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Instituto Politcnico

Nacional
Escuela Nacional de Ciencias
Biolgicas
Laboratorio de Gentica Microbiana
Prctica No. 4 Aislamiento de bacterifagos
de fuentes naturales

Grupo: 5QV1

Secc. I Eq. 3

Integrantes: Chvez Gngora Ayla Anil


Cevada Santiago Karen Jazmin

Fecha de entrega: 07 - Nov - 17


Prctica No. 4 Aislamiento de bacterifagos de fuentes naturales

Objetivos

a) Conocer algunos aspectos de la metodologa empleada en el trabajo con bacterifagos.


b) Establecer algunas de las propiedades de las partculas fgicas que permiten su identificacin.
c) Aislar bacterifagos a partir de muestras de agua negras.
d) Determinar el ttulo y ciclo de multiplicacin de los fagos presentes en la muestra de agua, con
base en su morfologa de placa.

Introduccin

Los virus son molculas de DNA o RNA rodeadas por una envoltura proteica que necesitan clulas
viables para poder replicarse. Los virus utilizan la maquinaria metablica de las clulas para sintetizar
su material gentico y protenas de la envoltura. Existen distintos tipos de virus que pueden infectar
clulas procariontes o clulas eucariontes. Los bacterifagos o fagos son virus que se reproducen en
clulas procariontes.

El genoma de los fagos puede ser RNA de cadena simple (MS2, Q), RNA de doble cadena (6), DNA
de cadena simple ( X174, M13) o DNA de doble cadena (T3, T7, , T5, , T2, T4). Estos cidos
nucleicos pueden contener bases inusuales que son sintetizadas por protenas del fago. En los T-
pares el genoma no contiene citosina sino 5'- hidroximetilcitosina, mientras que en otros tipos de fago
alguna de las bases est parcialmente sustituida.

Los fagos son usualmente identificados por las placas, que forman en las colonias de las bacterias
sensibles a la infeccin. Una placa puede formarse cuando un fago es mezclado con un gran nmero
de bacterias susceptibles y la mezcla es colocada en un medio de agar. Puesto que la bacteria se
multiplica, eventualmente una ser infectada por el fago, que se multiplica y termina lisando a la
bacteria, liberando ms fagos. Al infectarse las bacterias que la rodean, el fago se esparce a travs de
la multiplicacin de la bacteria, que formaba el csped bacteriano. Tal que el fago original infecta la
primera bacteria, la placa interrumpe el csped, formando un punto claro en el agar. A pesar que
parecera una zona vaca, ese punto contiene millones de fagos.

De acuerdo al ciclo de multiplicacin del fago pueden clasificarse en temperados, lticos o virulentos y
virulentos no citocidas.

Los fagos lisognicos o temperados son aquellos que bien pueden multiplicarse va ciclo ltico o entran
en un estado latente en la clula. En este estado latente la mayora de los genes del fago no se
transcriben; el genoma del fago existe en un estado reprimido. Al DNA del fago en este estado
reprimido se le conoce como profago porque no es un fago, pero posee el potencial para producir
fagos. En la mayora de los casos el DNA de fago realmente se integra en el cromosoma del husped
y se replica junto con el cromosoma del husped y se transmite a las clulas hijas. La clula que
alberga un profago no se ve negativamente afectada por la presencia del profago y el estado lisognico
puede persistir indefinidamente. A la clula que alberga un profago se le conoce como lisgena.
Los fagos lticos o virulentos son fagos que matan a la clula debido a la lisis al trmino del ciclo de
replicacin del virus, mientras que los fagos virulentos no citocidas generan vesculas en la bacteria,
con ellas se liberan miles de fagos sin lisar a la bacteria.

Infectar clulas permisivas con un fago es suficientemente simple en principio. El fago y la bacteria
potencialmente hospedera slo necesitan mezclarse juntos, y alguna bacteria y fago colisionarn
aleatoriamente, llevando a la infeccin del fago. Sin embargo, el porcentaje de las clulas que son
infectadas dependen de la concentracin del fago y la bacteria. Si ambos se encuentran en mayor
concentracin chocarn entre ellos e iniciarn la infeccin en mayor proporcin que si estn ms
diluidos. La eficiencia de infeccin es afectada no slo por la concentracin del fago y la bacteria, sino
tambin por la proporcin del fago en relacin a la bacteria, la multiplicidad de infeccin (MOI). Si el
nmero de fagos excede el nmero de clulas a infectar se habla de una MOI alta. Inversamente una
baja MOI indica que las clulas sobrepasan el nmero de fagos.

