DIVERSIDAD CELULAR I

CELULAS PROCARIOTAS: TINCION Y SU OBSEVACION.

RECONGITION OF BIOMOLECULES IN LIVING BEINGS: Qualitative
analysis.
Arellano, A.1*; Gutirrez, O.2*; Pertuz, A.3*; Martnez, L.4*; Escorcia, A. 5*
1 2017161002 2 2017161020 3 2017162087 4 2017161023 5 2017161023
*Estudiante de Medicina Universidad del Magdalena

RESUMEN

En el laboratorio identificamos los diferentes de microorganismo bacterianos que se

encuentran en uno de nuestros alimentos de consumir diario (yogurt) a travs del
microscopio con ayuda de otros elementos qumicos que incidieron en este experimento.

PALABRAS CLAVE: Bacterias, Bacilos, Cocos, Gram, Espirilos, Microorganismo,

Vibrin, estreptococos, estafilococos.

ABSTRACT

In the laboratory identified them different of microorganism bacterial that are found in one
of our food of consume daily (yogurt) through the microscope with help of others
elements chemical that impacted in this experiment.
KEYWORDS: Bacteria, bacilli, coconuts, Gram, spirits, microorganism, Vibrio,
streptococci, staphylococci.
1. INTRODUCCION
En 1676, Antonio Van Leeuwenhoek,
pulidor de lentes holands, mezcl
algunos granos de pimienta con agua
y despus de una o dos semanas,
observ una gota de esta infusin con
ayuda de un microscopio simple. As
fueron descubiertas las bacterias. En
la actualidad para hacer
observaciones similares, empleamos
microscopios de un gran aumento;
dotados de objetivos de inmersin o
microscopios electrnicos. Con tales
instrumentos es posible ver bacterias
aumentada alrededor de 1000
dimetros. Aunque es posible
observar bacterias vivas mediante
preparaciones en fresco, lo usual es
hacer preparaciones teidas, con lo
que es posible observarlas ms
fcilmente. La introduccin de
coloraciones como la de GRAM (1986)
permiti demostrar el fino detalle de
sus estructuras.
Dentro de las clulas procariotas se
incluyen las bacterias y las algas
cianofceas o cianobacterias, estas
clulas se distinguen porque: Carecen
de organelos membranosos internos
que asisten las estructuras
intracelulares; el ADN no est unido a
protenas y presenta un sistema de
duplicacin propio y generalmente
unido a la membrana plasmtica;
presentan una pared celular de
composicin qumica especfica,
diferente de la composicin de las
clulas vegetales y los hongos.
Las bacterias son importantes dado el
papel que cumplen en el mbito de la
industria, la medicina y la agricultura.
La mayora de las clulas bacterianas
son unicelulares, pero tienen la
tendencia a la agregacin.
Las bacterias se pueden clasificar de
acuerdo a su forma (morfologa) o la
coloracin de GRAM. Dentro de la
clasificacin morfolgica las formas
ms caractersticas son BACILOS
cuando tienen forma de bastn,
COCOS de forma redondeada;
ESPIRILOS en forma de espiral,
VIBRIN cuando tienen forma de
coma, cuando hay agregaciones se
pueden denominar
ESTREPTOCOCO, si los cocos se
disponen linealmente y
ESTAFILOCOCOS si se agrupan en
forma de racimo.
Las tinciones para observar bacterias
se preparan en soluciones acuosas y
orgnicas de colorantes o grupos de
colorantes que confieren una gran
variedad de colores a los
microorganismos. Los colorantes no
solo sirven para la tincin directa de
materiales biolgicos, si no tambin se
pueden emplear a fin de demostrar las
funciones fisiolgicas de los
microorganismos con el empleo de
tinciones supra vitales.
La mayora de las clulas contienen
estructuras llamadas organelos que
llevan a cabo funciones especficas.
Hoy en da las clulas se clasifican en
dos grupos, basndose en el hecho de
si poseen o no organelos
especializados rodeados por
membrana: Las clulas procariotas
(Eubacterias y Archaebacterias) que
no tienen organelos rodeados por
membranas y la clula eucaritica
(Eukarya) que tienen organelos
rodeados por una membrana.
2. OBJETIVOS
Observar algunas de las
caractersticas de las bacterias
desarrolladas en medio de cultivo o
en bebidas lcteas.
Aplicar alguna tcnica de coloracin
para la observacin de
microorganismos a travs del
microscopio.
Reconocer las diferentes formas y
tamaos de las clulas procariotas
3. MATERIALES
Cultivo de microorganismos realizado
con anterioridad, Un vaso de Kumis o
yogurt, Azul de metileno, Solucin
colorante de cristal violeta, colorante
de Gram (bacterias), Violeta de
Genciana, Toallas de papel secante o
servilletas; microscopio, aceite de
inmersin, asa de inoculacin punta
redonda; portaobjetos y cubreobjetos,
beaker, pipeta, mechero, agua
destilada, goteros, papel filtro, etanol
al 95%.
4. PROCEDIMIENTO
PARTE A.
PREPARACIN DE UN FROTIS
Comprende las siguientes etapas:
1) Extendido del material en un
portaobjetos transparente.
2) Secado.
3) Fijacin.
Verifique en la mesa se encuentren los
siguientes materiales: caja Petri, asa
microbiolgica, beaker con agua
destilada, portaobjetos limpios,
muestra biolgica
1. Extendido. Disolver la muestra en
una caja Petri con un poco de agua
destilada; mezclarla con el asa.
2. preparar un portaobjetos limpio
3. introducir el asa en un beaker con
agua destilada (para limpiarla) y luego
flamearlo hasta rojo vivo; introducirla
de nuevo en el agua destilada (para
enfriarla) figura 6.1.
4. tomar una muestra con el asa (si es
lquida) y colocarla sobre un
portaobjetos limpio zigzagueando.
5. Si la muestra proviene de un cultivo
en medio slido, colocar primero una
gota de agua sobre el portaobjetos,
tomar la muestra con el asa, tocar la
gota, quemar el asa y luego enfriada,
mezclar bien con el agua (figura 6.2).
Figura 6.1. Procedimiento para la toma de muestra de una
caja Petri.

