Cromatografia Ejemplos

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co/15-ejemplos-de-cromatografia/
15 EJEMPLOS DE
CROMATOGRAFA
Cromatografa
La cromatografa es un mtodo de separacin de mezclas complejas

ampliamente utilizado a lo largo de diferentes ramas de la ciencia. Emplea un
conjunto de tcnicas basadas en el principio de la retencin selectiva para separar
los componentes de una mezcla en un alto estado de pureza, o
para identificarlos en una mezcla y determinar su proporcin exacta.
De esa manera, la cromatografa consiste en la exposicin de una mezcla

determinada a un soporte especfico (gas, papel, un lquido neutro, etc.) para as
aprovechar las diferencias en la velocidad de adsorcin de cada componente de la
mezcla, identificndolas a partir del espectro de color que la mezcla arroje en el
tiempo.
La adsorcin (que no absorcin) es el coeficiente de adherencia de la mezcla a la

superficie del soporte, y de acuerdo a la diferencia de velocidades de reaccin de los
componentes de la mezcla, stos podrn separarse efectivamente o podr medirse
en todo caso su porcentaje de concentracin.
Este proceso de separacin ocurre en dos fases:
Fase esttica. Se aplica la mezcla a un soporte especfico y se la prepara para

la medicin.
Fase mvil. Se mueve otra sustancia sobre el soporte, para permitir su
reaccin con los componentes de la mezcla y que la diferencia en la velocidad de
reaccin los separe.
De esta manera, algunas sustancias tendern a moverse y otras a permanecer, de
acuerdo a sus respectivas naturalezas. Esto puede llevarse a cabo empleando fases
estticas y mviles de diversa condicin: lquidas, slidas y gaseosas.
Ver adems: Ejemplos de Mezclas
Ejemplos de cromatografa
1. Derramar vino sobre un mantel blanco. Al secarse el vino en contacto con el

aire, las diversas sustancias que lo componen teirn de distinto color el blanco de la
tela, permitiendo as identificarlas cuando normalmente resultara imposible.
2. En los anlisis de sangre. A menudo se realiza la cromatografa de muestras de
sangre para poder separar e identificar sustancias contenidas en ella, imperceptibles
normalmente, a partir del color que reflejan en un soporte o sometidos a una luz
especfica. Tal es el caso de algn frmaco o alguna sustancia especfica, como el
alcohol.
3. En un examen de orina. La orina, incluso ms que la sangre, es una mezcla de

diversos compuestos, cuya presencia o ausencia revela el funcionamiento del
organismo. Por ende, se puede realizar una separacin cromatogrfica para buscar
residuos inusuales, como sangre, sales, glucosa o drogas.
4. Revisin de escenas del crimen. Como en las pelculas: se toman telas, fibras,
tejidos u otros soportes para observar la separacin por adherencia de distintas
sustancias, como el semen o la sangre, que a simple vista podran pasar
desapercibidas.
5. Comprobaciones sanitarias de alimentos. Dado que se conoce la reaccin de los

alimentos al ser sometidos a un espectro cromatogrfico, puede observarse si hay en
ellos algn tipo de sustancia indebida o producto de agentes microbianos a partir de
una pequea muestra.
6. Verificacin de niveles de contaminacin. Ya sea en el aire o el agua, puede

medirse a partir de una muestra pequea la reaccin de las sustancias disueltas e
imperceptibles, empleando un soporte especfico que permita distinguir entre los
compuestos, dejando secar el agua, por ejemplo.
7. Exmenes complejos de microbiologa. Esta tcnica es ampliamente usada para

combatir enfermedades como el bola, por ejemplo, pues en este caso permite la
distincin entre los anticuerpos ms y menos eficaces de cara a la mortal enfermedad.
8. Aplicaciones petroqumicas. La cromatografa es til en el proceso de separacin de