Bacterifago T4

Tipo de material gentico: DNA doble cadena lineal


de 169kb

Ciclo de multiplicacin: ltico

Morfologa de placa: placas circulares, claras de 1-


2mm de dimetro con bordes regulares.

Tipo de receptor: lipopolilisacridos (LPS) de la


bacteria.

Morfologa del fago: cabeza icosadrica, cuello y


cola como se muestra en la siguiente figura

Libera alrededor de 100-200 virones.

Ciclo de multiplicacin del bacterifago T4

El ciclo de multiplicacin de un bacterifago T4 se puede dividir esquemticamente en distintas etapas,


las que son comunes a otros virus lticos.

1. Adsorcin: El virus se fija o adsorbe a componentes de la superficie celular que actan como
receptores especficos. La zona de adsorcin del virus es complementaria al receptor celular, por lo
tanto un determinado virus slo puede infectar un nmero limitado de cepas celulares que contengan
a un determinado receptor.

2. Inyeccin del material gentico viral: Despus de la adsorcin, se produce un cambio


configuracional en las protenas de la placa basal, alguna de las cuales tienen actividad enzimtica y
producen un poro en la membrana citoplasmtica de la clula. La vaina del fago se contrae y el material
gentico viral ingresa en la clula, mientras que la envoltura proteica queda en el exterior.

3. Replicacin del material gentico viral: El material gentico viral que ingresa en una clula
contiene bases modificadas que evitan la degradacin por nucleasas bacterianas. Esta modificacin
consiste en la glicosilacin y/o metilacin de algunas determinadas bases. En el caso del fago T4 se
glucosila la base 5'-hidroximetilcitosina. Para lograr una efectiva replicacin del genoma viral se deben
sintetizar algunas protenas cuando el material gentico ingresa en la clula. Estas protenas
tempranas reparan el poro de la membrana citoplasmtica por donde ingres el genoma viral,
degradan el DNA bacteriano lo que proporciona una fuente de precursores, evita la sntesis de RNA y
protenas bacterianas, y proporciona ribosomas para la sntesis de protenas del fago. Adems algunas
de estas protenas tempranas participan en la sntesis de las bases inusuales. La forma de replicacin
del genoma viral es dependiente del tipo de material gentico (si es RNA o DNA, si es simple o doble
cadena). En el caso del fago T4, las molculas replicadas se aparean en los extremos y formando una
molcula de DNA ms larga denominada concatmero. Despus una enzima corta esta larga molcula
lineal en molculas ms pequeas de igual longitud.

4. Sntesis de las envolturas proteicas y empaquetamiento del DNA: Las protenas de la envoltura
(cpside, vaina, fibras, etc.) son protenas tardas que se sintetizan despus de iniciada la replicacin
del material gentico. La sntesis de cada componente proteico se realiza separadamente, el material
gentico es encapsidado antes del ensamble del resto de los componentes.

5. Ensamblaje de las envolturas: Todas las protenas de la envoltura se ensamblan para formar
una partcula viral madura capaz de infectar a otra clula cuando sea liberada.

6. Lisis y liberacin de las partculas virales: La lisis celular se debe a la sntesis de protenas tardas
codificadas en el genoma del fago. En el fago T4, estas protenas son enzimas que lesionan la
membrana citoplasmtica y la pared celular se rompe permitiendo la salida de las partculas virales,
para seguir con el proceso de infeccin y su ciclo de multiplicacin.

Bacterifago lambda

Tipo de material gentico: DNA lineal de doble


cadena de 50kb, que posee extremos cohesivos.

Ciclo de multiplicacin: temperado

Morfologa de placa: placas circulares, claras de


2-4mm de dimetro con bordes regulares, y
formacin de microcolonias dentro de la placa
ltica.

Tipo de receptor: protena lamb transportadora


de maltosa.