Figura 6.2. Forma de formar una pelcula delgada sobre el
portaobjetos (zigzagueo)
6. Secar al aire. Puede acelerarse el
secado, manteniendo la lmina
encima de la llama del mechero a 15
cm o ms de distancia. (Es
conveniente sostener el portaobjetos
con la mano, ya que, si la mano no
soporta el calor de la llama, las clulas
pueden deformarse y teirse
defectuosamente).
7. Fijar. Con el frotis seco, pasar la
porta tres veces por la llama del
mechero para fijar (figura 6.3).
Figura 6.3. Fijado de la muestra por calentamiento
PARTE B.
TCNICA PARA LA COLORACIN DE
BACTERIAS
Cada una de las cuales comprende
varios pasos como se explica a
continuacin.
1. COLORACIN SIMPLE:
1. Preparar un frotis segn la tcnica
habitual antes descrita.
2. Colocar el portaobjetos sobre un
soporte para tinciones.
3. Cubrir la preparacin con 2 o 3
gotas de solucin de azul de metileno
y dejar 1 min (o cristal violeta y dejar
30s).
4. Lavar con agua.
5. Secar con papel filtro o encima del
mechero.
6. Observar al microscopio con lente
de inmersin y determinar forma,
disposicin y relacin de tamaos de
las distintas bacterias.
2. COLORACIN DE GRAM (TCNICA
DE HUCKER)
1. Preparar un frotis segn la tcnica
antes descrita.
2. Colocar el portaobjetos sobre un
soporte para tinciones.
3. Cubrir con solucin de cristal violeta
y dejar actuar 1min (figura 6.4).
Figura 6.4. Adicin de colorante sobre el frotis
4. Lavar suavemente con agua de la
pluma o grifo (figura 6.5).
 10. Lavar y secar. Observar con
objetivo de inmersin y determinar
forma, disposicin y relacin de
tamaos de las distintas bacterias