los hidrocarburos del petrleo y su transformacin en diversos materiales refinados,
que presentan propiedades y adherencias sumamente dismiles y observables.
9. Comprobacin de incendios. Para determinar si fueron o no provocados, a menudo
se emplea una cromatografa de los residuos, para evidenciar la presencia de
sustancias inesperadas cuya reactividad sea distinta a las del resto, como
ciertos combustibles fsiles.
10. Para separar tintas. Ya que las tintas estn compuestas de diversos pigmentos en un
medio lquido, es posible separar estos pigmentos mediante cromatografa y
evidenciar las diferencias entre cada uno. Es, de hecho, un experimento comn a la
hora de explicar esta tcnica, empleando para ello rotuladores de colores.
11. Deteccin de radiactividad. Dado que los elementos radiactivos presentan

actividades y velocidades de emisin distintas a las de la materia ordinaria, a menudo
puede identificrselos empleando esta tcnica en laboratorio, exponiendo la materia a
sustancias que evidencien el cambio de velocidad de reaccin.
12. Para determinar la pureza de una sustancia. En la industria a menudo se requieren

materiales de alta pureza, sobre todo gases (cuya volatilidad lo hace difcil) y un
mecanismo para evaluarla es la deteccin por cromatografa de residuos de otras
sustancias, a partir del empleo de una fase esttica lquida.
13. Estudio de los vinos. En la deteccin de los vinos monovarietales a menudo se

emplea la cromatografa para saber si se encuentran mezclados con otras cepas, ya
que stas presentarn caractersticas distintas detectables en presencia de un medio
esttico distinto.
14. Control del destilado industrial de aguardientes. Mediante cromatografa en fase

gaseosa, se puede identificar y cuantificar los componentes bsicos de calidad
presentes en el licor (etanol, metanol, acetaldehdo, acetal, etc.), permitiendo as hacer
una administracin responsable de dichos compuestos.
15. Estudios de calidad de aceites de oliva. La cromatografa es esencial en la revisin

y clasificacin del aceite de oliva, ya que arroja un estudio del perfil graso, acidez y
valor de perxido presentes en la mezcla.
Otras tcnicas de separacin de mezclas
Ejemplos de Cristalizacin
Ejemplos de Destilacin
Ejemplos de Centrifugacin
Ejemplos de Decantacin
Ejemplos de Imantacin
Te recomendamos:
Mezclas
Decantacin
Centrifugacin
Destilacin
Tamizado
Mezclas Homogneas y Heterogneas
Mezclas Homogneas
Filtracin
Mezclas Heterogneas
Mezclas de Gases
https://es.slideshare.net/jmramos1978/cromatografa-lquida-de-alta-presin?qid=d8a1218a-
f82b-4cf2-95da-a0efe44ef776&v=&b=&from_search=6
Cromatografa lquida de alta presin