Morfologa del virus: cabeza icosadrica, cuello y


cola como se muestra en la siguiente figura

Ciclo de multiplicacin del bacterifago lambda

En este caso el bacterifago puede seguir dos vas de multiplicacin la lisognica o la ltica.
En primer lugar deben ocurrir los dos primerosprocesos de cualquiera de los ciclos de multiplicacin
(que ya han sido explicados con anterioridad en T4)
1. Adsorcin
2. inyeccin del material gentico
Seguido de los procesos de cada una de las vas que siga. En el caso de la va lisognica ocurre lo
siguiente:
3. Integracin del DNA viral al DNAl cromosomal: El material gentico del fago se une con el de
la clula husped por medio de una recombinacin sitio especfico y as para comenzare cic
lo lisognico.
4. Replicacin del DNA viral: En este caso, la bacteria sigue su propio proceso de multiplicaci
n por lo cual al estar el DNA integrado al DNA cromosomal, ambos DNA se replican juntos si
n consecuencias obvias. El DNA del fago que se integr dentro del cromosoma bacteriano s
e denomina profago y las bacterias que contienen profagos se denominan bacterias lisogn
icas.
Posteriormente el bacterifago pude cambiar de ciclo pasando al ltico. Para ello primero se requiere
de una escisin del DNA viral del DNA cromosomal para inicial el ciclo ltico que ya ha sido explicado
con anterioridad. Ocurriendo los siguientes procesos:
1. Replicacin del material gentico viral
2. Sntesis de las envolturas proteicas y empaquetamiento del DNA
3. Ensamblaje de las envolturas
4. Lisis y liberacin de las partculas virales

O bien desde un principio puede llevar a cabo la va ltica.

Bacterifago M13 / Ciclo de multiplicacin del bacterifago M13

Tipo de material gentico: DNA


circular monocatenario de 3.5kb

Ciclo de multiplicacin: no ltico.

Morfologa de placa: placas


circulares, opacas de 1-2.2 mm de
dimetro con bordes difusos,

Tipo de receptor: reconoce al pili de


las bacterias con carcter de
donadora.

Morfologa del virus: estructura


filamentosa figura.

En este tipo de multiplicacin ocurre lo siguiente.


1. Adsorcin
2. inyeccin del material gentico
3. sntesis de la cadena complementaria a la original
4. replicacin del DNA viral: por crculo rotador usando como molde la cadena complementara
para crear copias idnticas a la original.
5. Liberndose las partculas virales por extruccin.

Desarrollo (modificaciones)

Para la diferenciacin de fagos temperados, virulentos y virulentos no citocidas por morfologa de placa
se modificaron las diluciones, siendo para los fagos:

Lambda. 10-2, 10-3 y 10-4

T4. 10-3, 10-4 y 10-5

M13. 10-2, 10-3 Y 10-4

Resultados.

Descripcin del lugar de toma de la muestra.

Descripcin: el lugar de donde se tom la muestra forma parte del estado de Mxico, delegacin de
Naucalpan, cuya regin posee un clima Templado subhmedo con lluvias en verano, temperatura
promedio anual de 15 C con temperaturas mxima de 32.5 C, y mnima de 3.4 C. La precipitacin
promedio anual es de 807 mm y como parte de su hidrologa perteneciente a la Regin Hidrolgica
No. 26, Pnuco, Cuenca Ro Moctezuma, el municipio cuenta con seis ros (entre los que destacan el
San Lorenzo Totolinga, Los Remedios y Ro Hondo ), este ltimo es de donde se extrajo la muestra
utilizada.
Descripcin de la toma de la muestra.

La muestra fue tomada el domingo 22 de Octubre, aproximadamente a las 4:00 pm, la temperatura
era de 23 C; la corriente del viento era baja.

Como se nota en las imgenes el ro no se encuentra entubado en esta parte de su recorrido por lo
que el aroma peculiar de las aguas negras a pesar de la hora era muy penetrante, aunado a que los
habitantes de la zona, tanto residenciales y comerciantes, han usado la ribera como un tiradero de
basura.

Tabla1. Descripcin del lugar de toma de muestra y prueba de gota de los filtrados fgicos de todos lo
equipos correspondientes a la seccin 1.

