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MONZON PER
2017
I. INTRODUCCION
Objetivos
Realizar la preparacin de medio de cultivo PDA
Realizar el aislamiento de microorganismos de en el medio de cultivo y
condiciones de incubacin empleadas para el aislamiento de
microorganismos.
Preparar la cmara hmeda para el cultivo de hongos en tejidos
vegetales infectados por hongos.
Realizar la prueba de patogenicidad en semillas de maz y frijol en
laboratorio.
II. REVISIN BIBLIOGRFICA
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
Existen medios cuya composicin permite el crecimiento de:
Un gran nmero de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de
Sabouraud).
Determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son
los denominados medios selectivos.
Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas
fisiolgicas o test bioqumicos (utilizacin de citratos, acidificacin a partir
de azcares, etc.).
CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
A continuacin, se da una idea general sobre algunos de los constituyentes
habituales de los medios de cultivo.
AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de
cultivo. En el agar bacteriolgico el componente dominante es un polisacrido
que se obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de
que, a excepcin de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como
nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua alrededor de los 100C y se gelifica
alrededor de los 40C, dependiendo de su grado de pureza.
EXTRACTOS. Su preparacin consiste en que ciertos rganos o tejidos
animales o vegetales (p.e. carne, hgado, cerebro, semillas, etc.) son extrados
con agua y calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o
polvo. Estos preparados deshidratados son a menudo empleados en la
elaboracin de los medios de cultivo. Los ms utilizados son el extracto de
carne, de levadura y el de malta.
PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgnicos, nitrogenados
y sales minerales, que se obtienen por digestin enzimtica o qumica de
protenas animales o vegetales (soja casena carne, etc.). Las peptonas son
muy ricas en ppticos y aminocidos, pero pueden ser deficientes en
determinadas vitaminas y sales minerales.
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO
Preparacin de una cantidad suficiente de un determinado medio de cultivo,
para ser utilizado, en su momento, por todos los alumnos del grupo de prcticas.
Las instrucciones a seguir dependern del nmero de mesa y el medio de cultivo
asignado, pero en todos los casos, los pasos son los siguientes:
2. Esterilizar la disolucin.- Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para
evitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya
a utilizarse el medio, el procedimiento ser diferente:
a) Medios slidos en placa.- Tapar el matraz con tapn de algodn y cubrir
con papel de aluminio. Llevar a esterilizar al autoclave (1210C) durante 15-20
minutos. Una vez estril repartir en placas de Petri estriles y dejar en reposo
para que solidifique.
b) Medios lquidos.- Una vez disueltos los componentes repartir en tubos a
razn de unos 2-4 ml por tubo, tapar con tapn de aluminio y llevar a esterilizar
en autoclave.
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
Placas Petri
Autoclave
Erlenmeyer, olla y vaso precipitado
trpode
mechero de bucen
Agua destilada
Balanza
Insumos, papa, dextrosa, agar - agar
3.2. Mtodos
Agar Agar : 18 g
Dextrosa : 10 g
Papa : 100 g
Agua destilada 1000 Ml.
3) Prendemos el mechero de bucen y ponemos sobre el tripode la olla con
agua y lo echamos la papa ya pesada en la balanza.
5) Una vez que el caldo es vertido se agrega agua destilada hasta 1000 ml,
donde se adiciona las sustancias el agar- agar, dextrosa y homogenizar
las sustancias.
6) Esterilizamos las placas Petri y el matraz.
8) Una vez esterilizado las placas Petri, vertimos el medio de cultivo en las
placas Petri. El medio de cultivo que sobro se guard en un matraz.
I. MATERIALES Y METODOS
Materiales e insumos
Mechero
Pinza
Papel suave
Vaso precipitado
Alcohol, hipoclorito de sodio y agua destilada
Porcin vegetal con sntomas
Agua destilada
Cloro
Alcohol
MTODOS
3. Una vez desinfectado la pinza se saca una porcion del hongo con mucho
cuidado ya sea de la placa como del tubo de ensayo donde huvo
cresimiento de hongos.
5. Una vez desinfectada tomamos las esporas y/o micelio de material vegetal
con una cinta adhesiva y lo ponemos en el portaobjeto.
6. Observamos en el microscopio.
PRUEBA DE PATOGENICIDAD EN SEMILLAS DE MAZ
Materiales e insumos
Vasos presipitado
Pinza
Placas petri
Agua destilada
Alcohol
Hipoclorito de sodio
Gasa
Semillas
Procedimiento
1. Preparacion de agua alcohol y hipoclorito de sodio para la desinfeccion
de a muestra.
Frijol maz
Rhizopus- en zanahoria
Cercospora - en col
IV. CONCLUSINES
La preparacin de los medios de cultivo se realiz de manera correcta con todos
los procedimientos teniendo cuidado que no se adicionen insumos que no son
adecuados que anteriormente se realiz.
La siembra de los microorganismos se realiz con xito obteniendo resultados
de crecimiento de los microorganismos en el medio de cultivo se presentaron en
algunas placas hasta tres colonias de hongos.
La cmara hmeda dio resultados en el crecimiento de hongos como es el caso
Rhizopus stolonifer en tomate que se desarrollo muy bien y se pudo observar a
simple viata el cresimiento de este hongo.
En la prueva de patogenesidad en las semillas de frijol y maiz se observo que en
la muestra uno que es el frijol no presento cresimiento de hongos por lo tanto no
esta contaminada pero en la otra muestra que es del maiz se prento el
cresimiento de hongos eso quiere decir que la semilla estaba contaminada por
hongos.
IV. RECOMENDACIONES
Preparar el medio de cultivo correctamente para que el microrganismo se
desarrolle y as tener un buen resultado
Es recomendable tener cuidado al realizar el aislamiento de
microorganismos para evitar la contaminacin.
Al realizar el cultivo de hongos en cmara hmeda proteger bien el vaso
para evitar la contaminacin.
Al realizar la prueba de patogenicidad desinfectar bien los materiales.
V. REVISIN BIBLIOGRFICA
Madigan, M. T., J. M. Martinko y J. Parker. 2003. Brock. Biologa de los
microorganismos. 10 Ed. Prentice Hall Iberia. Espaa.
Ramrez-Gama, R. M., B. Luna Milln, O. Velsquez Madrazo, L. Vierna
Garca, A. Meja Chvez, G. Tsuzuki Reyes, L. Hernndez Gmez, I.
Mggenburg, A. Camacho Cruz y M del C. Urza Hernndez. 2006.
Manual de Prcticas de Microbiologa General. 5 edicin. Facultad de
Qumica, UNAM. Mxico.
Tortora Gerard J., Fonke Beidell R. y Case Christine L. 1995.
Microbiology an Introduction. 5a. ed. The Benjamin/Cummings
Publishing Company, Inc. 801 pp.
CAFATI, C. R.; SAETTLER; A. W. 1980. Transmission of Xanthomonas
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vulgaris genotypes. Phytopathology 70(7):638-640.