.1. O Mercrio na Atmosfera ........................................................................................................... 28
4.6.2. A Cadeia Biolgica e a Acumulao Mercurial......................................................................... 28
4.6.3. Bioacumulao de Mercrio em Peixes .................................................................................. 29
4.7. ALUMNIO ................................................................................................................................... 30
4.7.1. Bioacumulao de Alumnio em Peixes .................................................................................. 30
4.8. BIOMAGNIFICAO, BIOACUMULAO E BIOCONCENTRAO ............................... 31
4. 9. FATOR DE BIOACUMULAO ............................................................................................... 33
5. MATERIAL E MTODOS ........................................................................................................... 35
5.1. MATERIAL BIOLGICO ............................................................................................................ 35
5.2. PROCESSAMENTO DAS AMOSTRAS ......................................................................................37
5.2.1. Descontaminao de Materiais.................................................................................................37
5.2.2. Procedimento amostral .............................................................................................................37
5.2.2.1. Anlise de Alumnio................................................................................................................37
5.2.2.1.1. Secagem e Macerao das Amostras .................................................................................37
5.2.2.1.2. Digesto das Amostras e Branco Analtico .......................................................................... 38
5. 3. PROCEDIMENTOS ANALTICOS ............................................................................................ 39
5.3.1. Equipamentos Utilizados ......................................................................................................... 39
5.3.2. Anlise de Mercrio Total........................................................................................................ 40
5.3.2.1. Funcionamento Interno do DMA-80 ................................................................................... 41
5.3.2.2. Captura de Tela do Sistema .................................................................................................. 41
5. 3. 2. 3. Aquecedores ........................................................................................................................ 42
5.3.2.4. Curvas de Calibrao............................................................................................................. 43
5.4. ANLISE ESTATSTICA ............................................................................................................ 43
6. RESULTADOS ............................................................................................................................... 44
7. DISCUSSO ................................................................................................................................... 51
7.1. BIOMETRIA................................................................................................................................. 51
7.2. GUA ........................................................................................................................................... 53
7.3. MERCRIO NOS PEIXES .......................................................................................................... 53
7.4. ALUMNIO NOS PEIXES ........................................................................................................... 55
7.5. FATOR DE BIOACUMULAO ................................................................................................ 56
7.6. CURVA DE BIOACUMULAO ............................................................................................... 58
7.7. TESTE T ........................................................................................................................................ 59
8. CONCLUSO ................................................................................................................................ 60
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .............................................................................................. 61
LISTA DE FIGURAS
Figura 7 Pontos de medida para a obteno dos parmetros das espcies analisadas
(SANTOS e HEUBEL,
2008)................................................................................................................................... 33
Figura 10 (A) Amostras de msculo em placas de Petri; (B) cadinhos com amostras
pulverizadas; (C) Pesagem de amostra, 0,2g; (D) Amostras no tubo identificadas.............. 36
1. INTRODUO
2. JUSTIFICATIVA
Nos estudos de CUI et al., (2011) e KEHRIG et al., (2009), os maiores teores de
metais so encontrados em peixes que esto no topo da cadeia trfica, como os peixes
carnvoros. Assim, por estar no pice da cadeia trfica, a mais importante via de exposio
dos seres humanos aos metais pesados a ingesto de peixes contaminados, visto que, reter
todo o percentual de contaminantes acumulados ao longo da cadeia pelos peixes (TAO et al.,
2012).
solo e rejeitos do extrativismo mineral, dessa forma contribuindo para a melhoria e sade da
populao, alm da preservao do meio ambiente.
3. OBJETIVOS
3.1. GERAL
3.2. ESPECFICOS
4. REVISO DE LITERATURA
4.3. METAIS
Por outro lado, os elementos no essenciais, como As, Cd, Cr, Hg, Mn, Ni e Pb,
geralmente no possuem uma funo biolgica conhecida para o metabolismo. Tanto os
metais essenciais quanto os no essenciais, so extremamente txicos para os organismos
aquticos quando ingeridos em altas concentraes. No caso dos peixes, a intoxicao por
estes elementos provoca uma srie de distrbios, tais como a baixa fertilidade, diminuio das
defesas imunolgicas, reduo da taxa de crescimento e patologias que podem levar morte
do indivduo (LIMA, 2013).
4.4. BIOINDICADORES
saudveis, mas tambm apresentar resistncia relativa ao contaminante que est exposto.
Outro aspecto que podem facilitar o desenvolvimento de um estudo a abundncia dessa
espcie no ambiente e a facilidade em adaptar-se aos ensaios laboratoriais (MELA, 2004).