Descripcin del Cepas Prueba Cepas Dil. No. Ttulo de Morfologa de


lugar de muestreo indicadoras de usadas para de bacterifagos placa.
gota determinacin placas UFP/mL
UFP/mL

-Naucalpan, col. Escherichia coli + 100 15 1.2x102 Placas


Equipo 1 Seccin 1 5QV1

Alce Blanco W3110 Escherichia 9 circulares de


Fecha y hora de Escherichia coli - coli W3110 8 1 a 2mm,
toma: 21-10-2017, TG1 16 turbias
11 A.M. Escherichia coli - (homogneas)
Zona residencial B837 con borde
Se obtuvo se un entero.
tubo de desage, Bacillus subtilis -
que proviene de un SB19
canal amplio, Salmonella -
aproximadamente a typhimurium
20cm de LT2
profundidad. Staphylococcus -
aureus
Klebsiella -
pneumoniae
Tlalnepalntla, Edo. Escherichia coli + 100 11 2.75x102 Placas
Equipo 2 Seccin 1 5QV1

Mxico W3110 Escherichia claras,circulares,


28-Oct-2017 Escherichia coli - coli W3110 bordes regulares
Canal con flujo lento TG1 2mm
La muestra se tom Escherichia coli -
aproximadamente a 70 B837
cm de profundidad.
Bacillus subtilis -
La zona de muestreo
SB19
esta rodeada por
unidades Salmonella -
habitacionales. typhimurium
LT2
La muestra se Staphylococcus -
observaba negra, turbia. aureus
Klebsiella -
pneumoniae
Muestra tomada del Escherichia coli + 100 25
canal de W3110 Escherichia 30 2.15 X102
Naucalpan, estado Escherichia coli - coli W3110 14 Placas
Equipo 3 Seccin 1 5QV1

de Mxico. TG1 17 circulares


Muestra extraida a Escherichia coli - claras de 1.5
una altura de 50 B837 mm con bordes
cm. , canal a orilla Bacillus subtilis - regulares
de calle y con SB19
casas alrededor. Salmonella -
Se tom el domingo typhimurium
22 de octubre del LT2
2017 a la 4 pm con Staphylococcus -
una temperatura de aureus
alrededor de 23C. Klebsiella -
pneumoniae
Zona habitacional. Escherichia coli + Escherichia 100 20 1.45x102 Placas
Av. del ro Colinas W3110 coli W3110 25 circulares
de San Mateo, Escherichia coli - 3 claras de 1 a
Equipo 4 Seccin 1 5QV1

Naucalpan, Edo de TG1 10 4 mm con


Mxico. Escherichia coli + bordes
12:45 pm. 25C B837 regulares
Bacillus subtilis -
SB19

Salmonella -
typhimurium
LT2 100 0 0 No hubo
Escherichia formacin de
Staphylococcus -
aureus coli B837 placas
Klebsiella -
pneumoniae
Tlalminulpa, Escherichia coli + 100 Placas de
W3110 Escherichia 53 opacas de 5mm
Hidalgo.
Escherichia coli + coli W3110 37 4.5x102 con forma con
23/10/17 TG1 bordes
10:05 hrs. UFP/mL
Escherichia coli + irregulares.
Flujo del agua B837
lento.
Muestra tomada Bacillus subtilis - Escherichia Placas
Equipo 5 Seccin 1 5QV1*

SB19 coli TG1 24 2.8x102 circulares


aproximadamente Salmonella - 100 32 UFP/mL claras de 2mm
a 20 cm de la typhimurium con bordes
superficie. LT2 regulares.
El canal de
muestreo se Staphylococcus -
aureus
encuentra Klebsiella - Placas
rodeado por una pneumoniae
Escherichia circulares
zona habitacional, claras de 2mm
coli B837 100 5 3.5x101
adems de con bordes
2 UFP/mL
cultivos, establos regulares.
y corrales, lo
cuales vierten sus
desechos en este
canal.
Lugar: Texcoco de Escherichia coli + Klebsiella 100 4 3x101 Placas de
Mora, Estado de W3110 pneumoniae 2 opacas de 5mm
Mexico. Escherichia coli - con forma
TG1 circular de
Fecha y hora: 22 de
bordes
octubre de 2017
regulares
9:00 hrs.
Equipo 6 Seccin 1 5QV1*

Zona habitacional.
20 C. Escherichia coli - Salmonella 100 0 0 Sin formacin
La zona se B837 typhimurium 0 de placas
encuentra Bacillus subtilis - LT2
alrededor de casas, SB19
el olor era ftido, Salmonella - Bacillus 100 0 0 Sin formacin
typhimurium subtilis SB19 0 de placas
haba basura y
LT2
pasto alrededor, la Staphylococcus -
mayor parte del aureus
agua permanece Klebsiella - Escherichia 100 40 4.1x102 Placas
estancada. pneumoniae coli B837 42 circulares
opacas de
3mm con
bordes
regulares.