1. 1. TRABAJO FINAL DE ANALISIS INSTRUMENTAL INTEGRANTES: 
Adrin Rodrguez Diego Guamn ngel Nez TEMA:
CROMATOGRAFIA HPLC Dr. Juan Marcelo Ramos Riobamba -
Ecuador 
2. 2. INTRODUCCION A LA CROMATOGRAFIA DEFINICION: La
cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los
componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra
mvil. La cromatografa es una tcnica de separacin de sustancias que se
basa en las diferentes velocidades con que se mueve cada una de ellas a travs de un
medio poroso arrastradas por un disolvente en movimiento. 
3. 3. <ul><li>Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamao de
las partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de los micrones, lo cual
gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase mvil.
4. 4. De esta manera, naci la tcnica de cromatografa lquida de alta resolucin
(HPLC), que requiere de equipos especiales que permita trabajar con las altas
presiones requeridas.</li></li></ul><li>CROMATOGRAFIA HPLC <ul><li> La
Cromatografa lquida de alta eficacia o High performance liquid chromatography
(HPLC) es un tipo de cromatografa en columna utilizada frecuentemente
en bioqumica y qumica analtica. </li></ul>CROMATOGRAFO HPLC <ul><li>El
HPLC es una tcnica utilizada para separar los componentes de una mezcla
basndose en diferentes tipos de interacciones qumicas entre las sustancias
analizadas y la columna cromatogrfica.</li></li></ul><li>Elementos que participan en
una cromatografa 1. Fase estacionaria 2. Fase mvil 3. Muestra En general, una cromatografa se realiza permitiendo que la (muestra) interaccione
con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo
medio (la fase mvil) que no puede mezclarse con la fase estacionaria se hace fluir a
travs de sta para "lavar" a las molculas en la muestra. 
5. 5. TIPOS DE CROMATOGRAFIAS LIQUIDAS <ul><li>Hay varias formas de
interaccin entre las cuales tenemos:
6. 6. Adsorcin superficial
7. 7. Particin
8. 8. Intercambio inico
9. 9. Exclusin por tamao</li></li></ul><li>Adsorcin superficial. <ul><li>La fase
estacionaria es slida.
10. 10. La separacin se logra por las diferencias en solubilidad (en fase mvil) y de
retencin por absorcin (en fase estacionaria) de la mezcla de solutos.
11. 11. Slice (90%) y almina (10%) son las fases estacionarias ms comunes.
12. 12. Tanto las molculas de solutos como de disolvente son atradas hacia los lugares
activos polares de la fase estacionaria.</li></li></ul><li>Particin. <ul><li>La
separacin se basa en el reparto o distribucin de los solutos entre una fase mvil
lquida y otra estacionaria inmiscible, soportada sobre un slido inerte.
13. 13. La migracin se produce por diferencias de solubilidad.
14. 14. El mecanismo de actuacin es similar al de un modelo de extraccin en
contracorriente.</li></li></ul><li>Intercambio Inico Tanto la fase estacionaria
como la fase mvil son de naturaleza inica. Los iones de la fase estacionaria
son de carga opuesta a los del eluyente. 
15. 15. La separacin se basa en el tamao molecular. Como fase estacionaria se
emplean sustancias porosas de un tamao determinado. Se denomina tambin
cromatografa de permeabilidad. Exclusin por Tamao 
16. 16. ECUACIONES FUNDAMENTALES Constante de distribucin: En
general, los equilibrios de distribucin implicados en cromatografa se describen por
ecuaciones sencillas que suponen la transferencia de una analito entre las fases
estacionaria y la mvil. As, para el soluto A, se puede escribir: A movil A
estacionario 
17. 17. La constante de equilibrio K para este proceso se denomina constante de
distribucin y mide la distribucin del analito entre la fase mvil y la estacionaria Entonces tenemos: Donde: CS : Es la concentracin molar del soluto en la
fase estacionaria CM : Es la concentracin molar del soluto en la fase mvil. 
18. 18. La resolucin cromatogrfica de una columna es una medida cuantitativa de su
capacidad para separar sus analitos. Se la define como: Donde: WA y
WB son la anchura de los picos A y B en el cromatgrafo TR: Es el tiempo que
tarda en aparecer el mximo de un pico A partir de esto se deduce que si R> 1,5
la separacin de los componentes es completa, no ser as si R<1,5. - 
19. 19. PROCEDIMIENTO PARA UN ANALISIS CROMATOGRAFICO HPLC Parmetros a seguir: 
20. 20. 1.- El compuesto pasa por la columna cromatogrfica a travs de la fase
estacionaria mediante el bombeo de lquido (fase mvil) a alta presin a travs de la
columna. 
21. 21. 2.- La muestra a analizar es introducida en pequeas cantidades y sus
componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones qumicas
o fsicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna.(El grado de
retencin de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto,
de la composicin de la fase estacionaria y de la fase mvil.) 
22. 22. 3.- Despus los componentes pasan por un detector que genera una seal
(dependiendo de la concentracin y del tipo de compuesto) 
23. 23. 4.- Se utilizar una bomba para impulsar a la fase mvil con velocidad y presin
constante. 
24. 24. 5.- Luego llegan a las columnas en donde hay unos detectores que no hacen mas
que indicar el momento de aparicin de los distintos componentes que constituyen la
muestra. 
25. 25. CARACTERISTICAS QUE DEBE TENER UNA FASE MOVIL (SOLVENTE) 
26. 26. BOMBAS UTILIZADAS EN UNA CROMATOGRAFIA HPLC Las bombas que
se usan en HPLC se pueden clasificar segn su funcionamiento y diseo en: 
27. 27. REQUISITOS QUE DEBE TENER UNA BOMBA PARA UNA CROMATOGRAFIA
HPLC 
28. 28. VENTAJAS de una cromatografa hplc La mas importante es la diversidad de
sus aplicaciones, tanto en compuestos orgnicos como inorgnicos, Adems: 
29. 29. DESVENTAJAS de una cromatografa hplc 
30. 30. APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA HPLC La cromatografa lquida
de alta presin a pesar de ser una tcnica relativamente nueva, tiene numerosas
aplicaciones en la qumica. En la mayora de los casos, stas consisten en
determinaciones de sustancias cuyo anlisis por otra tcnica cromatografa resulta
muy difcil. 
31. 31. Compuestos inicos: como aminocidos, sales inorgnicas, cidos orgnicos, etc.
 Compuestos de alto peso molecular: como polmeros, hidrocarburos
polinucleares, productos naturales, etc. Compuestos no voltiles: como
vitaminas, pesticidas, esteroides, plastificantes, drogas y una parte muy grande de
otros productos farmacuticos. 
32. 32. <ul><li> Tiene grandes aplicaciones en lo que se refiere a la contaminacin
ambiental la HPLC se utiliza para analizar la capacidadque tienen algunos pesticidas
(insecticidas, larvicidas, herbicidas, etc.)</li></li></ul><li>El anlisis de medicamentos
constituye la Aplicacin mas grande de la Cromatografa HPLC que nos sirve para
determinar los componentes activos de diferentes productos usados en la Industria
Farmaceutica como por ejemplo en tabletas analgsicas. 
33. 33. Recomendaciones para adquirir un Sistema HPLC Depender de cuntas
muestras y tipos de ensayos deban ser analizados. La facilidad para reemplazar
los sellos de las bombas (mantenimiento). La exactitudes y precisin del sistema
de bombas La suavidad y reproducibilidad de la mezcla 
34. 34. GRACIAS POR SU ATENCION 
http://www.carburos.com/industries/Analytical-Laboratories/analytical-lab-applications/product-
list/high-performance-liquid-chromatography-hplc-analytical-
laboratories.aspx?itemId=5C5233E1630347DF9163B6FBE9CF3F2D
Aplicaciones para laboratorios de analtica