4.6. MERCRIO
Uma vez liberado no ambiente aqutico, o mercrio passa por uma srie de
reaes qumicas. O mercrio elementar (Hgo) pode ser oxidado nos sedimentos do fundo dos
rios para a forma divalente (Hg2+). Bactrias aerbicas e anaerbicas so capazes de
biotransformar o mercrio inorgnico nos sedimentos e esturios para a forma metilada Hg
(CH3)+. A principal via de metilao da forma solvel Hg2+ envolve a transferncia de um
grupamento metil da vitamina B12 (metil-B12) para a forma inorgnica do mercrio sendo
que, a taxa de formao do metilmercrio amplamente determinada pelas concentraes do
Hg2+solvel e da metil-B12 (COSTA, 2011).
msculo dos peixes. Entretanto, sabe-se que a estratgia alimentar de uma determinada
espcie de peixe, pode interagir com o tamanho e a idade dentro de uma mesma espcie,
podendo constituir variveis relevantes e que determinam a acumulao de mercrio no
msculo dos peixes (VIEIRA et al., 2004).
4.7. ALUMNIO
alimentao. Isto ter implicaes nas vrias etapas da cadeia alimentar e dos diferentes tipos
de alimento consumido, como plnctons, crustceos e peixes de pequeno porte. Logo,
medida que aumenta o nvel trfico na cadeia alimentar maior ser a quantidade de metais
acumulados no peixe, uma vez que, alm dos compostos que seu organismo j absorveu, vai
ainda concentrar os que provm das futuras. No fim, os peixes predadores acumulam valores
de concentraes mais elevados que os encontrados nos indivduos que estes se alimentam
(LIMA, 2013).
Quando os peixes concentram metais em seu corpo de forma gradual atravs dos
nveis trficos, processo este denominado biomagnificao ou em alguns casos magnificao
trfica. Tal processo um fenmeno caracterizado pela transferncia dos contaminantes por
meio da cadeia trfica. Ou seja, a transferncia ocorre eficientemente dos metais acumulados
no primeiro nvel trfico (os produtores) para o nvel trfico superior imediato
(os consumidores), sendo que quanto mais longa for cadeia, maior ser a quantidade
concentrada pelo consumidor final (LIMA, 2013).
33
4. 9. FATOR DE BIOACUMULAO
FBA = Co/Cs
Onde: FBA
que tecnicamente, o BCF baseado em bioacumulao somente de gua, por isso s pode ser
medido em estudos de laboratrio onde os peixes esto em jejum ou alimentados com comida
limpa. Quando a medio feita com base em estudos de campo, o clculo feito da mesma
maneira, mas chamado o fator de bioacumulao (BAF) como o metal pode ser
bioacumulado de tanto a gua e a comida, ou seja ingerida presas e sedimento em equilbrio
com a gua. BCFs e BAFs foram originalmente derivados para a classificao do risco
associado a vrios produtos qumicos orgnicos.
5. MATERIAL E MTODOS
Figura 7- Pontos de medida para a obteno dos parmetros das espcies analisadas.
A- Comprimento Total; B- Comprimento Padro; C- Comprimento da Cabea; D- Dimetro
do olho.
Para fins diagnsticos, foram coletados todos os tecidos vitais, como fgado,
guelras, rins, visando as anlises histopatolgicas e bioqumicas; para a deteco de metais
pesados, os mesmos tecidos foram acondicionados e mantidos sob congelamento; todos os
indivduos foram fotografados.
O tecido escolhido para a anlise de alumnio foi o msculo. Este tecido foi
colocado em fraes e devidamente fragmentado em placa de Petri, identificados e colocados
em estufa 70C para desidratao em um tempo mnimo de 6 horas. Depois de decorrido o
tempo necessrio para a secagem das amostras, em seguida, foram macerados em cadinhos
com uso de pistilho colocados em tubos plsticos identificados e pesados em balana de
preciso digital, para a obteno de 0,2 g de cada amostra preparadas em triplicatas em tubo
digestor identificado.
38
Figura 10- (A) Amostras de msculo em placas de Petri; (B) cadinhos com amostras
pulverizadas; (C) Pesagem de amostra, 0,2g; (D) Amostras no tubo identificadas.
Fonte: Arquivo Pessoal
5. 3. PROCEDIMENTOS ANALTICOS
Figura 12- Aparelho Espectrmetro de Absoro Atmica (AAS), modelo Varian SPECTRA
AA 220.
