H.

Pylori Ig G
Cat # 1503-11

Los resultados de laboratorio no pueden ser la nica base de un informe

mdico. La historia clnica del paciente y otras pruebas tienen que ser
teniendo en cuenta

Prueba H. pylori IgG ELISA

Mtodo Ensayo enzimtico

inmunoabsorbente ligado

Principio indirecta; Antgeno placa

recubierta

Rango de deteccin Positivo cualitativa; Control

negativo y Cortar

Muestra 5 ul

Tiempo total 75 min

Vida til 12 -18 meses desde
fecha de fabricacin
Especificidad 97%

Sensibilidad 99%

NOMBRE Y USO PREVISTO

La Automatizacin de diagnstico.,
Helicobacter pylori IgG es para uso en la evaluacin del estado serolgico
al H. pylori en pacientes con sntomas gastrointestinales.
RESUMEN Y EXPLICACIN DE LA PRUEBA
Helicobacter pylori es una bacteria espiral cultivado a partir de mucosa
gstrica humana por Marshall en 1982. Los estudios han se indica que la
presencia de H. pylori se asocia con una variedad de enfermedades
gastrointestinales incluyendo gastritis, lcera duodenal y gstrica, dispepsia no
ulcerosa, adenocarcinoma gstrico y linfoma. El organismo est presente en el
95-98% de los pacientes con lcera duodenal y el 60-90% de los pacientes con
lceras gstricas. Los estudios tambin han demostrado que la remocin del
organismo por la terapia antimicrobiana se correlaciona con la resolucin de
los sntomas y cura de enfermedades.
Los pacientes que presentan sntomas clnicos relacionados con el tracto
gastrointestinal pueden ser diagnosticados por H. pylori la infeccin por dos
mtodos:
1) Tcnicas invasivas incluyen la biopsia seguida de la cultura o el examen
histolgico de muestras de biopsia o directa deteccin de la actividad ureasa.
2) Tcnicas no invasivas incluyen pruebas de aliento de urea y mtodos
serolgicos.
Todas las pruebas realizadas en muestras de biopsia estn sujetas a errores
relacionados con la toma de muestras y la interferencia de
Bacterias contaminadas. DIAGNSTICO DE AUTOMATIZACIN INC. H.
pylori IgG, poniendo a prueba la presencia de H. pylori anticuerpo IgG
especfica es la tcnica de eleccin para las pruebas serolgicas, por su
precisin y simplicidad.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
Purificada H. pylori antgeno se recubre sobre la superficie de los
micropocillos. Suero de paciente diluido se aade a los pocillos, y la
H. pylori IgG anticuerpo especfico, si est presente, se une al antgeno. Todos
los materiales no unidos son lavados. Despus aadiendo conjugado
Enzimtico, este se une al complejo antgeno-anticuerpo. Exceso de
conjugado enzimtico es lavado y se aade el sustrato cromognico TMB. La
reaccin cataltica del conjugado enzimtico se detiene en un momento
especfico. La intensidad del color generado es proporcional a la cantidad de
IgG anticuerpo especfico en la muestra. Los resultados son ledos por un
lector de microplaca comparados de una manera paralela con un calibrador y
los controles.
MATERIALES SUMINISTRADOS
1. Microplacas: Tiras de micropocillos: Purificada H. pylori antgeno
recubierto pozos.
(12 X 8)
2. Diluyente de Muestra: Solucin de color azul 1 botella (22 ml)
3. Calibrador: Valor del factor (f) indicadas en la etiqueta. Red Cap
1 Vial (150L)
4. Control negativo: Rango indicadas en la etiqueta. Cap Natural
1 Vial (150 ul)
5. Control positivo: rango indicado en la etiqueta. Verde Cap
1 Vial (150 ul)
6. Lavado Concentrado 10X 1 botella (100 ml)
7. conjugado enzimtico. Solucin Color Rojo 1 Vial (12 ml)
8. TMB Cromgeno Sustrato. mbar Botella 1 Vial (12 ml)
9. Solucin de Stop 1 Vial (12 ml)

