UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

LABORATORIO CLNICO E HISTOTECNOLGICO
CATEDRA DE BIOLOGIA MOLECULAR

NOMBRE: Ana Muso

SEMESTRE: Sexto
FECHA: 01/11/17

INFORME DE EXTRACCIN DE ADN

RESUMEN

La extraccin consiste en aislar y purificar las molculas de ADN y se basa en las

caractersticas fisicoqumicas de la molcula. El ADN est constituido por dos cadenas
de nucletidos unidas entre s formando una doble hlice. Los nucletidos estn
integrados por un azcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada.

Los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga negativa,
lo que permite disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante
alrededor de la molcula. Pero, en presencia de etanol, se rompe la capa hidratante y
quedan expuestos los grupos fosfato. Bajo estas condiciones se favorece la unin con
cationes como Na+ que reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucletidos
y permiten que el ADN precipite.

Se han diseado distintos protocolos con la finalidad de obtener una cantidad y calidad
de ADN adecuados, as como garantizar la eliminacin de inhibidores potenciales que
dificulten el tratamiento posterior de la molcula. Los mtodos tradicionales, utilizan
solventes orgnicos para separar a las protenas del ADN y, una vez suspendido en la
fase acuosa, aislarlo por precipitacin con etanol. En general, los protocolos
tradicionales consisten de cinco etapas principales: homogeneizacin del tejido, lisis
celular, separacin de protenas y lpidos, precipitacin y redisolucin del ADN.

INTRODUCCION

Biologa molecular se va a basar en los estudios que comienzan con la extraccin de

cidos nucleicos. La lisis celular libera las molculas en una fase acuosa que es
separada de los restos celulares por centrifugacin. Las protenas son removidas de la
fase acuosa con solventes orgnicos (fenol, cloroformo). El DNA, que permanece en la
fase acuosa, precipita junto al etanol y posteriormente es purificado y suspendido en
un buffer adecuado.

Muchos laboratorios van a variar en las tcnicas dependiendo del protocolo que se
encuentre en el kit, aqu los solventes orgnicos son sustituidos por filtros que retienen
el DNA, en condiciones de alta concentracin salina. La elucin del DNA retenido en el
filtro ocurre en baja concentracin salina.
MATERIALES Y MTODOS

Tomar la muestra de sangre perifrica

Identificar la vena del paciente y colocar el torniquete 4 dedos

Limpiar la zona de extraccin con alcohol
Proceder a realizar la puncin y extraer la sangre en el tubo lila
Retirar la aguja con la torunda encima para que haga presin
Se debe mezclar bien el tubo lila ya que contiene el anticoagulante EDTA

Extraccin de ADN

Poner 500 micro litros de sangre total en 2 ependorff de 1,5 ml

Anadir a cada tubo 1000 micro litros de buffer de extraccin de ADN
Colocar en el vortex por 1 minuto, dejar incubar durante 10 minutos,
Retirar el sobrenadante, aadir 500 microlitros de alcohol 90%
Colocar de nuevo en el vortex por 1 minuto, dejar incubar de por 5 minutos y
retirar el sobrenadante
Aadir 500 microlitros de alcohol al 70%, y dejar en el vortex por 1 minuto
Incubar por 5 minutos y retirar el sobrenadante
Aadir 500 microlitros de alcohol isoamilico, mezclar en el vortex por 1 minuto
Agitar por inversin por 5 minutos a 10 minutos, observar el adn el ovillo
(blanquecino )

RESULTADO Y DISCUSIN

No logramos obtener el ADN, debido a que la muestra pudo haber sido hemolizada y
esto produjo la liberacin de hemoglobina y va a ser un contaminante para el ADN, y a
su vez se van a liberar enzimas que van a bloquear el ciclo de la membrana celular.
Hemolisis inducida provoca que el fibringeno soluble se convierta en insoluble,
bloqueando la membrana de clula llenndola de H2O provocando que la membrana
se endurezca por lo que no se romper.

Otra causa pudo haber sido el protocolo realizado durante la prctica ya que es una
tcnica que debe hacerse con mucho cuidado y siguiendo al pie de la letra cada paso, y
en caso de un mnimo error todo el proceso no servir de nada y no se podr obtener
el ADN, aqu se incluye la cantidad y la medida exacta que se debe poner de cada
reactivo.

CONCLUSIONES

La extraccin consiste en el aislamiento y purificacin de molculas de ADN

basndose en las caractersticas fisicoqumicas de la molcula.
 Se puede disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante
debido a su carga negativa y esta capa se rompe en presencia de etanol
La extraccin de ADN es una tcnica muy importante ya que nos va a servir en
varios campos de la medicina, incluso en criminalstica es muy importante ya
que con esto obtendremos ADN para resolver un caso.

BIBLIOGRAFIA

o Watson y Crik Estructura del ADN Nature 25 abril 1953

o Fdsfs
o Adsfsdf
o

CUESTIONARIO

1. Observe la imagen. Identifique las estructuras del cromosoma, ponga los

nombres correspondientes

2. Qu tipo de ADN es y por que

Es de hlice a mano derecha, pero con ms cantidad de pares base por turno. Son
once bases pares por turno. Con una estructura compacta se parece al ADN-B.
Tambin es activo biolgicamente en la clula formando estructuras cristalizadas al
experimentar en el laboratorio.
 3. Dibuje la estructura secundaria segn modelo de Watson y crik

4. Caractersticas del ADN extrado

El ADN es un polmero formado por unidades repetitivas, los nucleotidos. Una doble
cadena de ADN mide de 22 a 26 angstroms (2,2 a 2,6 nanometros) de ancho, y una
unidad (un nucletido) mide 3,3 (0,33 nm) de largo. Aunque cada unidad individual
que se repite es muy pequea, los polmeros de ADN pueden ser molculas enormes
que contienen millones de nucletidos. Por ejemplo, el cromosoma humano ms largo,
el cromosoma nmero 1, tiene aproximadamente 220 millones de pares de bases.

5. Artculo de Watson y Crick Nature 25 abril 1953

- Por qu el ARN es monocatenario

La estructura tridimensional del RNA difiere claramente de la del DNA. En general las
molculas de RNA son monocatenarias (una sola cadena polinucleotdica), por lo que
su composicin en bases nitrogenadas no se ajusta a la regla de equivalencia de
Chargaff. Sin embargo, existen molculas de RNA que, aun siendo monocatenarias,
presentan tramos con secuencias de bases complementarias los cuales adoptan
estructuras en doble hlice, denominadas horquillas, de caractersticas anlogas a las
del DNA. En ocasiones, cuando las secuencias complementarias no son contiguas, se
forman bucles de bases no emparejadas dentro de las horquillas. En las dobles hlices
de RNA la adenina se empareja con el uracilo, que tiene estructura similar e idnticas
posibilidades de formar puentes de hidrgeno que la timina, y la guanina con la
citosina.