Las bacterias Gram+ se vern de color

azul-violeta y las Gram- rosadas.
Determinar forma, disposicin y
Figura 6.5. Lavado de la muestra teida
tamao relativo y reaccin al Gram de
las distintas bacterias presentes.
5. Cubrir con lugol y dejar actuar 1 min
Podr detectar dos tipos de bacterias:
(figura 6.6).
Streptococusthermophilus, el cual
6. Lavar de la misma manera.
forma largas cadenas de clulas
7. Cubrir con etanol 95% (decolorante
esfricas alineadas que es el
de Gram) y dejar 30s moviendo
responsable de la acidificacin de la
suavemente la lmina. Seguir lavando
leche y Lactobacilusbulgaricus
hasta que ste no arrastre ms
compuesto por clulas bacilares
colorante (figura 6.6)
largas y finas al cual se le debe la
8. Lavar con agua.
transformacin de leche en yogurt.
9. Cubrir con solucin de safranina o
Fuscina de Gram y dejar 1 min (figura D. RELACIN ENTRE CLULAS
6.7.). PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

1. Tomar un palillo de dientes y

realizar un frotis sobre el epitelio
interno de la mejilla y colocarlo sobre
un portaobjetos zigzagueando sobre
l y teir con azul de metileno.

2. Salir del laboratorio y consumir un

poco de yogurt.

Figura 6.6. Adicin de lugol y posterior lavado con alcohol. 3. Esperar dos minutos y realizar un
frotis de la mejilla interna.

4. Esparcir la muestra sobre un

portaobjetos; dejar secar y teir con
azul de metileno

5. secar y observar las clulas

procariotas adosadas sobre las
clulas del epitelio escamoso de la
mejilla.

Figura. 6.7. Tincin con la tintura de Gram

 que forma racimos irregulares
(staphylo) y por su coloracin (tincin
rosada), es una bacteria Gram
Negativa.
La tincin diferencial permite
diferenciar las bacterias que retienen
el primer color (Gram +) de las que no
Figura 6. 8. Apariencia de una muestra de las clulas del lo retienen (Gram -), esta diferencia en
epitelio de la mucosa interna de la mejilla:
comportamiento refleja diferencias
6. Dibujar, explicar o describir sus estructurales y fisiolgicas entre
observaciones. ambos grupos de bacterias.
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EVIDENCIAS
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RESULTADOS

COLORACION SIMPLE
Por forma cilndrica o de vara y su
coloracin (tincin azul), es una
bacteria Gram Positiva, con forma de
bacilo.
Su tamao es un parmetro que est
determinado genticamente, pero los
valores concretos vienen influidos por
condiciones ambientales (nutrientes,
sales, temperatura, tensin superficial,
etc.)
Son de forma alargada, cilndrica,
obtienen nutrientes de manera ms
eficaz, son menos resistentes, suelen
ser saprfitos.

COLORACION DE GRAM

Por su forma redondeada es una

Bacteria con forma de Coco (coccus),
5. PREGUNTAS
COMPLEMENTRIAS

1. Por qu deben usarse

coloraciones para observar a
los microorganismos?

Porque facilita la identificacin

microrganismos y nos permite
diferenciarlos ya que originalmente
estos se ven transparentes.

2. Para qu se usa la coloracin

de azul de metileno?

Se utiliza para teir las clulas

animales y as hacer ms visibles los
ncleos.

3. Segn GRAM, cmo se

dividen las bacterias?
Gram Positivas Tienen una pared
celular interna y una pared de
peptidoglucano. No tiene membrana
externa y no tiene espacio
periplasmatico.
Gram Negativas Posee una capa
celular similar a las Gram positiva
adicionndole una bicapa lipdica
externa. Posee una membrana
externa y espacio periplasmatico.

4. Por qu se debe enfriar el asa

antes de usarla?
Porque la temperatura de esta Puede
afectar los microorganismos en la
muestra y de esta manera se desvirta
el anlisis.

5. Cmo se clasifican las

bacterias segn su forma?
 Barras Esferas Espirales 8. Cul es la composicin
Bacilos: Cocos: Espirilos qumica de la cpsula
Bacteria del Estreptococos treponema
e.coli y y philococos (causa sifilis) bacteriana?
spemonella.

Se conforma generalmente por

glucoprotenas y polisacridos
diferentes incluyendo polialcoholes y
aminoazucares.