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
1. Conservar el kit a 2 - 8 C.
2. Mantenga siempre micro pozos sellados en bolsa con desecantes. Le
Recomendamos que utilice todos los pozos dentro de 4 semanas despus de la
apertura inicial de la bolsa.
3. Los reactivos son estables hasta la expiracin del kit.
4. No exponga los reactivos al calor, sol o luz fuerte durante el
almacenamiento o el uso.
Advertencias y precauciones
1. Materiales de potencial riesgo biolgico:
El calibrador y los controles contienen componentes de fuente humana los
cuales han sido probados y encontrados no reactivos para el antgeno de
superficie de la hepatitis B, as como de anticuerpos del VIH con reactivos
con licencia FDA. Sin embargo, como no hay mtodo de prueba que puede
garantizar la completa seguridad de que el virus del VIH, Hepatitis B u otros
agentes infecciosos, estos reactivos deben ser manipulados en el nivel de
bioseguridad 2, tal como se recomienda en los Centros de Enfermedades
Control / Institutos Nacionales de la Salud de Estados, "Bioseguridad en
laboratorios microbiolgicos y biomdicos".1984
2. Este kit est diseado para uso diagnstico in vitro.
3. No pipetear con la boca. No fumar, comer o beber en las reas en las que
las muestras o los reactivos del kit son manejados.
4. Los componentes de este kit estn pensados para su uso como una unidad
integral. Los componentes de diferentes lotes no deben mezclar.
5. Este producto contiene componentes preservados con acida de sodio. La
acida sdica puede reaccionar con el plomo y el cobre tuberas para formar
acidas metlicas explosivas. Para su eliminacin, lavar con un gran volumen
de agua.
RECOLECCIN Y MANIPULACIN
1. Recoger muestras de sangre y separar el suero.
2. Las muestras pueden ser refrigeradas a 2 - 8 C durante un mximo de siete
das o congelados por hasta seis meses. Evite repetitivo congelacin y
descongelacin de la muestra de suero.
PREPARACIN PARA EL ENSAYO
1. Prepare el buffer de lavado 1x.
Prepare el buffer de lavado aadiendo agua destilada o desionizada a 10x de
lavado concentrado a un volumen final de 1 litros.
2. Lleve todas las muestras y reactivos del kit a temperatura ambiente (20 a 25
oC) y mezclar suavemente.
PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
1. Coloque el nmero deseado de tiras cubiertas en el soporte.
2. Prepare la dilucin 1:40 aadiendo 5 ul de las muestras, calibrador
negativo, calibrador positivo, y de corte
Calibrador a 200 ul de diluyente de muestra. Mezclar bien.
3. Dispensar 100 ul de sueros y calibradores diluidos en los pocillos
correspondientes. Para el blanco reactivo, dispense 100 ul de diluyente de la
muestra en posicin bien 1A. Toque el soporte para eliminar las burbujas de
aire del lquido y mezcle bien.
Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente.
4. Retire el lquido de todos los pocillos. Repetir el lavado tres veces con
tampn de lavado.
5. Dispensar 100 ul de conjugado de enzima a cada pocillo e incubar durante
30 minutos a temperatura ambiente.
6. Retire la enzima conjugada de todos los pozos. Repetir el lavado tres veces
con tampn de lavado.
7. Agregue 100 ul de cromgeno sustrato a cada pocillo e incubar durante 15
minutos a la habitacin la temperatura.
8. Aadir 100 ul de solucin de stop para detener la reaccin.
Asegrese de que no haya burbujas de aire en cada pocillo antes de leer.
9. Lea la DO a 450 nm con un lector de micro.
CLCULO DE LOS RESULTADOS
1. Para obtener el valor de corte: Multiplique el OD450 del calibrador por el
factor (f) impreso en la etiqueta del calibrador.
2. Calcular el ndice de IgG de cada determinacin dividiendo los valores de
la DO de cada muestra por valor de DO obtenido de cortar.
Nota: Este factor (f) es un valor variable de cada kit.
Por ejemplo
Si el factor (f) el valor en la etiqueta = 0,30
Calibrador f = 0,3