Tabla 1 Diferenciacin de fagos temperados, virulentos y virulentos no citocidas por morfologa de placa.

Bacterifago Cepa indicadora Dilucin Nmero Ttulo de Morfologa de placa


de placas bacterifagos UFP/mL
10-4 104 36
T4 Escherichia coli W3110 6.79 X 106 Placas claras, circulares, con
-5
10 3 bordes bien definidos.
10-6 0 1
10-1 53 84
Escherichia coli W3110 Placas con microcolonias,
10-2 3 8
6.80 X 103 centro claro y periferia turbia.
10-3 1 2
10-1 0 0
M13 Escherichia coli TG1 0 Placas turbias
10-2 0 0
10-3 0 0

Clculo de UFP (ejemplo con fago lambda):

53 + 84 + 3 + 8 + 1 + 2 1 1
/ = ( ) ( 1 ) = 6.80103
2.22 0.1 10

Tabla 2. Determinacin de la amplitud de husped de los bacterifagos T4, y M13

Bacterifago. T4 M13
Cepa indicadora. Equipo 1 Equipo 2 Equipo 3 Equipo 4 Equipo 5 Equipo 6
Escherichia coli W3110 + - - - - -
Escherichia coli TG1 + - - - - -
Escherichia coli B837 - - - - - -
Bacillus subtilis SB19 - - - - - -
Salmonella typhimurium LT2 - - - - - -
Staphylococcus aureus - - - - - -
Klebsiella pneumoniae - - - - - -