cromatografa de lquidos de alto rendimiento (HPLC)
Aplicaciones para laboratorios de analtica
El uso del gas especial y el equipo correctos cuando realice una cromatografa de lquidos de alto
rendimiento (HPLC) mejorar considerablemente la precisin de sus resultados.
La HPLC es particularmente til para la separacin de materiales con grandes pesos moleculares
que presentan una volatilidad muy baja y no pueden separarse mediante cromatografa de
gases. Se usa principalmente en la biotecnologa, en ciencias y la industria farmacutica.
La HPLC utiliza una fase mvil lquida para separar los componentes de la muestra. Los
componentes se disuelven en un disolvente y a continuacin se hacen pasar por la columna a
una gran presin. A continuacin, interactan con la fase estacionaria y salen en momentos
distintos, igual que ocurre con la cromatografa de gases. Si una cantidad excesiva de gas
permanece disuelta en la fase mvil lquida a la presin de la columna, el gas puede salir del
detector y provocar grandes picos no deseados. Estos pueden eliminarse mediante el burbujeo
de helio de gran pureza a travs del lquido cuando el sistema HPLC no disponga de un
desgasificador integrado. El helio debe presentar unos niveles bajos de hidrocarburos, ya que
estos pueden disolverse en el disolvente y generar ruido de lnea base.
Nuestra gama de gases ultrapuros Experis le ofrece el gas ptimo para sus requisitos de HPLC.
No olvide que la eleccin del equipo de botellas tambin afecta a sus resultados analticos.
Nuestra gama incluye reguladores para botellas de alta calidad, colectores, vlvulas y sistemas
de purga, que le ayudarn a conseguir un funcionamiento correcto y a optimizar la precisin de
su anlisis.
A continuacin se enumeran los gases y equipos recomendados para esta aplicacin. Tenga en
cuenta que nuestra recomendacin est basada en las necesidades analticas comunes, as que
es posible que necesite un grado ms elevado de pureza si analiza concentraciones ms bajas o
que pueda usar un grado de pureza inferior si analiza concentraciones ms altas. Pngase en
contacto con nosotros si necesita asesoramiento ms especfico acerca del grado de pureza
adecuado para sus necesidades.
Otras aplicaciones
cromatografa de lquidos de alto rendimiento
(HPLC)
Informacin de contacto
Telfono de contacto
Nombre del producto Descripcin/ventajas Descargas
Gases
Gas helio Premier/Premium Cuando se utiliza en la desgasificacin de disolventes, el gas MSDS