CONTROL DE CALIDAD
La prueba de funcionamiento puede ser considerado vlido siempre que se
cumplan los siguientes criterios:
1. El valor de la DO del blanco reactivo contra el aire de un lector de micro
pozos debe ser inferior a 0,150.
2. Si el valor de la DO del calibrador es menor de 0.250, la prueba no es
vlida y debe repetirse.
3. El ndice de IgG para el control negativo y positivo debe estar en el rango
indicado en las etiquetas
INTERPRETACIN
Negativo: H. pylori G ndice de 0.90 o menos son seronegativos para
anticuerpo IgG para H. pylori. El suero muestra puede haber sido tomada
demasiado pronto.
Equivocado: H. pylori G ndice de 0,91-0,99 es equvoca. Vuelva a probar de
una manera paralela con un nuevo suero la muestra tomada 3 semanas ms
tarde.
Positivo: H. G ndice de 1,00 o mayor pylori son seropositivos.
CARACTERSTICAS DE RENDIMIENTO
Un total de 347 muestras de pacientes se utilizaron para evaluar la
especificidad y la sensibilidad de la prueba. El DIAGNSTICO
AUTOMATIZACIN INC. H. resultados de la prueba de IgG pylori se
compararon con los resultados de las biopsias endoscpicas.

Sensibilidad = A / (A + B) = 196/198 = 99%

Especificidad = D / (C + D) = 134/138 = 97%
Precisin = (A + D) / (A + B + C + D) = 330/336 = 98%
La comparacin de la prueba de diagnstico Automation Inc IgG por H.
pylori. A unos resultados comerciales del kit ELISA
se resumen.

Sensibilidad = A / (A + B) = 107/109 = 96%

Especificidad = D / (C + D) = 96/99 = 97%
Precisin = (A + D) / (A + B + C + D) = 201/208 = 97%
La precisin del ensayo se evalu mediante el ensayo tres diferentes sueros
ocho repeticiones en 3 das. La intra-ensayo y CV inter-ensayo se resumen a
continuacin:
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. El ensayo debe ser utilizado slo para evaluar a los pacientes con signos y
sntomas clnicos sugestivos de enfermedad gastrointestinal.
2. Un resultado positivo no permite distinguir entre la infeccin activa y la
colonizacin por H. pylori.
No indica necesariamente que la enfermedad gastrointestinal est presente.
Referencias
1. Marshall, BJ y JR Warren. Bacilos curvos no identificados en el estmago
de los pacientes con gastritis y
La lcera pptica, Lancet 1: 1311-1314, 1984.
2. Ruaws, EAJ y GNJ Tytgat. Cura de la lcera duodenal asociada a la
erradicacin de Helicobacter pylori,
Lancet 335: 1233-1235, 1990.
3. Prez-Prez, GI, SS Wilkin, MD Decker y MJ Blaswer. La seroprevalencia
de Helicobacter pylori
Infeccin en parejas. J. Clin. Microbiol. 29: 642-644, 1991.

Paso (20 a 25 C de temperatura de habitaciones.) Volumen El tiempo

de incubacin
1Dilucin de la muestra 01:40 = 5 ul / 200 ul
2Diluidas de muestras y los calibradores y controles100 ul 30 minutos
3Tampn de lavado (3 veces) 350 ul
4Conjugado enzimtico 100 ul 30 minutos
5 Tampn de lavado (3 veces) 350 ul
6 TMB Cromgeno Sustrato 100 ul 15 minutos
7 Solucin de stop 100 ul
8 La lectura de OD 450 nm