Mtodo para la evaluacin microbiolgica de superficies inertes, vivas y

medio ambiente.

1. Objetivos:

Conocer y aplicar las diferentes tcnicas para evaluar superficies

inertes, vivas, medio ambiente (MOs en el aire).
Conocer y aplicar tcnicas rpidas de evaluacin de higiene de
superficies. (mtodo de bioluminiscencia)

Interpretar los resultados obtenidos por los diferentes mtodos de

evaluacin de superficies.

2. Etiqueta

3. Procedimiento y resultados.

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1) Se efectuaron los mtodos de hisopo para superficies inertes de iPad
y de un celular, se hizo el monitoreo del medio ambiente y se realiz
el mtodo rpido de la bioluminiscencia, adems de evaluar la accin
desinfectante de nuestro producto comercial: Sanytol.

2) Se tom un hisopo estril y se humedeci con la solucin diluyente

estril, en este caso un tubo con 10ml de solucin salina, el rea de
anlisis fue de 10x10 cm2 de un iPad y se realiz la toma de la muestra
de la superficie sucia y despus fue aplicado el desinfectante Sanytol,
para proceder a realizar la toma de la muestra de la superficie sucia,
en cada caso se deposit el hisopo en el tubo en el que se humedeci,
con el resto de la solucin salina, rompiendo la porcin del hisopo
que tuvo contacto con la mano. Se realiz el procedimiento de toma de
muestra de superficie sucia de un celular para el mtodo rpido del
hisopo.

3) Se inocul 1ml de cada tubo, por duplicado, en cajas Petri, para

proceder con el mtodo de cuenta en placa con los medios agar bilis
rojo violeta para coliformes totales y agar triptona extracto de
levadura para mesfilos aerobios y aunque no se llev acabo el anlisis
de hongos y levaduras se usa agar papa dextrosa acidificado para el
caso de superficies vivas.

4) Para el monitoreo del aire, se expuso al ambiente una caja Petri con
agar triptona extracto de levadura, durante un periodo de 15 minutos.

5) Todas las cajas se llevaron a incubar por 48 h (debido a da inhbil

en la escuela, pero deberan de haber sido 24 h), para posteriormente
observar el crecimiento de las colonias, hacer el conteo
correspondiente y expresar los resultados.

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 Tabla 1. Resultados en medio agar de crecimiento de microorganismos para
cuenta en placa
MOs
Medio Resultado experimental
indicadores
Antes Despus (Dilucin 10-0)
Superficie sucia Superficie limpia
Coliformes
totales Agar bilis
(Anlisis de rojo
superficie de violeta
iPad)
En ninguna de las cajas Petri hubo crecimiento de
coliformes a las 24 horas de incubacin a
temperatura de 37 oC.
Antes Despus (Dilucin 10-0)
Superficie sucia Superficie limpia

Mesfilos Agar
aerobios triptona
(Anlisis de extracto
superficie de de
iPad) levadura Existi crecimiento de colonias redondas, de color
beige claro en la caja Petri de superficie sucia y
en el medio de superficie limpia no existi
crecimiento.
Antes Despus
Superficie sucia
Monitoreo del
celular (Dilucin
medio ambiente
10-0)
Mesfilos
aerobios
Agar
(Anlisis
triptona
superficie de
extracto
celular y
de
monitoreo de
levadura Existi crecimiento de colonias redondas, las ms
medio
ambiente) grandes convexas, de color beige claro en la caja
Petri de monitoreo del medio ambiente y en el
anlisis de superficie sucia del celular, empleando
el mtodo rpido del hisopo, no existi
crecimiento.
1) Para el mtodo rpido por bioluminiscencia 3M Clean Trace, se tom la
muestra de una superficie de celular, el hisopo se deposit en su
estuche y se presion hacia abajo para activar la solucin de reactivos
de bioluminiscencia, inmediatamente se introdujo en el luminmetro 3M
UNI-LITE y se registr la lectura de datos.

4. Clculos.

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 Tabla 2. Conteo superficie iPad (mesfilos)
Superficie Sucia Limpia
Dilucin 100 100
A 5 0
B 3 0

Tabla 3. Conteo superficie iPad (coliformes totales)

Superficie Sucia Limpia
Dilucin 10 0 100
A 0 0
B 0 0

Conteo de colonias para mesfilos aerobios en agar.

Superficie sucia:
5 + 3
( ) = 4
2

4 10
( )( ) = 0.4 2
100 2

Superficie limpia:
0 + 0
( ) = 0
2

0 10
( )( ) = 0 2
100 2

Eficiencia del desinfectante:

100 %
0 2 ( )=0%
0.4 2

= (0 % 100 %) = 100 %

= 100 %

Tabla 4. Conteo superficie celular, mtodo rpido

(mesfilos)
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 Superficie Sucia
Dilucin 100
A 0
B 0

Tabla 5. Conteo medio ambiente por 15 minutos (mesfilos)

A 12

Tabla 6. Conteo superficie inerte, mtodo rpido (3MTM)

Equipo Superficie URL
1 Gaveta 575
2 Mesa de profesores 586
3 ltima mesa 336
4 Pared inferior del refrigerador 28
5 Bote de basura 586
6 Cuchillo 74
7 Celular 73
8 Bata de laboratorio 411
9 WC del bao de mujeres 126
10 Mesa de trabajo rea de preparacin de 115
medios de cultivo