helio Premier/Premium es el gas ideal para esta aplicacin
gracias a sus bajos niveles de oxgeno e hidrocarburos. Data
Sheet
Cuando se utiliza en la desgasificacin de disolventes, el gas helio Premier/Premium es el gas ideal para esta aplicacin gracias a
sus bajos niveles de oxgeno e hidrocarburos.
Colectores Esenciales para garantizar el suministro por lotes o el Data

suministro continuo, nuestra gama de colectores de alta Sheet
calidad puede llegar a conectar hasta seis botellas, puede
permitir los cambios manuales o semiautomticos y est
disponible en latn y acero inoxidable.
Esenciales para garantizar el suministro por lotes o el suministro continuo, nuestra gama de colectores de alta calidad puede llegar
a conectar hasta seis botellas, puede permitir los cambios manuales o semiautomticos y est disponible en latn y acero
inoxidable.
Manmetros Nuestros manmetros ofrecen precisin y una gran calidad, y Data

estn disponibles en latn, acero inoxidable o Monel para Sheet
una amplia variedad de intervalos de presin.
Nuestros manmetros ofrecen precisin y una gran calidad, y estn disponibles en latn, acero inoxidable o Monel para una
amplia variedad de intervalos de presin.
Reguladores de lnea Nuestros reguladores en lnea de alta calidad son esenciales Data
para reducir la presin de gas en las tuberas y estn Sheet
disponibles tanto en latn como en acero inoxidable, con
distintos caudales y presiones de salida.
Nuestros reguladores en lnea de alta calidad son esenciales para reducir la presin de gas en las tuberas y estn disponibles tanto
en latn como en acero inoxidable, con distintos caudales y presiones de salida.
Reguladores para botellas Nuestra gama de reguladores de alta calidad para botellas son
esenciales para reducir la presin de los gases en la salida de
la botella y estn disponibles en versiones de una o dos
etapas; diversos materiales, como el latn, el acero inoxidable
y Monel; y distintas presiones de entrada y de salida.
Nuestra gama de reguladores de alta calidad para botellas son esenciales para reducir la presin de los gases en la salida de la
botella y estn disponibles en versiones de una o dos etapas; diversos materiales, como el latn, el acero inoxidable y Monel; y
distintas presiones de entrada y de salida.
Sistemas de purga Los sistemas de purga son fundamentales para la eliminacin Data
de impurezas o la exposicin del operador al gas cuando se
cambian las botellas. Nuestros sistemas de purga cruzada, Sheet

autopurga y purga con llave en T de alta calidad estn
disponibles en una gran variedad de materiales para la
manipulacin de gases puros, txicos, corrosivos e
inflamables.
Los sistemas de purga son fundamentales para la eliminacin de impurezas o la exposicin del operador al gas cuando se cambian
las botellas. Nuestros sistemas de purga cruzada, autopurga y purga con llave en T de alta calidad estn disponibles en una gran
variedad de materiales para la manipulacin de gases puros, txicos, corrosivos e inflamables.
Vlvulas Nuestra gama de vlvulas de comprobacin y vlvulas de

seguridad de alta calidad est disponible en latn y acero
inoxidable y una variedad de tamaos de conexin para
conectar las botellas al equipo.
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aki ta aplicaione de croma descagar subiendo archivpo
Cromatografa
ndice de tcnicas
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Definicin:
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el que

los componentes que se han de separar se distribuyen entre dos
fases, una de las cuales est en reposo (fase estacionaria,
F.E.) mientras que la otra (fase mvil, F.M.) se mueve en una
direccin definida.
Otras definiciones (en la web): cromatograma, cromatografiar,

cromatgrafo, fase ligada, fase inmovilizada, eluir, efluente,
muestra, componentes de la muestra, soluto, disolvente, zona.
Otros trminos: columna, lecho cromatogrfico,
empaquetamiento... (vase la seccin de nomenclatura).
Hay 3 mtodos principales de cromatografa: frontal, de

