METODO DE FILTRACION POR MEMBRANA

Para la deteccin de coliformes totales y coliformes fecales (E.coli) es utilizado

el mtodo de filtracin por membrana, el cual es un mtodo altamente
reproducible, puede usarse para analizar volmenes de muestra relativamente
grande y se obtienen resultados en menor tiempo que con el NMP. Sin embargo,
no puede aplicarse a cualquier tipo de muestra y tiene sus limitaciones tambin
se encuentra entre los mtodos standards.

Fundamento del mtodo filtracin por membrana:

La muestra de agua se hace pasar mediante vaco por un filtro de celulosa

de0.45 micras de tamao de poro, para que queden retenidas en l, las bacterias
de tipo coliformes y las mesfilas. El filtro es colocado en un medio de cultivo
especfico para lo que se desea determinar en la muestra (coliformes totales,
coliformes fecales y microorganismos mesfilos), incubando a 35 grados
centgrados ms o menos dos grados durante 18 a 20 horas

El nmero de coliformes totales presentes en el agua se determina

mediante la filtracin de volmenes especficos de la muestra a travs de
filtros de membrana. Por lo general, estn compuestos de steres de
celulosa, tpicamente con poros de 0,45 mm de dimetro que retienen los
coliformes totales y otras clases de bacterias presentes en la muestra. Despus
se incuban las membranas vueltas hacia arriba en un medio selectivo. En la
prctica, la tcnica de filtracin de membrana ofrece resultados comparables a
los que se obtienen con el mtodo de tubos mltiples.

Una de las ventajas del mtodo de filtracin a travs de membrana es la prontitud

con que pueden obtenerse los resultados y, en consecuencia, se pueden llevar
a cabo rpidamente acciones correctivas y operar en la planta de agua de nuevo
en forma normal. Esta tcnica puede aplicarse en el anlisis de casi todos los
tipos de agua, tambien se utiliza en el anlisis de leche y otros alimentos lquidos.

Caractersticas del filtro de membrana:

Se debe utilizar filtro de membrana con un dimetro de poro que permita una
completa retencin de las bacterias coliformes. Se debe tener en cuenta que
estos filtros estn libres de qumicos susceptibles a inhibir el crecimiento y
desarrollo bacteriano, que posean una velocidad de filtracin satisfactoria

Ventajas y desventajas del mtodo de filtracin por membrana:

El mtodo de filtracin por membrana es un mtodo gil y poco dispendioso. La

lectura de resultados se da en un mejor tiempo (24 horas) a comparacin del
mtodo NMP, adems se puede utilizar en pruebas de campo, empleando
accesorios adecuados, el anlisis se dificulta en muestras de aguas muy turbias
o con abundante carga bacteriana. Este inconveniente es posible remediarlo,
haciendo diluciones de la muestra o haciendo inculos muy pequeos de
acuerdo con el tipo de muestra a analizar

https://www.academia.edu/29948088/Filtracion_por_membrana

C. Aparatos y tcnicas de filtracin

El aparato de filtracin consiste de un disco incrustado (portafiltros) sostenido
por soporte de goma o caucho y que se ajusta a una base donde puede fijarse
un embudo graduado o una rampa mltiple de filtracin

El disco incrustado o perforado (portafiltros) sostiene el filtro de membrana.

El portafiltros se coloca encima de un soporte de filtracin bien sea nico o

colector mltiple (rampas de filtracin para varias muestras a la vez) conectado

a un sistema de vaco.
Volumen de agua analizada

El volumen de muestra a filtrar es generalmente de 100 ml, excepto para aguas

envasadas, en las que se recomienda analizar muestras de 250 ml. Sin embargo,
en aguas superficiales y en general en aguas naturales sin tratar, el nmero de
bacterias en 100 ml puede variar desde pocas decenas hasta cientos de millares.
La siguiente tabla proporciona unos datos que pueden servir de orientacin:

Tipos de agua Coliformes totales

Potable de consumo pblico 100 ml

Envasadas 250 ml

Manantiales 15; 60; 100 ml

Lagos, depsitos 4; 15; 60; 100 ml

Acometidas 0,08; 0,15; 0,5; 1,4 ml

De playas 0,08; 0,15; 0,5; 1,4 ml

De ros 0,003; 0,01; 0,02; 0,08 ml

Residuales cloradas 0,003; 0,01; 0,02; 0,08 ml

Residuales sin tratar 0,0001; 0,0003; 0,001; 0,003; 0,01 ml

Las muestras comprendidas entre 30 ml y 250 ml se filtran directamente

aadiendolas al embudo de filtracin.