Discusin

Primeramente se realiz un filtrado de una muestra de aguas negras, del cual se pretende aislar
bacterifagos, as como tambin se utilizaron 7 cepas tipo, para poder conocer a cul de ellas el fago
podra provocar una infeccin.
Las cepas utilizadas tienen una importancia especfica, primero se utilizaron tres tipos diferentes de
Escherichia coli (W3110, TG1 Y B837) , la importancia de su utilizacin radica en que se tiene dos
linajes de este tipo de bacteria, el linaje K para las cepas W3110 Y TG1 y el linaje B para la B837, la
diferencia entre linajes radica en los patrones de metilacin del DNA para cada bacteria, esta diferencia
sirva como proteccin para la infeccin por bacterifago pues hace que las endonucleasas de la
bacteria reconozcan a su propio DNA y as puedan eliminar a uno exgeno; la diferencia entre la cepa
W3110 y la B837 es que una es una donadora F+ (posee el pili sexual) y la otra un a receptora F- (no
posee el pili sexual), y por consiguiente una infeccin por fagos dara una pauta que este podra ser
especfico para las protenas de pili sexual de la bacteria. Se utiliz tambin la cepa de Staphylococcus
aureus debido a que al extraer la muestra de fuentes naturales como los canales de aguas negras, la
presencia de fagos en este cepa indicara que se tiene una gran cantidad de desages en el canal
pues esta bacteria es propia de la micro biota de la piel humana. Para el caso de Bacillus subtilis SB19
la presencia de fagos en esta cepa indicara que existe una gran cantidad de lodo, pues la bacteria es
muy especfica para los suelos, tambin indica una toma de muestra inadecuada pues se tendra una
gran cantidad de barro en ella. En Salmonella typhimurium LT2 , esta bacteria se encuentra a menudo
en pollos y sus huevos y en reptiles como las tortugas; la salmonela es un bacilo gram negativo que
pertenece a la familia Enterobacteriaceae; la causa ms comn del envenenamiento de comida por
salmonelosis es Salmonella Typhimurium, en humanos, Salmonella Typhimurium no causa una
enfermedad tan severa como la Salmonella Typhi (otra variacin de Salmonella que causa la fiebre
tifoidea) y normalmente no es fatal, la presencia de dicha cepa indicara una contaminacin por
desechos de materia orgnica, de granjas o corrales as como la infeccin por fagos a bacterias Gram
- . Y finalmente se utiliz a Klebsiella pneumoniae que es la especie de mayor relevancia clnica dentro
del gnero bacteriano Klebsiella, compuesto por bacterias Gram negativas de la
familia Enterobacteriaceae, que desempean un importante papel como causa de las enfermedades
infecciosas oportunistas. La presencia de un fago en esta cepa indicara una contaminacin por
desages de clnicas y hospitales y la infeccin por fagos a bacterias Gram -.
En la primer prueba realiza que fue la prueba de gota los resultados obtenidos primeramente de
manera individual (solo el equipo 3) arrojan presencia de bacterifagos a partir de muestras de aguas
negras, para la cepa de Escherichia coli W3110, datos que nos hablan acerca del mal estado del lugar
donde fue tomada la muestra. Al presentar fagos para esta cepa, nos hace pensar que por ende debe
existir este microorganismo en el canal de Naucalpan, lugar de recoleccin de la muestra. La presencia
de este fago y de Escherichia coli W3110, tambin nos habla que en el agua de este ro existe una
contaminacin de materia fecal y como consecuencia de enterobacterias contenidas en ella, esto es
hasta cierto punto normal, dadas las condiciones en las que se encuentra este canal de aguas negras
y la cantidad de descargas de desechos a lo largo de su recorrido, no solamente desechos propios de
las zonas habitacionales, sino que adems de zonas comerciales e incluso industriales. En cuanto a
la parte microbiolgica, solo hay presencia de enterobacterias no patgenas. Esto se puede deber a
que cerca del lugar de la toma de muestra existe una gran cantidad de casa habitacionales. Con
respecto a los resultados grupales se tiene una alta presencia de bacterifago para la cepa de
Escherichia coli W3110 , puesto que 4 de 6 equipos la obtuvieron, con respecto al equipo 4 se observa
la presencia de bacterifagos para la cepa Escherichia coli B837 que hace suponer que se trate de
dos tipos de fagos distintos que se determin observando la morfologa de las placas obtenidas, como
comparacin general de los resultados de las dos cepas de Escherichia coli ambas poseen una
estructura en comn que sirve como receptor para dicho fago, lo que puede ser resultado de un
receptor en la membrana y su diferencia radica debido las cepas pertenecen linajes diferentes. A
pesar de que las tres cepas utilizadas son entero bacterias se observa que hay una gran diferencia
entre las cepas de Escherichia coli, esto se podra deber la las enzimas que contiene Escherichia coli
W3110 que son enzimas de restriccin y al introducir el fago su material gentico y no presentar el
patrn de metilacin correcto, estas enzimas de restriccin reconocen al material gentico como
extrao y lo cortan de tal manera que es degradado y pierde su actividad, por lo cual Escherichia coli
W3110 al observarse una mayor cantidad de placas se deduce que sus mecanismo de proteccin es
ms eficiente que el de Escherichia coli TG1, que presento un menor nmero de placas.

Con respecto al ttulo de fagos de la muestra de agua, se debe tener en cuenta que por el hecho de
haber sido aislados de una fuente natural el nmero de fagos no ser directamente proporcional a la
cantidad de microrganismos capaces de hospedar al virus. La cuantificacin solo nos proporciona la
cifra de estos microrganismos, y una muy vaga idea de la cantidad relativa de las clulas que pueden
infectar en el sitio de recoleccin de la muestra. Cabe resaltar tambin que los registros negativos de
los equipos 5 y 6 no indican una ausencia de bacterifagos; puede considerarse que las cepas
indicadas no correspondan a la especie especfica de infeccin de algn bacterifago presente o la
concentracin del fago era muy baja (1 fago en 1 mL o incluso 1 en 1 L), tambin puede ser debido a
que en los canales de recoleccin de la muestra existieran detergentes o metales pesado que inhiban
la proliferacin de los fagos.