desplazamiento y de elucin. Slo consideraremos este ltimo,
que es el ms habitual, al menos en Bioqumica y Biologa
Molecular.
Clasificacin de las tcnicas

cromatogrficas
1. De acuerdo con la forma del lecho
cromatogrfico:
1.1 Cromatografa plana
Se realiza sobre papel u otro material slido. Suele llamarse en

capa fina o en capa delgada porque la fase estacionaria
recubre un soporte plano y rgido.
Disposiciones
experimentales para
Cromatografa ascendente en realizar una cromatografa
capa fina en papel descendente
(izqda.) y ascendente
(dcha.).
Cromatografa ascendente en
capa fina: colocacin de una
muestra (con 3 componentes),
desarrollo de la cromatografa y
revelado del cromatograma. 1: aplicacin de la muestra
2: se sumerge el extremo
Rf es el factor de retardo o inferior en la fase mvil
retraso, que mide la movilidad 3 a 5: la fase mvil asciende por
relativa de cada componente con capilaridad y se va produciendo
respecto al mximo posible, la la separacin de los
distancia recorrida por el frente componentes
de fase mvil. 6: se marca el frente de avance
Componente 1: Rf = a / D del disolvente y se deja secar la
Componente 2: Rf = b / D placa
Componente 3: Rf = c / D 7: revelado de los componentes
ya separados y medida de su
avance
1.2 Cromatografa en columna
F.M. lquida, F.E. slida: columnas de varios mm de dimetro y

varios cm de longitud.
F.M. gas, F.E. slida: columnas de unos 5 mm de dimetro y 1-
20 m de longitud.
F.M. gas, F.E. lquida: columnas capilares, con menor dimetro
y 30-100 m (incluso ms) de longitud.
Puede verse una animacin del avance de las molculas por la
columna.
Funcionamien
to de una
columna,
mostrando la
carga de la
muestra y
diversos
momentos a
lo largo de la
elucin:
1. Muestra
depositad
a sobre el
lecho
cromatog
rfico
2. La
muestra
penetra
en el
lecho
3. Se aade
fase
mvil
4. Comienza
la
separaci
n de los
compone
ntes de la
muestra
7. Eluye el
primer
compone
nte
9. Eluye el
segundo
compone
nte
2. De acuerdo con el estado fsico de las fases

fase mvil
lquida gaseosa
cromatografa cromatografa
lquida de gases
Cromatografa Cromatografa
slida
lquido-slido gas-slido
fase
estacionaria
Cromatografa Cromatografa
lquida
lquido-lquido gas-lquido
2.1 Cromatografa de gases

Con fase mvil gaseosa.
Cromatografa gas-lquido
Cromatografa gas-slido
2.2 Cromatografa lquida

Con fase mvil lquida.
Cromatografa lquido-lquido
Cromatografa lquido-slido
2.2.1 HPLC
Cromatografa lquida de alta presin o de alta eficacia (cuando

se emplean particulas de fase estacionaria muy pequeas y una
presin de entrada relativamente alta).
[HPLC, de High Pressure Liquid Chromatography / High
Performance Liquid Chromatography]
3. De acuerdo con el mecanismo de separacin
Nota: sta es una clasificacin conceptual; en la prctica, el
mecanismo que rige la separacin puede ser mixto; p.ej.,
adsorcin+reparto.
3.1 Cromatografa de adsorcin
(atencin: es adsorcin, no absorcin)
Diferente afinidad de adsorcin de los componentes de la

muestra sobre la superficie de un slido activo. La adsorcin es
la capacidad de las superficies para fijar molculas.
La F.E. es siempre slida. Ejemplos: almina, gel de slice,

carbn activo, fosfato clcico, hidroxiapatito...
3.2 Cromatografa de reparto

Diferente solubilidad de los componentes de la muestra en la
fase estacionaria (caso de la cromatografa de gases), o
diferentes solubilidades de los componentes en las fases mvil y
estacionaria (caso de la cromatografa lquida).
Ejemplos: en cromatografa plana, la F.E. es el agua o

disolvente asociados a la celulosa (papel) o al soporte slido que
forma la capa fina; en columna, como F.E. se usan tierra de
diatomeas, gel de slice, celulosa en polvo...
3.3 Cromatografa de intercambio inico