Para muestras entre 1 y 30 ml, se aaden primero al embudo 20-30 ml de

solucin tamponada estril y, encima de ella, se vierte la muestraa a filtrar.
Para todas las muestras inferiores a 1 ml, es preciso realizar previamente
diluciones con solucin tamponada estril.
Toma de muestra

La tcnica de muestreo depende del lugar donde se realiza dicho muestreo, para
conocer los detalles sobre la toma de muestras de aguas para anlisisi
microbiolgicos haga clic sobre esta frase

Material y equipo

Membranas filtrantes de 0,45 m de tamao de poro

Soporte del filtro con embudo

Sistema de vacio

Pipetas estriles de 10 y 1 mL.

Estufa de cultivo

Asa de siembra

Pinzas estriles

G. Medio de cultivo selectivo para Coliformes Totales: Caldo Endo, MF

Se utiliza el Caldo Endo para el recuento de coliformes totales. Este es un medio

para el aislamiento selectivo de los coliformes totales pues lleva inhibidores para
el resto de microorganismos. El lauril sulfato y desoxicolato que forman parte de
la frmula del medio permite crecer a los coliformes lactosa positivo pero inhibe
el crecimiento del resto de bacterias acompaantes. Las colonias lactosa positivo
se colorean de rojo por la liberacin de fucsina del sulfato de fucsina. Las
colonias de E. coli y de los coliformes muestran generalmente un brillo metlico.

Se utiliza este medio para la identificacin y recuento de coliformes en agua,

leche y otros lquidos mediante filtracin sobre membrana y esta incluido en las
recomendaciones de la APHA "American Water Works Association and Water
Pollution Control Federation: Standard Methods for the Examination of Water and
Wastewater, 2004 ".
Medio slido selectivo, que se prepara en placas para filtracin de membrana.

Medio lquido selectivo, que se deposita en placas de cultivo que llevan una
almohadilla absorbente (aproximadamente 2 mL por placa)