5. Anlisis de resultados.

En la evaluacin microbiolgica de la superficie de iPad no existi

crecimiento de coliformes totales, ni en la superficie sucia ni en la
superficie limpia, esto puede deberse a que la cantidad de stos
microorganismos en la superficie del equipo no fue suficiente para poder
ser determinada por el mtodo, por lo se puede decir que se tiene un
valor estimado de coliformes totales < 0.1 UFC/cm2, lo que equivale a < 10
UFC/100 cm2 de superficie de iPad y en ste caso no podemos determinar la
eficiencia del desinfectante. Por otra parte, en la determinacin de
mesfilos aerobios encontramos que se tiene una eficiencia del
desinfectante Sanytol correspondiente al 100%; se explica el que s haya
existido crecimiento de mesfilos aerobios para el anlisis de la
superficie sucia y no haya crecimiento para coliformes totales, debido a
que ste ltimo grupo de microorganismos (coliformes totales) son ms
especficos, mientras que los microorganismos mesfilos aerobios abarca
una gran diversidad de especies.

Al emplear un mtodo rpido para la cuantificacin de mesfilos aerobios

en la superficie sucia de un celular, no se tuvo crecimiento, por lo que
podemos decir que el mtodo no permiti cuantificar a stos
microorganismos. En el monitoreo del medio ambiente de tuvo un conteo de
12 UFC de mesfilos aerobios en un tiempo de 15 minutos y debido a este
tiempo de exposicin se determinan 12 UFC/m3.

Finalmente, al emplear el mtodo rpido de la bioluminiscencia, utilizando

el sistema 3M Clean Trace, de manera grupal encontramos resultados diferentes
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 de acuerdo con cada superficie analizada, ya que de algunas superficies
no se pudo tomar la muestra de 100 cm2 y al ser una superficie menor, se
tuvieron resultados bajos de URL, como es el caso del cuchillo y del
celular en los cuales se obtuvo un resultado de 74 y 73 URL
respectivamente; el resultado ms bajo, de 28 URL correspondi al anlisis
realizado de la superficie de pared inferior del refrigerador, esto se
puede explicar debido a que la mayor parte del tiempo el refrigerador
est cerrado y al mantener temperaturas bajas, impide el desarrollo de
diversos microrganismos. Los resultados ms altos, que superan el lmite
de referencia en el cual se considera no aceptable, es decir > 300 URL,
fueron las superficies ms expuestas, como es la gaveta, la mesa de
profesores, el bote de basura y la bata de laboratorio.

6. Conclusiones.
Para el anlisis de superficies inertes, utilizando la superficie de una
iPad, no hubo crecimiento de coliformes totales ni antes ni despus de
la aplicacin de la solucin antibacteriana, por lo que tenemos un valor
estimado para ambas superficies < 0.1 UFC de coliformes totales /cm2,
respecto a mesfilos aerobios se reporta en la superficie sucia tiene 0.4
UFC de mesfilos aerobios/cm2, mientras que la superficie limpia tiene <
0.1 UFC de mesfilos aerobios/cm2 y con base en los datos anteriores se
determin la eficacia del Sanytol, que corresponde al 100%. Considerando
el lmite como referencia tomado de la NOM-093-SSA1-1994, que son para
mesoflicos aerobios: <400 UFC/cm2 y para coliformes totales, un valor de:
< 200 UFC/cm2, se cumplen con los lmites de referencia para superficies
inertes.
Al utilizar el mtodo rpido del hisopo, se emple la superficie de un
celular y no se obtuvo crecimiento en el medio para mesfilos aerobios,
por lo que tambin se cumple con los lmites de referencia tomados de la
NOM-093-SSA1-1994.
De acuerdo con el lmite de referencia tomado de Standard Methods for
the examination of Dairy Products que corresponde a 15 UFC de
mesoflicos aerobios /m3, se cumple con la referencia pues se determin
un valor de 12 UFC de mesoflicos aerobios/m3.
En el sistema 3M Clean Trace se obtuvieron resultados variables
dependiendo de la superficie analizada y con base en los lmites generales
de aceptacin o rechazo, se tiene que:

Las superficies limpias (lectura <150 URL): Pared inferior del refrigerador,
cuchillo, celular, WC del bao de mujeres y mesa de trabajo rea de
preparacin de medios de cultivo.
Superficies con precaucin (lectura de 150 a 299 URL): No se determin alguna.
Superficies no aceptables (lectura > 300 URL): Gaveta, mesa de profesores, ltima
mesa, bote de basura y bata de laboratorio
Es necesario evaluar las condiciones sanitarias de superficies inertes y
vivas, adems de monitorear el ambiente, al aplicar estas tcnicas se

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 cuenta con las herramientas necesarias para la evaluacin de limpieza y
saneamiento, y con base en los resultados es posible realizar
recomendaciones para mejorar las prcticas de limpieza y saneamiento.

7. Referencias.

Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Facultad de qumica. Anlisis

de superficies vivas e inertes [en lnea]. Disponible en:
http://amyd.quimica.unam.mx/course/view.php?id=43

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