Diferente afinidad de los componentes de la muestra para el
intercambio de iones. Qu significa intercambio de iones? La
F.E. posee carga elctrica y por ello interacciona con los
componentes de la muestra que tienen carga opuesta.
Intercambio aninico: F.E. con carga positiva,

une aniones, bien los del disolvente (F.M.) o bien los de la
muestra (de ah la palabra intercambio).
Intercambio catinico: F.E. con carga negativa,
une cationes, bien los del disolvente (F.M.) o bien los de
la muestra.
Ejemplos de grupos funcionales intercambiadores (unidos

covalentemente a la F.E. slida):
intercambiadores intercambiadores
catinicos aninicos
carboxilato
dietilaminoetilo (DEAE)
sulfonato
dietil-(2-
fosforilo
hidroxipropil)aminoetilo
carboximetilo (CM)
polietilenimina
sulfopropilo (SP)
La F.E. suele llamarse resina (de intercambio inico).
Puede verse una animacin de una cromatografa de

intercambio aninico.
Las biomolculas poseen frecuentemente varios grupos

ionizables, de modo que su carga elctrica neta depende del pH
del medio en el que se encuentran (es decir, la F.M.).
3.4 Cromatografa de exclusin

Tambin se llama de exclusin molecular. Estrictamente, se
basa en diferencias de tamao, forma o carga entre las
molculas de los distintos componentes de la muestra, pero lo
ms habitual es aprovechar las diferencias de forma y
tamao. En este caso, se la llama tambin cromatografa de
exclusin por tamao, de filtracin en gel, de permeacin
en gel o de tamiz molecular.
Esquema
de la
separacin
de
molculas
de distinto
tamao
durante
una
cromatogr
afa de
exclusin.
entrada de fase mvil
Pulsando
sobre la detector
imagen de
columna
la columna cromatogrfica
a la con
derecha se relleno poroso
mostrar
seal
el aspecto
en detalle
del relleno,
que ilustra
el
diferente
acceso de
las
molculas
a los poros
dependien
do del
tamao de
aqullas.
Pueden verse dos animaciones (A y B) de una cromatografa de
exclusin.
Ejemplos: para la separacin de protenas y polisacridos se

usan como F.E. polmeros lineales entrecruzados (es decir, que
forman enlaces transversales). Los ms comunes son dextranos
(marca comercial: Sephadex), agarosa (Sepharosay Biogel A) y
poliacrilamida (Biogel P). Estos materiales, en forma de
pequeas esferas, se expanden o hinchan al sumergirlos en
disoluciones acuosas, generando un retculo o matriz
tridimensional, con poros de tamao definido.
Aplicaciones:
Para la purificacin de una protena (al igual que otras

tcnicas cromatogrficas).
Se puede establecer una correlacin entre el tamao
molecular y la movilidad en la columna de exclusin, por lo
que esta tcnica se emplea para determinar masas
moleculares. Dicha correlacin es aproximadamente lineal
pero slo dentro del llamado intervalo de fraccionamiento
o intervalo de resolucin propio del tipo de F.E.
empleado.
Para eliminar sustancias de pequeo tamao molecular de
una muestra proteica (p.ej., las sales inorgnicas en un
desalado de la muestra, eliminacin del exceso de
reactivos tras tratar una protena en el laboratorio,
eliminacin de inhibidores enzimticos,...). El resultado es
similar a una dilisis, pero ms rpido.
(ms aplicaciones en Freifelder, 1991)
3.5 Cromatografa de afinidad

Variedad particular de cromatografa en la que la separacin se
basa en la especificidad biolgica singular de interaccin
entre un componente de la muestra y otra molcula unida a la
F.E.; los ejemplos ms comunes son las interacciones enzima-
sustrato, antgeno-anticuerpo y ligando-receptor.
F.E.: un soporte inerte (microesferas de vidrio o plstico, gel de
agarosa, ...) al que se une covalentemente el ligando de
afinidad. Ejemplos de este ligando: sustrato, inhibidor o cofactor
de una enzima, anticuerpo, antgeno, hapteno, sustancia
transportada, hormona, oligosacridos, lectinas (protenas con
afinidad por oligosacridos)...
Pueden verse dos animaciones (A y B) de una cromatografa de

afinidad.
4. Algunas tcnicas especiales

4.1 Cromatografas de fase normal y de fase invertida
Fase normal: cuando la F.E. es ms polar que la F.M.
Fase invertida: cuando es ms polar la F.M.
[Nota: se suele ver el trmino "fase reversa", expresin

incorrecta que debe evitarse (la normativa IUPAC indica que en
ingls debe decirse Reversed Phase y no Reverse Phase).]
4.2 Anlisis isocrtico