El medio de cultivo debe prepararse segn instrucciones del fabricante en el envase, en material
de vidrio estril, sin necesidad de ser autoclavado. Disolver y fundir en horno microondas o en
bao Mara. Hervir 1minuto. El pH final del medio de cultivo debe ser 7,4 0.2. Dejar registro
en la ruta de anlisis 10.6 Puede almacenarse a 1- 4,4 C por un perodo mximo de 14 das, ya
sea en erlenmeyer, frasco Schott o repartido en las placas. 10.7 Dejar registro en la ruta de
anlisis de la preparacin de los medios de cultivo. Preparacin de las Placas de Petri 10.8 Previo
a la distribucin del medio de cultivo en las placas de Petri estriles, termostatizarlo a 45C.
Colocar aproximadamente 3 mL de medio por cada placa de 47 mm de dimetro, bajo
condiciones de esterilidad. 10.9 Dejar solidificar sobre la mesada de trabajo. 10.10 Almacenar
en heladera de material estril (1- 4,4C) hasta su utilizacin. 10.11 Las placas de Petri antes de
usarse deben rotularse en el fondo de las mismas con lpiz graso, indicando nmero de muestra
y dilucin efectuada. Preparacin de tubos para diluciones 10.12 Estos tubos se preparan en
caso de que sea necesario hacer diluciones de la muestra antes de filtrar. 10.13 Colocar 9 0.2
mL de agua peptonada en tubos de ensayo. Tapar con algodn o tapa de rosca. Colocar los tubos
en una gradilla o cesto y cubrir con papel aluminio o papel de embalaje. 10.14 Autoclavar por
15 minutos a 121C. 10.15 Conservar en heladera de material estril (1- 4.4C) hasta el momento
de su uso, como mximo 30 das. 11 ANALISIS DE LA MUESTRA 11.1 El volumen de muestra a ser
filtrado se determina de acuerdo a la densidad bacteriana esperada y el origen de la muestra.
En caso de ser necesario se preparan diluciones en cascada en los tubos de dilucin, adicionando
1mL de muestra o de la dilucin previa, a los 9 mL de agua peptonada. Se recomienda filtrar 2
volmenes diferentes de muestra en mltiplo de 10. Si no se dispone de valores histricos de la
muestra es conveniente filtrar tres volmenes diferentes. 11.2 Conectar el equipo de filtracin
con embudo estril. Colocar un filtro de nitrocelulosa estril con la superficie cuadriculada hacia
arriba sobre el portafiltros poroso del embudo utilizando pinzas humedecidas en alcohol,
flambeadas y a temperatura ambiente. 5053UY Coliformes Termotolerantes / Versin 5 /
Septiembre 2009 Pg. 7 / 10 5053UY Coliformes Termotolerantes SECCION 5 11.3 Filtrar un
volumen aproximado a 10 mL de agua peptonada estril para humedecer el filtro. 11.4
Homogeneizar la muestra agitndola o usando el vortex (si se hicieron diluciones en tubos), y
filtrar el volumen seleccionado. 11.5 Luego enjuagar el embudo filtrando aproximadamente 10
mL de agua peptonada estril. Retirar el filtro con pinzas estriles y colocarlo en la placa de Petri
sobre el medio, con la parte cuadriculada hacia arriba, evitando la formacin de burbujas de
aire, pasar suavemente la pinza por el borde del filtro para sacar el aire. No tocar con la pinza el
rea de filtracin del filtro ya que se arrastran clulas bacterianas. Asegurarse de que todo el
filtro quede en contacto con el medio de cultivo. Cerrar la placa y colocarla en la mesada para
luego ser incubada. 11.6 Luego de filtrar cada muestra descontaminar los embudos
humedecindolos con alcohol y flambendolos. Una vez que el alcohol se consume hacer pasar
suficiente agua peptonada estril para lavar el sistema y enfriarlo ms rpidamente. 11.7 Si el
volumen a filtrar es poco (1 mL) colocar en el embudo aproximadamente 10 mL de agua
peptonada estril y luego la muestra, para lograr una mejor distribucin de la misma sobre la
membrana al ser filtrada. 11.8 Siempre comenzar la serie de filtracin por la dilucin mayor para
no contaminar el embudo. 11.9 Incubar las placas de Petri en posicin invertida, en la estufa de
44.5 0.2C durante 24 2 horas. Recuento 11.10 Las colonias tpicas de coliformes
termotolerantes son de distintas tonalidades de azul. Las colonias grises o crema son
consideradas como no coliformes, aunque exiten colonias de E.coli atpicas que se presentan de
color crema por lo que se recomienda realiza la verificacin a posteriori. 11.11 El recuento de
colonias se realiza en las placas que contengan entre 20 y 60 colonias de coliformes tpicas y no
ms de 200 colonias de cualquier tipo. 12 ANLISIS DE DATOS 12.1 La ecuacin que se emplea
es la siguiente: C. Termotolerantes (ufc/100mL) = colonias de coliformes contadas x 100 mL de
muestra filtrados Ufc corresponde a Unidades Formadoras de Colonias. 12.2 Si las colonias
crecen unindose sobre la membrana se informa como crecimiento confluente con o sin
presencia de coliformes y se sugiere la realizacin de otro muestreo del mismo punto. 12.3 Si el
nmero de colonias tpicas de coliformes termotolerantes fuera entre 20 y 60 pero la placa
posee ms de 200 colonias de cualquier tipo, se informa como mayor al recuento realizado y se
aconseja la realizacin de otro muestreo en ese punto. 12.4 Si el nmero de colonias tpicas es
mayor a 60, el recuento se realiza siguiendo alguno de los procedimientos que se detallan a
continuacin y se informa como valor estimado. Dividir la placa en 4 cuadrantes, contar en
uno, multiplicar por cuatro.

http://coli.usal.es/Web/demo_fundacua/demo2/FiltraMembColiT_auto.html

file:///C:/Users/BRYAN/Downloads/cioh_bcc3313%20(2).pdf

http://www.dczogbi.com/membranas.html
https://documents.tips/documents/practica5-filtracion-por-membrana.html