PRACTICA N 1

BIOQUIMICA MICROBIANA

I. GENERALIDADES
II. OBJETIVOS
Estudiar la bioqumica microbiana a travs del proceso productivo de la
levadura saccharomyces cerevisiae: biomasa.
Estudiar la bioqumica microbiana a travs del proceso fermentativo de la
levadura saccharomyces cerevisiae: alcohol.
III. MATERIALES Y METODOS
3.1. Materiales, insumos y reactivos
Levadura (saccharomyces cerevisiae)
Algarrobina
Acido ctrico
Glucosa anhidra
Fructosa
Sacarosa
Maltosa
Galactosa
Agua destilada
Fosfato de amonio
Peptona
Arena esteril

Fig. 1 e

3.2. Equipos
Matraz 250 mL
Matras 100mL
 2 vasos de 250 mL
6 tubos de ensayo
Pipetas de 10 mL
Alcoholmetro
Termmetro
Tapones
Olla presin
Centrifuga
Equipo de destilacin
Balanza analtica
Mechero bunsen
Cocinilla elctrica
Refractmetro
Potencimetro o cintas pH
Placas Petri
Probeta de 250 mL
4 viales
7 campanas durham
3.3. Procedimiento
3.3.1. Caracterizacin del sustrato: medir los grados brix de la algarrobina con
el refractmetro.
3.3.2. Caracterizacin de la levadura: se determinara la capacidad
fermentativa mediante caldos nutritivos (1% de azcar y 1% de peptona en
agua destilada) los tubos debern ser inoculados a 30 C por 2 a 4 dias se
observara la produccin de gas lo cual nos indicara que los azucares son
fermentados por la levadura.
3.3.3. Produccin de biomasa y alcohol: en un matraz se llenara del 70 al 75%
con algarrobina a 16 brix con agua y con cido ctrico se corregir el pH hasta
4.5 y se esterilizara en la olla presin por 15 minutos y en otro matraz
pequeo se inoculara la levadura para luego ser aadido en la muestra patrn
para llevarlo a incubarlo durante 4 das en la estufa a 30 C con agitacin
diaria. Pasado este tiempo se pondr en refrigeracin para luego ser analizado.
3.3.4. Obtencin de biomasa y alcohol: la muestra refrigerada se centrifugara a
4000 rpm durante 15 min, se decantara el sobrenadante y se pasara a una
placa Petri el precipitado para luego separa 3g del precipitado con 3 gr de
arena estril y ser llevado a la estufa a 105 C por 4 horas. El sobrenadante se
destilara y se medir el alcohol formado medidos mediante el alcoholmetro.
IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES
Realizacin de clculos previos:
Brix iniciales de la algarrobina 84.8

84.8 16x 187,5= 35.38 mL

84.8
16

0 68,8x187.5=152.12mL
84.8
Brix finales: 15
pH : 4.5
extraer 5% del volumen inicial para el precultivo.

100 % 187.5 mL

5% X

X=9,37mL

Adicionar 1% de levadura y activar

100 % 187.5 mL

1% X

X=1.88
Cuadro N 1 peso del precipitado gr muestra.
de la
N Peso del vial Precipitado + Precipitado (gr)
(gr) vial (gr)
1 15.83 15.83 2.14
2 16.69 16.69 2.33
3 14.11 16.11 2.2
4 14.64 14.64 2.18
total 8.85

Datos obtenidos en el laboratorio.

1. Peso real del precipitado: peso de la torta 6.89gr :BIOMASA
2. Volumen del sobrenadante: 158 mL
3. Destilado: 142 mL
4. Grado alcohlico 8%
Cuadro N 2 resumen de los resultados obtenidos.
Entra (mL) proceso Sale (mL)

187.5 Incubacin 187.5

187.5 Centrifugacin 158

158 Destilacin- 142

sobrenadante

Cuadro N 3 materia seca de las muestras

secado M 1 precipitado M2 sobrenadante
Peso de la muestra 3 gr 3 gr
Peso de la arena 3 gr 3 gr
Peso de la placa
 Placa + muestra seca + 47,5834 49,8716
arena

Placa + M1 inicial=____gr
Placa + M1 final=____gr

Placa + M2 inicial= ____gr

Placa + M2 final= _____gr
___gr + ___gr = ___gr / 2 gr= ____ gr promedio

Determinacin:
Tuvimos que en 16 de muestra ____gr de biomasa

3 gr ___________

6.89 gr X

X=____ gr de biomasa

Evaluar el alcohol producido, rendimiento.

158 mL 100 mL

___ X

X= ___% de sobrenadante es alcohol

Rendimiento:

158 mL 100 %

142 mL X

X=89.87 % del sobrenadante.

158 gr 100 %

6.89 gr X

X=4.36% de la torta.

V. CONCLUSIONES
VI. RECOMENDACIONES BIBLIOGRAFIA