168 PARTE U N O Bases de la microbiologa
I
iED!OS DE CULTIVO
# OBJETIVOS DE A P R I W D i Z A j E
Distinguir entre medios de cultivo qumicamente definidos y
complejos,
Justificar el empleo de cada uno de los siguientes elementos;
tcnicas anaerobias, clulas husped viables, frascos con
vela, medios de cultivo selectivos y diferenciales, medio de
enriquecimiento.
U n m aterial nu tritiv o preparatio para el crecim iento de
microorganismos en un laboratorio se denom ina m edio de
cultivo. A lgunas bacterias pueden crecer bien en casi cual
quier medio de cultivo; otras requieren medios especiales y
otras no pueden crecer en ninguno de los medios inertes exis-
ten tes hasta ahora. Los m icrobios que se introducen en un
m edio de cultivo para que com iencen a crecer se denom inan
inoculo. Los microbios que crecen y se m ultiplican en un
medio de cultivo se denom inan cultivo.
' Supngase que se desea cultivar un microorganismo deter-
m inado, tal vez los microbios provenientes de una muestra
clnica particular. Qu criterios debe satisfacer el m edio de
cultivo? Prim ero, debe co n tener los nutrientes adecuados
para el m icroorganism o especfico que se desea desarrollar.
Tam bin debe co n ten er hum edad suficiente, un pH ajustado
de m ai\era apropiada y una concentracin conveniente de
oxgeno, tal vez ausente por com pleto. El m edio que se va a
sem brar debe ser estril, es decir, en u n principio no debe
co n ten er microorganismos viables, de m odo que el cultivo
contenga slo los m icrobios (y su descendencia) que se agre-
guen al medio. Por ltim o, el m edio de cultivo sembrado debe
incubarse a la tem peratura correcta.
Se dispone de una am plia variedad de medios de cultivo
para el crecim iento de m icroorganismos en el laboratorio.
Casi todos esos medios, disponibles en el comercio, estn
constituidos por com ponentes mezclados con anterioridad y
slo precisan el agregado de agua y luego la esterilizacin. De
m anera co ntinua se elaboran y revisan medios de cultivo para
ser utilizados en el aislam iento y la identificacin de bacterias
que son de inters para los investigadores en los campos de la
alim entacin, el agua y la microbiologa clnica.
C uando se desea que las bacterias se desarrollen sobre un
m edio slido se agrega un agente solidificante como el agar,
que consiste en u n polisacrido com plejo proveniente de un
alga m arina que se utiliza desde hace m ucho tiem po como
espesante de alim entos com o jaleas y helados.
El agar posee algunas propiedades muy im portantes que lo
convierten en valioso para la m icrobiologa y nunca se
en co n tr un sustituto satisfactorio. Pocos microorganismos
pueden degradar el agar, de m odo que perm anece en estado
slido. Adems, el agar se lica a una tem peratura de alrede
dor de 100 C (el pun to de ebullicin del agua) y al nivel del
m ar perm anece lquido hasta que la tem peratura disminuye a
cerca de 40 C. Para el uso en el laboratorio el agar se m an
tien e en baos de agua a 50 C. A esta tem peratura no altera
a la mayor parte de las bacterias cuando se vierte sobre ellas
(com o se m uestra en lafig. 6.16a). U n a vez que el agar se soli
difica puede incubarse a tem peraturas que se aproxim an a los
gre:
Fos^cito ae rnenle m onobsico
C b f iio de sod'o N oCI)
S -1-0*0 d-o - o g r e s io ,AqSO 7 H -0
" 0 ' ' 0 >; 0-? ccQs'o, c ic a s ic o K .n P O ,:
100C antes de c^ue vuelva a licuarse; esta propiedad es p ar
ticu larm en te til cuando se desea cultivar bacterias term -
filas.
Los medios con agar suelen utilizarse en tubos de ensayo o
placas de Petri. Los tubos de ensayo se denom inan tubos en pico
de flauta o inclinados cuando el m edio se solidifica m an ten ien
do el tubo en un ngulo adecuado para lograr una gran super
ficie para el crecim iento. C uando el agar se solidifica en un
tubo de posicin vertical, se denom ina profundo. Los cultivos
e n placas de Petri, denom inadas as en h onor a su inventor, se
realizan en placas poco profundas con una tapa que cubre per
fectam ente la base para evitar la contam inacin.
MEDIOS DE CULTIVO QUMICAMENTE DEFINIDOS
Para favorecer el crecim iento m icrobiano un m edio debe pro
porcionar una fuente de energa as com o fuentes de carbono,
nitrgeno, azufre, fsforo y cualquier otro factor de creci
m iento que el organismo no pueda sintetizar. U n m edio q u
m icam ente definido es uno del que se conoce la com posicin
qum ica exacta. En el caso de u n organismo quim iohetertro-
fo, el medio qum icam ente definido debe contener factores de
crecim iento orgnicos que acten com o fuente de carbono y
energa. Por ejem plo, com o se m uestra en el cuadro 6.2, se
incluye glucosa en el m edio para favorecer el crecim iento de
la bacteria quim ioetergrafa E. cali.
C om o se describe en el cuadro 6.3, para cultivar especies de
N eisseria deben agregarse m uchos factores de crecim iento
orgnicos al m edio qum icam ente definido utilizado (p. 320).
Los organismos que requieren varios factores de crecim iento
se describen com o m icroorganismos con requerim ientos
especiales de crecim iento. Los organismos de este tipo, como
Lactobacillus (p. 332), algunas veces se utilizan en pruebas que
determ inan la concentracin de una vitam ina en una sustan
cia particular. Para llevar a cabo este ensayo microbiolgico se
prepara un m edio de crecim iento que contenga todos los
requerim ientos necesarios para el desarrollo de la bacteria
excepto la vitam ina que se va a evaluar. Luego se com binan
el medio, la sustancia de prueba y la bacteria y se mide el ere-