STERILIZAREA

1. GENERALITI

Microorganismele triesc n mediul nconjurtor n prezena anumitor factori

fizici, chimici i biologici care influeneaz n mod favorabil sau defavorabil
dezvoltarea i nmulirea lor. De-a lungul timpului, omul a nvat s selecteze acei
factori care s-i permit distrugerea speciilor patogene sau selectarea speciilor
folositoare.
n cele mai vechi civilizaii s-au cunoscut practici care au prevenit alterarea
alimentelor, putrefacia cadavrelor, fr a se cunoate rolul microorganismelor n
aceste procese. Astfel, alimentele perisabile au fost conservate prin adaus de sare,
uleiuri aromatice, afumare sau fermentaie acid. Conservele au aprut cu 50 de ani
naintea cercetrilor lui Pasteur, fr a fi fost lmurit principiul care st la baza lor.
La nceputul secolului al XVIII-lea s-a folosit pentru prima oara clorura de var i
fenolul pentru dezodorizarea gunoaielor i n final pentru curirea plgilor, fr a
se cunoate aciunea bactericid a acestor substane.
Tehnicile de sterilizare s-au dezvoltat iniial n laboratoare pentru a permite
izolarea miocrobilor n culturi pure, ele fiind apoi rapid preluate de toate
specialitile medicale pentru a preveni rspndirea infeciilor.
Prin termenul de sterilizare, care este un termen absolut, se
nteleg procedeele fizice i chimice care elimin toi germenii viabili
(bacterii, spori, fungi, virusuri, parazii) de pe un obiect. Se
desemneaz ca steril un obiect care a fost supus unui procedeu de
sterilizare i protejat n mod corespunztor pentru a preveni
contaminarea sa.

Se folosesc, n principiu, 4 metode de sterilizare:

a) sterilizarea prin caldur;
b) iradierea cu raze UV sau raze ionizante;
c) filtrarea prin filtre bacteriologice care rein bacteriile din
lichidele ce nu pot fi supuse temperaturilor ridicate;
d) sterilizarea chimic, metod evitat n general deoarece
doar civa dezinfectani, foarte toxici i iritani (ca de exemplu,
formaldehida, oxidul de etilen etc.) folosii n conditii riguros
controlate, sunt capabili s omoare toate formele de via inclusiv

1
sporii, fr a deteriora obiectele de sterilizat.

Trebuie specificat, ns, c sterilizarea nu este identic cu distrugerea fizic a

bacteriei, cu toate c cele dou noiuni se folosesc des una n locul celeilalte. Acest
aspect este foarte important, deoarece soluiile perfuzabile, care sunt sterile dar
conin bacterii omorte, a cror produi de degradare au efecte pirogene (febr i
frisoane), dau reacii toxice a cror gravitate merge pn la starea de oc.
Deci, apa si lichidele care vor servi la prepararea soluiilor injectabile sau
perfuzabile trebuie s fie nu numai sterile, dar s aib un grad pronunat de
puritate.

a) STERILIZAREA PRIN CALDUR

- Microorganismele sunt distruse la temperaturi ridicate ntr-un timp care
depinde de mai muli factori:
temperatura, care este invers proproional cu timpul necesar expunerii
bacteriilor,
numrul microorganismelor i al sporilor, elemente ce afecteaz rapiditatea
sterilizrii,
specia i proprietatea de a sporula a microorganismelor,
materialul n care este cuprins microorgansimul. Un coninut ridicat de
substane proteice, zaharuri, lipide, amidon, acizii nucleici sau uleiuri
protejeaz sporii i formele vegetative de aciunea cldurii,
pH-ul. Rezistena maxim a sporilor la caldur se situeaz la un pH de 7 i
scade o dat cu creterea aciditii sau alcalinitii,
condiiile n care are loc sporularea. Se pare c sporii formai n habitatul
natural al microbilor sunt mai rezisteni la caldur dect cei obinui pe
mediile de cultur.

- Sensibilitatea microorganismelor la caldur se poate exprima prin:

punctul termic letal, care se definete ca cea mai joas temperatur care
distruge bacteriile dintr-o cultur cu densitate dat n 10 minute. Pentru E.coli
valoarea se situeaz la 55C, pentru bacilul tuberculos la 60C, iar pentru
majoritatea sporilor la 120C;
timpul termic letal, care se definete ca timpul minim n care are loc
distrugerea bacteriilor la o temperatur dat.

a1) Sterilizarea prin cldur uscat

Cldura uscat omoar microorganismele prin oxidarea distructiv a
componentelor celulare a bacteriilor. Cei mai rezisteni spori sunt distrui de