Fonte: Arquivo pessoal
Figura 13- Analizador Direto de Mercrio (Direct Mercury Analyser)- Marca MILESTONE -
DMA-80.
Fonte: Arquivo pessoal.
41
Secagem forno/Decomposio
Voltagem das Lmpadas (V) Temperatura (OC)
Forno Catalisador
Temperatura (OC)
Amalgamador
Temperatura (oC) Absorbncia
Cuveta
Temperatura (oC)
5. 3. 2. 3. Aquecedores
6. RESULTADOS
Intervalo
A B
A
B
47
A B
A B
A B
A B
Tanque Fazenda
Castanheira Rio Parauapebas
Mdia 0,3482355 0,083767
Varincia 0,091185424 0,002125287
Observaes 2 4
Hiptese da diferena de mdia 0
Gl 1
Stat t 1,23143165
P(T<=t) uni-caudal 0,217104286
t crtico uni-caudal 6,313751514
P(T<=t) bi-caudal 0,434208572
t crtico bi-caudal 12,70620473
Tanque Fazenda
Castanheira Igarap Gelado
Mdia 0,3482355 0,114581
Varincia 0,091185424 1,02818E-06
Observaes 2 2
Hiptese da diferena de mdia 0
Gl 1
Stat t 1,094268727
P(T<=t) uni-caudal 0,235681672
t crtico uni-caudal 6,313751514
P(T<=t) bi-caudal 0,471363344
t crtico bi-caudal 12,70620473
7. DISCUSSO
7.1. BIOMETRIA
7.2. GUA
de Sade WHO, 1990) para consumo humano de peixe (0,5 mg/kg). LIGIANE. VC TEM
CERTEZA QUE mg/Kg...??/ esses valores no so para g/Kg????)
Brabo et al., (1999) verificou nveis de mercrio elevados nos peixes coletados, e
esto relacionados aos hbitos alimentares das espcies. A concentrao mdia de mercrio
nos peixes carnvoros foi de 0, 293 mg/g (DP = 0,104). Deste grupo, o barbado, o surubim e a
trara apresentaram concentraes mdias no intervalo de 0, 322 a 0, 419 mg Hg/g. Os dados
analticos indicaram que apenas um espcime de trara, com 0,546 mg Hg/g, ultrapassou o
valor de referncia (0,5 mg Hg/g com consumo semanal de 400 gramas) adotado como limite
mximo permitido pelo Ministrio da Sade, para ingesto de pescado. Nas amostras de
espcies no carnvoras a mdia encontrada foi de 0, 112 mg Hg/g (DP = 0, 036). AQUI A
MESMA COISA.....deve ser mg/Kg ou ento g/g que significa a mesma coisa...
FBA = CM/CA
Onde:
mercrio.
7.7. TESTE T
Segundo Scudino (2008), o teste t para duas amostras usado quando temos duas
condies e se precisa saber se as diferenas entre as mdias das amostras so grandes o
suficiente para que se possa concluir que as diferenas ocorrem somente devido influncia
da varivel independente. Ele avalia as diferenas significativas entre as mdias 1 2 das
duas condies. A hiptese nula H0 a alegao inicialmente assumida como verdadeira.
Hiptese alternativa H1 a afirmao contraditria a H0. A hiptese nula ser rejeitada em
favor da hiptese alternativa somente se a evidncia da amostra sugerir que H0 seja falsa. Se a
amostra no contradiz fortemente H0, continua-se a acreditar na verdade da hiptese nula. As
duas concluses possveis de uma anlise do teste de hipteses so, ento, rejeitar H0 ou no
rejeitar H0.
L.elongtus, do Tanque Fazenda Castanheira e Rio Parauapebas :0,43 > =0,05, Igarap
Gelado e Rio Parauapebas: 0,27 > =0,05, Tanque Fazenda Castanheira e Igarap Gelado:
0,47 > =0,05, apresentaram o valor de significncia maior de 0,05, ou seja, no existe
diferena entre os nveis de concentraes de Hg na musculatura dos L. elongatus dos
determinados lugares.
8. CONCLUSO
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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Cr e Al em tecidos de peixes provenientes do rio gelado/APA floresta de Carajs PA. Holos
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LIMA, L. M.; ROCHA, O.G.; BARROS, J.; GURBUZATIK,L.T.; SILVA, M.; RESENDE,C.;
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TAO, Y.; YUAN, Z.; XIAONA, H.; WEI, M. Distribution and bioaccumulation of heavy
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