10. Qu tipo de antibitico se

6. Por qu se dice que la conocen para bacterias GRAM
coloracin con azul de metileno positivas y GRAM negativas?
es una coloracin simple y9 En GRAM positivas: Atacan la
directa y con GRAM es una pared celular.
o Penicilinas.
coloracin diferencial?
o Eritromicina: Utilidad en
muchas infecciones
Porque la coloracin con azul de (amigdalitis, infecciones
metileno tie a todas las bacterias por bucales, neumonas,
igual, en cambio la tincin de Gram etc.), sobre todo en
busca diferenciar a las clulas por alrgicos a penicilina.
pared celular (Gram positiva, Gram o Glucopptidos
Negativas) (Vancomicina y
teicoplanina): Se
emplean en infecciones
hospitalarias graves,
7. Cul es la diferencia entre sobre todo en alrgicos
cpsula y capa mucosa en las a penicilina.
bacterias? o Lincomicina y
clindamicina: Tambin
se emplean en
Capa Mucosa infecciones de hospital,
Capsula sobre todo en alrgicos
(Glucocalix)
a penicilina. La
Capsula rigida. clindamicina se utiliza
Capa extracelular
Organizada por
Se deforma con
tpicamente en algunas
matriz infecciones de piel.
facilidad , no tiene
Impermeable.
limite definido o Penicilinas G: Eficaces
Excluye colorantes
incapaz de excluir
como tinte china.
particulas contra estreptococos
Gram-positivos,
estafilococos,
enterococos y
meningococos: se
 emplean en el equilibrio de la flora
tratamiento de la sfilis, bacteriana interna que
gonorrea, meningitis, normalmente es
ntrax y el pian. La controlada por el
penicilina V se utiliza en sistema inmunolgico
el tratamiento de las del organismo; esto
infecciones puede producir
respiratorias. infecciones secundarias
En GRAM negativas: Evitan la en el tracto
sntesis de aminocidos. gastrointestinal o la
o Aminoglucsidos. vagina, por ejemplo.
Estreptomicina, el Para GRAM positivas y GRAM
antibitico ms utilizado negativas:
despus de la o Tetraciclinas y
penicilina. cloranfenicol.
o Aminopenicilinas o Amoxishot premix.
(Amoxicilina, ampicilina, Amoxicilina.
etc.). o Sulfamidas.
o Gentamicina, o Cefalosporinas.
trobamicina, amikacina,
netilmicina.
o Quinolomas.
o Tetraciclinas: Inhiben
sntesis de protenas
bacterianas. Son
GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS
antibiticos de amplio
penicilina aminoglucidos
espectro eficaces frente
ampicilina
a cepas de lincomicina
amoxacilina
estreptococos, bacilos eritromicina
estreptomicina
Gram-negativos, las clindamicina netilmicina
bacterias del gnero teicoplanina amikalcina
Rickettsia (las bacterias
que producen el tifus) y
espiroquetas (las
bacterias que producen
la sfilis). Se emplean
tambin en el
tratamiento del acn, la
enfermedad inflamatoria
plvica, las infecciones
del tracto urinario, las
bronquitis y la CONCLUSION
enfermedad de Lyme.
Debido a su amplio La tincin de Gram es de gran
espectro, las importancia, para poder diferenciar las
tetraciclinas pueden, en
Gram Positivas de las Gram
ocasiones, alterar el
Negativas. Debido a sus paredes
celulares y sus estructuras, y as poder
comprobar si tienen o no propiedades
patolgicas diferentes, se realizaron
todos los procedimientos en el
laboratorio de microbiologa, sin
embargo, no pudimos observar, a
pesar que tenamos conocimiento que
ah se encontraban dichas bacterias,
la falta de experiencia o quizs de un
poco ms de informacin nos conllevo
a el fracaso de la prctica.

BIBLIOGRAFIA

Carr, J.G, C.V. Cutting, y G.C. Whiting

(eds).: Lactic acid bacterias in becerages
and food, academic, nueva York 1975.
Contiene los trabajos presentados en el
simposio que se efectu en 1973 y una
relacin muy completa de las aplicaciones
industriales de las bacterias acido
lcticas.

Fonken , G.S , y R.A. Johnson: Chemical

oxidations with microorganisms , marcel
deker. Inc; nueva York 1972. Introduccion
a las distintas molculas orgnicas de uso
ms frecuente en el laboratorio.