2
cldura uscat la 160o, timp de 60 de minute. Sporii fungilor sunt distrui n 60 de
minute la 115oC, iar cei bacterieni sunt distrui n 60 de minute la temperaturi
cuprinse ntre 120-160oC. n laboratorul de microbiologie se utilizeaz
urmtoarele tehnici de sterilizare:
nclzirea la rou n flacr a obiectelor - se aplic anselor bacteriologice n
laboratorul de microbiologie;
flambarea (trecerea prin flacr pentru cteva secunde) - se aplic gtului
baloanelor, eprubetelor dup deschiderea i nainte de nchiderea lor,
pipetelor nainte de utilizare pentru a preveni contaminarea cu germenii din
aer;
sterilizarea la pupinel. Pupinelul sau cuptorul cu aer cald este o cutie
metalic cu perei dubli ntre care se gseste un strat de azbest care mpiedic
pierderile de caldur, o surs de caldur care este energia electric i un
termoregulator. n interior, pupinelul este prevzut cu rafturi pentru obiectele
de sterilizat.
Temperatura de sterilizare la pupinel este de 180oC timp de 60 de minute.
La pupinel se sterilizeaz ntreaga sticlrie de laborator, instrumentarul de
stomatologie, seringi fr armatur metalic, pudre, uleiuri etc. Pupinelul nu
trebuie s fie suprancrcat, pentru ca aerul s poata circula nestingherit
printre obiectele de sterilizat.
sterilizarea cu raze infraroii este folosit pentru sterilizarea seringilor fr
armatur metalic la o temperatur de 180oC. Sterilizarea se poate efectua i
la 200oC n vid, aplicndu-se instrumentelor chirurgicale.

a2) Sterilizarea prin caldur umed

Cldura umed este mai eficient dect cldura uscat, distrugnd bacteriile la
o temperatur mai scazut i timp mai scurt. Formele vegetative a majoritii
bacteriilor, fungilor i virusurilor sunt omorte de cldura umed n 10 minute la
temperaturi cuprinse ntre 50oC (Neisseria gonorrhoeae) i 65oC (Staphylococcus
aureus). O susceptibilitate deosebit fa de cldura o prezint Treponema
pallidum, care este distrus n 10 minute la 43oC.
O parte din virusurile animale au o rezisten crescut fa de cldura umed,
ca, de pild, virusul poliomielitic care este inactivat la 60oC dup 30 de minute, i
virusul hepatitei B care dac se afl n ser rezist 10 ore la 60o.
Omorrea microorganismelor prin cldura umed se produce prin coagularea
proteinelor structurale i inactivarea enzimelor, cu participarea apei. Cei mai
rezisteni spori sunt distrui prin expunere la cldura umed la 121o timp de 30 de
minute.

3
 fierberea este de fapt o metod de dezinfecie deoarece ea nu distruge toate
formele sporulate. Se efectueaz la 100oC timp de 30 de minute i se aplic
seringilor i instrumentelor de mic chirurgie atunci cnd nu este posibil alt
metod. Fierberea se mai folosete n epidemii la sterilizarea apei.
pasteurizarea a fost introdus de Louis Pasteur pentru conservarea vinului,
fiind utilizat i acum pentru sterilizarea unor alimente lichide care nu
suport temperaturi prea ridicate (lapte, bere, sucuri de fructe).
Metoda const n nclzirea lichidului la 62C pentru 30 de minute
(pasterurizare joas), 71oC 15 minute (pasteurizare medie), 80-85o 3-5
minute (pasteurizare nalt). Pasteurizarea este o metod eficient deoarece
bacteriile patogene care se pot dezvolta n lapte (Mycobacterium
tuberculosis, Salmonella, Streptococcus si Brucella) nu sunt bacterii
sporulate, numrul lor reducndu-se dup pasteurizare cu 97-99%.
tyndalizarea const n nclzirea produsului de sterilizat 3 zile la rnd, n baie
de ap la 56-100oC cte 60 de minute. Temperatura se alege n funcie de
produsul de sterilizat. Metoda se aplic lichidelor care nu suport
temperaturile ridicate, ca de exemplu: vaccinuri.
autoclavarea este metoda folosit pentru instrumentarul de chirurgie iar n
laboratoarele de microbiologie pentru sterilizarea mediilor de cultur i a
materialului infecios. Sterilizarea are loc ntr-o atmosfer saturat de vapori
de ap la 121oC, la o presiune de 1 atm, timp de 20-30 de minute, n aparate
speciale numite autoclave sau la 134 oC, la o presiune de 2 atm. 10-15
minute.

b) STERILIZAREA PRIN RADIATII

b1) Razele neionizante
Razele ultraviolete. Puterea bactericid a razelor luminoase devine
perceptibil la o lungime de und de 330nm, crescnd pe msura scderii lungimii
de und a luminii UV. Mecanismul bactericid al razelor UV const n alterarea
replicrii ADN-ului bacteriei, deci mpiedicarea multiplicrii acesteia.
n scop practic, lmpile cu vapori de mercur care produc raze UV se folosesc
pentru a reduce numrul de bacterii existente n aer n slile de operaie, n
laboratoare, n ncperi n care sunt adpostite animale de experien etc.
b2) Radiaiile ionizante
Radiaiile ionizante de tipul radiaiilor gamma sunt folosite pe scar larg
pentru sterilizarea materialelor medicale de unic folosin.