La composicin de la fase mvil permanece constante a lo largo
del proceso de elucin.
4.3 Elucin con gradiente

La composicin de la fase mvil se cambia, de forma continua o
en etapas, a lo largo del proceso de elucin
(respectivamente, gradiente continuo y gradiente
escalonado o en etapas).
4.4 Cromatografa bidimensional

Una vez separados los componentes de la muestra, parte de
ellos o todos se someten a etapas adicionales de separacin
bajo diferentes condiciones, en otra columna o, en el caso de la
cromatografa plana, en direccin perpendicular.
Ejemplo: Huellas dactilares estudio de protenas (Freifelder-

193ss)
Etapas en la realizacin de una

cromatografa
Cromatografa plana
Cromatografa en columna
(papel o capa fina)
1.- Preparacin del

1.- Preparacin del soporte y fase
soporte y fase
estacionaria.
estacionaria.
1.1.- Equilibrado de la columna.
2.- Aplicacin de la
2.- Aplicacin de la muestra. muestra.
Secado.
3.- Elucin:
a) Lavado de componentes no
retenidos.
3.- Desarrollo de la
b) Liberacin, desplazamiento o cromatografa.
elucin propiamente dicha de los
componentes retenidos.
4.- Recoleccin de fracciones o

4.- Secado de la placa.
anlisis del efluente en continuo.
5.- Revelado y
5.- Anlisis, cuantificacin o
cuantificacin en su
revelado.
caso.
6.- Regeneracin de la fase
estacionaria.
Recogida del efluente

El efluente de una columna se suele
recoger en forma de pequeas porciones o
fracciones, comnmente con la ayuda de
un dispositivo mecnico llamado colector
de fracciones.
Esquema de un colector de fracciones.

En cada tubo cae un nmero determinado
de gotas o un cierto volumen. A
continuacin el soporte gira, de modo que
el tubo siguiente queda colocado bajo la
salida del efluente. Las gotas se detectan
mediante una clula fotoelctrica; cada
gota interrumpe el haz de luz y as se
cuenta.
Deteccin
Los componentes de la muestra separados se detectan en el
efluente:
a. Mediante su anlisis en continuo. Por ejemplo:

o midiendo absorbancia a 280 nm para protenas
o midiendo absorbancia a 260 nm para cidos nucleicos
o midiendo radiactividad
b. O bien mediante el anlisis de las fracciones una vez
recogidas.
o cualquier tipo de anlisis (absorbancia, radiactividad,
ensayo enzimtico, ensayo biolgico...)
pagina de este ultimo doc http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htmv

Cromatografia Ejemplos

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Colectores Esenciales para garantizar el suministro por lotes o el Data

Manmetros Nuestros manmetros ofrecen precisin y una gran calidad, y Data

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aki ta aplicaione de croma descagar subiendo archivpo

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3.1 Cromatografa de adsorcin

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3.2 Cromatografa de reparto

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3.3 Cromatografa de intercambio inico

Intercambio aninico: F.E. con carga positiva,

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La F.E. suele llamarse resina (de intercambio inico).

Puede verse una animacin de una cromatografa de

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3.4 Cromatografa de exclusin

Ejemplos: para la separacin de protenas y polisacridos se

Para la purificacin de una protena (al igual que otras

3.5 Cromatografa de afinidad

Pueden verse dos animaciones (A y B) de una cromatografa de

4. Algunas tcnicas especiales

Fase invertida: cuando es ms polar la F.M.

[Nota: se suele ver el trmino "fase reversa", expresin

4.2 Anlisis isocrtico

4.3 Elucin con gradiente

4.4 Cromatografa bidimensional

Ejemplo: Huellas dactilares estudio de protenas (Freifelder-