Para la diferenciacin de fagos temperados, virulentos y virulentos no citocidas por morfologa de


placa, se tiene que debido al ciclo de multiplicacin de cada fago se puede diferenciar en su morfologa
colonial, los resultados arrojan que para el fago M13 tiene a la cepa Escherichia coli TG1 por ser una
donadora (F+) y presentar el pili sexual con el cual tiene receptores especficos y teniendo una
morfologa de placas no lticas turbias en el medio de cultivo 2YT, debido a que la liberacin de estos
se da por vesculas, lo cual confiere turbidez a la placa, pues parte de la bacteria se encuentra
presente, para el fago T4 experimentalmente se tienen placas claras, circulares, con bordes bien
definidos, pues el ciclo de multiplicacin del fago implica la lisis total de la bacteria, y cuya cepa
receptora es Escherichia coli W3110 , finalmente para el bacterifago result en una morfologa con
placas con micro colonias, centro claro y periferia turbia, debido a que su ciclo de replicacin es ltico
y lisognico (fago temperado), en el caso de seguir un ciclo lisognico, el DNA fgico se integra al
cromosoma bacteriano aprovechando las enzimas de la recombinacin de la bacteria, lo cual general
las micro colonias en las placas, pues en este ciclo al tener un profago este no induce infeccin y no
destruye a la clula hospedadora, y la bacteria adquiere resistencia a infeccin solo a este tipo de fago,
para el ciclo ltico el fago no se integra al genoma bacteriano (es ms habitual que se comporte como
un virus de ciclo ltico) provocando la lisis total de la bacteria dando las zonas claras en las placas.
Otro aspecto a recalcar es la utilizacin de los medios, el 2YT especfico para M13 es debido al ciclo
de multiplicacin del fago, pues en este se elimina la actividad de reproduccin de la bacteria y debido
a que necesita que esta conserve aspectos metablicos para que as se pueda dar la liberacin de los
fagos, el medio proporciona los nutrientes necesarios para que la clula conserve un estado metablico
normal para ella y para que desarrolle la multiplicacin del fago. Para el bacterifago T4 se utiliz un
medio rico, esto es debido a que por el ciclo de multiplicacin utilizado por este fago elimina
completamente a la bacteria, tanto a nivel metablico como de reproduccin. Finalmente para el
bacterifago lambda se utiliz el medio lambda, el cual contiene biotina que es esencial para el
crecimiento del fago.
Finalmente para la determinacin de la amplitud de husped de los bacterifagos T4, y M13, donde
se pretende ver la infeccin de los fagos a cepas tipos se obtuvieron los resultados reflejados en la
tabla 3, que algunos equipos no tuvieron formacin de csped; esto debido a que se verti la cepa
indicadora en el agar blando fundido cuando se encontraba an a una elevada temperatura, matando
as las clulas, el nico resultado a analizar es el del equipo 1 donde se observaron placas lticas para
Escherichia coli W3110 y Escherichia coli TG1 en fago T4, lo cual indica que este fago solo induce
infeccin en linajes K de E. coli . de manera terica el fago M13 debi infectar a Escherichia coli TG1
, pues esta cepa era una donadora y el receptor especfico de este fago es el pili sexual presente en
bacterias F+.

Conclusiones

Los bacterifagos que tienen un ciclo no ltico, no citocida como M-13 deben aislarse en medios
con mayores nutrientes.
El bacterifago T4 produce infeccin en Escherichia coli pertenecientes al linaje K.
La muestra obtenida de aguas negras contena bacterifagos, para la cepa de Escherichia coli
W3110.
Los bacterifagos que tiene placas claras, con bordes definidos y circulares, poseen un ciclo lti
co.
Los bacterifagos que tiene placas turbias con microcolonias y con bordes irregulares, poseen
un ciclo ltico-lisognico.
El bacterifago M-13 solo induce infeccin a la cepas donadoras como E. coli TG1.
El bacterifago induce infeccin los linajes K y B de Escherichia coli.

Bibliografa

http://www.microbiologybook.org/Spanish/chapter7.htm. BACTERIOLOGA CAPTULO


SIETE: BACTERIFAGOS. Dr Gene Mayer. University of South Carolina School of Medicine.

Klug, W.S., Cummings, M.R., Spencer, C.A., (2006).. Conceptos de Gentica. Madrid: PEARSON

EDUCACIN. (8a edicin).